新福菌素对人白血病细胞株K562的凋亡诱导作用

 目的 研究新福菌素对人白血病细胞株K562的体外抑瘤效应及其作用机制。方法应用MTT比色法观察新福菌素对细胞的生长抑制作用;显微镜观察细胞的生长变化和结构改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡和Bel-2蛋白表达情况。结果 新福菌素对人白血病细胞株K562有较强的体外增殖抑制作用。新福菌素能诱导K562细胞凋亡,同时伴随有Bel-2蛋白表达下调。结论 新福菌素对白血病细胞株K562有较强的抗瘤效应,其可能与Bel-2蛋白下调引起的细胞凋亡有关。     

当归多糖对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：探讨中药当归的主要有效成分当归多糖（APS）在白血病分化疗法中的应用价值。方法：应用细胞计数、流式细胞术、形态学、细胞化学、细胞分化免疫表型等现代实验血液学检测技术，研究APS对人红白血病细胞株K562细胞的增殖与分化的作用。结果：APS对K562细胞有明显的增殖抑制作用（P＜0．05）；经APS诱导后K562细胞向红系、粒单系细胞方向分化增加，联苯胺染色、糖原染色和过氧化物酶染色阳性率、细胞表面分化抗原CD15表达明显增强（P＜0．05）；APS诱导后K562细胞表达C－MYC明显降低（P＜0．05）。结论：APS体外可抑制K562细胞增殖，并诱导其向红系、粒系细胞方向分化，是较有开发和应用前景的天然诱导剂。     

苦参碱抑制慢性粒细胞白血病K562细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的研究苦参碱在体外对人慢性粒细胞白血病(慢粒)K562细胞的生长抑制作用并探讨可能的分子机制。方法光学显微镜下观察苦参碱作用前后K562细胞的形态学改变;联苯胺染色观测K562细胞的红系分化趋势;MTT法检测苦参碱对K562细胞的增殖抑制效应;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对K562细胞的周期改变及早期凋亡作用。结果与阴性对照组相比,0.05,0.1和0.2 g/L苦参碱作用下的K562细胞均出现红系分化趋势,其中0.05 g/L的分化趋势最明显;MTT结果显示0.2,0.5及1.0 g/L苦参碱对K562细胞的生长抑制率分别为25.88%,46.96%和63.04%(P均<0.01),其中效作用浓度(IC50)为0.6 g/L;苦参碱可使K562细胞周期阻滞于S期,阻止细胞的有丝分裂,同时可诱导K562细胞凋亡:0.05,0.1和0.2 g/L苦参碱对K562细胞的早期凋亡率分别是11.60%,69.81%和44.12%,明显高于对照细胞的自发凋亡率(1.49%)(P均<0.01)。结论苦参碱对体外培养的人慢粒K562细胞具有显著抑制增殖作用,且可诱导细胞向红系分化和早期凋亡。     

蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株抗肿瘤作用的研究

目的研究蝙蝠葛活性成分体外对人白血病K562细胞株的抑制增殖和诱导凋亡作用。方法应用MTT法检测蝙蝠葛活性成分对体外培养的人白血病K562细胞株的抑制增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜对细胞进行形态学观察;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡关键效应酶Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的表达情况。结果(1)MTT比色法结果表明,蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性(P0.01);(2)倒置显微镜观察:蝙蝠葛活性成分20μg/ml作用后早期细胞出现凋亡形态学变化:细胞膜鼓泡、凋亡小体形成等;作用晚期细胞发生膜破裂坏死;(3)免疫细胞化学结果表明:蝙蝠葛活性成分作用后加药组Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3表达增加,与对照组相比较均有显著差异(P0.01)。结论蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡作用。     

