siRNA 靶向沉默 Lipocalin-2基因增加人肺癌 A549细胞对顺铂的敏感性

目的：利用针对 Lipocalin-2的小干扰 RNA（siRNA）沉默人肺癌 A549细胞中 Lipocalin-2基因表达,观察其对顺铂化疗敏感性的影响。方法分别采用免疫组织化学 SP 法和 Western blot 检测 Lipocalin-2在肺癌组织和3种肺癌细胞株（A549、NCI-H661、NCI-H446）中的表达情况。设计并构建靶向 Lipocalin-2的 siRNA 转染 A549细胞,采用Real-time PCR 和 Western blot 检测转染效率。MTT 法检测顺铂处理后细胞存活率及半数抑制浓度（IC50）。流式细胞术检测顺铂处理后细胞凋亡率。结果 Lipocalin-2蛋白在肺癌组织和肺癌 A549、NCI-H661、NCI-H446细胞中均异常高表达（ P ＜0.05）。siRNA-Lipocalin-2转染 A549细胞能在 mRNA 和蛋白水平显著抑制 Lipocalin-2表达,同时顺铂诱导的细胞存活率显著降低,凋亡率显著增高（ P ＜0.05）。结论利用特异性 siRNA 能有效抑制人肺癌 A549细胞中Lipocalin-2 mRNA 和蛋白表达,增强细胞对顺铂的敏感性。     

阿司匹林下调lncRNA CCAT1增加肺癌细胞顺铂敏感性的研究

目的研究阿司匹林通过调控长链非编码RNA(lnc RNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对人非小细胞肺癌耐顺铂细胞A549(A549/DDP)的顺铂敏感性的影响。方法阿司匹林以不同浓度(1、3、6和9 mmol/L)作用于A549/DDP细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;用流式细胞术和蛋白质印迹法(Western blot)检测阿司匹林处理A549/DDP细胞的凋亡率和凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测多种肺癌细胞中CCAT1的表达差异,并分析阿司匹林作用A549/DDP细胞后CCAT1的表达情况;运用双酶切法构建pcDNA3.1-CCAT1表达载体;流式细胞仪和Western blot分别检测阿司匹林作用于CCAT1过表达的A549/DDP细胞后,细胞的凋亡率和凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果阿司匹林可明显抑制A549/DDP细胞增殖(P0.05),具有剂量依耐性;且可通过调节Bax等相关蛋白表达增强A549/DDP细胞凋亡效应(P0.05);A459/DDP细胞中CCAT1较非耐药细胞株明显高表达(P0.05);阿司匹林作用后,CCAT1表达明显下调(P0.05);成功构建了pcDNA3.1-CCAT1表达载体并成功转染;证实CCAT1过表达逆转阿司匹林对A549/DDP细胞敏感性的影响。结论阿司匹林通过下调lncRNA CCAT1的表达,提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

Bcl-XL siRNA对肺腺癌细胞A549/DDP药物敏感性及凋亡的影响

目的：探讨小干扰RNA沉默Bcl-XL对肺腺癌耐药细胞株A549／DDP药物敏感性的影响及其凋亡机制。方法：将Bcl-XL siRNA质粒载体转染至A549／DDP细胞，MTT、流式细胞仪检测细胞药物敏感性的改变；丫啶橙／溴化乙锭（AO／EB）染色法检测细胞凋亡；RT-PCR检测Bcl-XL mRNA水平；Western-Blot检测Bcl—XL、caspase-3蛋白表达的变化。结果：分别用0．2、2、20、200μg／mL顺铂处理细胞48h，MTT显示转染Bcl-XL siRNA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照组明显降低，细胞生长抑制率明显增高；用20μg/mL顺铂处理细胞48h，流式细胞仪检测，转染Bcl-XL siRNA组凋亡率较转染阴性siRNA组和未转染组增加；AO／EB染色显示转染Bcl-XL siRNA的细胞较转染阴性siRNA及未转染者凋亡率增加；转染Bcl-XL siRNA降低了Bcl-XL mRNA和蛋白水平，升高了caspase-3活性形式蛋白表达。结论：Bcl-XL siRNA特异性下调A549／DDP细胞Bcl-XL的表达，活化caspase-3蛋白，促进A549／DDP细胞凋亡，增强该肺腺瘤细胞对顺铂的敏感性。     

