乙型肝炎病毒前C／C基因区硫代和脂肪链—硫代反义寡核苷酸的体外抗…

为了研究修饰的反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）的抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。以２．２．１５细胞为靶细胞，在ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区设计合成了１６聚硫代和脂肪链－硫代两种修饰的ＡＳＯＮ，用酶联免疫吸附和斑点杂交技术分别检测作用细胞的乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）以及ＨＢＶ ＤＮＡ的分泌情况。结果显示，ＡＳＯＮ在浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ时能特异性抑制细胞９２％￣９５％ＨＢｓＡｇ和８４％￣     

特异性乙型肝炎病毒X基因反义核酸体外抗病毒作用

为了观察互补于乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因的三段硫代反义核酸（ＡＳＯＮ）体外抗病毒作用，采用ＥＬＩＳＡ和ＰＡＰ－ＥＬＩＳＡ法检测ＡＳＯＮ作用前后２，２，１５细胞上清中乙型肝炎病毒表面抗原、ｅ抗原及Ｘ抗原（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｘＡｇ）含量变化及细胞原位杂交检测细胞内ＨＢＶＤＮＡ含量变化。结果表明，三段ＡＳＯＮ均可抑制ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢｘＡｇ的表达，其抑制率分别为８０．６５％、６２．７６％和７８．０７％；细胞内ＨＢＶＤＮＡ也明显减少。据此认为，ＨＢｘＡｇ表达量下降可能系ＡＳＯＮ序列特异性封闭作用所致，而ＨＢ－ｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ表达量以及ＨＢＶＤＮＡ含量降低，可能是通过ＨＢｘＡｇ对ＨＢＶＤＮＡ启动子的反式激活功能降低而实现的。     

不同基因区反义寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒基因表达的比较

目的探讨反义寡核苷酸（ＡＳＯＮ）特异性抗病毒作用。方法在ＨｅｐＧ２２．２．１５细胞中观察了４段１６聚针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因不同功能区的ＡＳＯＮ对病毒复制的抑制作用。结果ＡＳＯＮ能显著抑制ＨＢＶ基因的抗原表达（Ｐ＜０．００１），在Ｓ基因区设计的ＡＳＯＮ对ＨＢｓＡｇ的抑制作用明显优于Ｃ基因区的ＡＳＯＮ（Ｐ＜０．０５）。反之，在Ｃ基因区设计的ＡＳＯＮ对ＨＢｅＡｇ的抑制作用又明显优于Ｓ和Ｐｒｅ－Ｓ２基因区的ＡＳＯＮ（Ｐ＜０．０１）。４段ＡＳＯＮ的联合用药并不能增强其对ＨＢＶ的抑制作用。结论ＡＳＯＮ可能成为一种有开发潜力的抗病毒药物。     

反义乙肝病毒S基因真核载体构建及体外抗乙肝病毒作用

目的：探讨反义ＲＮＡ抗乙肝病毒（ＨＢＶ）作用。方法：构建了正，反义ＨＢＶＳ基因重组ＥＢ病毒载体ｐＭＥＰ４ｓ，ｐＭＥＰ４Ｓａｓ，ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀法将重组载体ＤＮＡ转染２．２．１５细胞，潮霉素筛选１个月得到抗性细胞克隆，ＥＬＩＳＡ，斑点杂交法分别检测抗性细胞上清ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇＨＢＶＤＮＡ水平，结果：转染后１，２月，反义载体ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ的抑制率分别达７５％，５１．６％，７０％，４６     

乙型肝炎病毒基因组S区编码产物的检测及临床意义

为了进一步明确 ＨＢＶ基因组 Ｓ区编码产物对乙型病毒性肝炎诊断的临床价值，用双抗体夹心 ＥＬＩＳＡ法检测 ９０份乙型病毒性肝炎患者血清标本ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ、Ｐｒｅ－Ｓ１和 Ｐｒｅ－Ｓ２，并与 ＨＢＶＭ及 ＨＢＶＤＮＡ ＰＣＲ进行对比分析。结果以抗 ＨＢｃ、ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ、ＨＢＶＤＮＡ（ＰＣＲ）及 Ｐｒｅ－Ｓ２的阳性检出率为最高，分别为８７．８％、７３．３％、７２．２％和６４．４％，以ＨＢＶＤＮＡ作为ＨＢＶ感染的金标准，无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；其中ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ与 ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ的符合率最高，分别为 ７６．７ ％和 ７４．７ ％；ＭＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ与 ＨＢＶＤＮＡ具有高度相关性。ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ做为早期诊断ＨＢＶ感染及判断是否具有传染性方面，是一项非常重要的血清学指标，Ｐｒｅ－Ｓ２也可作为ＨＢＶ复制活跃的标志之一，用于急慢性肝炎的预后判断．     

