α-硫辛酸抑制高糖诱导的系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1的表达

目的:探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法:体外条件下采用正常糖浓度(5.6 mmol/L,NG)、高糖浓度(25 mmol/L,HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸(50、100、200、300 μmol/L)分别与大鼠系膜细胞共同培养不同时间(12、24、48 h).MTT法测定系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA的表达;ELISA法测定细胞培养上清ICAM-1蛋白的浓度. 结果:50～300 μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖.高糖刺激24 h时, 200 μmol/L的α-硫辛酸干预组ICAM-1的蛋白浓度[(288.4±23.4) ng/ml]明显低于HG组[(542.3±35.6) ng/ml,P<0.01].100 μmol/L及200 μmol/L的α-硫辛酸均可下调高糖诱导的ICAM-1 mRNA的表达.结论:一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低ICAM-1蛋白和mRNA的表达.     

脂联素对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖及粘附分子1表达的影响

目的 探讨脂联素(ADPN)对高糖环境下肾小球系膜细胞(MCs)增殖及细胞间粘附分子1(ICAM-1)表达的影响. 方法 将MCs分为三组:①正常组(5.5 mmol/L葡萄糖),②高糖组(25mmol/L葡萄糖),③ADPN组(25 mmol/L葡萄糖,2.5ug/mlADPN)运用MTT测定(24h,48h,96h)后MCs的增殖情况;再将MCs分为三组:①正常组(5.5mmol/L葡萄糖),②高糖组(25mmol/L葡萄糖),③ADPN组(25mmol/L葡萄糖2.5,5,7.5,10,15,20ug/ mlADPN),作用48小时后运用ELISA法测定各组MCs上清液中ICAM-1的含量. 结果 高糖组抑制细胞增殖,加入ADPN后促进细胞增殖.ICAM-1 在高糖组表达较高,加入低浓度ADPN对于ICAM-1表达影响不大,10～20mg/LADPN组和高糖组相比,ICAM-1的表达下降,差异有统计学差异(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论 低浓度ADPN可以促进MCs增殖;中等以上浓度ADPN可以抑制ICAM-1在MCs的表达.提示ADPN可能通过阻抑ICAM-1表达发挥对DN的保护作用.     

内质网应激在UCH-L1抑制剂诱导细胞凋亡中的作用

目的 探讨内质网应激(ERS)在泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)抑制剂导致的细胞损伤过程中的作用.方法 采用50 umoL/L的UCH-L1抑制剂处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞.于处理前(对照组)和处理后不同时间点(2、4、6、12、24 h),分别采用MTT比色法和Western blotting法检测细胞活力和ERS相关蛋白Bip/Grp78、Xbp-1、p-eIF2a及其促凋亡转录因子CHOP/Gadd153的表达.结果 MTT比色法检测发现,50umol/L UCH-L1抑制剂处理后4 h,SK-N-SH细胞活力下降43.1%(P＜0.05),且随处理时间的延长继续呈现显著下降趋势(P＜0.01).Western blotting检测显示,经50umol/L UCH-L1抑制剂处理后,SK-N-SH细胞ERS相关蛋白Bip/Grp78、p-eIF2a和Xbp-1表达分别于处理后2、4、6 h时显著增加;转录因子CHOP/Gadd153表达则在处理后2 h和4 h时略有增加,6 h后达到高峰.结论 在UCH-L1抑制剂诱导的细胞凋亡过程中,ERS是导致细胞损伤的路径之一.     

