抗纤维蛋白和抗尿激酶双特异单克隆抗体的研制

利用分泌抗纤维蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经在８－氨鸟杂嘌呤内诱导突变，使其成为对ＨＡＴ敏感细胞株．以此突变株与用尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，经筛选获得一株分泌双特异单克隆抗体的杂交瘤细胞９Ｅｌｌ，在体外有明显的溶栓效果。经二年来检测证明，该细胞株是稳定的。     

E_4B_7D_5单克隆抗体对钩体粘附的影响——扫描电镜观察

作者采用黄疸出血群赖型017株钩体外膜免疫BALB/C小鼠,通过细胞融合等技术获得单克隆抗体(Mcab)E_4B_7D_5,亚类鉴定为IgG_1、凝集效价为1:25600,经被动免疫保护试验,证明对同型017株钩体具有免疫保护作用。为了进一步探讨其保护机制,作者用扫描电镜观察E_4B_7D_5McAb对钩     

抗纤维蛋白和抗尿激酶双特异单克隆抗体的研制

利用分泌抗纤维蛋白单克隆抗体的杂瘤细胞株，经在８－氨鸟杂嘌呤内诱导突变，使其成为以地ＨＡＴ敏感细胞株。以此突变株与用尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，经筛选获得一株分泌双特异单克隆抗体的杂交瘤细胞９Ｅ１１。在体外有明显的溶栓效果，经二年来检测证明，该细胞株是稳定的。     

抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建…

以亲和层析技术和纯化的肾综合征出血热病毒结构蛋白为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞，然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ间接法选出２株分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。     

一株A和B亚群禽白血病病毒特异性单克隆抗体的制备及其特性

目的:制备A和B亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)特异性单克隆抗体。方法:用ALV-A-SDAU09C1株的env-gp85基因的PCR产物构建重组表达性质粒pET32a-SDAU09C1-gp85,经IPTG诱导后,表达分子量为53 kD的ALV-A囊膜gp85蛋白与GST的融合蛋白,将表达产物免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,筛选杂交瘤细胞株。结果:获得了1株(A6D1株)能与A和B亚群ALV发生反应但不与J亚群ALV反应的杂交瘤细胞株。Western blot试验结果表明,单克隆抗体识别的A和B亚群ALV囊膜糖蛋白的分子量为53 kD。在IFA中,这株单克隆抗体可以与所试验的3株ALV-A和1株ALV-B毒株反应,而与4株ALV-J亚群的毒株不反应。结论:A6D1株单克隆抗体可以用于A和B亚群ALV感染的诊断和流行病学调查,弥补了目前只有J亚群ALV特异性单克隆抗体可用的不足。     

登革病毒非结构蛋白NS1群特异性单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备登革病毒NS1群特异性单克隆抗体,建立可检测登革病毒1～4型NS1抗原的ELISA检测法,为登革热的早期快速诊断奠定基础。方法应用毕赤酵母表达系统分泌表达登革病毒2型重组非结构蛋白NS1,以此为抗原免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经HAT选择培养、间接ELISA筛选和亚克隆,获得能稳定分泌登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用所获得的单克隆抗体建立可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结果从登革病毒2型NS1重组毕赤酵母（Pichia Pastoris-NS1）中获得了大量纯化的登革病毒重组NS1蛋白;经免疫小鼠、细胞融合、间接ELISA筛选及3次亚克隆后,最终获得2株能高效分泌抗登革病毒NS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D7B6B4和2D10E2F6,间接ELISA显示抗体效价高达1∶8000～1∶16000;ELISA及免疫荧光检测证实,其所分泌的抗体与1～4型登革病毒及其重组NS1蛋白均有特异性免疫反应,为登革病毒NS1群特异性单克隆抗体;两株单克隆抗体均为IgG2a亚类;初步建立了检测4个血清型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结论成功研制出两株能高效分泌抗登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。初步建立了可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA检测法。     