乙肝病毒S基因区反义寡核苷酸对表面抗原表达的抑制作用

为了研究硫代反义寡核苷酸的抗乙型肝炎病毒作用，以２．２．１５细胞为靶细胞，在ＨＢＶ Ｓ基因起始区设计了１段ＡＳＯＮ，用酶联免疫吸附法检测了作用细胞的ＨＢＶ的分泌情况。结果显示，ＡＳＯＮ在每天给予２μｍｏｌ／Ｌ的浓度情况下抑制８８％的ＨＢｓＡｇ产生，无关序列的寡核苷酸无明显抑制作用，同时未见ＡＳＯＮ的细胞毒作用。     

海藻硫酸多糖抗乙型肝炎病毒的实验研究

１．材料与方法：海藻硫酸多糖（ＳＰＳ）是自制的一种天然硫酸酯多糖。在ＨＢＶ基因转染的人肝癌细胞系 ２．２．１５细胞中，观察ＳＰＳ在对ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ的抑制作用，以齐多夫定和灵芝多糖作为对照药物。选用鸭肝炎动物模型，以阿昔洛韦为阳性对照，观察ＳＰＳ对ＤＨＢＶ感染鸭血清ＤＨＢＶ ＤＮＡ水平的抑制作用。 ２．结果：ＳＰＳ在 ２．２．１５细胞培养中对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的分泌有明显抑制作用，随着ＳＰＳ浓度的增高，对ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ表达的抑制作用增强，最高抑制率分别为７０．１％±４．２％（ＩＣ５…     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

脂质体干扰素的体外抗乙型肝炎病毒效应

本文采用２．２．１５细胞进行脂质体干扰素与干扰素的体外抗乙型肝炎病毒实验，用ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｅＡｇ，用反向血凝法及ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｓＡｇ，用斑 交法测ＨＢＶ ＤＮＡ，结果证实，脂质体ＩＦＮ体外对ＨＢｅＡｇ的抑制率较ＩＦＮ高，能较好地抑制ＨＢＶ ＤＮＡ，但与ＩＦＮ一样，对ＨＢｓＡｇ无抑制作用。     

乙型肝炎患者血清Pre-S-2抗原的意义

目的研究ＰｒｅＳ２抗原与乙型肝炎患者ＨＢＶ标记的关系．方法血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者２６例，血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｂ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者４７例及健康献血者２０例，血清用ＲＩＡ法检测ＰｒｅＳ２抗原及用ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ．结果血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者２６例，ＰｒｅＳ２抗原与ＨＢＶＤＮＡ均阳性（１００％）；血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｂ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者４７例，ＰｒｅＳ２抗原３０例阳性（６３８％），１７例阴性（３６２％），ＨＢＶＤＮＡ３２例阳性（６８１％），１５例阴性（３１９％），ＰｒｅＳ２抗原与ＨＢＶＤＮＡ均阳性２８例（５９６％），均阴性１４例（３００％）．健康献血者２０例，ＰｒｅＳ２抗原阳性１例（５０％），阴性１９例（９５０％），ＨＢＶＤＮＡ阳性２例（１００％），阴性１８例（８００％），ＰｒｅＳ２抗原及ＨＢＶＤＮＡ均阳性０例（０％），均阴性１８例（８００％）．结论ＰｒｅＳ２抗原可作为预测慢性乙型肝炎患者病情活动与传染的标志．     

重型乙型肝炎患者血浆与外周血单个核细胞培养上清液中sIL－2R的检测及意义

以双单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，对４５例重型乙型肝炎（ＳＨＢ）患者（其中急性１０例，亚急性１５例，慢性２０例）检测了血浆与外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清液中的可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）。结果显示，各型ＳＨ一Ｂ患者血浆ｓＩＬ－２Ｒ水平均明显高于正常对照（Ｐ均＜Ｏ０ｌ）。而不同类型ＳＨ一Ｂ之间，ＨＢｅＡｇ与抗－ＨＢｅ阳性组之间血浆ｓｌＬ－２Ｒ水平及ＳＨ－Ｂ患者与正常对照组之间ＰＢＭＣ培养上清液中的ｓＩＬ－２Ｒ水平皆无显著性差异（Ｐ均＞Ｏ．０５）。提示不同类型ＳＨ一Ｂ患者都存在免疫效应细胞的过度活化而其ＰＢＭＣ体外释放ｓＩＬ－２Ｒ的功能似乎无异常，血浆ｓＪＬ－２Ｒ水平高低似乎与ＨＢＶ复制状态无关。     