小剂量硒化壳聚糖与全反式维甲酸协同诱导NB4细胞分化和凋亡

目的 研究小剂量硒化壳聚糖(25 mg/L)与全反式维甲酸(ATRA 0.1 μmol/L)联合应用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化及凋亡的影响.方法 采用DNA片段化凝胶电泳法检测细胞凋亡;NBT还原法检测细胞分化;流式细胞法检测分化抗原CD11b.结果 25 mg/L硒化壳聚糖没有诱导NB4细胞分化和凋亡的能力,但与0.1 μmoL/L ATRA联合使用同单独使用0.1 μmol/L ATRA相比,CD11b表达阳性率进一步增加,NBT还原能力进一步增强,两药合用DNA电泳呈现出典型的梯带.结论 小剂量硒化壳聚糖与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化.     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡干预作用的初步研究

目的:探讨益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡作用的影响。方法:采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562/A02白血病细胞,采用MTT比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测益气养阴解毒含药血清诱导K562/A02细胞凋亡的影响。结果:不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。高、中、低剂量的益气养阴解毒方含药血清可诱导K562/A02细胞的凋亡,其凋亡作用以中、高剂量中药血清组最强。结论:益气养阴解毒方含药血清具有抑制K562/A02白血病细胞增殖作用,可诱导K562/A02白血病细胞明显凋亡,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

小檗碱对K562细胞分化及凋亡的影响

目的:研究小檗碱对K562细胞是否具有抑制增殖、促进分化、诱导凋亡的作用,为临床应用黄连治疗慢性粒细胞白血病提供理论依据.方法:MTT比色法、克隆形成实验检测小檗碱对K562细胞增殖的影响;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态改变;DNA琼脂糖凝胶电泳检测晚期细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期分布,细胞表面分化抗原表型检测分析细胞分化.结果:小檗碱对K562细胞的生长有抑制作用;小檗碱与Ara-C联用存在一定的协同效应;小檗碱处理K562细胞48 h后能明显促进其向红系、粒系、巨核系分化,随着作用时间的延长小檗碱诱导K562细胞发生凋亡的百分比逐渐增加.结论:小檗碱能有效地抑制K562细胞的增殖,其作用可能是通过诱导K562细胞发生G0/G1期和(或)G2期阻滞并进一步诱导其凋亡和分化实现的.     

复方扶正中药含药血清对急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞来源树突状细胞影响

目的:研究复方扶正中药对急性髓细胞白血病完全缓解期(AML-CR)患者骨髓单个核细胞(BMNC)来源树突状细胞(DC)的影响。方法:分离培养AML-CR患者的BMNC,用不同浓度复方扶正中药含药血清与之进行体外培养,倒置显微镜下观察诱导转化的DC形态学特征,流式细胞术检测DC表面分子CD86、CD-1a、HLA-DR的表达。以诱导转化的DC分别与异体T细胞、自体T细胞共同培养,以激发T细胞,MTT法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人白血病细胞株K562的杀伤作用。结果:复方扶正中药含药血清与AML-CR患者BMNC培养能促进BMNC分化为形态特征典型的DC,高表达成熟DC的特异性标记(CD86、CD-1a和HLA-DR),并激发T细胞杀伤K562细胞。结论:复方扶正中药对AML-CR患者BMNC来源DC具有明显的促进作用。     

辣椒素诱导白血病和肝癌细胞凋亡的比较研究

目的:比较合成辣椒素(N-Vanillylnonanamide)诱导白血病细胞K562及其多药耐药K562/ADM、肝癌HepG2细胞凋亡的作用.方法:以K562细胞、K562/ADM细胞和HepG2细胞为靶细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,流式细胞法测定细胞周期和Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡.结果:MTT示合成辣椒素可抑制白血病细胞和HepG2细胞的增殖,根据同时期半数抑制浓度(IC50)示HepG2细胞最敏感,K562细胞较K562/ADM细胞敏感.合成辣椒素可阻滞细胞周期.合成辣椒素诱导24小时后Annexin V/PI双染色显示白血病细胞和肝癌细胞凋亡率升高;白血病敏感细胞株和耐药细胞株的对舍成辣椒素敏感性相似.结论:合成辣椒素可抑制白血病和肝癌细胞的增殖并诱导其凋亡;辣椒素对药物敏感和耐受的白血病细胞的作用相似.     