沉默EZH2表达逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药性

目的探讨沉默EZH2表达逆转人肺癌顺铂耐药性的作用及机制。方法以实时荧光定量PCR和Western blot法检测人非小细胞肺癌A549及其顺铂耐药株A549/DDP细胞中EZH2的表达;以siRNA沉默EZH2的表达,MTT法检测细胞增殖力;流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡;β-半乳糖苷酶染色法检测细胞的衰老;Western blot法检测细胞衰老通路P14ARF、P16INK4a、P53、P21、CDK1、CDK2、Rb、E2F1和H3K27me3的表达。结果 A549/DDP细胞的EZH2在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显高于A549细胞。沉默EZH2的表达并未引起细胞发生明显的凋亡现象,但G0/G1期比值明显升高(从0.53±0.08升到0.84±0.09,P<0.01),明显增加耐药株对顺铂的敏感性[IC50从(41.2±4.3)μmol·L-1降低到(19.4±3.3)μmol·L-1,P<0.01]。细胞呈衰老特征,细胞衰老通路的P14ARF、P16INK4a、P53、P21、Rb表达上调,CDK1、CDK2、H3K27me3、E2F1表达下调。结论沉默EZH2的表达能诱导A549/DDP细胞衰老,逆转其对顺铂的耐药性,其机制与调节INK4a/ARF/Rb衰老通路有关。     

PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。     

芹菜素影响非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的RAD51基因调控机制研究

目的:从RAD51基因途径研究芹菜素对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:取人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP,分为对照组(空白培养基)、顺铂组(5 g/L)和芹菜素低、高剂量组(10、20μmol/L),采用MTT法检测A549/DDP细胞生长,采用AnnexinⅤ/PI双染色法结合流式细胞术检测其凋亡情况。取A549/DDP细胞,分为顺铂单用组(1、2、4、8、16μg/mL)和芹菜素联用组(10μmol/L,在顺铂基础上加用),采用MTT法测定并计算细胞增殖抑制率;采用回归分析模型计算药物的半数抑制浓度(IC_(50)),并以此计算芹菜素的逆转指数。将18只裸鼠随机分为对照组、顺铂单用组和芹菜素联用组,每组6只,接种A549/DDP细胞使形成移植瘤后,分别腹腔注射生理盐水、顺铂(2 mg/kg,隔天给药1次)、顺铂(剂量、用法同前)+芹菜素药液(30 mg/kg,每天给药1次),连续给药18 d,测量小鼠的体质量和移植瘤质量并计算抑瘤率。取人肺癌细胞A549和A549/DDP,分为正常组(A549细胞)、对照组(A549/DDP细胞)、顺铂组(5 g/L,A549/DDP细胞)和芹菜素低、高剂量组(10、20μmol/L,A549/DDP细胞),分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测细胞中RAD51的mRNA及其蛋白表达情况。结果:与对照组比较,芹菜素低、高剂量组细胞增长数均显著降低,凋亡率均显著升高且显著高于顺铂组(P<0.05或P<0.01)。联用芹菜素后,A549/DDP细胞的增殖抑制率均较相应质量浓度的顺铂单用组显著升高(P<0.05);芹菜素联用组的IC_(50)为(5.81±0.47)μg/mL,显著低于顺铂单用组的IC_(50)(14.44±0.52)μg/mL(P<0.05);逆转指数为2.49。裸鼠抑瘤实验结果显示,联用芹菜素后,A549/DDP荷瘤裸鼠抑瘤率为68.72%,显著低于顺铂单用组的33.82%(P<0.05)。与正常组A549细胞比较,对照组A549/DDP细胞中RAD51mRNA及其蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05);与对照组A549/DDP细胞比较,芹菜素低、高剂量组A549/DDP细胞中RAD51 m RNA及其蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05);与顺铂组A549/DDP细胞比较,芹菜素低、高剂量组A549/DDP细胞中RAD51 m RNA及其蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论:芹菜素能够有效逆转人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的耐药性,其机制可能与下调RAD51基因转录及其蛋白表达有关。     