反义寡核苷酸抗HBV作用的双峰现象

ＨＢＶ基因组含３－２ｋｂＤＮＡ,有至少４个ＯＲＦ,其中Ｓ区包含Ｓ基因,ｐｒｅＳ１基因和ｐｒｅＳ２基因,编码形成大、中、小３种蛋白,构成ＨＢＶ的包膜蛋白（ＨＢｓＡｇ,ｐｒｅＳ１Ａｇ,ｐｒｅＳ２Ａｇ）．其中ＨＢｓＡｇ在体内引起的免疫病理反应是ＨＢＶ感染中的重要致病机制,ｐｒｅＳ２Ａｇ较ＨＢｓＡｇ有更强的抗原性,并具有反式激活作用,在ＨＢＶ感染及肝癌发生中关系密切．因而如何从基因水平抑制ＨＢｓＡｇ和ｐｒｅＳ２Ａｇ的表达,对抗ＨＢＶ治疗有重要意义．我们设计了针对Ｓ基因翻译起始区和ｐｒｅＳ２基因翻译起…     

反义寡核苷酸对H1δ9细胞中了型肝炎病毒

在Ｈ-１δ９细胞中观察反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）及其硫代修饰物（Ｓ－ＡＳＯＤＮ）对丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因复制与表达的抑制作用。方法在分子水平证实互补于ＨＤＶ基因链核酶自裂位点和Ｓｔｅｍｌ区的ＡＳＯＤＮ可抑制核酶自裂的基础上，进一步台成针对该区６８４－６９８位核苷酸的１５聚ＡＳＯＤＮ及Ｓ－ＡＳＯＤＮ，在培养的ＨＩδ细胞中加人不同寡核苷酸，分别采用ＥＬＩＳＡ和斑点杂交法检测上清中ＨＤＡｇ及细胞中的ＨＤＶｃＤＮＡ。结果加人终浓度为６μｍｏｌ／Ｌ的Ｓ－ＡＳＯＤＮ后２４ｈＨ１δ９细胞中ＨＤＶＲＮＡ复制及ＨＤＡｇ分泌均受抑制，抑制率分别为８４５％和７６．１４％。Ｓ－ＡＳＯＤＮ的终浓度为２、４、６μｍｏｌ／Ｌ时，其抑制作用呈剂量依赖关系。在同等剂量时，ＡＳＯＤＮ与Ｓ－ＡＳＯＤＮ抑制作用相近。结论提示所用ＡＳＯＤＮ及Ｓ－ＡＳＯＤＮ均能有效抑制转基因细胞中ＨＤＶ基因的复制与表达，为进一步在动物体内研究Ｓ－ＡＳＯＤＮ抗ＨＤＶ的作用提供了实验依据。     

聚合酶链反应检测HBV－DNA的临床意义

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ法对２７３７例乙肝患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝病毒标志物进行检测，结果发现各组ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率：①ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为９９．２７％；②ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｅ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４４．７７％；③ＨＢｓＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４２．８６％；④ＨＢＶ标志物均阴性为１５．９２％。结果表明ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ检出先于其它乙肝病毒标志物，可早期发现乙肝。ＰＣＲ法直接检测ＨＢＶ－ＤＮＡ更有利于临床对乙肝的诊断和治疗。     

血清HBeAg阴性与HBeAg/IC及A1896变异的关系

目的探讨血清ＨＢｅＡｇ阴性（双抗体夹心法）与ＨＢｅＡｇ／ＩＣ形成及ＨＢＶ变异株Ａ１８９６的关系，评价ＨＢｅＡｇ／ＩＣ检测的临床意义．方法单克隆抗ＨＢｅ固相ＥＬＩＳＡ检测血清中ＨＢｅＡｇ／ＩＣ；套式多聚酶链反应检测ＨＢＶＤＮＡ；３＇碱基特异多聚酶链反应判断Ａ１８９６变异；ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ，研究对象为１１７例慢性ＨＢＶ感染者，２０例健康对照统计处理采用卡方检验．结果ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ检出率明显高于ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性血清，Ｐ＜０００１（９１３％ｖｓ３６２％）；２９份ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中仅５例（１７２％）检出Ａ１８９６，而且其中２例与野毒株（Ｇ１８９６）混合感染并伴ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性．２９份中１７份（５８７％）为ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性的Ｇ１８９６感染；血清抗ＨＢｅ阳性组Ａ１８９６检出率高于抗ＨＢｅ阴性组，Ｐ＜００５（２５％ｖｓ３２％）．结论ＨＢｅＡｇ／ＩＣ为ＨＢＶ活跃复制指标；临床ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性患者仍多数为Ｇ１８９６感染，ＨＢｅＡｇ／ＩＣ形致双抗体夹心法不能检出ＨＢｅＡｇ；抗ＨＢｅ应答可能为促使前Ｃ变异的重要因素     

