化瘀止痛方外用对骨转移癌疼痛大鼠脊髓背角的影响

目的:研究化瘀止痛方外用对骨转移癌疼痛大鼠的镇痛作用及机制。方法:采用大鼠乳腺癌MRMT-1细胞,按Medhurst方法建立骨转移癌疼痛模型。以唑来膦酸为阳性对照,观察外用药对大鼠脊髓背角神经元原癌基因c-FOS蛋白表达、神经胶质细胞胶质细胞酸性蛋白(GFAP)表达的影响。结果:相对于假手术组,各手术组脊髓后角神经元c-FOS蛋白表达明显增高,GFAP染色阳性星形胶质细胞明显增生肥大。与模型组比较,脊髓背角c-FOS表达明显降低(P0.05),GFAP表达变化改善。结论:外用中药对骨转移癌疼痛模型有明显镇痛作用,作用机制与拮抗伤害感受器并且抑制痛觉在脊髓水平的放大有关。     

电针对间质性膀胱炎大鼠脊髓背角p-ERK1/2和c-fos表达的影响

目的:观察电针"次髎""会阳"对间质性膀胱炎(IC)大鼠脊髓背角磷酸化的胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)及原癌基因(c-fos)表达的影响。方法:将雌性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组各6只。采用环磷酰胺腹腔注射的方法建立IC大鼠模型。电针组于"次髎""会阳"给予电针干预,20 min/次,1次/d,连续3 d。造模后48 h及干预后24 h观察大鼠膀胱疼痛行为变化;Western blot法检测脊髓腰6至骶1节段p-ERK1/2和c-fos蛋白的相对表达量;免疫荧光染色法检测右侧脊髓背角p-ERK1/2和c-fos的表达。结果:与空白组比较,模型组膀胱机械疼痛阈值降低(P0.05),脊髓p-ERK1/2和c-fos的蛋白表达及脊髓背角p-ERK1/2和c-fos的免疫荧光面密度值均升高(P0.05)。与模型组比较,电针组治疗后膀胱机械疼痛阈值升高(P0.05),脊髓p-ERK1/2和c-fos的蛋白表达及脊髓背角p-ERK1/2和c-fos的免疫荧光面密度值均降低(P0.05)。结论:电针"次髎""会阳"可提高IC大鼠膀胱机械疼痛阈值,调节脊髓痛觉过敏,发挥镇痛作用,其机制可能与降低脊髓背角中p-ERK1/2和c-fos的表达有关。     

痛必定对CCI大鼠镇痛作用和脊髓背角c-fos表达的影响

目的:观察痛必定对CCI模型大鼠痛阈的影响,并探讨其镇痛作用机理。方法:测定用药前后CCI大鼠压痛阈值的变化,采用免疫组织化学方法研究痛必定粉针对CCI大鼠脊髓背角c-fos基因表达的影响。结果:痛必定粉针可明显提高CCI模型大鼠的疼痛阈值(P<0.05),抑制由疼痛所引起的脊髓背角c-fos表达增强的效应(P<0.05)。结论:痛必定粉针对CCI模型大鼠具有明确的镇痛作用,减少脊髓背角神经元对传入的伤害性刺激的反应,可能是其发挥镇痛作用的途径之一。     

撤稿声明

本研究团队在《中国实验方剂学杂志》发表了论文《益肾骨康方对骨转移癌疼痛大鼠脊髓背角的作用》(2014年20卷第21期,作者:刘蔚霞,张平,周磊,冯利)和《益肾解毒方对小鼠肺腺癌骨转移瘤RNase L蛋白表达的调控作用》(2017年23卷第20期,作者:张平,孙凯,李永秀,邱成新,胡佩岩),由于发表作者与研究合作者署名存在争议,本研究团队决定将这两篇已经刊登的学术论文进行撤稿处理,并向广大读者和《中国实验方剂学杂志》编辑部表示诚挚歉意。     

