Ox-LDL诱导血管平滑肌细胞胸腺基质淋巴细胞生成素表达

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是否可以诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP),并探讨核因子-κB(NF-κB)信号通路在其中的作用。方法:原代培养VSMCs,分别用ox-LDL及ox-LDL联合NF-κB特异性抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)干预。采用免疫组织化学染色检测胞质中TSLP的表达,用ELISA法检测细胞培养上清液中TSLP的浓度,用电泳迁移率实验检测NF-κB的结合活性。结果:正常未经ox-LDL刺激的VSMCs几乎不表达TSLP,经ox-LDL刺激后胞质及上清液中的TSLP表达明显增加,并有浓度和时间依赖性。Ox-LDL刺激VSMCs表达TSLP的同时NF-κB信号通路激活,经PDTC预处理后TSLP表达量显著减少。结论:Ox-LDL能够诱导VSMCs表达TSLP,其作用机制可能为上调NF-κB的结合活性。     

川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养人冠状动脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度川芎嗪为1μmol/L组、10μmol/L组、100μmol/L组。用RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因和蛋白表达;采用免疫荧光法观察NF-κB p65蛋白的核转位。结果与对照组比较,ox-LDL组MCP-1、ICAM-1基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,10μmol/L组、100μmol/L组MCP-1、ICAM-1基因表达明显降低(P<0.01),1μmol/L组、10μmol/L组MCP-1、ICAM-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。免疫荧光显示,1μmol/L组、10μmol/L组可抑制NF-κB p65亚基的核转位。结论川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

前列腺素E1对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨前列腺素E1(PGE1)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattactant protein-1,MCP-1)表达的影响及可能机制.方法 用培养的人脐静脉内皮细胞观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对MCP-1、核因子(NF)-κB表达的影响及PGE1的干预作用.采用ELISA检测上清液MCP-1浓度,原位杂交检测MCP-1 mRNA的表达,免疫印迹检测NF-κB蛋白表达.结果 (1)PGE1(0.001、0.010、0.100 mol/L)组与ox-LDL(100 μg/ml)组比较,MCP-1蛋白表达为(0.327±0.051)、(0.214±0.213)、(0.247±0.228)pg/ml对(0.655±0.013)pg/ml,MCP-1mRNA表达为(0.061±0.008)、(0.033±0.006)、(0.026±0.004)吸光度(A)/μm2对(0.220±0.032)A/μm2,PGE1显著抑制了ox-LDL所诱导的MCP-1改变.(2)Western blot结果显示,PGE1呈浓度依赖性抑制ox-LDL所诱导的NF-κB P65蛋白表达.结论 PGE1可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1及NF-κB表达上调,这可能与PGE1介导的血管内皮保护作用有关.     

运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠Toll样受体促炎通路的影响

目的研究不同运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR2)、TLR4及白细胞介素6(IL-6)、核转录因子κB(NF-κB)表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为对照组(n=20)和糖尿病动脉粥样硬化组(n=80)。对照组予普通饲料喂养,糖尿病动脉粥样硬化组予高糖高脂喂养后腹腔注射STZ(30mg/kg)建立糖尿病动脉粥样硬化模型,后再随机分为模型亚组及小、中、大运动量亚组,对后3亚组进行游泳运动干预。干预后采用ELISA测定各组血浆IL-6、NF-κB的浓度及采用Western blott测定主动脉组织中TLR2、TLR4的表达。结果运动前,模型亚组血浆IL-6[(58.06±5.38)vs(14.21±4.04)ng/ml]、NF-κB[(154.24±9.24)vs(65.99±8.63)ng/ml]较对照组升高(P0.01);各运动亚组运动干预后血浆IL-6、NF-κB较运动前下降(P0.01)。模型亚组主动脉组织中TLR2[(1.19±0.04)vs(0.57±0.04)]、TLR4蛋白表达[(1.25±0.05)vs(0.68±0.06)]较对照组升高(P0.01);运动干预的各亚组运动后主动脉组织中TLR2、TLR4较模型亚组降低,以中、大运动量亚组下降明显(P0.01或P0.05)。结论糖尿病动脉粥样硬化大鼠动脉组织TLR2、TLR4蛋白表达及血浆IL-6、NF-κB增高,运动可以改善上述与促炎通路有关的因素。     

