去氢表雄酮通过调节丝/苏氨酸蛋白激酶信号传导通路抑制大鼠Morris肝细胞瘤生长

Objective To investigate the inhibitory effect of dehydroepaimdrosterone(DHEA)on the growth of transplatnted MorriS hepatomas(7288CTC)in vivo in rats.Methods 21 Buffalo rats were randomly devided into 4 groups,including one blank control group(n=5),one group for tumor-bearing control(n=6),and 2 experimental groups with DHEA(n=6)or DHEA-s(n=4).DHEA or DHEA-s was fed to the rats for 4 weeks immediately after Morris hepatomas(7288CTC)was implanted in both flanks.Phenotypes of the spleen lymphocytes were examined by flow cytometry,Akt and PTEN expression in rumor cells was detected by Western blot and immunohistochemistry.Results Tumor weights of DHEA treated group were less than those of the control(P＜0.05),the inhibitory rate was 43%.The results of Western blot and immunohistochemistry showed that in DHEA tumor group,the expression of phosphorilated Akt protein was decreased,the expression of PTEN was enhanced,the percentage of CD3 positive cells and the ratio of CD4/CD8 were increased (P＜0.05). Conclusion DHEA can inhibit tumor growth,possibly via the inhibition of the Akt signaling pathway as well as modulating the immune function.     

雄激素对去势雄性SD大鼠胰岛素敏感性的影响

目的观察去势后雄性SD大鼠胰岛素敏感性的改变,及其使用十一酸睾酮(TU)、去氢表雄酮(DHEA)干预后的影响。方法将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、去势1组、去势2组、TU组及DHEA组,每组10只。除假手术组外,其余4组均进行去势手术。手术2周后,TU组给予TU 4 mg/kg肌肉注射,2周1次;DHEA组给予DHEA 5 mg/kg灌胃,1次/d。6周后,观察各组大鼠体重改变、血清睾酮、硫化去氢表雄酮(DHEAs)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平;并在第8周时进行高胰岛素正葡萄糖钳夹试验,以评价大鼠胰岛素敏感性。结果(1)去势后第2周,与假手术组比较,其他4组雄激素水平明显下降;去势第8周后,与去势1组、去势2组比较,TU组和DHEA组雄性激素明显上升。给予TU、DHEA干预后,去势雄性SD大鼠雄激素水平明显升高。(2)去势雄性SD大鼠采用雄激素干预后,血清FINS水平下降,但对各组大鼠FPG无明显影响。(3)TU组及DHEA组大鼠的葡萄糖清除率分别较去势1组及去势2组明显升高。结论雄性SD大鼠去势后,血清睾酮、DHEAs水平降低,FINS水平升高,胰岛素敏感性明显下降。给予TU、DHEA干预后,血清睾酮上升,升高的FINS下降,胰岛素敏感性得到改善。     

异基因骨髓间充质干细胞移植对胶原诱导性关节炎大鼠的免疫调节作用

目的 通过对类风湿关节炎(RA)动物模型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的实验研究,观察异基因骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对早期、晚期CIA大鼠免疫细胞和分子的免疫学作用,并探讨其在体内发挥免疫调节作用的机制.方法 采用密度梯度离心结合贴壁培养法体外分离、培养大鼠MSCs,细胞表型鉴定;建立CIA大鼠模型;MSCs移植均采用尾静脉注射,移植后第42天全部处死动物取脾,通过实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)测定Foxp3 mRNA的表达水平,流式细胞术测定CD4+CD25+调节性T细胞的变化.采用单因素方差分析、LSD-t检验法进行统计学分析.结果 早期、晚期CIA对照组CD4+CD25+调节性T细胞(1.6±0.6,1.4±0.6)和Foxp3 mRNA(0.88±0.20,0.91±0.12)的表达水平低于健康组和治疗组,差异有统计学意义(P＜0.05),早期治疗组CD4+CD25+调节性T细胞(5.0±0.4)比晚期治疗组(3.9±0.4)有所升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 异基因MSCs移植可通过上调CIA大鼠体内CD4+CD25+调节性T细胞水平,促进Foxp3 mRNA的表达而发挥其在体内的免疫调节作用,早期治疗组的疗效优于晚期治疗组.     