一株抗人BLys单克隆抗体的制备及其生物学功能研究

研究以稳定高表达BLys的基因转染细胞L-BLys为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,L-BLys细胞和天然表达BLys的HL60细胞为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和以有限稀释法反复克隆化培养。将获得的克隆4F7培养细胞注射入经致敏的小鼠体内,-抽取的腹水经Protein G亲和层析柱纯化。将纯化所得的抗体作用于经BLys分子刺激的扁桃体B细胞,3H-TdR检测细胞的增殖效率。结果获得1株持续、稳定分泌鼠抗人BLys单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该细胞株所分泌的抗体能阻断膜型和可溶性BLys分子对扁桃体B细胞的促增殖作用。对这株单克隆抗体生物学功能的研究表明,这株单抗能特异性识别人BLys分子及阻断膜型和可溶性BLys发挥生物学活性。     

抗前列腺特异性膜抗原膜外区多肽单克隆抗体的研制及初步应用

目的建立前列腺特异性膜抗原（PSMA）膜外区多肽杂交瘤细胞株，并对其分泌的PSMA单克隆抗体进行初步鉴定，为PSMA的功能研究和人源化抗体的制备奠定基础，以求进一步用于前列腺癌的诊断和治疗。方法使用人工合成多肽免疫BABL／c小鼠，采用PEG融合技术建立杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。通过免疫荧光法、酶联免疫吸附法及斑点金标法确定单克隆抗体的交叉反应性、亲和力及免疫球蛋白的类型和亚类。结果获得两株可稳定分泌PSMA单克隆抗体的杂交瘤细胞，4F4为IsG1类，1F1为IgC3类。两株单抗均能识别LNCap细胞表达的PSMA蛋白，与不表达PSMA的PC-3、SP2／0等细胞无交叉反应。杂交瘤细胞株1F1培养上清效价为1：40。腹水效价为1：6400；而杂交瘤细胞株4F4培养上清效价为1：80。腹水效价为1：8000。结论成功地制备出两株抗PSMA单克隆抗体，均具有良好的特异性和亲和力，为进一步建立免疫分析方法。进行PSMA相关研究奠定了基础。     

猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的：建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌（APP-1）脂多糖（LPS）的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的分型诊断技术奠定基础。方法：腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果：获得3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价1∶16000～1∶32000。结论：已成功建立3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其产生的单克隆抗体与呼吸道其它常见致病菌及APP-3,5,7,9,型无交叉反应。     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个月稳定传代,冻存于液氮中,复苏后其分泌抗体的水平未见下降。     

沙门氏菌属特异性单克隆抗体的制备及初步应用

本文报道提取鼠伤寒和乙型副伤寒沙门氏菌鞭毛聚合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾脏和Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,从中筛选出八株分泌抗沙门氏菌属单克隆抗体杂交瘤。其中的3A_3-1杂交瘤细胞株分泌的抗体同国内79个血清型共18l株常见沙门氏菌株进行酶联反应,检出175株,复盖率达96.7％。其中A～F群共110株沙门氏菌,检出108株,复盖率达98.2％。     

缺失PRD的人FOXP3单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗脯氨酸富含区缺失的人FOXP3(△PRD-hFOXP3)的单克隆抗体(mAb),为进一步研究人FOXP3各片段功能奠定基础。方法:以纯化的△PRD-hFOXP3重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,经筛选及克隆化建立2株分泌抗△PRD-hFOXP3的mAb杂交瘤细胞株;利用核型分析、间接ELISA及Western blot分别鉴定了杂交瘤的细胞核型、抗体的效价与特异性。结果:筛选到2株可稳定分泌抗△PRD-hFOXP3的mAb的细胞株,分别命名为1A2和3A11;2株抗体均为IgG1,腹水经ELISA方法测定效价均可达1∶105;Western blot显示这2株杂交瘤分泌的mAb均可与△PRD-hFOXP3蛋白特异性地结合。结论:成功获得2株能稳定分泌特异性抗△PRD-hFOXP3的mAb的杂交瘤细胞株,可用于人FOXP3的进一步研究及相关试剂的研发等。     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞，在PEG1000作用下，与小鼠骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag 14融合，共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体，并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个片稳定传代，冻存于液氮中．复苏后其分泌抗体的水平末见下降。     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备

作者用提纯的解脲脲原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得3株稳定分泌抗解脲脲原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。用ELISA法测定该抗体腹水效价为1:64000～1:2048000,1F9、2B2抗体的Ig类型为IgG1,5H1为IgG2b。建立的3株能稳定分泌抗解脲脲原体的McAb杂交瘤细胞林,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。     

