寡脱氧核糖核苷酸致敏树突状细胞对OVCAR-3卵巢癌细胞株杀伤作用的实验研究

目的探讨含有未甲基化“胞嘧啶-磷酸二酯键-鸟嘌呤（CpG）基序”的寡脱氧核糖核苷酸（CpGODN）致敏人外周血来源树突状细胞（DC）在卵巢癌免疫治疗中的作用。方法应用CpGODN2006联合肿瘤相关抗原CA125体外冲击致敏DCs,流式细胞技术检测DC膜表面CD1α、CD8、CD86和人白细胞DR抗原（HLA-DR）的表达,用EHSA测定DC培养上清液中白细胞介素（IL）-12的分泌水平;四唑盐（MTT）比色试验法检测活化DCs对细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤OVCAR-3卵巢癌细胞株作用的影响。结果CpG ODN2006联合CA125在体外可明显激活人外周血来源DCs,DC表面分子CD83、CD86和HLA-DR表达的阳性细胞百分率[（85±4）％、（87±12）％和（92±7）％]明显高于未致敏组[（19±4）％、（67±9）％和（63±6）％]（P＜0．01）;联合致敏后DCs培养上清液中白细胞介素（IL）-12分泌水平为（467±84）ng／L,与未致敏组[（60±9）ng／L]和单纯CA125致敏组[（97±16）ng／L]相比差异有统计学意义（P＜0．01）;联合刺激后的DCs可以促进T淋巴细胞的增殖,增殖活性显著高于未致敏组和单纯CA125致敏组（P＜0．01）,且相同效靶比下所诱导的CTLs对OVCAR-3卵巢癌细胞的杀伤活性显著强于未致敏组、单纯CA125致敏组和单纯CpGODN致敏组（P＜0．01）。结论CpGODN联合CA125体外致敏DC可诱导产生对OVCAR-3卵巢癌细胞的免疫杀伤作用,是一种临床应用前景良好的肿瘤免疫治疗方法。     

树突状细胞在抗原特异性皮炎中的作用

目的：观察树突状细胞（DC）捕获抗原后的移行、抗原提呈方式及其在抗原特异性皮炎中的作用，方法：利用异硫氰酸荧光素（FITC）的可显示性，将其作为抗原皮内免疫CBA小鼠，测定局部淋巴结的淋巴细胞、DC总数并作淋巴细胞增殖试验，用FACS分析DC携带抗原。结果：皮肤经FITC刺激后，局部淋巴结的树突状细胞及淋巴细胞及淋巴数明显高于对照组（P＜0．05，P＜0．01），淋巴细胞增殖试验亦有明显差异（P＜0．05）；FACS分析的结果表明，局部淋巴结内的树突状细胞百分率及荧光强度均明显提高；荧光显微镜观察呈现不均一的膜荧光，提示该细胞抗原提呈方式为膜结合型。经病理切片观察，再次注射抗原的局部皮肤明显有单核，淋巴细胞浸润为主的皮肤迟发型超敏反应的病理变化，结论：FITC所引起的抗原特异性皮炎是一种细胞介导的迟发型超敏反应，DC在致敏过程中了重要的作用。     

肿瘤抗原致敏树突状细胞诱导机体产生抗肿瘤作用的实验研究

目的：探讨肿瘤抗原冲击致敏的树突状细胞（Dc）诱导机体产生的特异性抗肿瘤作用。方法：体外培养的小鼠骨髓树突状细胞用小鼠结肠腺癌细胞株CT26细胞抗原冲击致敏；混合淋巴细胞反应检测肿瘤抗原致敏DC刺激同基因型T淋巴细胞增殖的能力；观察小鼠经皮下免疫肿瘤抗原致敏DC后诱导产生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和抵抗CT26细胞再攻击的能力。结果：肿瘤抗原致敏DC能有效刺激同基因型T淋巴细胞增殖反应；小鼠经肿瘤抗原致敏DC免疫后可诱导强烈的CT[，杀瘤活性，产生免疫保护作用，能有效抵抗CT26细胞再攻击，肿瘤生长明显减缓，与未经抗原致敏DC免疫的小鼠组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：肿瘤抗原致敏的DC能有效诱导机体产生特异性的抗肿瘤作用。     

