CD3AK细胞对人卵巢癌细胞系体外杀伤作用的实验研究

为研究卵巢癌盆腔引流淋巴结的淋巴细胞,经CD3单克隆抗体激活后的杀伤细胞CD3AK在体外的抗瘤作用.作者采用人卵巢癌病人盆腔引流淋巴结的淋巴细胞,在体外与CD3单抗和少量rIL-2诱导并激活后,在我所自建的两株人卵巢癌HO-891O、HO-89lOPM细胞系上进行了研究.两株细胞各随机分成6组:1)阴性对照组(A组):只加新鲜的全培养液 ; 2)低浓度CD3AK组(B组):5×10~5/ml CD3AK培养液;3)中浓度CD3AK组(C组):1×10~6/mlCD3AK培养液;4)高浓度CD3AK组(D组):2.5×10~6/mlCD3AK培养液;5)顺铂阳性对照组(E组):含10μg/ml顺铂的培养液;6)顺铂 CD3AK联合用药组(F组):含10μg/ml顺铂 1×10~6/mlCD3AK培养液,分别用LDH活性测定、自然杀伤率及台盼兰活细胞计数法观察结果.结果表明:CD3AK细胞对卵巢癌细胞有明显的杀伤作用,两株细胞均以中浓度CD3AK细胞     

PJ-CW对细胞因子活化的杀伤细胞表型及细胞毒活性的影响

本文介绍我室有关LAK、TIL的体外诱导与活性调节研究及脐血CIK细胞诱导的初步研究.制备LAK-CM与PHA-CM(略)将TIL细胞(2×10~5/ml)分悬于含IL-2(500μ/ml)和/或PJ-CW(25μg/ml)的培液中置37℃,5%CO_2环境中培养,于培养后不同时间测定细胞扩增速度,并于第9天测定TIL细胞表型的变化(采用APAAP法与荧光检测法)及对自体肿瘤细胞与瘤靶细胞的杀伤活性(MIT显色法).将脐血淋巴细胞(1×10~6/ml)分别置含IL-2(2000μ/ml)和/或PJ-CW(25μg/ml)的环境中常规孵育,并于孵育后第5天进行表型分析(方法同前)及细胞毒活性测定.分离脐血淋巴细胞,于培养的不同时间分别加入rIFN-γ(1000U/ml),CD3MAB(20μl/ml),IL-2(300U/ml)及IL-1(100U/ml),测定其表型(方法同前).     

IL-7与IL-2,PHA或/及αCD3联用诱导人外周血LAK细胞的协同和抑制作用的研究

本文将IL-7与IL-2,PHA或/及αCD3联用诱生PHA-LAK,CD3Ak和PHA-αCD3LAK细胞,观察IL-7对上述三种细胞的激活作用,为肿瘤的过继性细胞免疫治疗提供新思路.方法:应用活细胞计数的方法测定细胞增殖活性;应用MTT法测定外源性IL-2的消耗和细胞毒活性;应用APAAP法检测mIL-2R的表达和效应细胞表型等指标.结果发现,1.IL-7对效应细胞增殖活性的影响各组效应细胞增殖曲线均于第6天达增殖的峰值,但以IL-7 PHA-LAK细胞为最高,达2.22×10~6/ml,IL-7 CD3AK也高于其IL-7~-对照组,而IL-7 PHA-αCD3LAK细胞则最低,仅有1.49×10~6/ml.IL-7~ PHA-LAK和IL-7 CD3AK细胞扩增倍数也高于各自的IL-7~-对照组(P<0.01),IL-7 PHA-αCD3LAK细胞的扩增     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激法诱生的小鼠CD3AK对Ca761乳腺癌的治疗作用

采用抗小鼠CD3单抗(145-2Cll)和rIL-2共刺激小鼠脾细胞,可制备出具有增殖能力和体外抗瘤活性的抗CD3单抗激活的杀伤细胞(CD3AK).在本实验中我们以615系小鼠的自发乳腺癌Ca761为模型,研究了小鼠CD3AK对Ca761的免疫治疗作用和继承性化学免疫治疗作用.于第0天给小鼠接种1×10~6个Ca761细胞,第4天时局部已长出瘤结,第7天平均瘤体积达2.3±0.46cm~3,第10天达4.07±1.63cm~3,第14天活杀时平均瘤重为3.88±2.41g.如果于第4天起每日注射(ip)rIL-2(1000 U/只/日)达7天,无抑瘤作用,活杀时瘤重为4.4±2.59g;给同样大rIL-2的基础上,于第7天瘤内注射1×10~7CD3AK细胞,也无抑瘤作用,活杀时瘤重为4,81±1.57g,抑瘤率为-16.86%;如果注射2×10~7CD3AK细胞,则有一定抑瘤作用,活杀时瘤重为2.82±2.72     