氧化低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶(furin)表达的影响,初步探讨ox-LDL影响活性转化生长因子-β(TGF-β)产生的作用机制。方法:本实验分为5组:对照组,ox-LDL 20、40、80、100mg/L组;体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度ox-LDL作用24h后,采用实时定量PCR和western blot方法检测各组细胞furin的mRNA及蛋白表达量,用荧光分析法检测各组furin的活性。结果:与对照组比较,ox-LDL 20、40mg/L组的furin蛋白表达量升高[(0.628±0.013),(0.991±0.009),(1.078±0.033),P<0.01],而ox-LDL 80、100mg/L组furin的蛋白表达量下降[(0.584±0.017),(0.559±0.021),P<0.05]。结论:低浓度ox-LDL(20、40mg/L)促进大鼠VSMCs中furin的表达,而高浓度ox-LDL(80、100mg/L)则抑制furin的表达;ox-LDL可能通过furin途径影响活性TGF-β的产生,从而影响斑块的稳定性。     

PCKS9通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性

目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是否通过人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/环氧合酶2(COX-2)途径调节单核-内皮细胞黏附性。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理HUVECs,real-time PCR与Western blot法检测PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白孵育或PCSK9 siRNA转染HUVECs,检测TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白与TLR4抑制剂瑞沙托维(TAK-242)或NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)共同孵育HUVECs,检测NF-κB p65与COX-2的mRNA和蛋白表达;COX-2抑制剂(NS398)与人重组PCSK9蛋白先后处理HUVECs后,加入THP-1单核细胞检测单核-内皮细胞黏附性。结果 ox-LDL上调HUVECs的PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);人重组PCSK9蛋白在ox-LDL基础上上调TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);PCSK9 siRNA转染可抑制ox-LDL对TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);TAK-242抑制人重组PCSK9蛋白对TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);PDTC抑制人重组PCSK9蛋白对NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);NS398可抑制人重组PCSK9蛋白的促单核-内皮细胞黏附作用(P均0.05)。结论 PCSK9可通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性。     

激活瞬时受体电位香草醛亚家族1改善平滑肌源性泡沫细胞形成机制研究

目的探讨瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)在血管平滑肌细胞(VSMC)泡沫化过程中的作用及可能的机制。方法将野生型C57BL/6J雄性小鼠来源主动脉VSMC不加任何试剂刺激作为对照组,另将野生型C57BL/6J雄性小鼠和Toll样受体(TLR4)基因敲除(TLR4-/-)雄性小鼠来源主动脉VSMC使用氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)80μg/ml刺激72h,建立oxLDL细胞模型,依次作为oxLDL组、辣椒素组(造模前预先用辣椒素50μmol/ml刺激VSMC 12h)和TLR4-/-组,每组5例。采用油红O染色观察VSMC内脂质聚积情况;检测VSMC内胆固醇、TRPV1、TLR4蛋白及炎性因子白细胞介素6(IL-6)和TNF-α表达。结果与对照组比较,oxLDL组VSMC泡沫化程度、胆固醇水平明显升高,TLR4及其介导的IL-6[(44.03±3.76)ng/L vs (25.64±4.84)ng/L]、TNF-α表达[(155.64±13.32)ng/L vs (89.86±9.18)ng/L]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而TLR4-/-组和辣椒素组VSMC泡沫化程度、胆固醇水平、TLR4及其介导的IL-6、TNF-α表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与oxLDL组比较,辣椒素组VSMC中TRPV1蛋白表达明显上调,同时伴随VSMC泡沫化程度、胆固醇水平、TLR4及其介导的IL-6、TNF-α表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论激活TRPV1可通过干扰TLR4介导的炎性反应抑制VSMC泡沫化。     