男性心力衰竭患者血清雄激素与T淋巴细胞亚群的关系及预后的影响

目的探讨男性心力衰竭(心衰)患者血清雄激素与T淋巴细胞亚群、人淋巴细胞相关抗原(HLA-DR)的关系及预后的影响。方法选择男性心衰患者160例为心衰组,心功能(NYHA)Ⅱ级40例,Ⅲ级55例,Ⅳ级65例,选择同期健康体检男性40例为对照组,检测外周血游离睾酮、总睾酮、去氢表雄酮(DHEA)、DHEA硫酸酯(DHEAS)及淋巴细胞表面表达CD3、CD4、CD8细胞比例和HLA-DR阳性细胞比例。结果心衰组血清游离睾酮、总睾酮、DHEA、DHEAS、CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值显著低于对照组,CD8细胞、HLA-DR显著高于对照组(P0.05)。心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅵ级患者血清游离睾酮、总睾酮、DHEA、DHEAS水平、CD3和CD4细胞比例及CD4/CD8比值逐级下降(P0.01);心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅵ级患者CD8细胞比例[(32.05±6.18)%vs (36.64±8.87)%vs(47.55±9.66)%]、HLA-DR[(27.54±4.93)%vs (30.58±5.89)%vs (35.64±9.10)%]逐级增高(P0.01)。游离睾酮、总睾酮与HLA-DR独立负相关(P0.01)。游离睾酮与随访期间死亡独立负相关(OR=0.89,95%CI:0.84～0.93,P=0.00)。结论男性心衰患者血清雄激素水平降低,可使T淋巴细胞亚群改变及HLA-DR表达增加,从而影响心衰患者预后。     

ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠肝移植急性排斥反应的影响

目的: 探讨大鼠肝移植术后应用ω-3多不饱和脂肪酸对移植肝脏功能、受体免疫功能、急性排斥反应的影响.方法: 二袖套法大鼠肝移植18例, 术后颈内静脉插管, 微量泵匀速输注液体. 盐水NS组( n =6)输注生理盐水, 肠外营养PN组( n = 6)输注营养液, 脂肪酸OM组( n = 6)输注营养液+ω-3脂肪乳. 术后第7天, 留取肝组织标本病理检查,取血清检测生化指标及IL-2、IL-4、IL-10、γ-IFN等细胞因子含量, 余血清检测生化指标,流式细胞检测CD4+、CD8+、CD4+CD25+ T细胞和CD8+CD28- T细胞.结果: 各组生化结果比较无统计学意义. 与NS组和PN组比较, OM组CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD28- T细胞含量下降(26.86%±1.60% vs 31.32%±5.92%, 32.87%±2.744%; 28.65%±1.40% v s 30.08%±1.37%, 30.64%±1.47%; 3.89%±0.20% vs4.75%±0.46%, 5.27%±0.20%; 13.31%±2.06% vs 22.08%±3.81%, 21.00%±3.46%,均P<0.05). OM组CD4+/CD8+与NS组和PN组比较下降有差异(0.94±0.001 vs 1.04±0.01,1.07±0.001, 均P<0.05). OM组IL-2、γ-IFN含量与NS组和PN组比较下降(20.17±2.87 ng/Lvs 35.47±8.94 ng/L, 35.92±3.31 ng/L, 2.12±0.84 ng/L vs 28.30±6.25 ng/L, 28.38±11.07ng/L, 均P<0.05). 病理学检查移植肝排斥反应强度(RAI)评分OM组与PN组、NS组比较下降有差异(均P<0.05).结论: 静脉输注ω-3多不饱和脂肪酸可以通过抑制IL-2和γ-IFN, 抑制T淋巴细胞, 更显著的降低CD4+辅助性T细胞比例, 减轻排斥反应.     