血栓通胶囊对氧糖剥夺/复氧致HUVEC细胞紧密连接损伤的改善作用

目的采用氧糖剥夺(OGD)致HUVEC细胞损伤模型,考察三七总皂苷(PNS)及其单体Rg1、Rb1对氧糖剥夺致血管内皮紧密连接损伤的保护作用。方法 HUVEC细胞接种于Transwell细胞小室,待细胞融合后,设立实验组别:正常对照组、模型组、PNS 10、20、40 mg/L组以及Rb1 13.52 mg/L、Rg1 12.44 mg/L组,于缺氧同时进行药物干预,氧糖剥夺6 h复氧24 h后,检测HUVEC内皮细胞电阻值以及内皮渗透性的变化;采用激光共聚焦显微镜,免疫荧光法检测HUVEC细胞ZO-1、claudin-5蛋白表达的变化。结果与正常对照组相比,HUVEC细胞缺氧6 h复氧24 h后内皮细胞间紧密连接电阻显著降低,细胞渗透性显著升高(P0.05)。PNS 20、40 mg/L组能够显著抑制模型组紧密连接电阻的降低,抑制HUVEC细胞渗透性的升高(P0.05)。人参皂苷Rb1能够显著升高OGD 6 h复氧24 h后内皮紧密连接电阻,降低HUVEC细胞渗透性(P0.05)。免疫荧光检测结果显示,正常对照组HUVEC细胞的ZO-1及claudin-5蛋白主要分布于细胞膜周围,排列连续,显示出内皮细胞的典型铺路石排列。缺氧6 h复氧24 h损伤后,模型组细胞边缘的紧密连接蛋白显著减少,环形结构断裂,甚至消失,细胞核内紧密连接蛋白呈增加趋势。PNS 20、40 mg/L及Rb1 13.52 mg/L可观察到细胞间紧密连接局部恢复,呈铺路石样结构。结论 PNS对缺血致血管内皮细胞间紧密连接损伤有保护作用。     

ox-LDL对人脑微血管内皮细胞活性及黏附分子表达的影响

目的观察氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养人脑微血管内皮细胞活性及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,探讨毒损脑络的现代分子生物学机制。方法以培养人脑微血管内皮细胞为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入不同浓度的ox-LDL(0、5、10、25、50、75、100、150 mg/L)培养24、48、72 h,用四唑盐比色(MTT)法检测细胞活性,并以MTT测得的实验结果为基础选取ox-LDL浓度组(0、50、75、100 mg/L)和时间点(24、72 h),采用细胞免疫化学法和图像定量分析系统观察ICAM-1和VCAM-1的变化。结果ox-LDL对内皮细胞活性的影响有时间和浓度依赖性,统计学差异显著。细胞免疫化学法和图像定量分析系统显示ox-LDL各组(50、75、100 mg/L)OD值在24、72 h与正常对照组相比都有显著性差异(P(0.01),相同浓度组在24、72 h相比无统计学差异。结论不同浓度的ox-LDL能改变体外培养人脑微血管内皮细胞的活性,提高ICAM-1和VCAM-1的表达,构成了内毒损伤络脉的部分生物学基础。     

内质网应激在UCH-L1抑制剂诱导细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激(ERS)在泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)抑制剂导致的细胞损伤过程中的作用。方法采用50μmol/L的UCH-L1抑制剂处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞。于处理前(对照组)和处理后不同时间点(2、4、6、12、24h),分别采用MTT比色法和Western blotting法检测细胞活力和ERS相关蛋白Bip/Grp78、Xbp-1、p-eIF2α及其促凋亡转录因子CHOP/Gadd153的表达。结果MTT比色法检测发现,50μmol/LUCH-L1抑制剂处理后4h,SK-N-SH细胞活力下降43.1%(P<0.05),且随处理时间的延长继续呈现显著下降趋势(P<0.01)。Western blotting检测显示,经50μmol/LUCH-L1抑制剂处理后,SK-N-SH细胞ERS相关蛋白Bip/Grp78、p-eIF2α和Xbp-1表达分别于处理后2、4、6h时显著增加;转录因子CHOP/Gadd153表达则在处理后2h和4h时略有增加,6h后达到高峰。结论在UCH-L1抑制剂诱导的细胞凋亡过程中,ERS是导致细胞损伤的路径之一。     

Cinaciguat对高糖损伤血管内皮细胞功能的影响

目的 糖尿病状态下，一氧化氮(NO)与可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylatecyclase,sGC)均被氧化，使NO-sGC-环磷酸鸟苷(cGMP)信号通路传导异常，NO-sGC-cGMP信号通路异常是糖尿病血管内皮功能障碍的重要病理基础。可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(cinaciguat，CIN)可激活失活的sGC进而起到保护血管内皮细胞功能的作用。本研究通过体外实验制造高糖内皮细胞损伤模型，观察CIN对人脐静脉内皮细胞功能的影响。 方法 培养人脐静脉内皮细胞，并将细胞分为正常对照组、高糖组、CIN干预组，每组6例。高糖组及CIN干预组均加入33.3 mmol/L的葡萄糖制造高糖细胞损伤模型，而CIN组同时加入0.1 μmol/L CIN干预。各组细胞在培养6、24、48 h时，检测上清液中的NO水平及细胞内一氧化氮合酶(NOS)浓度；培养48 h后RT-PCR检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达；培养48 h后Western blotting检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)及血管粘附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达。 结果 与正常对照组相比，高糖组NO、NOS含量呈现早期升高晚期下降的趋势，而CIN组上述趋势消失；与正常组比较，高糖组内皮细胞的eNOS mRNA表达水平降低(P＜0.05)，iNOS mRNA、ICAM-1与VCAM-1蛋白表达明显升高(P＜0.05)，而CIN组eNOS mRNA表达水平较高糖组明显升高(P＜0.05)，iNOS、ICAM-1与VCAM-1蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05)。 结论 CIN可平衡NOS的活性，调节NO的生成及ICAM-1与VCAM-1的表达，改善高糖状态下内皮细胞的功能。      