CD3AK细胞在裸鼠体内抗转移作用观察

为研究肿瘤引流淋巴结的淋巴细胞在体外用CD3单克隆抗体激活(CD3AK)后在体内是否仍然具有抗肿瘤作用,作者采用人卵巢癌病人盆腔引流淋巴结的淋巴细胞在体外用CD3单抗激活后输注载有高转移人卵巢癌裸鼠体内实验性治疗.实验共31只棵鼠分为4组:顺铂组、CD3AK组、联合治疗组各7只,对照组10只.治疗于接种移植瘤后10天开始,顺铂组以每只鼠给予顺铂7mg/kg的剂量腹腔注射0.5ml,在80天中共治疗6次,总剂量每只鼠为1.02mg.CD3AK组每只鼠各注射0.25ml含0.14×10~6～4.46×10~6细胞于腹腔和肿瘤周围,共治疗7次,每只鼠接受CD3AK细胞总量为10.76×10~6.观察到CD3AK细胞治疗组1只裸鼠移植瘤消退,2/7只裸鼠出现转移灶,与对照组8/10只裸鼠出现转移     

CD3抗体激活的杀伤细胞实验性抗喉癌作用的研究

基于CD3抗原广泛存在于成熟T细胞表面的理论基础,我们应用CD3单克隆抗体与IL-2在体外成功诱导出了具有较好增殖活性的CD3抗体激活的杀伤细胞(CD3AK细胞),并对其抗喉癌作用进行了观察和研究.结果表明:与常规培养的LAK细胞相比,以健康人新鲜外周静脉血单个核细胞为前体、经CD3单抗(4μg/ml)和IL-2(1000U/ml)诱导产生的CD3AK细胞具有集落形成率高、体外扩增能力强、存活时间长、抗瘤作用持久稳定等优势.在培养初期,CD3AK细胞的扩增情况与LAK细胞相似,但CD3AK细胞生长后劲明显,于培养8～10天达增殖高峰,平均扩增18.5倍,并可维持体外长期存活达两周之久,而同期培养的LAK细胞1周时平均仅增5.5倍,且多于1周后逐渐死亡,二者相比有非常显著性差异;同时,CD3AK细胞在体     

IL-12对CIK细胞体外增殖及体内外杀瘤活性影响的实验研究

目的 动态观察IL-12对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)体外增殖,体内外的细胞毒活性的影响.方法 采用三种不同的细胞因子组合扩增CIK细胞,即IL-2组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-2;IL-2加IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1、IL-2和IL-12;IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-12.流式细胞术分析细胞表型,细胞计数法测定细胞的增殖.MTT法测定CIK体外细胞毒活性,并通过做扫描和透射电镜,对CIK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察.研究CIK细胞对BGC-823荷瘤裸鼠的体内抗肿瘤作用.结果 三种方法均可使细胞增殖能力显著增加,对CD3+CD56+细胞的诱导作用也无明显差异,IL-12与IL-2联合作用组促增殖能力和细胞毒性作用明显强于其他两组(P＜0.05).被CIK细胞杀伤的肿瘤细胞的死亡形式是坏死和凋亡.动物实验证实CIK有较强的体内抗瘤活性,可延长荷瘤鼠的生存期,联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞疗效较好.结论 IL-12同样可以用于CIK细胞的诱导,而联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞其增殖能力和体内外抗肿瘤活性均增强.     