尾加压素Ⅱ对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的：探讨尾加压素Ⅱ（U-Ⅱ）对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制。方法：将体外培养A549细胞分为正常对照组、顺铂组（25μg/mL）及U-Ⅱ＋顺铂组（10-7mol/L U-Ⅱ＋25μg/mL顺铂）,TUNEL法测定A549细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测A549细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果：与正常对照组相比,顺铂组肺腺癌A549细胞的凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax表达明显升高（P〈0.01）;与顺铂组相比,U-Ⅱ则能够抑制A549细胞的凋亡,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达（P〈0.01）。结论：U-Ⅱ可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达从而抑制肺腺癌A549细胞凋亡。     

沉默ciRS-7通过靶向miR-944逆转胃癌细胞顺铂耐药性机制

目的 探讨沉默环状RNA(circRNA)ciRS-7对胃癌细胞顺铂耐药性的影响及相关机制。方法 构建顺铂耐药胃癌细胞HGC-27/DDP,沉默ciRS-7并用顺铂处理HGC-27/DDP细胞后，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ciRS-7、微小RNA-944(miR-944)表达水平，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率、克隆形成实验检测克隆形成数，蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡率，原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数，双荧光素酶实验验证ciRS-7与miR-944的靶向关系。结果 ciRS-7在顺铂耐药胃癌组织和细胞中高表达，miR-944在顺铂耐药胃癌组织和细胞中低表达，沉默ciRS-7明显降低顺铂处理的HGC-27/DDP细胞存活率、克隆形成数、cyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平...     

双氢青蒿素通过PI3K/Akt通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制

摘要：目的:研究双氢青蒿素通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制。方法:体外培养人肺癌耐顺铂株（A549/DDP）,给予不同浓度双氢青蒿素(20,40,80,160,200,250,300μmol·L-1)处理48 h后,通过MTT法检测双氢青蒿素对A549/DDP细胞增殖影响,选取双氢青蒿素最佳实验浓度及在不同浓度DDP(0,20,40,60,80,100μmol·L-1)作用下观察并计算顺铂对A549/DDP细胞IC50和双氢青蒿素对A549/DDP逆转倍数;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）及PI3K/Akt通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达。结果:随双氢青蒿素浓度升高,细胞增殖抑制率依次升高（P<0.05）,且具有浓度依赖性,IC10（32.07±1.04）μmol·L-1是双氢青蒿素为最佳逆转耐药浓度;随DDP浓度的升高,双氢青蒿素A549/DDP细胞增殖抑制率随之升高（P<0.05）,DDP+双氢青蒿素组顺铂对A549/DDP的IC50为（26.42±1.23）μmol·L-1,顺铂组为（58.16±1.32）μmol·L-1,双氢青蒿素的逆转耐药倍数为2.21;与对照组相比,DDP组、双氢青蒿素组、DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）;与DDP组、双氢青蒿素组相比,DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）。结论:双氢青蒿素通过抑制PI3K/Akt通路促进A549/DDP细胞凋亡,在一定程度上可逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性。     

二氢杨梅素诱导凋亡增敏顺铂抗肺癌A549细胞的研究

目的：探讨二氢杨梅素（dihydromyricetin,DMY）增强肺癌A549细胞对顺铂化疗敏感性的作用及机制,为肺癌减毒增敏治疗提供新思路。方法：体外培养A549细胞,分组（对照组、顺铂组、DMY组、顺铂+DMY组）干预细胞;倒置显微镜观察细胞生长状态;CCK-8检测各组细胞增殖情况;流式细胞术AV/PI双染检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白Parp、cleaved Parp、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2表达水平。结果：DMY联合顺铂对细胞的抑制作用显著高于单独应用DMY或顺铂组;流式细胞术AV/PI双染显示联合组的凋亡率显著高于单独用药组;蛋白印记结果显示联合组与单独用药组或与对照组比较总Parp及caspase-3蛋白表达显著降低,cleaved Parp及cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加,Bax蛋白水平升高的同时Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值显著升高。结论：DMY可以增强顺铂对A549细胞的治疗作用,其机制可能与抑制Parp表达介导的线粒体凋亡有关。     

