基于DNA条形码序列分析的5种菖蒲属药用植物鉴定

目的构建菖蒲属药用植物的鉴别方法。方法采用DNA条形码序列技术,对5种菖蒲属药用植物的4条候选DNA条形码序列(ITS2、rbc L、mat K、psb A-trn H)进行PCR扩增和测序,比较各序列的扩增和测序效率,对比分析种内、种间的遗传变异、分析barcoding Gap并构建聚类分析树。结果 4条候选DNA条形码序列PCR扩增和测序效率均为100%,ITS2序列对菖蒲属药用植物的鉴定成功率最高。结论基于ITS2序列的DNA条形码技术可以鉴定菖蒲属药用植物。     

基于ITS序列分析技术鉴定川牛膝与常见伪品麻牛膝

目的:比较川牛膝与其常见伪品麻牛膝之间的ITS序列差异及规律。为川牛膝与麻牛膝的DNA条形码鉴别提供适合的分子标记。方法:收集川牛膝及麻牛膝成品药材并提取纯化其基因组DNA,经PCR扩增得到ITS序列(包括ITS1、5.8S nrDNA、ITS2)并进行T-A克隆后测序,分析两者序列差异。结果:PCR扩增获得两者ITS序列,经多序列对比分析得出川牛膝与伪品麻牛膝的ITS序列存在明显差异。结论:ITS序列分析可以用作鉴定川牛膝与麻牛膝药材。     

北沙参及易混品的ITS2分子鉴定

目的北沙参(Glehniae Radix)药材性状与桔梗科(Campanulaceae)的南沙参(Adenophora tetraphylla(Thunb.)Fisch.)、轮叶党参(Codonopsis lanceolata(Sieb et Zucc)Benth.et Hook.)等类似,易产生混淆。作者通过对不同产地北沙参及其混淆品的ITS2(Internal Transcribed Spacer2)分子鉴定,探讨ITS2条形码序列对北沙参药材鉴定可行性。方法对样品进行DNA提取,并运用PCR扩增方法进行ITS2序列扩增,采用双向测序的方法对PCR产物进行测序。测序结果运用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,用MEGA5.1软件对序列结果进行分析并建立K2P模型的NJ树,并预测ITS2的二级结构。结果与结论不同产地北沙参的ITS2序列一致,并且从NJ树可明显区分北沙参及其混淆品。     

重叠延伸PCR方法的建立与应用

目的建立一种新型PCR技术（重叠延伸PCR）并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES（internal ribosome entry site）的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备.方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3＇端与IRES基因5＇端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段.结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段.结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值.     

用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因长片段

目的　建立一种简便有效的获取cDNA大片段的实验技术。方法　应用PCR原理 ,设计特异引物结合文库载体引物对大鼠胎肝cDNA文库进行PCR扩增 ;用随机引物标记法标记已知小片段“目的基因”(30 0bp± )作为探针 ,对PCR产物进行Sorthern杂交以检验“目的基因”片段的正确性及长度 ;回收“目的基因”片段并连接入PGEM T载体 ,转染JM 10 9并扩增后 ,提取“目的基因”测序。结果　琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增产物有多条不同长度的段 ,Sorthern杂交发现一段长度为 1 5kb的cDNA片段为“目的基因” ;测序结果与GeneBank进行Blaste分析 ,该基因为一株新的序列 ,已在GeneBank中登录注册 (RatLiverRegeneration relatedPro tein 1,RLRP 1AF2 36 0 5 4 )。结论　应用PCR结合Sorthern杂交等手段可迅速从cDNA文库中获取长片段目的基因     

薏苡仁提取物对人肺鳞癌细胞端粒酶的影响

目的：探讨薏苡仁提取物与人肺鳞癌细胞端粒酶的关系。方法：用脂肪乳剂作为对照组，观察两组肺鳞癌细胞生长情况，然后应用TRAP—PCR方法测定细胞端粒酶活性。结果：薏苡仁提取物能抑制肺鳞癌细胞的生长，但不能抑制肺鳞癌细胞端粒酶活性。结论：薏苡仁提取物可以抑制肺鳞癌细胞的生长，但不是通过抑制肺鳞癌细胞端粒酶的活性而实现的。     

薏苡仁及其伪品的鉴别研究

目的：鉴别薏苡仁的真伪。方法：采用薄层色谱法和高效液相色谱指纹图谱法对薏苡仁和4种伪品草珠子、小麦、大麦、高粱米进行比较研究。结果：结果显示,薏苡仁与小麦、大麦、高粱米在薄层色谱条带上加以区分。薏苡仁和同属的草珠子在薄层色谱鉴别中难以辨别,进一步采用指纹图谱区分。结论：建立的鉴别方法,可准确区分薏苡仁及其常见伪品,为薏苡仁的质量控制提供参考。     

