瘤细胞膜糖蛋白的抗移植肿瘤作用

注射同种小鼠的肿瘤可溶性提取物之后,则产生抗移植肿瘤作用.这种抗移植性是针对细胞膜表面的特殊结构的.此特殊结构被称为肿瘤相关移植抗原(Tumor-Asso-ziierte Transplan-tationsantigene).它在理化因素诱发的肿瘤中,基本上是肿瘤特异性的.所有紫外线诱发的小鼠肉瘤(UV-Sarkom)均显示有特殊的免疫原活性.这表明确有肿瘤相关移植抗原存在.由于同系肿瘤的免疫原活性特别高,所以最适合于提纯和分离肿瘤相关移植抗原.     

人单核细胞趋化蛋白-1在大肠杆菌中的高效表达及其生物学活性

利用PCR和DNA重组技术,将人单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）cDNA克隆在表达载体pGEX－2T中,表达产物GST／MCP－1占菌体总蛋白的50％,且以无活性的包涵体形式存在。经变复性,GlutathioneSepharose4B亲合柱层析纯化,融合蛋白达到电泳纯,且具有MCP－1趋化活性。体内外抗肿瘤试验结果表明,GST／MCP－1激活单核细胞和淋巴细胞后可抑制肿瘤细胞生长,提示MCP－1可能成为肿瘤辅助治疗的一个候选药物。     

双歧杆菌DNA对J774A.1巨噬细胞的活化作用

双歧杆菌的细胞壁成分能有效的激活免疫细胞,促使这些效应细胞释放免疫活性物质,并对多种肿瘤的发生与发展具有一定的抑制作用。本研究利用我室提取的双歧杆菌DNA观察了其对小鼠J774A.1巨噬细胞的活化作用。收集厌氧培养的双歧杆菌(菌种由山东省防疫站提供),加入溶菌酶(1mgm1)与10%SDS(终浓度为1%)裂解菌体,饱和酚抽提去除菌体蛋白,透析,用紫外分光光度计测定所提取的双歧杆菌DNAA260/A280为1.823,经薄板层析证实所制备的双歧杆菌DNA中无脂多糖存在,经HpaⅡ酶酶切证实所制备的双歧杆菌DNA具有一定的非甲基化CpG基序,冷冻干燥后备用…     

重组肌氨酸氧化酶的制备和鉴定

测定血清中肌酐的浓度是临床上诊断肾功能的一项重要指标。在利用偶联酶法测定的过程中,一种关键酶——肌氨酸氧化酶(SOX)(EC 1.5.3.1)的质量控制是我们首先要解决的一个重要问题。本文利用乳糖诱导重组肌氨酸氧化酶(r-SOX)基因在E.coli中高效表达,经300L发酵罐发酵培养,菌体终密度达到OD600值22,菌体湿重达30g/L,湿菌体含活性20U/g。重组肌氨酸氧化酶表达量占菌体可溶性蛋白的25%左右。菌体破碎液经55℃选择性热变性处理和Ni-Sepharose FF层析二步纯化,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析酶的纯度达97%以上,比活力达25U/mg,纯化倍数为14.4,活性收率为92.4%。纯化的酶经SDS-PAGE和分子筛层析法测定,其分子量分别为53kD和55kD,提示该酶结构为单一肽链。纯化的酶液和冻干粉均呈黄色,经三氯乙酸和热变性处理,发现其与核黄素以共价键的方式结合。此外,对该酶的稳定性和其中的干扰酶过氧化氢酶也做了进一步的考察。以上所取得的研究结果为此酶的开发和利用奠定了基础。     

恶性肿瘤免疫逃逸与免疫治疗策略

肿瘤具有免疫原性,在人类肿瘤组织中可发现大量肿瘤浸润性淋巴细胞;大多数肿瘤患者在接受主动免疫治疗后可以检测到参与应答反应的肿瘤抗原特异性T细胞.但是主动免疫治疗并未给患者带来显著的临床疗效,究其原因发现肿瘤微环境中的免疫抑制状态削弱了效应细胞的杀瘤活性.因此深入研究肿瘤与免疫系统的相互作用将有助于提高临床生物治疗的疗效.     