丹参酮IIA磺酸钠对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响

目的研究丹参酮IIA磺酸钠(TSIIA)对糖尿病大鼠神经痛的影响及其脊髓氧化应激机制。方法成年雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和丹参酮组,每组6只,佐脲霉菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病模型。采用Von-Frey检测SD大鼠足底机械痛阈值的变化,免疫荧光检测脊髓背角SOD及GFAP免疫阳性物质的表达变化,Real-time PCR检测脊髓背角IL-1βmRNA表达变化。结果与模型组比较,丹参酮组可显著提高机械性痛阈(P0.05),提高脊髓背角SOD表达,降低GFAP免疫阳性物质表达(P0.05)。结论丹参酮IIA减轻糖尿病大鼠神经痛,其机制可能与抑制脊髓神经炎症,上调脊髓背角SOD的表达有关。     

敲除缝隙连接蛋白Cx 43对针刺抑制内脏痛小鼠脊髓背角c-fos表达的影响

目的:探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)影响针刺镇痛作用的可能机制。方法:将野生型(WT)和Cx43基因敲除杂合子(HT)小鼠随机分为6组:WT对照组、WT模型组、WT针刺组、HT对照组、HT模型组、HT针刺组,每组12只,腹腔注射0.6%醋酸(0.1ml/10g)制造内脏痛模型。针刺"中脘"、双侧"足三里"穴,每5min捻针30s,共30min。采用瞬时基因c-fos表达作为神经元活动的标志,用RT-PCR、免疫印迹法检测脊髓背角c-fos基因的表达。结果:HT和WT对照组小鼠脊髓背角c-fosmRNA和蛋白很少表达,两组间差异无显著性意义(P>0.05)。HT和WT内脏痛模型组小鼠脊髓背角c-fosmRNA和蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.01);两模型组间上述指标差异无显著性意义(P>0.05)。与模型组比较,WT针刺组小鼠脊髓背角c-fosmRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01);HT针刺组小鼠c-fosmR-NA和蛋白水平虽然亦有下降趋势,但与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。HT和WT针刺组两组间差异分别有显著性(P<0.05)和极显著性(P<0.01)意义。结论:针刺可缓解腹腔内脏痛,同时抑制伤害性痛反应诱发的脊髓c-fos表达;敲除Cx43基因可减弱针刺镇痛的作用,同时减弱针刺下调脊髓背角c-fos表达的作用;提示Cx43与针刺镇痛效应有着密切联系。     

益肾骨康方对骨转移癌痛大鼠骨质破坏的影响

目的 评价益肾骨康方对骨转移癌痛大鼠的骨保护作用.方法 48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、解毒化瘀组、扶正组、益肾骨康方低剂量组、益肾骨康方高剂量组,每组8只.除对照组外其余各组采用大鼠乳腺癌MRMT-1细胞悬液10μL缓慢注射于大鼠胫骨骨髓腔内建立骨转移癌模型.于造模后第2天开始给药,中药组给予相应中药1 mL/...     

益肾骨康方联合射频热疗治疗骨转移癌疼痛的疗效及对生活质量的影响

目的观察益肾骨康方联合射频热疗治疗骨转移癌疼痛的疗效及对患者生活质量的影响。方法将80例骨转移癌疼痛患者随机分为对照组40例与观察组40例,对照组给予氨酚羟考酮治疗,观察组在对照组治疗基础上给予益肾骨康方+射频热疗治疗,观察2组疗效、不良反应情况、治疗前后疼痛影响评分、生活质量(SF-36)评分。结果观察组治疗总有效率显著高于对照组(P0.05)。2组治疗后SF-36评分均显著升高(P均0.05),疼痛影响评分均显著降低(P均0.05),且治疗后观察组SF-36评分均显著高于对照组(P均0.05),疼痛影响评分显著低于对照组(P0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论益肾骨康方联合射频热疗治疗骨转移癌疼痛可有效缓解疼痛症状,改善生活质量,且未加重不良反应。     

附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠TGF-β/Smads/Gli2/PTHrP信号通路的影响