艾迪注射液对K562／ADM细胞体外生长和增殖周期的实验研究

目的：研究复方中药艾迪注射液对白血病耐药细胞株K562／ADM细胞体外生长和增殖周期的影响。方法：采用细胞体外培养技术，台盼兰染色计数法观察活细胞数量变化并绘制细胞生长曲线，细胞集落形成实验，MTT法检测生长抑制率，光学显微镜、透射电镜观察细胞形态变化．流式细胞仪测定细胞增殖周期。结果：艾迪注射液对KS62／ADM细胞生长和增殖活力均有明显的抑制作用，作用随艾迪注射液剂量和作用时间的增加而增加，呈量效、时效关系，与对照组比较，P〈0．05。流式细胞分析显示它能抑制细胞周期，减少G1期的比例，增加S期和G2期的比例，并能明显诱导细胞凋亡，尤以中、高剂量组和联合用药组为明显，在光镜、透射电镜下观察到较为典型的细胞凋亡形态。结论：艾迪注射液有明显的抗肿瘤活性，能抑制K562／ADM细胞的生长和增殖，调控细胞增殖周期并诱导凋亡。     

参麦注射液对慢性再生障碍性贫血患者血清肿瘤坏死因子及骨髓CD34+细胞凋亡的影响

目的:探讨参麦注射液治疗慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)的疗效及其作用机制。方法:将65例CAA患者随机分为治疗组和对照组,治疗组采用参麦注射液配合西药常规治疗,对照组单用西药治疗,治疗后进行疗效评价,并分别于治疗前后检测患者血清肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)水平,以及采用免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化骨髓CD₃₄⁺细胞,用DNA末端原位标记(TUNEL)技术分析骨髓CD₃₄⁺细胞原位凋亡状况。结果:治疗组总有效率为63.6%,对照组总有效率为40.6%,治疗组疗效明显优于对照组(P<0.01);治疗前,CAA患者血清TNF-α浓度、骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡率均明显高于健康对照组(P<0.01),治疗后,治疗组血清TNF-α浓度明显降低(P<0.01),骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡率减低(P<0.05),与对照组相比均有显著差异(P<0.05)。结论:参麦注射液治疗CAA疗效确切,其机制可能为降低CAA患者血清TNE-α浓度,减少骨髓CD₃₄⁺细胞凋亡。     

铜绿假单胞菌注射液对K562细胞株处理后淋巴细胞凋亡及免疫功能的影响

 目的观察铜绿假单胞菌注射液对肿瘤微环境中正常人外周血淋巴细胞的凋亡的抑制作用及免疫增强作用。方法分离纯化正常人外周血淋巴细胞并与K562细胞株上清共培养,与不同浓度的铜绿假单胞菌注射液作用72h后,用酶标仪或流式细胞仪进行各项指标检测,观察铜绿假单胞菌注射液对人外周单个核细胞(PMBC)增殖率、凋亡率、坏死率、凋亡相关蛋白及细胞表面蛋白表达的影响。结果铜绿假单胞菌注射液能增强K562细胞株上清作用后淋巴细胞增殖,降低细胞凋亡率、坏死率,降低促凋亡蛋白Fas的表达,增加抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,增加CD25、CD69的表达,对CD4⁺/CD8⁺无显著影响。结论铜绿假单胞菌注射液可以抑制肿瘤微环境中正常人外周血淋巴细胞的凋亡、坏死,并能增强淋巴细胞的免疫功能。     