Toll样受体4在不同类型冠心病患者中的表达及与经皮冠状动脉介入术后支架内再狭窄的危险因素的相关性

目的分析Toll样受体4(TLR4)在不同类型冠心病患者中的表达,并探讨经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后支架内再狭窄的危险因素及与TLR4的相关性。方法连续选取因胸痛接受冠状动脉造影的患者342例,根据造影结果分为对照组44例和冠心病组298例,包括稳定性心绞痛(SAP组)48例和急性冠状动脉综合征(ACS组)250例,比较TLR4在SAP组和ACS组间的表达差异;再进一步将ACS组分为不稳定性心绞痛(UA组)68例、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI组)85例和ST段抬高型心肌梗死(STEMI组)97例,比较TLR4在3组间的表达差异。术后随访,根据PCI术后是否出现支架内再狭窄分为再狭窄组和未狭窄组,分析影响术后支架内再狭窄的危险因素及与TLR4的相关性。结果对照组与不同类型冠心病组在性别、年龄、病程、吸烟史、高血压、血糖、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)方面均存在显著差异(均为P<0.05)。ACS组TLR4水平明显高于SAP组[(137.88±12.43)ng/ml比(97.34±9.78)ng/ml,t=2.35,P=0.02];NSTEMI组和STEMI组的TLR4水平均明显高于UA组[(147.78±15.32)ng/ml和(152.12±13.77)ng/ml比(112.37±11.38)ng/ml,t=2.23,P=0.03;t=2.74,P<0.01]。PCI术后共有18例(11.4%)患者出现支架内再狭窄,再狭窄组的TLR4水平明显高于未狭窄组[(149.94±11.43)ng/ml比(95.45±10.78)ng/ml,t=7.13,P<0.01]。Logistic回归分析发现,血糖>11.1 mmol/L(OR=2.67,95%CI:1.22～3.93,P=0.022)、术后吸烟(OR=8.65,95%CI:4.39～14.71,P=0.020)、术后停用阿司匹林>1年(OR=10.12,95%CI:6.34～16.28,P=0.016)和LDL-C>4.14 mmol/L(OR=19.35,95%CI:13.46～28.39,P=0.005)为PCI术后支架内再狭窄的危险因素,且TLR4与血糖、停用阿司匹林时间和LDL-C均呈正相关(r=0.685,P=0.02;r=0.557,P=0.03;r=0.473,P=0.04)。结论 TLR4在ACS患者中的表达,不同类型冠心病较SAP患者明显升高,NSTEMI和STEMI又较UA患者明显升高;血糖>11.1 mmol/L、术后吸烟、停用阿司匹林时间>1年和LDL-C>4.14 mmol/L与PCI术后支架内再狭窄相关,且血糖、停用阿司匹林时间和LDL-C水平与TLR4均呈正相关。     

LOX-1/NF-κB信号途径对ox-LDL刺激的人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用

目的：探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）/核因子（NF）-κB信号途径对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）炎症因子表达的影响及氟伐他汀的干预作用。方法：设立不同浓度的ox-LDL刺激组,LOX-1中和抗体干预组,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氢基甲酸盐（PDTC）干预组,氟伐他汀干预组及空白对照组;检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α,白细胞介素（IL）-6的浓度。结果：25mg/L、50mg/L、100mg/L浓度的ox-LDL刺激组24h后上清液TNF-α浓度分别为：（32.34±2.46）pg/ml、（96.43±8.36）pg/ml、（62.79±4.64）pg/ml,IL-6浓度分别为：（264.71±15.06）pg/ml、（630.70±17.77）pg/ml、（378.62±16.33）pg/ml,均较空白对照组TNF-а（22.99±3.55）pg/ml、IL-6（80.37±8.29）pg/ml水平显著升高（P〈0.05~0.01）;NF-кB抑制剂PDTC和LOX-1中和抗体干预后上清液TNF-α浓度较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.01）。不同浓度氟伐他汀（0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L）干预HUVECs 24h后上清液TNF-α浓度分别为（73.84±6.50）pg/ml、（42.59±6.45）pg/ml、（23.55±4.27）pg/ml;IL-6浓度分别为（549.0±20.23）pg/ml、（434.56±22.4）pg/ml、（302.42±21.30）pg/ml,较50mg/L ox-LDL刺激组显著下降（P〈0.05~0.01）。结论：氧化低密度脂蛋白可刺激人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达,在25~50mg/L剂量范围内呈显著的剂量-效应关系。氟伐他汀可浓度依赖性抑制人脐静脉内皮细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的表达。     

吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉核因子-κB/单核细胞趋化因子1表达的影响

目的观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉核因子-κB/单核细胞趋化因子1(NF-κB/MCP-1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法将26只雄性SD大鼠按照随机数字表法分成普通饲料对照组(n=9)和高脂饲料组(n=17),高脂饲料组喂养12周后再按照随机数字表法分成模型组(n=8)和吡格列酮组(n=9)。分组干预4周后,平行检测各组血脂、血糖水平,HE染色观察主动脉组织形态学改变,免疫组化法检测主动脉NF-κB/MCP-1的表达。结果高脂饲料组大鼠喂养12周后,与对照组比较,三酰甘油、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平明显升高[(1.729±0.472)mmol/L比(0.929±0.150)mmol/L,(2.981±0.318)mmol/L比(1.831±0.226)mmol/L,(0.499±0.337)mmol/L比(0.195±0.051)mmol/L,均为P<0.05];给药4周后,与模型组相比,吡格列酮组血清三酰甘油、总胆固醇水平明显降低[(0.731±0.319)mmol/L比(1.534±0.172)mmol/L,(1.720±0.249)mmol/L比(3.084±0.984)mmol/L,均为P<0.05],且主动脉内皮组织基本完好,偶有脱落,平滑肌增生不明显。与对照组相比,模型组NF-κB、MCP-1表达水平也明显升高(0.506±0.083比0.215±0.021,0.378±0.100比0.167±0.012,均为P<0.01);与模型组相比,吡格列酮组NF-κB、MCP-1表达水平明显下降(0.250±0.033比0.506±0.083,0.171±0.012比0.378±0.100,均为P<0.01)。结论吡格列酮能够减轻高脂血症对动脉内膜的损伤。     

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞Fractalkine的表达

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生趋化因子Fractalkine及普罗布考的抑制作用.方法:用不同浓度的ox-LDL刺激HUVEC及用不同浓度普罗布考和PDTC预处理细胞后再用ox-LDL刺激,半定量RT-PCR方法检测Fractalkine和NF-κB p65的mRNA的表达.结果:未用ox-LDL刺激的HUVEC不表达Fractalkine,分别用25、50、100 mg/L浓度的ox-LDL刺激后,Fractalkine mRNA的表达呈浓度依赖性增加,与空白对照组比较分别增加384.58%(P＜0.01)、484.09%(P＜0.01)、558.26%(P＜0.01),同时NF-κB p65 mRNA的表达分别增加15.71%(P＞0.05),41.73%(P＜0.01),66.72%(P＜0.01).40 μmol/L PDTC预处理后,再用50 mg/L ox-LDL刺激HUVEC,NF-κB p65 mRNA的表达下降25.61%(P＜0.01),分别用20、40、80 μmol/L的普罗布考干预后,NF-κB p65 mRNA的表达分别下调15.52%(P＜0.05)、24.92%(P＜0.01)、34.93%(P＜0.01);同时,Fractalkine mRNA的表达则分别下调32.22%(P＜0.01)、10.07%(P＞0.05)、20.59%(P＜0.01)、33.60%(P＜0.01).结论:ox-LDL可以通过NF-κB p65诱导HUVEC表达Fractalkine,而普罗布考则可以抑制Fractalkine的表达,这种作用可能与抑制NF-κB p65有关.     