目的:研究附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠的保护作用及其作用机制。方法:裸鼠随机分为正常组、模型组、唑来膦酸组、附子-白术药对组,采用左心室注射乳腺癌细胞MDA-MB-231BO法建立骨转移模型,并进行相应干预。观察裸鼠骨转移程度,微计算机断层扫描(Micro-CT)检测裸鼠胫骨矿物质密度(BMD),骨体积(BV),选取感兴趣区域(ROI)体积(TV),计算骨体积分数BV/TV,抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(TRAP)观察骨转移灶中破骨细胞表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测转化生长因子-β_1(TGF-β1),Smad3,Smad4,胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)的表达。结果:与模型组比较,附子-白术药对组骨转移程度显著降低(P0.01),裸鼠胫骨BMD,BV/TV显著升高(P0.01),TRAP(+)细胞数量显著减少(P0.01),骨转移灶中TGF-β_1,Smad3,Gli2和PHTr P表达均显著降低(P0.01),Smad4表达均明显升高(P0.05)。结论:附子-白术药对可减轻乳腺癌骨转移裸鼠溶骨性损伤,其机制可能与其上调Smad4蛋白表达,下调TGF-β1,Smad3,Gli2和PTHr P蛋白表达,调控TGF-β1/Smads/Gli2/PTHr P信号通路有关。     

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中星形胶质细胞过度增殖的影响

目的观察益肾养髓方对脊髓慢性压迫大鼠脊髓（C5~C7）中胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）mRNA 表达量及GFAP 蛋白表达和分布的影响,以探讨益肾养髓方对脊髓型颈椎病（Cervical Spondylotic Myelopathy,CSM）大鼠脊髓中星形胶质细胞过度增殖和胶质瘢痕形成的作用。方法将56 只健康 雌性SD 大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、阳性对照组及益肾养髓方低、中、高剂量组,每组8 只。 模型组、益肾养髓方各剂量组及阳性对照组大鼠采用吸水膨胀材料压迫脊髓建立脊髓型颈椎病大鼠模型,假手 术组仅手术暴露脊髓。手术后2 周,益肾养髓方不同剂量组采用中药水煎剂灌胃,阳性对照组采用单唾液酸四 己糖神经节甘脂钠肌注,其余组采用生理盐水灌胃,每日1 次,连续4 周。于给药后第1、3、7、14、21、 28 天进行大鼠运动功能评价（BBB 评分）。术后6 周时HE 染色观察脊髓组织结构,RT-qPCR 法检测大鼠脊髓 GFAP 的mRNA 表达,免疫荧光观察GFAP 蛋白表达。结果灌胃后益肾养髓方各组及阳性对照组大鼠BBB 评分明显高于模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,说明益肾养髓方对改善脊髓型颈椎病大鼠脊髓功能有 一定疗效。HE 染色益肾养髓方各组及阳性对照组可见脊髓组织中瘢痕、空洞变少,胞浆逐渐增多,神经细胞 形态接近假手术组。RT-qPCR 及免疫荧光结果提示模型组GFAP mRNA 及蛋白表达升高（P＜0.05）,益肾养髓 方各组及阳性对照组可降低其表达,与模型组比差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论益肾养髓方可降低脊 髓慢性压迫性损伤大鼠脊髓中GFAP 的表达,从而减少胶质瘢痕的形成,促进大鼠后肢运动功能恢复。     

益肾解毒方对小鼠肺腺癌骨转移瘤RNase L蛋白表达的调控作用

目的： 研究益肾解毒方对小鼠溶骨性骨转移瘤细胞核糖核酸酶L（ribonuclease L,RNase L）蛋白及凋亡终末蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的调控作用。方法： 将已经获得国家专利的肺腺癌溶骨性骨转移细胞株,给予裸鼠左心室注射,制备溶骨性骨转移模型,随机分为5组,益肾解毒方高、中、低剂量（24,12,3 g ·kg^-1）组,帕米磷酸二钠组及模型组,以MicroSPECT/CT显像及病理组织学方法观察骨转移发生情况,定时定量给药并于5周后取材,通过免疫组织化学、蛋白免疫印迹法（Western blot）以及反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）等方法研究RNase L,Caspase-3及益肾解毒方的干预作用。结果： 与模型组比较,帕米磷酸二钠组、益肾解毒方高、中、低剂量组骨转移瘤细胞RNase L蛋白,mRNA表达降低（P<0.01）,益肾解毒方中、低剂量组及帕米磷酸二钠组骨转移灶中Caspase-3蛋白,mRNA表达升高（P<0.01）。讨论： 肺腺癌骨转移灶中RNase L高表达,而细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶Caspase-3表达降低,其内在机制可能与肺腺癌骨转移细胞的凋亡逃避机制相关,益肾解毒方能够降低RNase L表达,增强Caspase-3表达,一定程度上抑制了肿瘤细胞的凋亡逃避,这可能是益肾解毒方抗肿瘤的内在机制。     