中药黄草石斛rDNA ITS序列分析

目的　研究黄草石斛ITS片段遗传多样性,分析该片段在黄草药材DNA分子鉴别和石斛属植物系统学研究中的意义。方法　用一对引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后用双脱氧终止法(Sangerdideoxy)测序。结果　获得核糖体DNA中ITS和5 8SrDNA完整序列,14个石斛类群的ITS 1与ITS 2序列的长度分别为228-233bp和242-247 bp。石斛种间ITS 1序列的差异百分率为11.79% - 31.58% ,ITS 2序列的差异百分率为10.29% - 25.30% ,金钗石斛种内ITS 1序列的差异百分率为0.87% ,ITS 2序列无差异。石斛各类群与外类群的差异百分率ITS 1序列为23.56% - 36.89% ,ITS 2序列为26.5.2 % - 33.31%。用NJ法根据ITS 1与ITS 2序列数据重建系统发生树。结论　两段序列在石斛种内保守,在种间有较大的差异,与外类群的差异最大,可作为中药黄草石斛分子鉴定的标记,而石斛属的系统发生关系尚须进一步研究     

4个地区独一味的ITS基因片段序列分析

目的：检测独一味的ITS基因序列片段,并利用ITS序列作为遗传标记分析了来自4个不同地区（甘南玛曲、西藏林芝、四川若尔盖道班、四川若尔盖热当坝）的独一味的遗传变异情况。方法：采用Plant DNA Mini Kit法作为基因组DNA提取的最佳方法,提取植物独一味的核基因组DNA,并且建立了适合独一味的PCR反应体系,利用合成的特异性PCR引物对所提取的DNA中rRNA基因内转录间隔区序列进行套式扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳得到电泳图谱,并进行分析,测序。经Clusta 1X软件排序,MEGA3软件统计分析和分支分析,建立系统发育树,并计算各类群间的遗传距离。结果：琼脂糖电泳图谱及所测序列显示,来自于植物独一味的核DNA中rRNA基因内转录间隔区全长为670bp左右．甘南玛曲和西藏林芝的独一味遗传距离较小,四川与甘南玛曲和西藏林芝的独一味遗传距离较大。结论：基于ITS序列分析,作为品质突出的甘南玛曲独一味和其他地区的独一味相比,并未形成一个区别于其他地区独一味的一个独特的种。根据ITS序列特征所构建的系统树,与传统分类有所不同。     

家庭性高胆固醇血症LDL—R基因点突变的初步研究

目的：建立一种快速、高效地检测LDL－R基因点突变的方法用于对家族性高胆固醇血症患进行分析。方法：采用同一种程序和反应体系分别扩增家族性高胆固醇血症LDL－R基因包括18外显子和启动子在内的21个片段，琼脂糖电泳检测PCR产物，SSCP分析和PCR产物直接测序检测点突变。结果与结论：本方法可以快速、简便、有效地扩增LDL－R基因包括启动子在内的21个片段，PCR产物直接测序初步发现一家族性高胆固醇血症患存在点突变。     

环境因素对薏苡黑粉病菌冬孢子活力的影响

薏苡黑粉菌的冬孢子在室内干燥条件下,可以存活５年左右,北京地区田间地表及地下５ｃｍ深处的冬孢子均可以安全越冬,增加土壤湿度有利于降低土壤中越冬孢子数量。病田轮作大豆、山药等作物安全期至少为２年。     

超临界CO2萃取薏苡仁油工艺条件优化

目的应用超临界CO2萃取技术提取薏苡仁中的薏苡仁油，优化工艺条件。方法利用1L与600L的超临界萃取装置，考察原料水份、压力、时间与温度等参数对薏苡仁油提取得率的影响。结果优化得到用超临界CO2萃取技术从薏苡仁中提取薏苡仁油的工艺参数。结论超临界CO2萃取技术可用于薏苡仁油的提取，适用于工业化生产。     

娑罗子生长期成分分析研究

目的对中药材娑罗子生长过程中的成分进行分析,以利于寻找娑罗子的最佳采摘时间,指导娑罗子提取物的生产过程控制。方法参照《中国药典》2010年版(一部)娑罗子的高效液相色谱成分检测法,结合娑罗子提取物有效成分的检测方法,建立可行的高效液相色谱法检测。结果娑罗子在开花结果后的生长过程中,随着含量的不断增加,其成分比例也是在不断变化的,成熟期后成分A含量高于成分B。结论可通过该方法确定娑罗子的最佳收获时间,以减少药材批与批间的差异,使药材提取过程的参数更加可控。     