抗原冲击致敏树突状细胞诱导特异性CTL杀伤Lovo细胞实验研究

目的：本研究以健康人外周血单核细胞为前体细胞,体外诱导其为树突状细胞（DC）,负载直肠癌细胞株Lovo细胞冻融抗原,产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic Tlymphocytes,CTLs）,探讨其对Lovo细胞的杀伤作用。方法：联合应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-a及rhsCD40L等细胞因子,密度梯度离心法、贴壁法从外周血获取单核细胞并进行诱导扩增,培养出DC,用冻融抗原冲击致敏DC。实验分3组：冻融抗原致敏DC组（Ⅲ组）,未致敏DC组（Ⅱ组）,T细胞组（Ⅱ组）,观察CTL对Lovo细胞的杀伤作用。结果：冻融抗原致敏DC激活CTL的能力显著高于未致敏的DCs组,两组CTLs对Lovo细胞的杀伤率差异有统计学意义（50．9％ vs 24．7%,P〈0．05）。结论：冻融细胞抗原致敏树突状细胞后活化CTLs,有抗肿瘤活性。     

小鼠树突状细胞过继转移抗原作用的实验研究

用绵羊红细胞免疫小鼠，取其脾脏分离树突状细胞产针这些带有抗原信息的ＤＣＳ经尾静脉注射给小鼠，以观察ＤＣＳ过继转移抗原的作用。结果表明，各试验组小鼠抗体形成细胞及血清中ＳＲＢＣ效价明显高于对照组，Ｐ〈０．０１，再次免疫ＤＣ组抗ＳＲＢＣ效价高于初次免疫ＤＣ组Ｐ〈０．０５，ＤＣＳ具有过断转移抗原的作用。     

白细胞介素-23基因修饰树突细胞获取凋亡癌细胞抗原诱导的抗胰腺癌免疫治疗

目的 探讨白细胞介素23（IL-23）基因转染的树突状细胞（DC）负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答对小鼠胰腺癌的治疗作用。方法 克隆并构建IL-23基因真核双表达载体,转染DC后检测其表型及自分泌IL-23和IL-12的能力;观察各组脾脏T淋巴细胞γ干扰素（IFN-γ）和IL4的分泌量以及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTL）对胰腺癌细胞的杀伤作用。转染DC并负载肿瘤抗原后制备成疫苗对小鼠抗肿瘤的免疫保护作用和肿瘤抑制作用。结果基因测序证实IL-23基因克隆及双表达载体构建成功,转染后DC对共刺激分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达增强;DC自分泌IL-23和IL-12的能力显著增强。DC介导的免疫应答促进了IFN-γ生成型Th1细胞的产生,IL-23转染组每24hIFN-γ的分泌（最高为535pg／ml／10^6）与其他各组比较（对照组每24h为60pg／ml／10^6）,P〈0．01;转染的DC疫苗在体内诱导出高水平的CTL活性（P〈0．05）。接种IL-23修饰DC疫苗后小鼠的免疫防御能力显著增强;对肿瘤的生长有明显抑制作用,治疗组荷瘤鼠生存期与其他各组比较差异有显著意义。结论IL-23使DC抗原递呈能力更强,IL-23修饰DC疫苗可强化宿主针对特异肿瘤的CTL免疫应答,使宿主不仅产生防御性免疫反应而且增强自动免疫能力。     