三螺旋形成寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒复制及抗原合成的实验研究

目的 探讨三螺旋形成寡核苷酸抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。方法 针对ＨＢＶ核心启动子ＳＰ１位点,合成２１ｍｅｒ硫代磷酸三螺旋形成寡核苷酸及２１ｍｅｒ无关对照寡核苷酸。采用ＬＥＩＳＡ,斑点杂交法分别检测了经寡核苷酸处理的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞及空白对照组细胞培养上清ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶ ＤＮＡ水平。结果 ＴＦＯ２１组２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ及ＨＢＶ ＤＮＡ分泌量明显低于空白对照组。ＴＦ     

HBV—DNA在各型乙肝中的分布规律探讨

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测乙肝患者的血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，商时用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢＶ各抗原抗体指标。结果显示，９０４例乙肝患者的ＨＢｅＡｇ阳性率为３７．９％，而ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率达６８．８％，血清ＨＢＶＤ－ＮＡ阳性率明显高于ＨＢｅＡｇ（Ｐ〈０．０５）。在ＨＢｅＡｇ阴性病例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率达５４．４％，其中有活动性肝病者阳性率为７２．３％，肝病静止期仅１９．９％，差异极显著（Ｐ〈０     

HDV感染与HBV血清标志物的关系

目的分析ＨＤＶ感染与ＨＢＶ血清标志物的关系方法选ＨＢＶ血清标志物阳性患者，同时进行ＨＤＶ感染的检测．供血员做正常对照．ＨＤＶ感染和ＨＢＶ血清标志物皆用相应酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）．结果２８９例ＨＢＶ血清标志物阳性患者中，有４０例ＨＤＶ感染阳性，阳性率为１３８％．在ＨＢＳＡｂ（＋）组，无ＨＤＶ感染阳性者检出；在ＨＢＳＡｇ（＋）或ＨＢＣＡｂ（＋）或ＨＢｅＡｂ（＋）组患者中，ＨＤＶ感染阳性率分别达１７６％，１８８％、２５２％，明显高于ＨＢｅＡｇ（＋）组（１０９％）；并且ＨＤＶ感染阳性率在ＨＢＳＡｇ·ＨＢＣＡｂ·ＨＢｅＡｂ（＋）患者中，高达２６２％，明显高于ＨＢＳＡｇ·ＨＢＣＡｂ·ＨＢｅＡｇ（＋）者（１０９％）．结论①ＨＤＶ感染性率在ＨＢＳＡｇ·ＨＢＣＡｂ·ＨＢｅＡｂ（＋）患者中高于ＨＢＳＡｇ·ＨＢＣＡｂ·ＨＢｅＡｇ（＋）患者．②ＨＤＶ感染阳性率与ＨＢＶ复制的速度和数量不全相关．     

HBV感染者血清HBeAg/IC和HBV DNA间的关系

资料与方法：ＨＢＶ感染者１１７例,正常对照２０例,研究对象排除其它肝炎病毒感染,半年内未经抗病毒及免疫治疗。采用ＥＬＩＳＡ及Ｎａｓｔｅｄ－ＰＣＲ方法分别检测ＨＢＶ感染者血清中ＨＢｅＡｇ／免疫复合物（ＩＣ）和ＨＢＶ ＤＮＡ。 结果：１１７例ＨＢＶ感染者血清中共检出ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性２３例,ＨＢＶＤＮＡ阳性 ５５例, ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性者中 ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９１．３％（２１／２３例）,而ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性的９４例中ＨＢＶ ＤＮＡ阳性３４例,阳性率为３６．２％,两组差异有非常显著性,ｘ２＝８．１５…     

肝舒胶囊在体外细胞培养中抗HBV活性的研究

目的：研究肝舒胶囊在２．２．１５细胞培养中抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）作用。方法：用２．２．１５细胞体外培养,对肝舒胶囊抗ＨＢＶ活性进行评价。结果：肝舒胶囊５ｇ／Ｌ加药后４ｄ对２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的抑制率为５１．１６％和７４．８３％,在加药后第８天抑制作用达高峰,对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的抑制率分别为７５．７２％和８０．０２％。