基于PCA及PLS-DA算法分析决明子炒制前后化学成分的变化

目的：分析决明子炒制前后化学成分的变化规律,筛选影响决明子炒制前后主要差异的物质基础。方法：采用HPLC-PDAD技术建立决明子及炒决明子的化学指纹图谱,利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行Mark峰匹配,以SIMCA-P 11.0统计软件进行主成分分析（principal component analysis,PCA）及偏最小二乘判别分析（partial least-squares discriminant analysis,PLS-DA）,建立决明子及炒决明子PCA模型和PLC-DA模型,获取得分图和载荷图及Variable Importance （VIP）值,筛选并分析影响决明子炒制前后主要差异的物质基础。结果：构建了决明子及炒决明子的PCA （R₂X=0.844,Q₂=0.667）和PLC-DA （R₂Y=0.944,Q₂=0.861）模型,筛选出VIP值大于1的7个色谱峰。与决明子相比,炒决明子的色谱峰的峰面积均增大,且有显著性差异（P<0.01）,其中保留时间为54.189 min,VIP值为1.395 6的色谱峰为大黄素。结论：决明子炒制前后化学成分的含量发生改变。保留时间为58.252,62.825 min的成分（待分离鉴定）和大黄素为影响决明子炒制前后差异的主要物质基础。     

Fisher成分分析法用于决明子化学指纹特征相似性研究

目的:探求Fisher成分分析法用于大、小决明子化学指纹特征相似的研究,为大、小决明子的分类提供依据。方法:对获得的指纹图谱进行数字化处理并得到大、小决明子的标准指纹图谱,然后用Fisher成分分析法提取大、小决明子化学指纹图谱中的隐含化学特征,对大、小决明子进行质量模式分类,并与主成分分析法及标准图谱法进行分类效果对比研究。结果:Fisher成分分析法能更好地表征大、小决明子的化学模式特征,分类准确性高。结论:根据Fisher成分分析法可识别大、小决明子的化学指纹特征的内在差异,可用于鉴别中药材真伪。     

薏苡仁对照药材和薏苡仁油对照提取物稳定性考察

目的:考察薏苡仁和薏苡仁油的稳定性.方法:比较不同产地样品的差异,进行影响因素试验、加速试验和长期稳定性试验.结果:薏苡仁经加速后明显不稳定,而薏苡仁油则较稳定.结论:建议在薄层色谱鉴别时采用薏苡仁油对照提取物替代薏苡仁对照药材.     

Apoptosis induction of persicae semen extract in human promyelocytic leukemia (hl-60) cells

The major ingredient of Persicae Semen is a cynogenic compound, amygdalin (D-mandelonitrile-beta-gentiobioside). Controversial results on the anticancer activity of amygdalin were reported due to its conversion to its inactive isomer, neoamygdalin. In order to inhibit the epimerization of amygdalin, we used newly developed simple acid boiling method in preparation of Persicae Semen extract. HPLC analysis revealed most of amygdalin in Persicae Semen extract was active D-form. Persicae Semen extract was used to analyze its effect on cell proliferation and induction of apoptosis in human promyelocytic leukemia (HL-60) cells. Persicae Semen extract was cytotoxic to HL-60 cells with IC50 of 6.4 mg/mL in the presence of 250 nM of beta-glucosidase. The antiproliferative effects of Persicae Semen extract appear to be attributable to its induction of apoptotic cell death, as Persicae Semen extract induced nuclear morphology changes and internucleosomal DNA fragmentation.     

含毒性中药马钱子中成药的剂型与工艺分析

目的了解含毒性中药马钱子制剂的剂型分布及其入药特点,为本院治疗肝癌特色中药制剂马红丸（由马钱子、红娘子、守宫等组成）的质量标准提高提供参考依据。方法对2010年版《中国药典》收载的11个含毒性中药马钱子的中成药制剂进行统计,分析该类制剂的剂型分布、方解作用及提取工艺。结果《中国药典》收载的11个含马钱子中成药涉及5种剂型,分别为片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、橡胶膏剂;其中以马钱子为君药的制剂有7个占63.6%,余下的均为臣药;公开提取工艺的有9个,占81.81%;各制剂所用提取方法均以物理打粉为主。结论含毒性中药马钱子的中成药制剂数量及剂型较少,其中马钱子均以打粉入药,作君臣药使用。但大部分制剂还欠缺质量控制、药效研究、临床应用的系统分析。     

中药材菟丝子中金丝桃苷含量测定的影响因素研究

目的 研究菟丝子中金丝桃苷含量测定结果的影响因素。方法 分别对供试品溶液制备的影响因素进行初步考察,发现粉碎是影响含量高低的关键因素。采用不同效能的粉碎机、不同的粉碎时间、粉碎次数等,对菟丝子药材进行粉碎,通过测定过筛后粉末中金丝桃苷的含量,以重点考察粉碎对测定结果的影响。结果 粉碎是影响菟丝子金丝桃苷含量高低的关键因素,而金丝桃苷在菟丝子种子不同部位的分布存在较大差异,其中以胚中含量较高。结论 由于菟丝子较难粉碎,而金丝桃苷含量在种子各部位的分布不均,含量测定中的粉碎是关键操作步骤。本研究为进一步完善粉碎的要求提供了一定的实验依据。