三七总皂苷抑制K562细胞mTOR信号通路活性的实验研究

目的 探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对体外培养K562细胞mTOR信号通路相关分子表达及活性的影响.方法 不同浓度的PNS(50～800 μ,g/mL)干预体外培养K562细胞24 ～ 72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测mTOR、p70S6K、4E-BP1及p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化.结果 与对照组相比,浓度为100～ 800 μg/mL的PNS能够抑制K562细胞增殖(P＜0.05),促进K562细胞凋亡及死亡(P＜0.05),PNS对K562细胞72 h的IC50为(229.07±2.36) μg/mL;100、200、400 μg/mL PNS作用于K562细胞72 h后mTOR蛋白表达量及mRNA表达量降低(P＜0.05),且磷酸化蛋白p-mTOR (Ser2448)、p-p70S6K (Thr229/389)及p-4E-BP1(Thr37/46)表达水平也随着药物浓度的增加而降低(P＜0.05).结论 PNS能够抑制K562细胞mTOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一.     

黄芪甲苷对高糖诱导人肾小球系膜细胞损伤的保护作用及其机制

目的研究黄芪甲苷( As-IV)对高糖诱导人肾小球系膜细胞( HMC)损伤的保护作用及其机制。方法用 HMC为目的细胞,实验分为正常对照组、甘露醇对照组、高糖组、Tempol(100μmol/L)组、转化生长因子-β(TGF-β)阻断剂SB431542(10μmol/L)组与 As-IV(25、50、100μmol/L)组。各组细胞培养48 h后,用MTT法检测HMC增殖状况,二氢二氯荧光素( DCFH-DA)法检测细胞内活性氧( ROS)含量, ELISA法检测细胞上清液中 IV 型胶原( Col Ⅳ)的表达, Western blot法检测细胞中转化生长因子-β1( TGF-β1)、p-Smad2/3、NADPH氧化酶4(NOX4)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)蛋白的表达。结果与高糖组比较,Tem-pol组、SB431542组、As-IV 25、50、100μmol/L组均能显著抑制高糖诱导的细胞增殖,减少细胞内ROS及上清液中ColⅣ的含量,降低高糖诱导细胞内TGF-β1、p-Smad2/3、NOX4蛋白的高表达,并提高 TRPC6蛋白的表达( P <0.05, P <0.01)。结论 As-IV对高糖诱导HMC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制细胞增殖,减少细胞内 ROS 生成,下调TGF-β1、p-Smad2/3、NOX4蛋白的表达及上调TRPC6蛋白的表达有关。     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

脂联素对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖及粘附分子1表达的影响

目的探讨脂联素（ADPN）对高糖环境下肾小球系膜细胞（MCs）增殖及细胞间粘附分子1（ICAM-1）表达的影响。方法将MCs分为三组：①正常组（5．5mmol／L葡萄糖）,②高糖组（25mmol／L葡萄糖）,③ADPN组（25mmol／L葡萄糖,2．5ug／mlADPN）运用MTT测定（24h,48h,96h）后MCs的增殖情况;再将MCs分为三组：①正常组（5．5mmol／L葡萄糖）,②高糖组（25mmol／L葡萄糖）,⑤ADPN组（25mmol／L葡萄糖2．5,5,7．5,10,15,20ug／mlADPN）,作用48小时后运用ELISA法测定各组MCs上清液中ICAM--1的含量。结果高糖组抑制细胞增殖,加A．ADPN后促进细胞增殖。ICAM--1在高糖组表达较高,加入低浓度ADPN对于ICAM--1表达影响不大,10--20mg／LADPN组和高糖组相比,ICAM--1的表达下降,差异有统计学差异（P〈O．05）,且呈剂量依赖性。姑论低浓度ADPN可以促进MCs增殖;中等以上浓度ADPN可以抑制ICAM--1在Mcs的表达。提示ADPN可能通过阻抑ICAM-1表达发挥对DN的保护作用。     