镇痛膏外用缓解癌性疼痛的作用及相关机制研究

目的：利用癌痛动物模型研究镇痛膏缓解癌性疼痛的作用及其作用机制。方法：建立小鼠肺癌股骨癌痛模型,实验分镇痛膏组、硫酸四氢帕马丁组、生理盐水组和假手术组。从造模第10天给药,连用5d。镇痛膏组,10g/kg;生理盐水组和假手术组,0.5ml/只;硫酸四氢帕马丁组在造模第14天,单次6.498mg/kg肌注。在末次给药后测量各组小鼠的痛行为,包括机械性痛觉超敏和热刺激痛觉过敏;将小鼠股骨进行X线摄片,影像学评估骨破坏;并用免疫组化法检测各组局灶皮肤组织TNFα、ET-1、IL-1β水平及脊髓后角SP-R、c-fos及GFAP阳性反应神经元的表达。结果：造模第14天,镇痛膏组、硫酸四氢帕马丁组、生理盐水组小鼠对2gVonFrey纤维刺激的缩足反应百分率分别为12.5%±14.88%、26.67%±16.33%、60%±28.28%,与生理盐水组比较,镇痛膏组缩足反应百分率明显下降（P〈0.01）;热刺激痛阈时间镇痛膏组、硫酸四氢帕马丁组、生理盐水组小鼠分别为（17.58±4.16）s、（16.50±2.76）s、（11.96±2.01）s,与生理盐水组比较,镇痛膏组热刺激痛阈升高（P〈0.01）。同时股骨X线显示,镇痛膏组骨破坏程度较轻,放射学评分下降;镇痛膏组局灶皮肤组织TNFα、ET-1、IL-1β水平及脊髓后角SP-R、c-fos及GFAP阳性反应神经元表达均明显减少。结论：镇痛膏对癌痛小鼠治疗有效,能够减轻痛行为,延缓骨破坏,其镇痛机制可能与外周和中枢机制共同参与有关。     

电针对神经病理性疼痛大鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白活性及肿瘤坏死因子-α和白介素-1β表达的影响

目的:观察电针治疗神经病理性疼痛大鼠对脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的活化以及促炎性细胞因子TNF-α(肿瘤坏死因子-α)和IL-1β(白介素-1β)表达的影响。方法:72只SD大鼠随机分为3组:假手术组(仅分离坐骨神经)、模型组[结扎坐骨神经造成慢性压迫性损伤(CCI)]和电针组(手术后连续6 d取"足三里""环跳"穴给予电针治疗)。手术前1天和手术后第7天测定各组动物的机械性痛阈和热痛阈。采用免疫组化的方法观察大鼠脊髓L4-L5GFAP的变化,并用荧光定量多聚酶链反应技术分别检测TNF-α mRNA和IL-1βmRNA表达变化。结果:CCI可导致大鼠机械性痛阈和热痛阈明显降低,显著激活损伤侧脊髓GFAP,脊髓中TNF-α和IL-1β mRNA的表达明显增多(均P0.05)。给予电针治疗后能明显改善CCI大鼠痛敏状态,并显著降低损伤侧脊髓GFAP活性和TNF-α和IL-1β mRNA的表达(均P0.05)。结论:电针"足三里""环跳"可明显减轻CCI大鼠的疼痛反应,其作用与其降低脊髓GFAP、TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的表达有关。     

Effects of electroacupuncture on expression of COX-2 in the dorsal horn of spinal cord of arthritic rats

目的:本工作试图通过观察慢性炎症痛大鼠脊髓背角环氧合酶(COX-2)蛋白表达的变化,探讨脊髓背角COX-2是否与电针镇痛的作用机制有关.方法:在佐剂性关节炎大鼠的模型上,采用行为学和免疫组化技术两种方法,观察电针治疗后不同时相关节炎大鼠的痛敏评分及脊髓背角COX-2蛋白的表达,并与正常组、模型组和药物组加以对照.结果:电针能明显减小关节炎大鼠痛敏评分的绝对值,多次电针具有显著的累积效应;并且随着电针治疗次数的增加,大鼠脊髓背角COX-2免疫阳性细胞数显著下降.结论:电针阳陵泉和昆仑两穴对佐剂性关节炎大鼠有明显的镇痛作用,并同时抑制其脊髓背角COX-2蛋白的表达.     