柴胡皂甙D对DEN致大鼠肝癌免疫功能的影响

目的: 观察柴胡皂甙D(saikosaponin-d, SSd)对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine, DEN)致大鼠肝癌免疫功能的影响, 并探讨其与SSd抗肝肿瘤作用的关系.方法: 清洁级♂SD大鼠90只, 平均体质量248.18±12.32 g, 随机分为5组: 模型组(n =20), 对照组(n=10)及SSd大、中、小剂量治疗组(均n=20).除对照组给予等量生理盐水灌胃外, 其余各组大鼠均给予2 mg/L DEN灌胃, 按体质量10 mg/kg给药, 每周5次, 同时各治疗组每天给予不同浓度SSd(2.0、1.5、1.0 mg/kg)腹腔注射, 至16 wk停药, 麻醉后处死大鼠.HE染色观察实验大鼠肝组织病理学结构的改变, 应用流式细胞仪测定大鼠外周血T淋巴细胞亚群(CD3+ CD4+%、CD3+ CD8+%及CD3+CD4+/CD3+ CD8+比值).结果: SSd各治疗组大鼠癌结节数及灶的大小均小于模型组.镜下单纯造模组癌细胞呈多形性, 异形性明显, Edmondson分级多数属于Ⅲ级;相反, SSd各干预组癌细胞分化程度高,异型性较低, 分级多为Ⅰ-Ⅱ级;肝癌模型组与正常对照组T淋巴细胞亚群比较CD4+、CD4+/CD8+明显下降, CD8+上升, 差异有统计学意义(33.56%±4.16% vs 45.50%±4.03%;1.06±0.56 vs 1.93±0.28;30.62%±3.65% vs 22.88%±3.15%;均P<0.05);而SSd各组与肝癌模型组T淋巴细胞亚群比较CD4+、CD4+/CD8+明显回升, CD8+下降, 差异有统计学意义, 尤其以SSd大剂量组明显(39.06%±3.98% vs 33.56%±4.16%;1.55±0.29 vs 1.06±0.56;18.99%±3.09% vs 30.62%±3.65%;均P<0.05).结论: SSd对DEN诱发大鼠肝癌形成有一定的免疫保护作用.     

去氢表雄酮通过Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡和细胞周期阻滞

目的 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期阻滞的作用。方法 应用MTT比色法检测不同浓度（1、10、50、100、200μmol／L）的DHEA或DHEAs与HepG2和HT-29细胞孵育8、24、48、72 h对两种细胞系的生长抑制作用;应用流式细胞术检测不同浓度的DHEA或DHEAs对细胞凋亡及细胞周期的变化;采用Western blot检测细胞内磷酸化Akt（Ser473,Thr308）蛋白的水平。结果 （1）不同浓度DHEA作用细胞24h时,HepG2的存活率24h时分别为92．7％±0．9%、84．7％±1．2％、62．4％±0．8％、49．5％±0．8％和50．7％±0．3％,HT-29细胞的存活率分别为92．5％±0.4％、89．5％±0．7％、80．5％±1．1％、67.5％±1.5％和70．6％±0．6％,与对照组相比,DHEA明显抑制HepG2和HT-29两种细胞的生长。在浓度为100μmol／L作用24 h时作用明显,而DHEAs对HepG2及HT-29细胞的增殖无明显影响。（2）100μmol／L的DHEA显著抑制两种细胞周期进程, HepG2细胞G0／G1期细胞比例显著升高,可以达到68．4％±2．0％,而对照组为48．6％±1．2％。HT-29细胞在100μmol／L时的G0／G1期的比率为90．3％±2．7％,而对照组仅为59．0％±1．2％,S及G2／M期细胞明显减少。（3）100μmol／L DHEA作用24 h时能显著诱导HepG2细胞凋亡（凋亡率为18．6％±2．2％）,而DHEAs却无此作用。（4）HepG2细胞在100μmol／L和200μmol／L DHEA作用24 h后,磷酸化Akt（Thr^308）、磷酸化Akt（Set^473）蛋白表达显著降低,这种作用在应用PI3K抑制剂和PI3K激活剂后分别被增强和消除。结论 DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用。而对于不同的肿瘤细胞系,DHEA可能通过调节Akt的信号通路来诱导细胞凋亡,还可能通过阻滞细胞周期,使其阻滞在G0／G1期。DHEAs对细胞的生长没有明显的作用。     