氨氯地平经核因子κB下调氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源生长因子B的表达

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)中血小板源生长因子B(PDGF-B)和核因子κB (NF-κB)表达的影响,通过氨氯地平对ox-LDL/NF-κB/PDGF-B的影响,进一步探讨氨氯地平相关的作用机制.方法 不同浓度氨氯地平(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)预先处理细胞0.5h后加入50mg/L ox-LDL共同孵育24 h,RT-PCR和Western Blot检测细胞内PDGF-B的表达及NF-κB的蛋白表达；进一步通过NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的加入,RT-PCR和Western blot观察其对PDGF-B及NF-κB表达的影响.结果 随着氨氯地平处理浓度的增加,HUVEC-12中PDGF-B的mRNA和蛋白表达,以及NF-κB的蛋白表达均明显下调,NF-κB抑制剂PDTC既可降低NF-κB的蛋白表达,也可下调PDGF-B的表达,作用与10.0 μmol/L氨氯地平组的结果相近.结论 氨氯地平可通过NF-κB下调ox-LDL诱导的HUVEC-12中PDGF-B的表达.     

罗格列酮对高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞炎症和增殖的影响

目的 探讨罗格列酮(RSG)对高浓度葡萄糖孵育下的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症和凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 以不同浓度的葡萄糖和罗格列酮单独或联合孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞,ELISA方法检测培养基中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平;采用流式细胞术检测VSMCs细胞凋亡率及Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达;Western印迹检测胞浆中VSMCs Bcl-xl蛋白表达及NF-κBp65和IκBα的表达.结果 高葡萄糖浓度(11.2、22.5 mmol/L)培养可明显增加上清中MCP-1的浓度,促进VSMCs增殖,抑制其凋亡,上调Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达,同时使NF-κB p65表达增加,IκBα表达下降;30及100 μmol/L RSG以浓度依赖形式减少VSMCs对MCP-1的分泌,抑制高葡萄糖培养下(11.2、22.5 mmol/L)VSMCs Bcl-xl、Bcl-2表达,促进其凋亡;下调NF-κBp65表达,促进IκBα表达.RSG拮抗剂GW9662(10 μmol/L)预处理可部分拮抗RSG的作用.结论 RSG可能通过对NF-κB通路的调控,减少炎症因子MCP-1分泌,下调Bcl-xl、Bcl-2表达,从而抑制高糖葡萄糖培养下的VSMCs炎症反应并促进其凋亡,从而在2型糖尿病大血管病变的防治中发挥重要作用.     

NF-κB在氧化型低密度脂蛋白引起人脐静脉内皮细胞表达CD40中的作用

目的研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞表达分化抗原CD40中核因子κB(NF-κB)的作用,进一步探讨卡托普利可能的抗动脉硬化作用。方法在ox-LDL作用人脐静脉内皮细胞前预先用卡托普利、NF-κB阻断剂(PDTC)、卡托普利+一氧化氮合酶阻断剂(L-NAME)、卡托普利+PDTC作用后,应用流式细胞技术检测细胞表面CD40的表达。结果预先加入卡托普利、PDTC人脐静脉内皮细胞的CD40的表达低于ox-LDL组(P<0.05),卡托普利组内皮细胞CD40的表达值低于卡托普利+PDTC组和卡托普利+NAME组,组间相比差异显著(P<0.001)。结论ox-LDL通过NF-κB途径激活了CD40的表达,卡托普利通过一氧化氮(NO)途径及NF-κB的转录使ox-LDL引起的内皮细胞CD40的表达下降,从而具有抗动脉硬化作用。     

沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响

目的探讨沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并分为对照组、ox-LDL组、沙格列汀组、沙格列汀+miR-590抑制物组、NC模拟物组、miR-590模拟物组、NC抑制物组、miR-590抑制物组。检测细胞的增殖活力、细胞中miR-590/TLR4/NF-κB表达量及培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的含量。结果 ox-LDL组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于对照组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于对照组;沙格列汀组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于ox-LDL组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显高于ox-LDL组;沙格列汀+miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于沙格列汀组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于沙格列汀组;miR-590模拟物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于NC模拟物组,miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于NC抑制物组。结论沙格列汀能够通过miR-590/TLR4/NF-κB通路减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。     