榄香烯在HuPBL—SCID小鼠体内对人脑胶质瘤协同免疫治疗作用的研究

榄香烯(Elemene)是从中药莪术中提取的抗癌新药,早期的实验研究表明它对肿瘤细胞有直接杀伤作用,是细胞毒类抗癌药;最近研究提示,它还有可能是一种免疫功能调节剂.本研究旨在阐明其在抗肿瘤免疫调节中的作用.取健康人外周血,分离单核细胞,加入含IL-2500U/ml的RPMI1640培养液,体外扩增4d,收集活化的HuPBL,尾静脉注射1.5×10~7·(0.5 ml)~(-1)/只鼠,第14天重复注射1次.取指数增殖期的人脑胶质瘤体外细胞系SHG-44细胞(1)1.5×10~5·(0.5ml)~(-1)/只鼠,于HuPBL 2次转输后次日,直接注射于SCID鼠右腋皮下.从接种日至皮下扪及微结节的时间为肿瘤增殖的潜伏期,尔后局部剃毛,用卡尺测肿瘤短径(a),长径(b),并根据公式计算肿瘤体积W=a~2 X b/2.取肿瘤组织制备单细胞悬液,沿管壁加入到置有淋巴细胞分离液的试管内,常规收集淋巴细胞,按流式细胞计数仪和间接荧光原位杂交法鉴定.实验分组:(A)Lx BsAb(抗 CD3-抗胶质瘤双特异性抗体) IL-2 HuPBL;(B)BsAb IL-2 HuP-BL;(C)IL-2 HuPBL;(D)HuPBL;(E)RPMI 1940.Lx1.5mg/只鼠,IL-2 500 U/只鼠,BsAb 200μg/只鼠均从腹腔给药,每天1次,至宰杀前1d,共观察28d.     

IL-6 通过诱导SOCS3表达缺失促进乳腺癌MDSCs 浸润和免疫抑制活性

目的：探讨髓系来源抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）通过IL-6 诱导STAT3/IDO信号通路活化对T细胞的免疫抑制作用及其分子机制。方法：收集天津医科大学肿瘤医院2015 年11 月至2016 年2 月收治的20 例乳腺癌患者肿瘤组织及其癌旁组织和40 例健康供者的外周血样本。免疫磁珠技术分选肿瘤组织中的CD33+和健康供者外周血中的CD33+和CD14+细胞,CD33+体外与乳腺癌细胞系MDA-MB-231 共孵诱导MDSCs生成。流式细胞术检测表型为CD45+CD13+CD33+CD14-CD15-的MDSCs 比例,Western blotting 检测细胞因子信号转导抑制因子1(suppressors of cytokine signalling 1,SOCS1)、SOCS3、JAK1、JAK2、TYK2、STAT1、STAT3 及其磷酸化水平,qRT-PCR 检测IL-6、SOCS1-3 的表达水平,CCK-8 法检测T 细胞增殖情况,Annexin V检测T 细胞凋亡,ELISA 检测T 细胞分泌的IL-10 和IFN-γ。结果：20 例乳腺癌组织中均有不同程度的MDSCs浸润（15.3%~58.1%）,平均为（29.82±11.46）%;IL-6high组MDSCs浸润比例明显高于IL-6low组[ （13.75±3.44）% vs（4.31±1.50）%,P<0.05],且IL-6 表达与MDSCs浸润呈正相关（R2=0.4399,P<0.01)。体外实验发现肿瘤源性IL-6 明显促进体外MDSCs的生成和免疫抑制活性,该过程可被IL-6 信号的阻断所逆转（P<0.05）;同样发现在体外诱导的MDSCs中SOCS3 表达缺失,阻断IL-6 后,以上过程被明显抑制（P< 0.05）。结论：乳腺癌来源的IL-6 刺激MDSCs中JAK/STAT信号通路的持续活化和SOCS3 的表达缺失,进而促进MDSCs的浸润、生成和免疫活性。因此IL-6 信号通路可以作为削弱MDSCs生成和逆转MDSCs活性的治疗靶点。     