老年肿瘤患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及临床意义

目的 探讨老年肿瘤患者CD4+CD25+凋节性T细胞的变化及其与免疫衰老的关系.方法 以64例健康青年人(青年组)、52例健康老年人(老年组)和64例老年肿瘤患者(老年肿瘤组)为研究对象,采用多色荧光素标记和多参数流式细胞术,分别检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127low T细胞,分析和比较各组之间的差异及各指标之间的相关性.结果 以外周血中CD4+ T细胞设门,青年组、老年组和老年肿瘤组CD4+CD25high T细胞分别为(1.390±0.4]2)%、(1.729士0.247)%和(2.150±0.769)%,CD4+CD25+FoxP3+细胞分别为(1.180±0.343)%、(2.477士0.400)%和(4.980±2.177)%,CD4+CD25+CD127low T细胞分别为(5.213±0.942)%、(6.186±1.196)%和(7.194±1.538)%.3项指标均为老年肿瘤组最高,青年组最低,差异有统计学意义(P＜0.05);3项指标均呈正相关(P＜O.05).结论 CD4+CD25+调节性T细胞过量累积可能与免疫衰老及老年肿瘤密切相关.     

复方中药木疏胶囊抗大鼠肝纤维化的免疫机制

目的:探讨木疏胶囊抗大鼠肝纤维化的免疫作用机制.方法:400 g/L CCl4诱导大鼠肝纤维化模型Wister大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,木疏胶囊预防组和治疗组,鳖甲软肝片预防组和治疗组.HE染色和Masson染色观察肝右叶相同部位组织病理改变.放免法测定血清细胞因子IL-2、IL-6、IL-8及TNF-a,流式细胞术检测血淋巴细胞CD4、CD8表达.结果:木疏胶囊与鳖甲软肝片各组两两比较,对TL-2和IL-6作用均无显著性差异:对IL-8的降低作用木疏胶囊优于鳖甲软肝片(预防组:0.4±0.2 μg/L vs 0.6±0.1 μg/L;治疗组:0.5±0.2μg/L vs 0.6±0.2 μg/L;均P＜0.05);对TNF-a的降低作用为木疏胶囊预防组优于鳖甲软肝片(1.1±0.3μg/L vs 1.4±0.3 μg/L,P＜0.05),而治疗组无显著差异.与模型对照组比较,木疏胶囊预防组和治疗组使CD4和CD4/CD8均显著升高(CD4:36.4%±7.5%,34.6%±5.0%vs28.0%±5.1%:CD4/CD8:1.9%±0.4%,1.8%±0.3% vs 1.5%±0.2%:均P＜0.01),鳖甲软肝片预防组使CD4显著升高(33.4%±4.9% vs28.0%±5.1%,P＜0.05),治疗组无显著性差异,鳖甲软肝片使CD8和CD4/CD8升高,但均无显著性差异:木疏胶囊和鳖甲软肝片对CD4、CD8、CD4/CD8的作用无显著性差异.结论:木疏胶囊可升高肝纤维化大鼠血清IL-2,降低IL-6、IL-8和TNF-a水平,升高CD4、CD4/CD8.     

汉丹肝乐对大鼠肝纤维化PI3K/Akt信号通路的影响及意义

目的:观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol-3 kinase/Akt,PI3K/Akt)信号通路在CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织中的变化并探讨中药汉丹肝乐对他的影响.方法:选取SD大鼠30只,随机分为正常对照组、肝纤维化8 wk组及汉丹肝乐治疗组,每组各10只.肝纤维化组及汉丹肝乐治疗组大鼠按0.3 mL/100 g体质量的剂量皮下注射40%CCl4花生油溶液,每隔3 d注射1次,造模时间为8wk;对照组大鼠皮下注射等量花生油溶液.造模结束后汉丹肝乐治疗组大鼠给予1.0 g/kg的汉丹肝乐灌胃治疗,1次/d,治疗时间为8 wk.HE染色观察肝组织病理学改变;采用免疫组织化学技术及Western blot检测肝组织中PI3K/Akt信号通路中关键分子Akt1、磷酸化Akt1的表达变化,同时应用TUNEL法检测肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡情况.结果:与正常对照组比较,肝纤维化8 wk组大鼠肝组织中Akt1(2.73±0.52 vs 9.60±2.28,P0.01)、磷酸化Akt1(0.92±0.40 vs 6.51±1.39,P0.01)的表达均显著增加,差异具有显著性;经汉丹肝乐治疗后,肝组织中Akt1(9.60±2.28 vs 5.36±1.59,P0.01)、磷酸化Akt1(6.51±1.39 vs 2.08±0.85,P0.01)的表达均显著下降;同时,TUNEL法检测发现汉丹肝乐组大鼠肝组织中HSC凋亡率显著高于肝纤维化8 wk组(1.07±0.32 vs 4.24±0.86,P0.01).结论:PI3K/Akt信号通路在肝纤维化的发生发展过程中发挥重要作用,而汉丹肝乐可通过抑制该信号通路,促进HSC的凋亡来发挥抗肝纤维化的作用.     