大鼠抑郁障碍与心血管组织炎性标记物的相关性研究

目的探讨强迫游泳抑郁模型大鼠抑郁障碍与炎性标记物的相关性。方法健康SD大鼠随机抽签分为对照组和模型组,应用21 d强迫游泳试验建立大鼠抑郁模型,模型组大鼠包括SS组(9只,应激+生理盐水腹腔注射)、SF组(8只,应激+氟西汀腹腔注射)和SI组(8只,应激+丙咪嗪腹腔注射)。对照组大鼠包括CS组(10只,生理盐水腹腔注射),CI组(7只,丙咪嗪腹腔注射)。应用透射免疫比浊法和酶联免疫法检测外周血炎性标记物高敏C反应蛋白(hsCRP)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)水平,应用免疫组织化学染色法和蛋白印迹法检测血管组织核因子-κB(NF-κB)p65、抑制蛋白κB(IκB)-α、MCP-1表达水平。结果应激后模型组外周血hsCRP和MCP-1含量明显高于CS、CI组,SS组与CS组hsCRP水平分别为(0.26±0.07)mg/L和(0.15±0.06)mg/L(P<0.01),SS组与CS组MCP-1水平分别为(52.02±18.83)ng/L和(22.52±8.45)ng/L(P<0.01)。血管组织中MCP-1、NF-κB p65表达显著增强,SS组与CS组MCP-1水平分别为(1.78±0.36)mg/L和(0.85±0.15)mg/L,SS组与CS组NF-κB p65水平分别为(0.88±0.16)和(0.12±0.04)(P<0.01),胞浆中IκB-α表达显著减少,SS组与CS组IκB-α水平分别为(0.48±0.07)和(2.07±0.48)(P<0.01)。结论抑郁障碍通过NF-κB表达增强来启动炎症反应。     

阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导的人内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达影响及其机制的实验研究

目的 观察阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,并探讨其作用机制.方法 实验分组:(1)空白对照组.(2)牛血清白蛋白(BSA)对照组.(3)AGE诱导组:不同作用浓度的AGE(10-4、10-3、10-2及10-1g/L)与细胞共同培养24 h.(4) AGE+阿托伐他汀组:用不同作用浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)分别与细胞培养1 h,而后加入10-1 g/L AGE[根据(3)实验结果选取最佳浓度]与细胞共孵育24 h.(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组:15 d-PGJ2( 10 μmol/L)与细胞孵育1 h后加入10-1 g/L AGE再与细胞共孵育24 h.(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组:GW9662(5000 g/L)与细胞孵育1 h后加入AGE(10-1 g/L)和阿托伐他汀(1 μmol/L)[根据(4)实验结果选取最佳浓度]再与细胞共孵育24 h.胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞.逆转录聚合酶链反应法分析细胞MCP-1和过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPAR-γ)基因的表达.蛋白免疫印迹法测定细胞核因子-κB(NF-κB )p65表达水平.结果 (1)AGE(10-4、10-3、10-2及10-1 g/L)呈浓度依赖性提高人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达水平,分别是空白对照组的1.53倍、2.12倍、2.56倍及4.71倍;AGE浓度为10-4 g/L时,细胞MCP-1 mRNA表达明显高于空白对照组(0.26±0.02比0.17±0.04,P<0.01).(2)与AGE组比,阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)呈浓度依赖性抑制AGE诱导的人内皮细胞MCP-1 mRNA的表达;阿托伐他汀浓度为1 μmol/L时,细胞MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.63±0.11比1.03±0.07,P<0.01).(3)AGE(10-1 g/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA的表达水平显著低于空白对照组(0.22±0.08比0.69±0.09,P<0.01),磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(0.78±0.06比0.31±0.01和1.61±0.16 比0.59±0.14,P均<0.01).(4)阿托伐他汀(1、10 μmol/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA表达水平显著高于AGE(10-1 g/L)组(0.59±0.02和0.61±0.06比0.22±0.08,P均<0.01);阿托伐他汀(1 μmol/L)组磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.40±0.03比0.78±0.06和0.65±0.12比1.61±0.16,P均<0.01).(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组 (0.21±0.01比0.78±0.06和0.67±0.14比1.61±0.16,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.17±0.02比0.93±0.12,P<0.01).(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.53±0.02比0.40±0.03和1.38±0.18比0.65±0.12,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.62±0.05比0.30±0.07,P<0.01).结论 阿托伐他汀可通过提高AGE诱导的人脐静脉内皮细胞对PPAR-γ表达抑制细胞NF-κB信号途径,进而抑制AGE诱导的人脐静脉内皮细胞的炎性反应.