SOCS1受抑的新型肝癌树突状细胞疫苗制备及功效的初步研究

目的探讨抑制SOCS1表达对LIGHT激活的肝癌树突状细胞疫苗效应的作用。方法用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）、重组小鼠白细胞介素4（rmIL-4）体外诱导培养小鼠骨髓单核细胞产生骨髓来源树突状细胞（BMDC），体外负载肝癌细胞HepA可溶性抗原，并用LIGHT和SOCS1反义寡核苷酸（AS1）处理DC，制备负载肝癌抗原DC疫苗；流式细胞仪检测疫苗细胞CD40及CD86表达和ELISA测定其IL-12、IL-1分泌水平以确定DC疫苗细胞的成熟度；通过体外细胞毒T淋巴细胞（CTL）活性、淋巴细胞增殖反应和IL-6、TNF-β分泌水平测定分析疫苗细胞的抗肿瘤免疫应答。结果负载肝癌抗原DC疫苗在LIGHT和AS1的双重作用下，疫苗细胞的成熟标志CD40、CD86、IL-1和IL-12增高（P〈0．01），能增强诱导CTL活性、刺激淋巴细胞增殖和分泌IL-6、TNF-β能力（P〈0．01）。结论抑制SOCS1能提高肝癌DC疫苗的成熟度，并增强疫苗细胞诱导抗肿瘤免疫应答。     

抗原致敏树突状细胞诱导CTL杀伤K562细胞体外实验研究

目的 研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞（DC）诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的特异性杀伤作用。方法 联合应用细胞因子从外周血单个核细胞（PBMC）诱导培养出DC,在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法,对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果 培养出具有典型特征的DC;在效靶比为10：1及20：1时。K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55．9％土22．0％、90．2％＋24．8％,均高于其他3组（p,0．05）。结论 K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL,具有明显杀伤K562细胞作用。并具有特异性。     

抗原致敏IL-12基因修饰的树突状细胞诱导抗肾癌免疫的体外研究

 【目的】探讨肾癌细胞抗原致敏白介素-12（IL-12）基因修饰的树突状细胞（DC）体外诱导、激活细胞毒性T淋巴细胞（CTL）免疫杀伤肾癌细胞的效能及相关免疫机制。【方法】采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞（PBMC）来源的DC；超声细胞破碎法提取肾癌细胞粗提抗原（Ag）致敏经IL-12转染的DC；ELISA法检测各组DCs和各组CTLs上清中IL-12、IFN-γ因子的分泌水平；流式细胞仪（FACS）分析各组DCs表面CD83、CD86、HLA-DR的表达；MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力及CTL免疫杀伤肾癌细胞的效能；统计学分析比较各组间的差异。【结果】经IL-12基因修饰和抗原致敏后的DC高表达CD83和CD86分子分别为（65．9％±3．1％，92．8％±3．4％），分泌高水平IL-12（279．6±1．7）pg／mL及IFN-γ（892±31）pg／mL，刺激同源T淋巴细胞增殖明显，诱导激活的CTL上清中IFN-γ水平（1146±31）pg/mL显著高于对照组；CTL对肾癌细胞有强大的杀伤作用，显著高于各对照组。【结论】经IL-12基因修饰和抗原致敏后的DC能有效地诱导CTL特异性抗肿瘤免疫应答。其机制可能与IL-12基因修饰和抗原致敏活化了DC抗原提呈第二信号，促进了DC高分泌IL-12因子，激活了T淋巴细胞致使CTL分泌IFN-γ的能力增强密切相关。     

Exosomes致敏的树突状细胞介导的抗大肠癌LoVo细胞株的作用

目的：分离LoVo细胞释放的exosomes,以其致敏树突状细胞（dendritic cell,DCs）,观察其对细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTLs）的激活效应。方法：离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离LoVo细胞释放的exosomes,常规方法从静脉血单个核细胞诱导DC,并分离T细胞,将LoVo细胞来源的exosomes冲击或未冲击的DCs与T细胞共培养。MTT比色法检测体外细胞毒活性。结果：LoVo细胞分泌的exosome致敏的静脉血DCs激活CTL的能力显著高于肿瘤冻融抗原致敏的DCs组,在效靶比为50：1时,两组CTLs对LoVo细胞的杀伤率为（67．9％vs38．7％,P〈0．05）。结论：树突状细胞经来自LoVo细胞分泌的exosomes致敏后,能活化CTLs而杀伤肿瘤细胞。     