抗人红细胞膜中3-磷酸甘油醛脱氢酶杂交瘤细胞株的建立和鉴定

应用正常人红细胞膜提纯的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)免疫 BALB/c 小鼠的脾细胞与 SP2/O 小鼠骨髓瘤细胞在50%(W/V)PEG 1,000作用下融合。经三次克隆后,获得一株分泌抗正常人红细胞膜中 GAPD 杂交瘤细胞株(简称9C_6)。经被动血凝实验,生物化学酶抑制试验以及酶联免疫电泳转移试验证明此杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)属小鼠 IgM,对正常人红细胞膜 GAPD 是特异的。此 McAb 可用于 GAPD 的纯化、人红细胞膜中 GAPD 活性的测定以及对阵发性夜间性血红蛋白尿症病因的探讨。     

抗小鼠胰腺癌单克隆抗体的研制和初步鉴定

应用杂交瘤技术,直接取胰腺癌荷瘤昆明种小鼠脾细胞与接种于活体内的Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。获得二株分泌Igg2a亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2B_6、B_(10)经过体外连续五个月的培养,仍能保持稳定的抗体分泌功能。所分泌抗体腹水效价分别为1.3×10~5,4.5×10~6。经间接免疫荧光法和免疫酶组织间接染色法分析,对小鼠胰腺癌组     

前列腺特异性抗原单克隆抗体的研制及其初步鉴定

本研究利用从正常男性精液中提取纯化的前列腺特异性抗原免疫小鼠，建立了２株可持续稳定分泌抗前列腺特异性抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为Ｐ１３和Ｐ２６。此２株杂交瘤细胞在体外连续传代培养半以上，冻存后复苏仍可保持抗体分泌能力，利用所制备的单克隆抗体对良性前列腺肥大，前列腺癌，乳腺癌，胃癌，食道癌和卵巢癌病人的病理切片标本进行免疫线化测定，证明其有一定的前列腺特异性。     

一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究

目的：鼠抗人4—1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法：以高表达人4—1BBL分子的基因转染细胞L929／4—1BBL为免疫原，常规免疫BALB／c小鼠，采用B淋巴瘤杂交瘤技术进行细胞融合，经流式细胞术分析和多次克隆化培养，筛选特异性杂交瘤细胞株；采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法对单抗的生物学特性进行鉴定，并采用体外细胞计数和ELISA检测分析单抗对单核细胞的作用。结果：获得1株持续、稳定分泌鼠抗人4-1BBL单抗的杂交瘤细胞株，命名为3E7。该单抗能识别人白血病细胞株和单核细胞表面的4-1BBL分子。对单抗生物学功能的研究结果表明，该单抗能有效地促进外周血单核细胞体外生长，并促进IL-6和TNF-α的分泌。结论：成功地获得了一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体3E7，该单抗能特异地识别人4-1BBL分子，并有效地通过激发4-1BBL逆向信号通路促进单核细胞的体外生长及细胞因子的分泌。     

鼠抗人Syndecan-1分子功能性单克隆抗体的制备及其生物学特性

制备鼠抗人Syndecan-1(CD138)分子的功能性单克隆抗体,研究其对高表达CD138分子细胞的生物学效应。以人多发性骨髓瘤(MM)细胞株8226作为免疫原,8226和B淋巴瘤细胞株Daudi作为检测细胞株,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的IgG亚类,采用间接免疫荧光标记法及竞争抑制实验分析单抗的亲和力和特异性,以高表达Syndecan-1的人多发性骨髓瘤细胞株XG-1为靶细胞,分析单抗对其生长的影响。结果:成功地获得1株鼠抗人Syndecan-1分子的功能性单克隆抗体杂交瘤细胞株(克隆4B3),经体外长期传代培养,液氮冻存半年以上反复复苏良好,分泌特异性抗体性能稳定。4B3分泌的单克隆抗体识别位点与单抗BB4识别位点相同或相近,重链为IgG1亚类,轻链为κ型,纯化后腹水中单克隆抗体蛋白的得率为2.9 mg/ml,加入4B3单克隆抗体后的XG-1细胞体外生长受到抑制,并可用于神经胶质瘤细胞的免疫组织化学检测。由此表明,4B3为功能性抗人Syndecan-1单克隆抗体,具有一定的基础研究和临床应用前景,这对进一步研究Syndecan-1分子的生物学特性也具有重要的价值。