Abstract：

Objective To investigate the effects of atorvastatin on advanced glycation end products (AGE) induced monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1) expression in human umbilical vein endothelial cells(HUVECs)and whether this effect could be linked to peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPAR-γ) and nuclear factor-κB(NF-κB).Methods Grouping: (1)Blank control group;(2)BSA group;(3)AGE group:cells were incubated with different concentrations of AGE(10-4,10-3, 10-2 and 10-1g/L)for 24 hours; (4)AGE+Atorvastatin group: cells were incubated with different concentrations of atorvastatin(0.1,1,10 μmol/L)for 1 hour,then incubated with AGE (10-1 g/L) for 24 hours; (5)PPAR-γ agonist(15 d-PGJ2)group: cells were incubated with 15 d-PGJ2(10 μmol/L)for 1 hour,then incubated with AGE (10-1g/L) for 24 hours;(6)PPAR-γ inhibitor(GW9662)group:cells were incubated with GW9662(5000 nmol/L)for 1 hour,then incubated with atorvastatin (1 μmol/L)and AGE (10-1g/L) for 24 hours. Collagenase was used to isolate the endothelial cell from human umbilical vein;RT-PCR was performed to examine the mRNA expression of MCP-1 and PPAR-γ;Western blot was performed to detect NF-κB p65 protein.Results (1) The expression of MCP-1 mRNA was increased in proportion with increasing concentrations of AGEs which could be blocked by atorvastatin in a dose-dependent manner. (2) AGE(10-1g/L)significantly downregulated the expression of PPAR-γ mRNA(0.22±0.08 vs. 0.69±0.09, P<0.01) while upregulated the expression of phospho-NF-κB p65 protein (0.78±0.06 vs. 0.31±0.01,P<0.01) and nonphospho-NF-κB p65 protein (1.61±0.16 vs. 0.59±0.14,P<0.01) comparaed with the control group which could be significantly attenuated by atorvastatin. (3) PPAR-γ agonist decreased the expression of phospho-NF-κB p65 protein (0.21±0.01 vs. 0.78±0.06, P<0.01),nonphospho-NF-κB p65 protein (0.67±0.14 vs. 1.61±0.16,P<0.01)and MCP-1 mRNA (0.17±0.02 vs. 0.93±0.12, P<0.01)compared with AGE(10-1g/L)group. (4) PPAR-γ inhibitor antagonized the effect of atorvastatin on the expression of phospho-NF-κB p65 protein, nonphospho-NF-κB p65 protein and MCP-1 mRNA stimulated by AGE in HUVECs(P<0.01).Conclusion The anti-inflammatory properties of atorvastatin in AGE stimulated HUVECs may partly be attributed to the effect on upregulation of PPAR-γ and downregulation of NF-κB signaling pathway.     