BMP-2 通过BMP/Smad/ID3 通路调控非小细胞肺癌 A549细胞的凋亡

目的探讨BMP-2通过BMP通路调控非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法通过双酶切/连接克隆的方法,构建BMP-2 siRNA慢病毒载体及BMP-2慢病毒载体并进行包装;转染慢病毒后,采用荧光显微镜对转染效率进行定性分析,流式细胞术对转染率进行定量分析,RT-qPCR和Western blotting检测BMP-2基因的表达,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡蛋白的表达水平以及A549细胞中Smad1/5/8、磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)和ID3蛋白的表达水平。结果转染后第3、4 d,BMP-2 siRNA可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05);转染后24 h,BMP-2 siRNA可显著诱导A549细胞的凋亡(P<0.05),且活化的凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),而过表达ID3可抑制BMP-2 siRNA对细胞凋亡的诱导作用。与未处理组和阴性对照组相比,BMP-2过表达组细胞中p-Smad1/5/8表达水平显著上调(P<0.05),而Smad1/5/8总蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),ID3蛋白的表达显著上调(P<0.05)。结论BMP-2可通过BMP/Smad/ID3通路参与调控A549细胞的增殖和凋亡。     

丙戊酸联合顺铂对体外人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨丙戊酸（VPA）联合顺铂（DDP）对人非小细胞肺癌细胞A549、NCI．H460增殖抑制及细胞凋亡的影响,以及两药联合影响肺癌细胞增殖的机制。方法3组不同质量浓度的VPA与DDP单药及联合作用于人非小细胞肺癌细胞A549、NCI—H460,培养24、48、72h后,观察细胞数量和形态的变化,用MTF法分析药物对细胞增殖的抑制率（IR）及联合用药对细胞增殖抑制率q值,Hoechst／PI双染检测细胞凋亡的数量变化,Westernblot观察联合用药对Bcl．2、Caspase．3、Caspase．8蛋白的表达变化。结果培养48h后,各用药组细胞数目减少十分明显,其中VPA＋DDP组较单独用药组减少更为显著,其细胞形态发生较大改变;MTF法及q值计算结果显示,对A549细胞,VPA的增殖抑制作用呈现明显的时间与浓度依赖性,在高质量浓度时（300mg·L-1）与DDP具有协同作用;对NCI—H460细胞,当VPA的质量浓度≤100mg·L-1时,未显示出明显的时间与浓度依赖性,所有浓度均未显示出VPA与DDP的协同作用。VPA联合DDP可以进一步促进A549与NCI—H460的细胞凋亡,导致两细胞中凋亡因子Bcl-2水平的明显下调。联合作用对A549细胞更为明显,可能与该细胞中抑凋亡因子Bcl-2低表达及促凋亡因子Caspase-3、Caspasel8高表达有关。结论VPA能增强DDP对人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用,联合作用的协同性与药物浓度及细胞类型有关,不同类型细胞对药物敏感性的差异可能与细胞自身表达的凋亡因子的含量有关。     

去甲基脱氧鬼臼毒素衍生物DPPC诱导A549细胞凋亡的研究

目的 探讨鬼臼毒素衍生物L-N-甲酰-4′-去甲基脱氧鬼臼-甲硫-4-N-哌嗪酰胺(DPPC)抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖作用,阐述DPPC诱导A549细胞凋亡的相关分子机制.方法 体外培养A549细胞,Ho-chest33258检测DPPC处理A549细胞后细胞凋亡现象;Annexin V-FITC/PI双染定量检测DPPC处理后细胞凋亡数量;蛋白免疫印迹实验检测凋亡基因p53、caspase-3、Bax的表达.并与依托泊苷(阳性对照组)和未给予任何药物处理的A549细胞做对照.结果 DPPC组A549细胞中γ-H2AX的表达量较阴性对照组和阳性对照组都有明显的增加.荧光显微镜下见DPPC处理后的A549细胞核呈现萎缩,并出现细胞凋亡小体.与阴性对照组比较,不同浓度DPPC处理A549细胞后,抑制肿瘤发生发展的p53基因表达增加,并呈剂量依赖性,其下游的凋亡相关蛋白caspase-3以及Bax表达增加(P<0.05,P<0.01).相同浓度的DPPC和依托泊苷抑制凋亡相关蛋白有明显的差异(P<0.05).结论 DPPC能够引起A549细胞DNA损伤,并诱导细胞凋亡,DPPC能够使细胞内凋亡相关蛋白表达异常,抑制A549细胞增殖;此外,DPPC体外表现出优越的抗肿瘤细胞增殖作用.     