红花注射液对HepG-2细胞Bcl-2和Survivin表达的影响

目的: 研究红花注射液在体外对HepG-2细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Survivin基因转录和蛋白表达的影响,探讨红花注射液诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制。 方法: 采用不同剂量的红花注射液(0,50,100,150,200,250 g·L^-1)体外作用于HepG-2细胞,利用MTT法观察红花注射液对HepG-2细胞增殖的抑制作用;以流式细胞术观察细胞凋亡率的变化;通过实时荧光定量 PCR 技术 (real time-PCR) 以及蛋白免疫印迹 (Western blotting) 法检测细胞凋亡相关因子 Bcl-2和Survivin mRNA和蛋白的表达情况。 结果: 红花注射液对体外培养的人肝癌HepG-2细胞的增殖具有抑制作用(P<0.01),且具有剂量、时间相关性;细胞凋亡率随着红花注射液浓度的增加而逐步增高,细胞凋亡相关因子Bcl-2,Survivin的 mRNA 和蛋白表达均下调。 结论: 红花注射液能够抑制HepG-2人肝癌细胞增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,可在翻译和转录水平下调Bcl-2,Survivin的表达,这可能是红花注射液诱导HepG-2细胞凋亡的主要机制之一。     

去甲斑蝥素诱导肿瘤干细胞凋亡作用研究

目的探究去甲斑蝥素(NCTD)对肿瘤干细胞促凋亡作用。方法分别以UMUC-3膀胱癌和Hep G2肝癌细胞为研究对象,通过无血清、低吸附、单克隆的方法筛选肿瘤干细胞(CSC),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CSC干性标志物表达变化,MTS法检测NCTD及紫杉醇(PTX)对CSC的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 2种细胞经筛选获得成球生长细胞克隆,其干性基因NANOG、OCT4、ABCG2、CD133、CD34表达明显升高,释放入含血清培养基后干性基因表达下调。经筛选所得的CSC对PTX高度耐药,但对NCTD耐药性低。NCTD可诱导CSC凋亡,但对干性基因表达没有显著影响。结论 NCTD诱导凋亡杀伤CSC,但对CSC分化没有显著影响。     

地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠胸腺细胞增殖 …

目的：研究中药复方地甘口服液对免疫介导再生生贫血小鼠模型胸腺淋巴细胞增殖周期的影响。方法：选用Ｂａｌｂ／ｃ小鼠为实验对象,在接受亚致死剂量射线照射后,立即注射ＤＢＡ／２小鼠胸腺、淋巴结混合细胞,形成免疫介导再障小鼠模型,分组处理后,摘取胸腺制成单细胞悬液,然后采用流氏细胞仪（ＦＡＣＳ）进行分析。结果：免疫介导再障小鼠胸腺细胞绝大部分停留在Ｇ０／Ｇ１期,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期细胞显著减少,与正常对照组比较     

埃克特注射液体内外抗肝癌作用研究

目的:观察埃克特注射液对人肝癌细胞SMMC-7721细胞及小鼠移植性肿瘤H22的抑制作用。方法:用MTT法、细胞生长曲线实验研究不同浓度的埃克特注射液作用48h对SMMC-7721细胞的生长抑制作用,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,以了解该药物对肝癌细胞的体外增殖作用;同时建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型研究埃克特注射液对肝癌的体内抑制作用。结果:埃克特注射液对SMMC-7721具有抑制作用,呈明显的量效关系,IC50为2.325mg/L;生长曲线提示埃克特注射液对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;Hoechst 33258染色后,给药组出现明显的细胞凋亡形态学变化;腹腔注射0.5、1、2mg/kg埃克特注射液对小鼠移植性肿瘤H22的抑制率分别为34.37%、42.36%、57.99%,呈剂量依赖性。结论:埃克特注射液对人肝癌细胞SMMC-7721细胞具有明显体外抗增殖作用,对小鼠移植性肿瘤H22有一定的抑制作用。     