Influence of Ehrlich Ascitic Carcinoma on Immune System:Inhibition of Host Response to Thymus-dependent Antigen

The response of Ehrlich ascitic carcinoma(EAC)-bearing hosts tothymus-dependent antigen(TDA)was assayed by plaque forming cells(PFC)andhemagglutination(HA)tests.It was found that the number of antibody-formingcells(AFC)and titer of antibody to sheep red blood cells(SRBC)decreased withEAC development.Transfer of normal thymocytes and spleen cells could enhancethe response of the recipient to TDA,but transfer of those from EAC-bearingdonor could not.Normal bone marrow cells plus thymocytes or spleen cells fromEAC-bearing mice,in contrary to the cells from nomal donors,were inefficient inimmunological reconstitution when they were transplanted into lethally irradiatedrecipients.The results suggest that deficiency of host response to TDA might beassociated with the decline of helper cell activity in the thymus and spleen oftumor-bearing mice.     

苯并(a)芘对金属硫蛋白基因敲除小鼠免疫功能的抑制

目的:观察苯并(a)芘[benzo(a)pyrene, B(a)P] 对金属硫蛋白(metallothionei n, MT)基因敲除的转基因小鼠[MT(-/-)]免疫功能的影响 .方法:选用MT(-/-)小鼠和野生型小鼠[MT(+/+)]进行对照,50 mg·kg -1体重的B(a)P 一次腹腔注射染毒后,检测动物对绵羊红细胞(sheep red blood ce lls, SRBC)的体液和细胞免疫功能变化.体液免疫指标为抗体形成细胞(plaque formation cells, PFC)数量.细胞免疫功能指标为迟发型变态反应(delayed-type hypersensitivi ty, DTH)的动物足跖厚度变化 .结果:MT(-/-)小鼠的脾脏重量在S RBC刺激后有明显增加,但在B(a)P染毒后被抑制.B(a)P染毒使MT(-/-)小鼠脾脏的的PFC 数明显减少,PFC抑制率达40.4%;而MT(+/+)小鼠没有观察到上述改变.B(a)P染毒对MT (-/-) 小鼠和MT(+/+)小鼠的细胞免疫反应的DTH未见明显影响.MT(-/-)小鼠和MT(+/+)小鼠的胸腺重量在B(a)P 染毒后都有减轻.结论:MT(-/-)小鼠的体液免疫功能更易被B(a)P抑制.提示MT具有保护小鼠不受B(a)P体液免疫损伤的功能.     

照射与免疫的时间间隔对抗体形成的影响及其辐射剂量效应

本实验观察了0. 25、0. 5、1. 0、2. 0、3. 0和4. 0Gy全身照射后3至6 h羊红细胞(SRBC)免疫对小鼠脾脏抗体形成细胞(PFC)的影响。结果发现,各剂量照射后,免疫与照射的时间间隔较长者,辐射对PFC反应的抑制显著加深。照射后3及6h免疫,脾脏PFC反应均随照射剂量的增加而降低。照射后3h免疫时,PFC反应的D_(37)值为4. 13Gy;照射后6h免疫时,PFC反应的D_(37)值为1. 74Gy。     

滑膜抗原特异性调节性T细胞的诱导扩增

目的 诱导扩增BALB/C小鼠滑膜抗原特异性调节性T细胞(antigen specific regulatory T cells,sTregs)的产生,为探索滑膜抗原sTregs在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的治疗作用提供实验基础.方法 体外诱导培养小鼠骨髓源性树突状细胞(DCs)并负载Ⅱ型胶原蛋白肽,在白细胞介素-2(IL-2)的协同作用下,与小鼠脾CD4+CD25+自然发生的调节性T细胞(nTregs)混合培养,以刺激产生滑膜抗原sTregs,并用混合淋巴细胞抑制实验评估扩增的sTregs抑制CD4+CD25-T细胞增殖的功能是否具有抗原特异性.结果 经DCs刺激1周后,小鼠CD4+CD25+Tregs扩增了6倍,并且增殖的sTregs在混合淋巴细胞抑制试验中较多克隆Tregs(Poly-Tregs)具有较强的抑制作用(P<0.01),显示抗原特异性抑制的特点.结论 以自身DCs负载滑膜源性抗原(Ⅱ型胶原蛋白肽)可以从小鼠脾CD4+CD25+nTregs中诱导扩增滑膜抗原sTregs.     