PTEN在支气管哮喘大鼠气道炎症中的作用

目的 探讨PTEN在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道炎症中的作用.方法 20只SPF级雄性SD大鼠随机分为2组,对照组和哮喘组.以卵清白蛋白致敏激发法复制大鼠哮喘模型,每只大鼠左肺留取肺组织,右肺进行支气管肺泡灌洗并留取支气管肺泡灌洗液(BALF).对BALF进行细胞分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(Sandwich ELISA)法测定BALF中IL-4、IL-12浓度;采用免疫组织化学法和Western blot法测定PTEN蛋白的表达和量的变化.结果 ①BALF IL-4的浓度哮喘组显著高于对照组,BALF中IL-12的浓度哮喘组显著低于对照组(P值均＜0.01);②免疫组织化学显示PTEN蛋白主要表达细胞是支气管上皮细胞,Western blot法显示哮喘组支气管PTEN蛋白的表达显著低于对照组(P＜0.01);③支气管上皮细胞PTEN蛋白表达量分别与BALF中的IL-4浓度呈显著负相关,与BALF中的IL-12浓度呈显著正相关.结论 哮喘大鼠PTEN蛋白表达明显减少,它能减少Th2因子的表达,可能与哮喘大鼠气道炎症中Th1/Th2平衡密切相关.     

肿瘤抑制因子PTEN与心肌肥大关系的研究

目的 观察肿瘤抑制因子PTEN在心肌肥厚大鼠心肌组织以及在血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞中的表达,探讨PTEN在心肌肥大发生发展中的作用以及相关机制。方法采用腹主动脉狭窄术制备压力超负荷心肌肥厚动物模型,及血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法、Western blot及免疫组化等方法,分别检测各组PTEN mRNA和蛋白表达的变化,以及PTEN蛋白在心肌细胞中的定位。结果(1)与对照组相比,心肌肥厚组大鼠左室肌PTEN mRNA和蛋白表达均明显减少;血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大组PTEN蛋白表达明显减少。(2)与心肌肥厚组相比,卡托普利组大鼠左室心肌PTEN mRNA和蛋白表达增加,接近对照组。(3)免疫组化实验结果显示心肌细胞胞核内有阳性免疫产物生成,提示PTEN蛋白定位于心肌细胞核内。结论PTEN在心肌肥大发生发展中可能起负调控作用,该作用与肾素-血管紧张素系统密切相关。     