高浓度葡萄糖对培养血管内皮细胞活力和黏附分子表达的影响

目的探讨高浓度葡萄糖作用于脐静脉内皮细胞后,对脐静脉血管内皮细胞系的活力和白细胞黏附分子〔血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)〕表达的影响,为阐明高血糖在糖尿病血管病变的早期发病中作用与机制提供依据。方法采用胎盘蓝染色法及流式细胞仪检测细胞活力和黏附分子表达。结果高浓度葡萄糖可使内皮细胞的死亡率增加,ICAM-1表达显著上调,但VCAM-1表达无明显变化。结论减少高糖诱导的ICAM-1、VCAM-1表达增加,对减少糖尿病患者慢性并发症的发生概率是一条有益的途径。     

尿酸在氧化应激状态下对人脐静脉内皮细胞的影响

目的 探讨不同浓度尿酸(UA)、作用不同时间及其在氧化应激状态下对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响.方法 体外细胞培养,用不同浓度UA(0 mg/d L、4 mg/d L、8 mg/d L、12 mg/d L)、过氧化氢(H2O2)(0.5 mmol/L)及不同浓度UA+H2O2刺激HUVEC.分别于24 h、48 h后观察HUVEC的细胞形态,采用MTT法检测HUVEC的增殖情况,用ELISA方法检测培养液中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的浓度.结果实验发现4 mg/d L UA组HUVEC 24 h、48 h后活力较对照组差异无统计学意义(P>0.05);8 mg/d L、16mg/d L组24 h后HUVEC活力较对照组差异无统计学意义(P>0.05),48 h后8 mg/d L、16 mg/d L组HUVEC活力较对照组显著降低(P<0.05).H2O2组HUVEC活力较对照组有显著降低(P<0.05);各种浓度UA加H2O2组HUVEC 24 h后较单纯H2O2组活力强,而48 h后8 mg/d L加H2O2、16 mg/d L加H2O2组较单纯H2O2组活力差异无统计学意义(P>0.05).ELISA法检测发现48 h后16 mg/d L UA组较对照组细胞合成NO减少,分泌ET-1增多(P<0.05).8 mg/d L加H2O2、16 mg/d L加H2O2组与单纯H2O2组相比,24 h后细胞合成NO增多,分泌ET-1减少(P<0.05);而48 h后16 mg/d L加H2O2组与单纯H2O2组相比,细胞合成NO减少,分泌ET-1增多(P<0.05).结论 尿酸对HUVEC的作用不仅与浓度有关,与作用时间也有关系.急性升高的尿酸对HUVEC还有保护作用,而高浓度的尿酸长时间对HUVEC有损伤作用,而氧化应激可能加重尿酸对HUVEC的损伤作用.     

高糖和MBL对体外培养的人肾小球内皮细胞表达IL-18的影响

目的观察高糖和甘露聚糖结合凝集素（MBL）对体外培养的人肾小球内皮细胞（HRGEC）表达白细胞介素-18（IL-18）的影响。方法体外培养正常HRGEC,按干预条件随机分为对照组（5mmol/L D-葡萄糖）、高糖组（30mmol/L D-葡萄糖）和甘露醇组（5mmol/L D-葡萄糖＋25mmol/L甘露醇）,培养72小时后分别采用实时荧光定量RCR法（Real-time PCR）和ELISA法检测各组细胞IL-18的mRNA及细胞培养上清液中的蛋白表达。另取细胞随机分为单纯高糖组和高糖＋MBL组,均用高糖培养72h后,分别加入等量的30%MBL缺乏人血清,高糖＋MBL组另加10μg/ml MBL,继续培养4h。采用免疫荧光法检测各组细胞表面凝集素补体途径（LCP）激活终产物膜攻击复合物（MAC）的沉积,并检测各组细胞IL-18的mRNA和蛋白表达。结果与其他各组相比,高糖组细胞的IL-18mRNA以及蛋白表达均明显增加（P〈0.05）;高糖＋MBL组细胞表面有明显MAC沉积,IL-18mRNA及蛋白表达与单纯高糖组相比明显增加（P〈0.05）。结论高糖可以诱导人肾小球内皮细胞炎症因子过表达;高糖和MBL共存时可促成LCP激活,并对DN的炎症状态具有促进作用。     