刺五加多糖对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的影响

本文用抗Thy-1.2单克隆抗体和补体在体外特异地去除C_(57)BL/6(H—2~b)小鼠骨髓中的T细胞,成功地对致死量照射的BALB/c(H—2~d)小鼠进行了异基因骨髓移植。移植后55天,异基因骨髓移植小鼠的免疫功能明显低于正常小鼠。在移植后45天,用每日100mg/kg剂量的刺五加多糖经腹腔连续给药10天,小鼠对胸腺不依赖抗原TNP-Ba的PFC反应以及对ConA和LPS增殖反应均较对照小鼠明显增加,但对胸腺依赖抗原SRBC的PFC反应以及BSA诱导的DTH反应无明显改善。     

树突状细胞在原位肝移植术后受体脾脏微嵌合体形成中的作用

目的 探讨树突状细胞(DCs)在原位肝移植术后受体脾脏微嵌合体形成中的作用.方法 以雄性Wistar大鼠为供体,雌性SD大鼠为受体,建立异性别原位肝移植大鼠模型(n=4).术后第7天处死受体大鼠,分离受体脾脏单个核细胞,建立脾脏来源DCs培养体系,经形态学观察和流式细胞仪检测DCs表面抗原OX62表达予以鉴定.采用PCR技术检测脾脏DCs培养体系的Y染色体基因片段(SRY基因)表达情况,明确受体脾脏中微嵌合体的形成.结果 大鼠异性别原位肝移植术后7 d,脾脏来源DCs培养体系的细胞具有DCs的形态学特征,并表达其表型OX62.PCR结果显示,受体脾脏来源DCs培养体系表达供体来源的SRY基因片段.结论 原位肝移植后,供体肝源性DCs或其前体在受体内迁移至脾脏,参与了受体微嵌合体的形成.     

白鲜皮的免疫药理学研究——Ⅰ.对细胞免疫和体液免疫的影响

对白鲜皮水提取物的免疫药理学特性进行了探讨,结果发现:对半抗原picryl chloride所致的接触性皮炎(PC-DTH)及颗粒抗原羊红细胞(SRBC)所致的足跖反应(SRBC-DTH),白鲜皮在各抗原攻击后给药有明显的抑制作用,但攻击前给药则未能抑制两DTH。白鲜皮还明显地抑制二甲苯所致的小鼠耳壳及鸡蛋清所致的小鼠足蹠炎症反应。此外,白鲜皮对于小鼠抗SRBC抗体的产生,包括对抗体产生细胞(PFC)数和血清溶血素水平均有明显的抑制作用。这些结果表明,白鲜皮对细胞免疫和体液免疫均有抑制作用,对DTH反应的作用表现为对DTH反应的效应相,其中包括炎症过程的抑制作用。     

雷公藤挥发油对小鼠免疫功能的影响

观察雷公藤挥发油对小鼠免疫功能的影响,发现给药1周后,其可减少脾脏有核细胞数,减少 PFC 和 RFC 数目,抑制脾细胞对 ConA 诱导 T 细胞增殖的反应性,减轻DTH。这说明雷公藤挥发油对小鼠体液免疫和细胞免疫均有明显的抑制作用。     

人参培养细胞多糖与人参多糖的免疫作用比较

人参培养细胞的多糖可明显增加小鼠脾重量,而对小鼠胸腺重量影响不大。能显著增强小鼠碳粒廓清速率,明显促进小鼠溶血素抗体的活性,提高正常小鼠血清IgG含量,对SRBC所致迟发型超敏反应有促进作用,而对小鼠的移植物抗宿主反应(GVHR)影响不大。与栽培人参多糖的作用无明显差异。