帕金森病运动并发症发生机制中G蛋白偶联受体激酶6与N-甲基-D-天冬氨酸受体关系的研究

目的 研究G蛋白偶联受体激酶6(GRK6)在帕金森病(PD)运动并发症发生机制中与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的关系.方法 建立PD运动并发症大鼠模型,25只大鼠分为3组.异动症(LID)组10只,腹腔注射左旋多巴甲酯23 d;MK-801处理组10只,第23天左旋多巴甲酯注射前腹腔注射MK-801;PD组5只,腹腔注射0.2%维生素C液.另设假手术组5只为对照组.观察MK-801处理左旋多巴诱导的运动并发症模型大鼠的行为变化,并用免疫组织化学方法和Western印迹方法检测大鼠纹状体区GRK6蛋白的表达情况.结果 PD组大鼠长期使用左旋多巴后出现明显的异常不自主运动,与人类LID具有相似特征.免疫组化结果显示.PD组损伤侧纹状体区GRK6阳性细胞指数减少至(4.81±1.31)×103(P＜0.05),LID组损伤侧GRK6阳性细胞指数进一步减少至(3.23±0.41)×103(P＜0.01).MK-801组LID大鼠异常不自主运动评分减少,药效期延长,同时损伤侧纹状体区GRK6阳性细胞指数增多至(4.64±1.39)×103(P＜0.05).Western印迹法检测结果同免疫组化基本相符,PD组损毁侧/未损毁侧纹状体区GRK6含量比值为(83.7±2.1)%,LID组GRK6值降低为(76.8±2.2)%,而MK-801组GRK6值升高至(91.1±2.7)%(P＜0.01).结论 NMDA受体拮抗剂能逆转大鼠运动并发症的发生,其机制可能与GRK6增多,抑制了谷氨酸受体的过度活化有关.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between G protein-coupled receptor kinase 6 (GRK6) and N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor in the mechanism study underlying motor complications in Parkinson's disease (PD).Methods The rat models (n= 25) of Parkinsonism related motor complications were established and were randomly divided into levodopa-induced dyskinesia (LID) group (n= 10,intraperitoneal injection of levodopa for 23 d),MK-801 treatment group (n= 10,intraperitoneal injection of MK-801 at day23 after intraperitoneal injection with levodopa for 22 days) and PD group (n= 5,intraperitoneal injection of vitamin C).Another 5 rats were served as controls (sham-operation group).The behavior changes of rats in MK-801 treatment group were observed,and the expression of GRK6 in the striate of rats was detected by immunohistochemistry and Western blot.Results After the chronic treatment with levodopa methyl ester,PD rats displayed abnormal involuntary movements,which was similar to levodopainduced dyskinesia in PD patients.Immunohistochemistry showed that GRK6-positive cells of lesion side were decreased in LID rats as compared with PD rats [(3.23±0.41 ) × 103 vs.(4.81 ± 1.31 ) ×103,P＜0.01].Rats in MK-801 treatment group displayed the decreased AIM scores and increased peak rotation,and the increased GRK6-positive cells of lesion side as compared with LID rats (P＜0.05).Western blot showed that the levels of GRK6 was 83.7% ±2.1% in PD group (presented as lesion side/unlesion side),76.8% ± 2.2% in LID group and 91.1% ± 2.7% in MK-801 treatment group (intergroups comparison:all P＜0.05).These results were in accordance with the results of immunohistochemistry.Conclusions Antagonist of NMDA receptor can be used to reduce the motor complications in rats.It may be due to increased GRK6 which inhibits the overactivation of glutamic acid receptors.     

美托洛尔对急性心肌梗死大鼠心肌神经生长因子表达和神经重构的影响

目的 探讨β受体阻滞剂美托洛尔对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心肌神经生长因子(NGF)表达和交感神经再生的影响.方法 结扎大鼠左前降支,建立AMI模型,存活者随机分为美托洛尔治疗组(MI-B组,n=10)和梗死对照组(MI-C组,n=10),另设假手术组(S组,n=8).MI-B组给予4周美托洛尔治疗,MI-C组和S组给予同体积生理盐水静脉注射和灌胃,4周后检测梗死周边区和梗死远端心脏神经纤维分布和密度以及心肌NGF基因和蛋白表达的变化.结果 与S组相比,MI-C组梗死周边和梗死远端心肌组织中NGF基因和蛋白表达明显升高(P＜0.05),梗死周边和梗死远端神经支配密度增高(P＜0.01).与MI-C组比较,MI-B组心肌细胞内NGF表达明显下降(P＜0.05),神经支配密度亦明显下降(P＜0.01).结论 早期美托洛尔治疗AMI可以改善心肌NGF表达和交感神经再生.美托洛尔改善交感神经再生的作用机制至少部分与其降低神经生长因子的表达和释放作用有关.     

葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体和结缔组织生长因子的影响

目的 探讨葡萄籽原花青素(GSPE)对糖尿病大鼠心肌糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子κB(NF-κB)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法 将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠30只随机分为两组,糖尿病未治疗组(糖尿病1组)和糖尿病GSPE治疗组(糖尿病2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各15只;正常大鼠20只随机分为正常对照组(对照l组)和正常GSPE治疗组(对照2组,每日给予GSPE 250 mg/kg灌胃)各10只,24周后采血检测空腹血糖(FBG)、糖基化终末产物(AGEs),免疫组织化学染色和Western blot测定心肌NF-κB蛋白的表达,并应用Westernblot测定各组心肌RAGE和CTGF的蛋白表达变化.结果 糖尿病1组FBG、血清AGEs含量较对照1组显著升高(P＜0.05),经GSPE治疗后,血清AGEs含量显著降低(P＜0.05),而FBG降低差异无统计学意义;糖尿病1组心肌组织RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达较对照1组显著升高(P＜0.05),GSPE能够显著抑制RAGE、NF-κB和CTGF蛋白表达.结论 GSPE对糖尿病心肌病具有保护作用,其可能机制与抑制糖尿病大鼠AGEs-RAGE、NF-κB和CTGF的表达有关.     

贝尼地平对糖尿病大鼠肾脏保护作用的机制探讨

目的 观察贝尼地平对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的影响并探讨其机制.方法 54只180～200 g雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为正常对照组(8只)、糖尿病肾病造模组(46只),糖尿病肾病组空腹12 h后一次性腹腔内注射链脲佐菌素(60mg/kg),对照组注射等量生理盐水.将37只造模成功的大鼠用随机数字表法分为3组,其中糖尿病组(13只),法舒地尔组(12只,10 mg·kg-1·d-1腹腔注射),贝尼地平组(12只,3 mg·kg-1·d-1灌胃).治疗3个月后处死,HE染色观察肾脏病理变化,免疫组织化学观察肾脏皮质Rho激酶1(ROCK1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮型-钙黏附蛋白(E-cadherin)的变化;Western Blot法观察肾皮质肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1(p-MYPT1)、ROCK1、α-SMA、E-cadherin的变化;实时PCR观察ROCK1的mRNA变化.采用单因素方差分析及SNK或LSD检验进行统计学分析.结果 正常对照组、糖尿病组、贝尼地平组大鼠肾皮质内ROCK1蛋白表达分别为0.39(0.23～0.55)、0.93(0.64～1.28)、0.61(0.52～0.90),p-MYPT1、α-SMA蛋白表达糖尿病组增强、贝尼地平组减弱,差异有统计学意义(F值分别为7.37和125.26,均P＜0.01),E-cadherin蛋白的表达分别为0.95±0.27,0.25±0.09,0.44±0.10,差异有统计学意义(F=28.15,P＜0.05),ROCK1 mRNA的表达分别为4.4±2.2,23.3±7.0,15.9±3.4,差异有统计学意义(F=18.47,P＜0.01).结论 贝尼地平可能通过抑制ROCK活性减轻糖尿病鼠肾小管上皮细胞间充质转分化和肾间质纤维化.     

miR-21对早期糖尿病肾病db/db小鼠蛋白尿的影响

目的 了解miR-21对早期糖尿病肾病db/db小鼠24 h尿白蛋白、肾小球形态学及其分子机制的影响.方法 24只5周龄雄性小鼠分为4组:6只db/m小鼠作为对照组,18只5周龄高血糖且无蛋白尿的db/db小鼠分别随机分为pGenesil-miR-21质粒处理组、对照空质粒处理组及未处理组,每天尾静脉液压法注射质粒30 mg·kg-1·d-1,直至未处理组db/db小鼠尿白蛋白排泄(UAE)显著高于db/m小鼠组.在光学显微镜下观察肾小球形态大小,计算机计算肾小球面积,实时RT-PCR检测肾脏组织miR-21的表达水平,Western印迹、免疫组化PTEN、p-Akt(Ser473)和PI3K p85α肾脏组织的蛋白质表达水平.结果 5周龄db/db小鼠连续注射质粒4周后,未处理组db/db小鼠出现高血糖伴UAE显著增高,提示9周龄db/db小鼠进入早期糖尿病肾病阶段.实时RT-PCR结果显示,在注射pGenesil-miR-21重组质粒的db/db小鼠肾脏组织中,miR-21的表达显著增高(P<0.01).光镜观察和肾小球面积测量实验发现,pGenesil-miR-21重组质粒组肾小球显著减小.Western印迹和免疫细胞化学结果显示,miR-21处理组的db/db小鼠肾脏组织中PTEN蛋白较注射对照空质粒和未注射质粒的db/db小鼠组显著降低,而PI3K p85α和磷酸化Akt (Ser473)蛋白显著增高(均P<0.01).结论 miR-21通过特异性靶向调控PTEN/PI3K信号传导途径,以抑制肾小球肥大,可能是一个新的糖尿病肾病的保护因子.     