NDRG2基因与肿瘤的演进

N-myc下游调节基因2(N-myc down stream regalated gene 2,NDRG2)是一个新近发现的分化相关新家族的成员之一,且在多种组织中均有表达,如脑、心脏、骨骼肌和肾等.最近的研究显示NDRG2是一种肿瘤抑制基因,并在多种肿瘤中都存在NDRG2基因杂合性缺失,高甲基化以及核心启动子突变.NDRG2在肿瘤转移中起抑制作用,且可能通过抑制TGF-β1的活性、消除胶原酶的诱导活性和特异性下调层黏连蛋白332通路成分来抑制肿瘤的转移.NDRG2与肿瘤关系复杂,可能用于预后判断,成为一个新的治疗靶点.     

Na+/H+交换子在肿瘤研究中的价值

在肿瘤的生长过程中,糖酵解占优势,因此会产生大量的乳酸及过多的H+,然而在肿瘤细胞周围却形成了一种胞内碱性、胞外酸性的特殊微环境,这种特殊微环境的形成主要是因为肿瘤细胞胞膜Na+/H+交换子表达增加及活性增强所致.许多研究已表明在肿瘤的发生、发展及转移过程中,Na+/H+交换子的表达及活性都会发生相应的变化,以适应肿瘤生长的需要,因此关于Na+/H+交换子结构及功能的研究有可能成为肿瘤治疗的新靶点.     

血管内皮生长因子与妇科肿瘤

血管内皮生长因子(VEGF)是特异性作用于血管内皮细胞,并促进其有丝分裂的一类活性物质,在多种肿瘤组织中均有表达.妇科肿瘤组织存在VEGF及其受体的高表达,VEGF可能与妇科肿瘤的发生、发展及预后有关.采用现代分子生物学方法阻止VEGF及其受体表达,可抑制肿瘤生长.     

自噬与肿瘤关系的研究进展

自噬是细胞适应环境变化、防御病原微生物侵袭、维持内环境稳定的重要机制.在多种人类肿瘤中存在有自噬活性的改变,自噬在肿瘤的发生发展过程中起到了促进和抑制的双重作用.对自噬研究的不断深入,不仅进一步揭示了真核生物自身调控的复杂性和多样性,更为肿瘤的基因治疗及克服肿瘤耐药性提供了新的思路.现将自噬与肿瘤的发生、发展的研究进展做一综述.     

双歧杆菌、大肠杆菌菌体外多糖对iIEL激活作用的对比研究

目的：对比研究双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖对iIEL的激活作用。方法：采用Percoll非连续密度梯度离心法从小鼠小肠提取小肠上皮间淋巴细胞（iIEL）;应用有机溶剂提取扔双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖与iIEL细胞共同孵育作用后,检测iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL－2产生能力。结果：大肠杆菌、双歧杆菌菌体外多糖均能显著增强iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL－2的产生能力（P＜0．01）,双歧杆菌组的作用显著高于大肠杆菌组（P＜0．01）。结论：双歧杆菌和大肠杆菌菌体外多糖均对iIEL细胞具有免疫激活作用,但双歧杆菌菌体多糖的作用强。     

髓源性抑制细胞与肿瘤

髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是一类具有显著免疫抑制活性的异质细胞群,其通过抑制效应T细胞功能从而介导肿瘤免疫逃逸,促进肿瘤生长.该文就MDSCs在肿瘤免疫逃逸中的作用机制、肿瘤微环境中的各种细胞因子对MDSCs的影响及各种免疫活性细胞与MDSCs间的相互作用作一综述.     