高糖及NF-κB抑制剂PTDC对大鼠肾成纤维细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨高糖及NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对大鼠成纤维细胞中,细胞间黏附蛋白-1(ICAM-1)表达的影响。方法:体外培养大鼠肾小管成纤维细胞(NRK);葡萄糖孵育下分6组:正常对照组,高糖1组,高糖2组含葡萄糖分别为5.6,15和30 mmol/L,干预组在葡萄糖30 mmo/L基础上分别加入PDTC 5,10和20μmol/L;RT-PCR检测24,48 h后各组ICAM-1 mRNA表达水平;免疫细胞化学(ICC)法检测24,48 h各组的ICAM-1表达情况。结果:与正常组相比,高糖组ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且呈剂量时间依赖性;而不同浓度PDTC干预后,ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),而且与PDTC呈剂量时间依赖性。结论:NF-κB抑制剂PDTC可以下调高糖环境下NRK中ICAM-1的表达。     

大黄素对急性淤胆型肝炎模型大鼠的治疗作用及机制

目的 初步探讨大黄素对急性淤胆型肝炎模型大鼠的治疗作用及机制.方法 SD大鼠分为5组:大黄素组、熊去氧胆酸组、地塞米松组、模型组、正常对照组,各24只.除正常对照组外,其余4组均给予α-异硫氰酸萘酯(ANJT)50 mg/kg一次灌胃大鼠建立淤胆型肝炎动物模型,并给予相应的药物干预.造模后24、48、72 h 3个时间点采集标本(每时间点8只),检测肝功能和肝脏病理学检查.实时荧光定最PCR检测肝组织中细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1(CINC-1)、巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)mRNA表达,Western印迹法检测肝组织中细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达.结果 大黄素组24、48、72 h各时间点总胆红素[TB,(32.8±3.7)μmol/L、(61.0±16.4)μmol/L、(10.8±4.5)μmol/L],直接胆红素[DB,(26.03±3.10)μmol/L、(49.40±18.16)μmol/L、(8.04±3.03)μmol/L],丙氨酸氨基转移酶[ALT,(314±50)U/L、(664±97)U/L、(200±60)U/L]均明显低于模型组(均P<0.05),天冬氨酸氨基转移酶(AST)48、72 h时间点、碱性磷酸酶(ALP)48 h、γ-谷氨酰转移酶(GGT)72 h、总胆汁酸(TBA)48、72 h时间点均明显低于同时间点模型组(均P<0.05);TB24、48 h,DB、ALT 24 h,TBA 24 h[(204±55)μmol/L]、72 h,均明显低于同时间点熊去氧胆酸组(均P<0.05);TB、TBA 24、48 h,AIX、AST、GGT各时间点,时间点均明显低于同时间点地塞米松组(均P<0.05).各时间点大黄素组的CINC-1、MIP-2 mRNA表达和ICAM-1蛋白表达水平均明显低于同时间点模型组(均P<0.05).结论 大黄素治疗ANIT诱导的急性淤胆型肝炎模型大鼠的作用以降低TB、DB、ALT最为显著,起效比熊去氧胆酸快,其对ALT、AST、GGT、TBA的作用优于地塞米松.其作用机制可能与抑制CINC-1、M1P-2、ICAM-1的活化有关.     

罗格列酮对高糖刺激下肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1表达的影响

目的 观察罗格列酮(ROS)对肾小管上皮细胞凋亡及整合素β1 (integrin β1)水平的影响.方法 将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞分为空白对照组、正常血糖(5 mmol/L)组、高糖(30 mmol/L)组、ROS (10 μmol/L)组、高糖(30 mmol/L) ROS (5 μmol/L)组和高糖30 mmol/L ROS 10 μmol/L 6组, 采用流式细胞仪检测细胞培养后24、48、72 h的凋亡情况、Western blot及RT-PCR检测不同浓度的ROS对高糖刺激下integrin β1蛋白质和mRNA表达的影响.结果 integrin β1的蛋白质和mRNA的改变趋势相同,高糖组较对照组及正常血糖组增加(P＜0.05) ,经ROS处理后integrin β1的表达较高糖组降低,且与ROS浓度呈剂量相关.各实验组在48 h、72 h的细胞凋亡率与空白对照组相比均降低(P＜0.05);48、72 h的细胞凋亡率低于24 h(P＜0.05),但48 h与72 h间的比较差异无统计学意义.结论 ROS可明显抑制高糖刺激下肾小管上皮细胞integrin β1的表达,且有明显剂量依赖关系,而ROS对细胞凋亡的影响可能与 integrin β1的参与有关.     