Graves病甲状腺共刺激分子GL50-ICOS的表达及其免疫病理意义

目的 研究共刺激分子GL50-ICOS在Graves病(GD)甲状腺组织中的表达及其免疫病理意义.方法运用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western印迹和免疫组化技术,检测GD甲状腺组织和原代培养的甲状腺滤泡细胞(TFC)共刺激分子GL50和ICOS的表达.结果 (1)与正常同龄对照相比,CD4+CD28-T细胞群体在GD患者外周血中显著升高,其表面ICOS表达上调.(2)RT-PCR显示,GD患者甲状腺组织中有ICOS mRNA表达,与对照非毒性甲状腺肿(NTG)组相比具有统计学差异(P＜0.01).(3)Western印迹显示,GL50蛋白在10例GD患者组织中全部表达,较对照组差异有统计学意义(P＜0.01).(4)与对照甲状腺腺瘤组相比,GL50在20例GD患者组织切片中全部检出,而对照组无阳性表达(P＜0.01).(5)炎性细胞因子刺激体外原代培养的甲状腺滤泡细胞表面上调表达GL50(P＜0.05).结论共刺激分子GL50-ICOS在Graves病甲状腺组织异常表达.     

糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的 探讨糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的影响变化,阐明糖尿病冠状动脉损伤的分子机制.方法 采用链脲霉素腹腔内注射建立大鼠糖尿病动物模型,酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,全细胞膜片钳实验技术和Western blot分别记录和测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流和亚基的表达;采用荧光测定方法测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度.结果 当刺激电压＞100 mV时,糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度明显低于正常冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度(P＜0.05),在刺激电压为150 mV时,电流密度分别为(275±40)pA/pF(n=8)和(70±10)pA/pF(n=6);与正常组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),但β1亚基蛋白表达较低(P＜0.05);正常组和糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞内钙离于浓度分别为(92±7)nmol/L(n=5)和(151±18)nmol/L(n=6),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道电流密度下降及细胞内钙离子浓度升高可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因.     

胰性脑病水通道蛋白-4的表达及意义

目的 观察水通道蛋白4(AQP4)在磷脂酶A2诱导的胰性脑病(PE)大鼠脑组织中的表达变化,探讨AQP4与胰性脑病的关系.方法 25只健康成年Wistar大鼠按数字表法随机分为空白组(5只)、对照组(10只)和PE组(10只),应用磷脂酶A2颈内动脉注射(0.1ml/100g体重)方法建立大鼠PE模型.对照组注射等容积生理盐水;空白组无任何处理.注射后1d处死大鼠,测脑湿/干重比值,常规行脑组织病理检查,采用免疫组化法和蛋白质印迹法检测AQP4的表达.结果 空白组、对照组大鼠脑组织无明显病理改变,PE组大鼠脑组织内神经元明显水肿,呈气球样变,炎细胞浸润、聚集,微血管内白细胞聚集及附壁.空白组、对照组、PE组大鼠脑组织含水量分别为(61.44±0.36)％、(63.20±0.32)％和(78.33±0.24)％,PE组大鼠脑组织含水量明显增加(P＜0.05);脑组织AQP4相对表达量分别为0.41±0.27、0.49±0.13、0.98±0.21,PE组大鼠脑组织AQP4表达明显上调(P＜0.05).结论 AQP4可能参与胰性脑病的发病机制.