电针对IBS内脏痛大鼠脊髓GFAP、P2X3受体的调节作用＊

目的 探讨脊髓星形胶质细胞和P2X3受体在电针缓解肠易激综合征（Irritable Bowel Syndrome，IBS）大鼠内脏痛的调节作用机制。方法 采用直结肠球囊扩张（Colorectal dilatation，CRD）刺激诱导IBS慢性内脏痛模型。将清洁级SD（Sprague-Dawley）雄性新生大鼠随机分为正常组和造模组。通过行为学评分和结肠形态学方法鉴定模型制备成功后将造模组随机分为模型组、电针组、氟代柠檬酸组。电针组取双侧上巨虚穴（S37）、天枢穴（S25）进行电针治疗，针刺深度为5 mm，30 min/次，每日1次，连续治疗7天。氟代柠檬酸组鞘内注射氟代柠檬酸10 μL，每周3次。治疗结束后，采用腹部撤回反射（Abdominal Withdrawal Reflex，AWR）评分评估电针对IBS内脏痛大鼠行为学影响；采用HE染色观察IBS内脏痛大鼠的结肠组织病理形态学变化；采用免疫组织化学、Western Blot等方法检测脊髓中星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP）和P2X3受体蛋白表达。结果 与正常组相比，模型组大鼠AWR评分显著升高，脊髓中GFAP和P2X3受体表达水平明显增多；与模型组比较，电针组、氟代柠檬酸组大鼠AWR评分明显降低，脊髓中GFAP、P2X3受体的表达明显降低。结论 电针能够有效缓解IBS大鼠内脏痛敏，其镇痛效应可能与其抑制脊髓GFAP和P2X3受体表达有关。     

健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响

目的:研究健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗大肠癌肝转移的作用机制。方法:随机抽取10只BALB/C-nu裸鼠作为空白组,其余裸鼠建立人大肠癌细胞肝转移裸鼠模型,建模3 d后取存活裸鼠30只,随机分为模型组,健脾消癌方组(41.6 g·kg-1),人参皂苷Rg3组(5.2 mg·kg-1),各组裸鼠灌胃相应药物及生理盐水4周后脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN),磷酸化第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(p-PTEN),Akt,磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果:健脾消癌方及人参皂苷Rg3组肝转移率明显低于模型组(P0.05);与空白组比较,模型组中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组肝组织中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组p-PTEN,p-Akt表达差异无统计学意义。与空白组比较,模型组PTEN,Akt蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达量明显升高(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达差异无统计学意义。结论:健脾消癌方可拮抗大肠癌肝转移,其作用机制可能与升高PTEN蛋白表达,降低p-PTEN,p-Akt蛋白表达有关。     

冰茶栓对骨癌痛大鼠脊髓GFAP及其mRNA表达的影响

目的观察冰茶栓对W256细胞诱导的骨癌痛大鼠脊髓GFAP及其mRNA表达的影响,以探讨其抗骨癌痛的中枢机制。方法将SD大鼠分成假手术组、模型组、给药组三组。给药组给予冰茶栓101mg?kg-1;给药10d后截取脊髓组织,检测GFAP蛋白及mRNA表达。结果给药组大鼠脊髓组织GFAP蛋白及其mRNA表达均较模型组显著降低(P<0.01;P<0.05)。结论冰茶栓抗骨癌痛作用的中枢机制可能与其抑制星形胶质细胞的激活有关。     

身痛逐瘀汤对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓星形胶质细胞活化的影响

目的 探讨身痛逐瘀汤的镇痛作用及对脊髓水平胶质细胞纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。