银杏达莫注射液联合鼠神经生长因子治疗重型急性颅脑损伤的临床研究

目的 探讨消岩汤逆转肺癌顺铂（DDP）耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;siRNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Werstern blotting检测mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Western blotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药相关蛋白（LRP）蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1（YAP1）、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论 消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

MiR-497对人胃癌细胞株顺铂耐药性的影响和机制

目的:通过建立人胃癌细胞SGC-7901的顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,探讨miR-497对SGC-7901/DDP耐药性的影响及其机制。方法:体外研究采用顺铂体外逐步加量诱导法建立人胃癌细胞SGC-7901耐药株,并通过检测药物半抑制浓度和耐药基因MDR1、BCRP、MRP1的表达以鉴定耐药细胞株;检测在亲本及耐药细胞中miR-497、MDR1、MRP1、BCRP和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达水平;miR-497模拟物分别转染SGC-7901/DDP细胞株,利用SRB法和流式细胞术检测转染miR-497模拟物后细胞对顺铂醇的敏感程度和细胞的周期、凋亡的变化,并检测耐药基因和凋亡相关基因的表达。结果:成功建立人胃癌SGC-7901/DDP耐药细胞株,耐药细胞株中耐药基因MDR1、BCRP、MRP1表达均升高,抗凋亡基因Bcl-2升高,凋亡基因Bax下降,miR-497表达下降(P<0.05);miR-497模拟物提高耐药细胞株对顺铂的药物敏感性,凋亡水平增加,细胞周期G₀/G₁期细胞增多(P<0.05),并可抑制耐药细胞中耐药基因的表达,降低Bcl-2/Bax比值(P<0.05)。结论:人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP的miR-497表达下调;上调miR-497的表达可逆转人胃癌SGC-7901/DDP细胞株对化疗药物顺铂的耐药性。     

内源性大麻素联用顺铂对人肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用

目的观察内源性大麻素（AEA）、顺铂（DDP）单用或联用对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测AEA和DDP对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪（FCM）PI单染检测AEA联用DDP对细胞周期的影响,以Annexinv／PI双染法检测AEA联用DDP对细胞凋亡的影响。结果AEA对肺癌细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。10,20μmol／L的AEA和1,2mg／L的DDP联合作用24,48,72h后,细胞增殖抑制率显著高于单用组;两药联用后诱导细胞凋亡的作用显著增强,AEA可使A549细胞阻滞于G2／M期。结论AEA及DDP对肺癌A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,在一定范围内呈量效关系,且两者联合应用具有相加或协同作用。     

全反式维甲酸联合阿司匹林对体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖和促凋亡的作用及其机制

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）联合阿司匹林（ASA）体外抑制肺癌A549细胞增殖,促凋亡作用和机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞,5,10 μmol·L^-1的ATRA单独及分别联合5,10 μmol·L^-1的ASA进行干预48 h、72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法观测药物作用48 h后细胞凋亡状态;RT-PCR法检测药物作用后肺腺癌A549细胞COX-2 mRNA的表达;Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、COX-2和caspase-3蛋白的表达。结果： ATRA与ASA联用对A549增殖具有协同作用;TUNEL法结果显示ATRA可诱导A549细胞凋亡,与ASA联用凋亡率显著升高（P<0.05）;RT-PCR显示A579细胞中COX-2 mRNA呈现高表达状态,ASA可下调COX-2表达,ATRA无此作用;Western blot结果显示ATRA和ASA协同作用使A549细胞中Bcl-2、COX-2蛋白表达受到抑制,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax值降低,对凋亡通路的影响大于单药作用（P<0.05）。结论： ASA联合ATRA可协同抑制肺腺癌细胞A549的增殖及以及促进其发生凋亡,其作用机制可能是ASA通过抑制COX-2蛋白表达,与ATRA共同通过Bcl/caspase通路诱导肿瘤凋亡实现的。     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.