NF-κB对急性坏死性胰腺炎大鼠甲状旁腺激素受体表达和低钙血症的影响

目的 探讨NF-κB对ANP大鼠甲状旁腺激素受体(PTH1R)表达及低钙血症的影响.方法 将雄性SD大鼠24只按完全随机法分为对照组、ANP组和四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂预处理组(PDTC组),各8只.以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立ANP模型.观察6 h后各组血清钙浓度以及胰腺组织病理改变,蛋白免疫印渍法检测肾脏和骨组织NF-κB、PTH1R蛋白表达,RT-PCR检测肾脏和骨组织FTH1R mRNA表达.结果 对照组、ANP组和PDTC组血钙浓度分别为(2.31±0.03)mmol/L、(2.01±0.03)mmol/L和(2.12±0.05)mmol/L,3组间差异显著(P<0.05).ANP组肾脏和骨组织的NF-κB蛋白表达量分别为1.53±0.08和0.47±0.19;PDTC组分别为0.61±0.13和0.36±0.06,两组差异显著(P<0.05).ANP组肾脏和骨组织PTH1R mRNA的表达量分别为0.27±0.08和0.29±0.06,PTH1R蛋白表达分别为0.87±0.07和0.31±0.09;PDTC组分别为0.57±0.27和0.37±0.11,1.13±0.17和0.68±0.15,两组差异显著(P<0.05).ANP组NF-κB活性较对照组明显升高,PTH1R表达明显下降;与ANP组比较,PDTC组NF-κB活性降低,血清钙水平明显升高,PTH1R的表达上调(P<0.05).结论 NF-κB可能通过间接下调组织PTH1R的表达,致血清钙显著下降.PDTC对改善ANP低钙血症有一定意义.     

Toll样受体4和核因子-κB在颅内动脉瘤组织中的表达及作用机制

目的探讨Toll样受体(TLR)4和核因子(NF)-κB在颅内动脉瘤组织中的表达及作用机制。方法在开颅动脉瘤夹闭术中收集18例动脉瘤标本,根据Hunt-hess标准分为破裂组10例、未破裂组8例;取开颅夹闭术中获取入路同侧血管10份为正常对照组。分别行光镜和电镜观察标本病理学改变,α-actin染色结合电镜观察计算出血管平滑肌细胞密度;免疫组化法检测标本中TLR4、NF-κB、CD68、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达水平;RT-PCR和Western印迹检测标本中TLR4、NF-κB mRNA和蛋白的相对表达量。结果动脉瘤血管壁分布有少量阳性平滑肌细胞,而正常血管壁平滑肌细胞α-actin染色几乎均为阳性,其中破裂组、未破裂组的血管平滑肌细胞密度明显低于正常对照组(P<0.01);破裂组血管平滑肌细胞密度明显低于未破裂组(P<0.05)。破裂组、未破裂组TLR4、NF-κB、CD68、Caspase-3表达水平明显高于正常对照组,破裂组明显高于未破裂组(P<0.05)。破裂组、未破裂组TLR4和NF-κB mRNA和蛋白的相对表达量均明显高于正常对照组,破裂组明显高于未破裂组(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路在血管内皮损伤介导的颅内动脉瘤血管壁炎性反应和平滑肌细胞介导的退行性病变过程中发挥重要作用。     

川芎嗪对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞炎症反应的影响

目的探讨川芎嗪对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法体外培养的人冠状动脉内皮细胞,随机分为正常对照组(无干预)、ox-LDL组(50mg/Lox-LDL)、川芎嗪组(1、10、100μmol/L川芎嗪+50mg/Lox-LDL),观察川芎嗪对细胞间黏附分子1(ICAM-1)和环氧酶2基因和蛋白表达的影响;进一步检测与其耦联的p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路活化的影响。结果与ox-LDL组比较,川芎嗪(10、100μmol/L)降低ICAM-1的基因表达(1.49±0.26、1.81±0.05比2.36±0.34,P<0.01),抑制环氧酶2的蛋白表达(0.21±0.03、0.13±0.04比0.48±0.01,P<0.05);川芎嗪(1、10μmol/L)降低ICAM-1的蛋白表达(0.16±0.03、0.14±0.02比0.87±0.05),抑制上述黏附分子和炎症因子耦联的信号分子p38MAPK的磷酸化激活(0.30±0.10、0.12±0.06比0.66±0.15),抑制信号分子NF-κB蛋白(0.32±0.08、0.20±0.11比0.62±0.10)表达水平的升高(均P<0.01)。结论川芎嗪具有对抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症和黏附反应,并抑制MAPK和NF-κB信号通路的激活。