LAK细胞和CTL治疗进展性肝癌的对比研究

此项研究旨在评价肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)和LAK细胞治疗Ⅳ期原发性肝癌的疗效。 将26例Ⅳ期肝痛患者分为2组,LAK细胞治疗组(8例)和肿瘤特异性CTL治疗组(18例)。体外扩增的效应细胞均通过肝动脉回输给患者。LAK细胞输入细胞数为1.9×10~9～14.4×10~9,IL-2为1×10~6U,CTL输入细胞数为0.4×10~9～5.3×10~9,IL-2为0～28×10~6U,治疗期间患者未接受其它治疗。 应用超声显像和CT检查肿瘤大小,两组患者的生存率用Kaplan-Meier法进行评价。LAK细胞治疗组8例中有效4例,但均为轻度消退(肿瘤体积减少<50％),其中3例在治疗结束后8个月内死亡,仅1例在治疗后存活27个月。CTL治疗组18例中3例为完全     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)辅以少量的基因重组人白细胞介素2(rIL-2)和植物血凝素(PHA)诱导外周血淋巴细胞,成功地研制出具有抗肿瘤活性的CD3McAb激活的杀伤细胞(anti-CD3monoclonal antibody activated killer cells)简称CD3AK细胞.结果表明,微量的CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,30ng/ml的CD3McAb就能激活CD3AK细胞,而且激活作用为一次性完成,并能保持至少16天的增殖生长趋势;当CD3McAb浓度增加到100ng/ml时,细胞扩增倍数为27±3.67,与LAK细胞扩增倍数相接近;当CD3McAb浓度提高到300ng/ml时,CD3AK细胞的扩增倍数为192±9.36明显高于LAK细胞扩增倍数28±6.13(P<0.05);当CD3McAb浓度提高到500ng/ml时,CD3AK细胞扩增倍数可达864±9.31倍.CD3AK细胞是以CD3~ 、CD8~ 和CD4~ 为主的异质性细胞群,CD3~ 和CD8~ 细胞百分率随培养时间延长而增加.培养至第4天的CD3AK细胞已开始具有明显的杀伤活性,并逐渐增强,至第10天达到高峰,随后开始下降,其抗瘤效应最佳时期在     

急性早幼粒细胞白血病患者白细胞介素6测定与意义分析

本文用IL-6依赖细胞株MH60-BSF2检测12例患者血清与白血病细胞内IL-6活性。结果发现正常对照血清IL-6平均<10U/ml,白细胞内IL-6活性多数测不到(仅1例为5U/2×10~5)。APL患者治疗前期、中期(白细胞增殖期)及后期(缓解期)血清IL-6活性分别为36.06±15.72U/ml、41.5±/5.0U/ml和22.12±12.02U/ml:治疗中期似有升高(P>0.05),治疗后期下降(P<0.05);外周白细胞内IL-6活性分别为8.98±8.6U/2×10~5细胞、5.36±4.16U/2×10~5细胞和5.95±3.68U/2×19~5细胞,治疗前似较高(P>0.05),治疗后无明显变化。APL瘤细胞在体外比正常白细胞有更高的IL-6活性(P<0.05)。相关分析表明APL患者外周总白细胞数,骨髓L-CFU及GM-CFU均与IL-6活性变化不相关(P<0.05)。     

从人结直肠癌中分离的肿瘤浸润淋巴细胞体外培养时表型的动态变化

Rosenberg 等报道,他们研究发现直接从手术切除标本中分离的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)杀伤活性比从外周血单个核细胞活化而来的淋巴因子激活细胞(LAK)要强50～100倍。然而从人结直肠癌中分离 TIL 的报道还不多。为了了解 TIL 活化的最佳培养与刺激条件,本文作者研究了从人结直肠癌中分离的 TIL,在体外培养时经 IL-2,及PHA 刺激后其表型与杀伤活性的动态变化。作者从5例结直肠腺癌手术切除标本中分离出肿瘤浸润淋巴细胞体外培养,首先用植物血凝素(PHA-P,最终浓度0.1%)。这是白细胞介素2(IL-2)受体的诱导剂,同时加重组 IL-2(rIL-2 1000 U/ml)刺激3天,然后去除PHA,单独用 rIL-2培养,每三天换培养液,继续培养46～79天,同时观察实验结果。体外培养的 TIL 表型用双色荧光流式细胞仪来检测,得到以下实验结果:一、从每克肿瘤组织可分离得到1.0×10~6至1.6×10~6的 TIL 细胞。经过体外全程培养细胞数量可增加31～3700     

脐血CIK细胞的体外扩增特性研究

目的动态观察脐血CIK细胞体外扩增特性及其表面抗原变化,并对其细胞毒活性进行检测。方法提取健康足月产妇的胎儿脐带血单个核细胞,第0天加入rh-IFN-γ,第1天加入rhIL-2、抗CD3单克隆抗体来诱导培养CIK细胞,以后每3d更换培养液1次,并补加rhIL-2及抗CD3McAb。用流式细胞仪动态检测培养物的免疫表型变化,同时进行细胞计数,并使用MTT法检测各阶段脐血CIK细胞的细胞毒活性。结果脐血CIK细胞在培养2￣3周后大量增生,扩增约(64.4±16)倍,其中CD3+CD5+6细胞扩增约900倍,是CIK的主要效应细胞,且CD+3CD+8的T细胞达(74.7±10.42)%,CD2+5细胞比例也明显增加,而CD3+4细胞比例却减少。另外CD+3CD1+6CD5+6细胞比例升高最显著;脐血CIK细胞对白血病细胞株K562,HL-60及原代白血病细胞有较高的杀伤活性。结论脐血单个核细胞在体外可以被培养为CIK细胞,且扩增潜能极大,扩增倍数极高,细胞毒活性强,脐血CIK细胞有望应用于恶性肿瘤的生物免疫治疗。     

骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞的诱导及研究

本研究探讨骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞(OSS-CTL)的诱导方法及其抗瘤特性和杀伤机制.通过生化方法从HOS-8603人骨肉瘤细胞系中提取、纯化、鉴定骨肉瘤相关抗原(OSAA66),然后与低剂量IL-2(100U/ml),CD3(10μg/ml)单折协同刺激骨肉瘤致敏的外周血淋巴细胞,诱导产生OSS-CTL.检测其细胞表型、杀伤机制、体内外的增值能力及抗瘤活性,并与骨肉瘤TIL进行了比较.①流式细胞仪检测OSS-CTL的表型特征为CD3~ (87.6±6.3)%,CD4~ (21.7±4.1)%,CD8~ (94.7±5.3)%,CD11b~ (1.9±0.9)%,HLA-DR~ (79.3±8.7)%,即以CD3~ CD8~ CTL为主异质细胞群.②[3~H]-TdR释放法测定细胞毒性,结果OSS-CTL对HOS-8603和自体骨肉瘤细胞的杀伤活性分别为97.3%和95.2%,而对K562和SHG-44细胞仅为11.2%和9.6%,两组差异显著(P<0.05).提示,OSS-CTL对OSAA66有关的骨肉瘤细胞具有高效的特异杀伤活性.杀伤机制研究表明,在光镜和电镜下观察到OSS-CTL通过接触溶解和诱导凋亡途径杀伤靶细胞.通过流式细胞仪检测发现,效靶比为1:1,50:1,     

白细胞介素-27促进CIK细胞的增殖及其对淋巴瘤细胞的杀伤能力

目的： 初步探讨重组人白介素-27（interleukin-27, IL-27）体外对人外周血来源的细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer,CIK）细胞增殖及其对肿瘤细胞的杀伤能力的影响。 方法:无菌条件下分离健康志愿者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,第0天加入IFN-γ、CD3单抗,之后根据加入不同细胞因子剂量随机分为六组进行CIK细胞培养：A组（IL-2：1 000 U/ml,正常对照组）, B组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：20 ng/ml）, C组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：10 ng/ml）, D组（IL-2：500 U/ml,IL-27：10 ng/ml）,E组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：5 ng/ml）, F组（IL-2：1 000 U/ml,IL-27：40 ng/ml）。倒置相差显微镜下观察各组CIK细胞生长情况,流式细胞术检测各组CIK细胞CD3 +CD56 +T、CD8 +T细胞的表达,自动细胞计数仪计数各组CIK细胞增殖情况,MTS方法测定各组CIK细胞对淋巴瘤K562细胞的杀伤活性。 结果： 培养第11天,D组与A、B、C组比较,CIK细胞中CD3 +CD56 +T细胞的表达\[（6657±244）% vs（6003±175）%,（5551±003）%,（5607±083）%;均P<005\]、CD8 +T细胞的表达\[（8167±197）%  vs（7030±267）%,（7492±247）%,（7443±190）%;均P<005\]都明显增强;D组CIK细胞培养的扩增倍数明显高于A、B、C组\[（4 81187±2307)  vs  (3 25773±9197), (379092±6449), (4 00985±4308)倍;均P<005\];效靶比40 ∶1时; D组CIK细胞培养第11天时杀伤力为（7671±221）%,显著高于其他各组（均P<005）。 结论： 细胞因子IL-27体外可显著提高CIK细胞的增殖能力和杀伤能力,最佳培养周期为11 d。     