凋亡抑制蛋白Livin、细胞凋亡与肿瘤治疗

Livin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,主要通过抑制Caspases蛋白发挥抑制细胞凋亡的作用,主要在胎盘组织中表达,同时在一些肿瘤组织中呈高表达,尤其是在黑色素瘤细胞系表达水平最高.研究表明,Livin与肿瘤的发生、发展关系密切,是一个有潜在价值的肿瘤标志物,此外,反义Livin以及Livin活性抑制物的研究有望成为肿瘤治疗的新靶点.     

人TPO全长分子在大肠杆菌中的表达及其活性分析

利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤＮＡ，在大肠杆菌中表达了人ＴＰＯ全长分子。电镜观察结果，目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的２７％；表达产物经初步纯化后，与ＣＯＳ－７细胞中表达的人ＴＰＯ３５３个氨基酸全长分子分别做ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体内活性分析，结果表明，原核与真核系统表达的ＴＰＯ均具有明显促进血小板生成的作用。这为进一步研究ＴＰＯ的糖基化与其生物学活性及半衰期关系打下基础。     

NK细胞与肿瘤

一些实验证据表明,NK细胞在抵抗肿瘤中占有重要地位,以下就近年来NK细胞在抗肿瘤中的研究概况加以讨论.一、NK细胞抗肿瘤作用在对鼠的研究中观察到,体外NK活性高与体内对瘤形成的抵抗力之间呈正相关;注射富含NK细胞的淋巴细胞群体能延缓体内肿瘤的生长.由种种肿瘤的实验表明,肿瘤生长遗传抵抗力的一个主要机     

人源抗-HBs Fab优化表达条件的初步探讨

目的：利用含重组质粒pBAD/HBs Fab的Top10大肠杆菌，优化表达人源抗－HBs Fab。方法：选取含pBAD/HBs Fab载体的Top10大肠杆菌单个克隆分级培养，将制备的二级种子液接种于摇瓶和KLF2000发酵罐中，摇瓶培养表达采用不同的菌体诱导起始密度、诱导剂浓度、诱导表达温度和诱导表达时间。发酵罐培养表达采用不同的培养基和菌体诱导起始密度。诱导表达完毕后，纯化蛋白，比较表达量，并鉴定所获蛋白的抗原性和生物学活性。结果：用摇瓶优化表达后，Fab蛋白占菌体总蛋白的6％，为0.8%mg/g菌体，利用发酵培养可进一步增加菌量，使蛋白表达量达80mg/L。所获蛋白经鉴定显示有较好的生物学活性。结论：用重组质粒pBAD/HBsFab,Top10表达系统，可得到80mg/L的具有较好生物学活性的人源抗－HBs Fab蛋白，为批量生产作了准备。     

异源结合抗体体外对肿瘤浸润淋巴细胞的细胞毒性增强作用

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是从肿瘤组织中分离出来的淋巴细胞.最初研究表明,TIL较培养的PBL和LAK细胞有较高的抗自身肿瘤活性,尤其对黑色素瘤有效率可达60%.TIL经静脉给予较PBL易到达肿瘤部位,而且TIL对IL-2的依赖性低于LAK细     

胃癌中P53蛋白转录调控活性的分析及其临床意义

目的 探讨P53蛋白转录调控活性在胃癌发生发展中的作用.方法 应用双荧光素酶报告基因测试(dual-luciferase reporter assay)检测人类胃癌细胞和正常细胞中p53转录调控活性,并通过逆转录-PCR对细胞中p53全长进行扩增,构建pMD18-T-p53重组质粒测序,检测p53突变对其活性的影响.应用免疫组织化学的方法 联合检测P21WAF1/Cip1,Gadd45α,Mdm2三种蛋白在76例胃癌及癌旁组织中表达水平,通过分析它们与肿瘤的临床病理特征及各个分子之间的相关性来间接反应P53在组织中的转录调控活性.结果 双荧光素酶报告基因显示p53转录调控活性在正常细胞中明显高于肿瘤细胞,在p53基因发生突变的细胞系MKN28中P53蛋白转录活性最低.免疫组化结果显示P21WAF1/Cip1,Gadd45α,Mdm2在癌旁组织中的表达明显高于肿瘤组织(P<0.05),且随着肿瘤TNM分期的增高有表达降低的趋势(P<0.05).P21WAF1/Cip1,Gadd45α,Mdm2之间的相关性分析结果显示3个分子在胃癌组织和癌旁组织中的表达呈正相关(P<0.05).结论 P53蛋白转录调控活性的变化在胃癌的发生发展中起着重要的作用,p53突变可以影响其转录调控活性.P21WAF1/Cip1,Gadd45α,Mdm2联合检测可以作为间接反映P53蛋白转录调控活性的效应分子.     