单宁酸对高糖和糖化终末产物培养条件下肾小球系膜细胞氧化应激及微炎症状态的改善作用

目的：探讨单宁酸对肾小球系膜细胞（GMC）的作用,从氧化应激及微炎症角度阐明单宁酸改善糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法：体外培养GMC,分别用高浓度葡萄糖（30 mmol/L）及糖化终末产物(AGEs)牛血清白蛋白（BSA,250 mg/L）处理,正常糖培养及不含糖的BSA处理的细胞作为相应对照组,在高糖或AGEs处理的同时采用不同浓度单宁酸（10、20、40和80 μmol/L）进行干预,培养48 h后检测细胞培养上清中丙二醛（MDA）水平及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,ELISA法检测细胞培养上清中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平,免疫组织化学法检测GMC中细胞间黏附分子1（ICAM-1）蛋白表达,RT-PCR法检测GMC中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和ICAM-1 mRNA的表达水平。结果：与高糖组和AGEs组比较,单宁酸处理组MDA水平明显降低（P<0.05）,GSH-Px、SOD及CAT活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,GMC培养上清中8-OHdG水平明显降低（P<0.05）。与高糖组和AGEs组比较,40 和80 μmol/L单宁酸组ICAM-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与高糖组比较,单宁酸组MCP-1和ICAM-1 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。结论：单宁酸可保护GMC免受氧化及炎症介质的损伤,从而延缓和改善DN的肾小球病变。     

余甘子中没食子酸抑制高糖诱导胰岛β细胞凋亡

目的 探究余甘子中没食子酸对高糖诱导胰岛β细胞凋亡的保护作用, 为从中药中发现治疗糖尿病的天然化合物提供一定参考依据.方法 体内实验造模:以wistar雄性大鼠作为体内研究对象, 腹腔注射50mg/kg STZ, 造模成功后口服给予25 mg/kg的没食子酸, 阳性药选用西格列汀, 给药4周后, 取血、摘取胰腺, 进行HE染色, 采用Western blot法测定高糖状态下胰腺组织中NLRP3、TXNIP蛋白表达;体外实验造模:以胰岛瘤细胞株INS-1细胞作为体外研究对象, 建立高糖诱导细胞凋亡模型, 在无糖RPMI1640完全培养基中添加25mmol/L葡萄糖培养INS-1细胞, 以没食子酸为受试样品, 将实验分为正常对照、高糖模型、没食子酸低、中、高剂量组.采用MTT法测定细胞活性, 采用QPCR法、Western blot法测定高糖状态下INS-1细胞中NLRP3、TXNIP的m RNA表达, 检测NLRP3、TXNIP蛋白表达.结果 (1) INS-1细胞在葡萄糖浓度为25 mmol/L的培养基中培养48 h后, 与对照组比较, 凋亡率升高 (P<0.01) , 表明高糖状态下细胞凋亡模型建立成功. (2) 10、5、2.5μmol/L的GA分别处理对照组和高糖模型组细胞, 对照组细胞存活率没有明显变化 (P>0.05) .体内实验中与对照组比, 高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3、TXNIP的蛋白表达具有统计学差异 (P<0.05) ;GA处理后蛋白表达水平明显下调, 有统计学差异 (P<0.05) , 体外实验中与对照组比, 高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3的蛋白表达有统计学差异 (P<0.01) , GA处理后蛋白表达水平明显下调 (P<0.01) ;TXNIP的蛋白表达水平上调 (P<0.05) ;GA处理后蛋白表达水平明显下调 (P<0.05) ; (3) 与对照组比, 高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3、TXNIP m RNA表达水平均上调 (P<0.01) ;GA处理后蛋白表达水平明显下调 (P<0.01) .结论 将细胞置于添加25 mmol/L浓度葡萄糖的无糖RPMI1640完全培养基中培养48 h.GA对正常INS-1细胞增殖无影响, GA具有保护高糖状态下INS-1细胞凋亡的作用, 其机制可能与GA下调NLRP3、TXNIP的基因表达有关.