与结核分支杆菌(Mtb)感染的抗原提呈细胞相作用的人CD8~ T细胞的特性

本研究旨在探讨与抗原提呈细胞相作用的人CD8~ T细胞的特性及其机制.在GM-CSF和IL-4作用下从外周血单个核细胞诱导培养后获得树突状细胞(DC),DC经Mtb感染(MOI=100)过夜,再与去除CD4~ 的T淋巴细胞(3×10~6/ml)共孵育并加入10ng/ml的IL-7,第7天用新鲜的Mtb感染的DC再次刺激T细胞,第8天及以后每隔1天均加入0.2ng/ml的IL-2,第9天时对T细胞进行阳性克隆选择,2天后收集细胞进行CD4~ 、CD8~ 表达分析,并测定IFN-γ的分泌水平.结果显示培养至第12天时96%的T细胞为CD8~ ,Mtb感染的DC能触发CD8~ T细胞应答,IFN-γ的分泌依赖于抗原(Mtb)和DC的同时存在.为了证实这种应答具有回忆性或在体外起到触发作用,又用同样的方法对5个PPD~ 、6个PPD~-的个体进行观察,结果发现,PPD~ 的个体均能产生CD8~ T细胞应答.将CD8~ T细胞经有限稀释进行克隆,结果有两个克隆(23和29)对Mtb有特异性应答.这些CD8~ T细胞与对Mtb感染的靶细胞的识别被抗MHCⅠ类抗体抑制,但与来自所有个体的Mtb感染的DC共培养均可产生IFN-γ,提示两者之间的识别不受MHC-ⅠA、-B、-C及CD1的限制.在Mtb感染DC前1小时,分别将作用于抗原处理不同阶段的     

IL-2吸入疗法:转移性肾癌的局部治疗

报告长期局部吸入IL-2治疗已有转移的肾癌6例,并配合小剂量静脉给予IL-2和皮下注射α-IFN,使转移癌缓解,尤其对肺部转移者效果明显,且无明显毒副作用。男4例,女2例,年龄47～61岁,平均54岁。6例均已行肾切除术,病理证实为肾癌。采用Salvia Lifetec喷雾器,将人体IL-2100000U经喷雾法吸入,每天5次,长期应用;每2周给予IL-2 4.5×10~6U,分4天静滴,皮下注射α-IFN3×10~6U/天,每周5天。     

双功能抗体抗CD3/抗CD19介导T细胞对靶细胞的杀伤作用

背景与目的:双功能抗体有2个抗原结合臂,一方面具有肿瘤相关抗原,另一方面具有和免疫效应细胞表面分子标记结合的能力,并能有效地使效应细胞靶向杀火肿瘤细胞的作用.本实验探讨抗CD3/抗CD19双功能抗体介导T细胞杀伤靶细胞的作用.方法:利用非放射性荧光染料Calcein-AM进行抗体介导的体外特异性杀伤活性榆测,Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞作为效应细胞.首先以Raji细胞为靶细胞,按不同效靶比,不同抗体浓度分组,以PBS、抗CD3scFv+、抗CD3scFv抗体及非相关抗体抗CD3/抗PGP为对照,另设CD19-K562细胞为非相关靶细胞组,比较双功能抗体介导特异性体外杀伤活性.取上述杀伤实验效靶比25:1,抗体浓度500 ng/mL各组,ELISA法比较激活的T细胞分泌IL-2的量,Real-time PcR法检测T细胞因子IL-3、IFN-γ、TNF-α激活后的表达变化.结果:体外介导T细胞杀伤靶细胞Raji的效果比对照组明显增强(P＜0.05),激活T细胞分泌IL-2、IL-3、IFN-γ及TNF-α的表达均明显高于对照组.结论:双功能抗体抗CD3/抗CD19在体外介导T细胞对靶细胞具有较强的杀伤作用.     

肿瘤浸润淋巴细胞和IL-2治疗晚期癌症

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是浸润肿瘤组织的活化淋巴细胞,能从小量肿瘤活检标本中分离,并在体外用白细胞介素-2(IL-2)扩增。这些细胞可能富含特异抗自身肿瘤活性,其活化所需 IL-2约为活化 LAK 细胞的1/100。本文报道非小细胞肺癌、恶性黑色素瘤或肾细胞癌患者应用 TIL 继承免疫疗法和持输注 IL-2的临床效果及免疫应答。对象为28例完成疗程的晚期癌症患者。用Kurnick 等报道的方法扩增 TIL,用~(111)铟标记静脉转输的 TIL(2.5×10~8)。患者在转输后4、24和48小时行 Gamma(γ)摄像机摄像,观察 TIL 在体内分布。在输注后每隔一定时间取外周血1 ml,用γ分光光度计检测放射活性,