大肠癌浸润淋巴细胞的免疫活性及表型特征

为明确大肠癌患者的细胞免疫活性状态及大肠癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)活性,分析比较了 TIL 区域淋巴结淋巴细胞(RNL)、外周血淋巴细胞(PBL)对 rIL—2刺激的增殖反应、表型特征、细胞毒活性及 IL—2产生能力.TIL 在 rIL—2培养早期呈现延迟的增殖反应和较高的总扩增能力.流式细胞仪分析表明肿瘤局部 T 细胞为主,各组淋巴细胞 T 亚群中 CD4~ 细胞减少,CD8~ 增加,Tac 抗原表达增加.乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测结果显示大肠癌患者淋巴细胞 NK 活性、ADCC 普遍降低,同位素掺入法显示 IL—2产生能力亦降低.IL—2培养后淋巴细胞的 NK 活性、ADCC 提高,并获得得 LAK 活性.     

绿色荧光蛋白-去整合素融合蛋白的表达及其结合功能的研究

目的：构建绿色荧光蛋白（CFP）-去整合素（disintegrin）融合基因，表达并分析该重组蛋白的生物学活性。方法：利用HF-PCR扩增Ⅱ型蛇毒出血性金属蛋白酶agacutin基因的去整合素区，并与绿色荧光蛋白基因进行拼接；将GFP-去整合素融合基因克隆入表达载体pQE-30，IPTG诱导重组蛋白表达；流式细胞术（FCM）与荧光显微镜分析重组蛋白与细胞的结合能力。结果：GFP-去整合素融合蛋白的表达载体在大肠杆菌M15中得到有效表达，菌体呈绿色。表达的蛋白量占菌体总蛋白的38％左右，免疫印迹证实分子量约为39kD；FCM分析显示该重组蛋白可与表达整合素的乳腺癌细胞MDA-MB-231和内皮细胞EA．hy926特异结合，在荧光显微镜下可见与重组蛋白结合的细胞发出绿色荧光。结论：GFP-去整合素融合蛋白可与表达整合素的细胞结合，并保留了各自的生物学活性，可用作肿瘤与血管生成等研究的新的分子标记物。     

肿瘤坏死因子基因克隆表达及其抗瘤活性的研究

本文根据已发表的肿瘤坏死因子(TNF)氨基酸序列和核苷酸序列,用大肠杆菌偏性密码人工合成全基因,并在大肠杆菌中表达,表达量占总菌体蛋白的22～33%,均为可溶性TNF·菌体裂解液经抗TNF 单抗亲和柱纯化后得到SDS—PAGE 上分子量为17KD 的单带蛋白,比活性1～4×10~7u/mg。体外细胞毒试验表明:部分人肿瘤细胞系例如HL-60、Molt-4、OVCAR-3等对TNF 很敏感;部分肿瘤细胞例如KG_1、H7402等对TNF 呈中等敏感;也有部分肿瘤细胞对TNF 不敏感。从白血病患者周血来的原代白血病细胞对TNF 也呈现不同敏感性。TNF 与各种化疗药物,如阿霉素(AD)、更生霉素(KSM)等,或某些细胞因子,如γ-干扰素(IFN-γ)等联合应用时,对肿瘤细胞的杀伤有协同作用。裸鼠移植瘤模型上也观察到不论瘤内局部注射还是腹腔注射,均能明显抑制肿瘤生长,如果TNF 与化疗药物合用则抑瘤效果更好。