承气生血方抗肿瘤及调节细胞免疫作用的研究

目的:研究承气生血方抗肿瘤及调节细胞免疫作用,分析其对敏感肿瘤凋亡率和T淋巴细胞亚群的影响。方法:选用S180腹水型和Lewis肺癌实体型荷瘤小鼠筛选敏感瘤株。55只敏感瘤株负荷小鼠进行抗肿瘤治疗,随机分为5组:模型组、环磷酰胺组(30 mg.kg^-1)和承气生血方2.4,1.2,0.6 g.kg^-13个剂量组。治疗后以流式细胞术分析小鼠敏感肿瘤外周血T淋巴细胞亚群百分比和肿瘤细胞凋亡率的变化。结果:Lewis肺癌实体型肿瘤为承气生血方敏感肿瘤。PI染色法分析,承气生血方高、中剂量组能明显诱导肿瘤细胞凋亡,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。AnnexinⅤ与PI双染法分析,各给药组均出现肿瘤细胞早期凋亡(P<0.01)。T淋巴细胞亚群结果分析,模型组CD3,CD4和CD4/CD8与正常组比较明显降低(P<0.01),CD8变化不明显;给药组CD3,CD4和CD8比正常组明显降低(P<0.01),CD4/CD8变化不明显。结论:承气生血方可选择性抑制小鼠Lewis肺癌实体型肿瘤生长,并具有抗转移作用,其抗肿瘤作用可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而实现。承气生血方通过提高CD4/CD8改善小鼠细胞免疫功能。     

地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠胸腺细胞增殖周期的影响

目的 :研究中药复方地甘口服液对免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型胸腺淋巴细胞增殖周期的影响。方法 :选用Balb/c小鼠为实验对象 ,在接受亚致死剂量射线照射后 ,立即注射DBA/2小鼠胸腺、淋巴结混合细胞 ,形成免疫介导再障小鼠模型 ,分组处理后 ,摘取胸腺制成单细胞悬液 ,然后采用流氏细胞仪(FACS)进行分析。结果 :免疫介导再障小鼠胸腺细胞绝大部分停留在G0 /G1期 ,S期和G2 +M期细胞显著减少 ,与正常对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1)。两种中药复方均能促进小鼠胸腺细胞的分化增殖 ,降低细胞的凋亡率 ,但地甘口服液的效果明显优于四物口服液 (P <0 0 5)。结论 :地甘口服液可明显促进免疫介导再障小鼠的胸腺淋巴细胞分化增殖 ,延缓免疫细胞的衰老凋亡 ,效果优于四物口服液组。     

黄芪针和药饼灸对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的　观察针灸对免疫功能的影响。方法　将C2 6小鼠结肠癌细胞株移植接种建立实验模型的 35只荷瘤小鼠 ,随机分为 5组 ,生理盐水对照组、5 FU组、黄芪针组、药饼灸组、药饼灸 +黄芪针组。由接种瘤细胞第 2日开始进行各组处理。治疗结束后 ,获取小鼠脾脏单个细胞 ,采用流式细胞 (FACS)测定脾淋巴细胞中T细胞亚群、自然杀伤细胞 (NK)及CTL杀伤功能。结果　药饼灸组、黄芪针组、药饼灸 +黄芪针组CD3、CD4、CD4 CD8比率、NK细胞、CTL杀伤活性显著高于 5 FU组 ,P <0 .0 1。结论　药饼灸、黄芪注射液对单用 5 FU治疗所致免疫力低下的荷瘤小鼠的免疫功能具有正向调节作用     

参芪扶正注射液对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究参芪扶正注射液对基底细胞样(basal-like型)乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖和凋亡的影响,探讨参芪扶正注射液对三阴性乳腺癌的治疗作用机制。方法:体外培养人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞,将其分为参芪扶正注射液组和空白组。采用噻唑蓝(MTT)比色法分别于24,48,72 h检测参芪扶正注射液对人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖的影响。采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期分布和凋亡情况。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blot)检测参芪扶正注射液对MDA-MB~(-2)31细胞p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)表达的影响。结果:参芪扶正注射液可抑制MDA-MB~(-2)31细胞增殖,高浓度者抑制作用强,即呈现浓度依赖性,体外培养48 h时抑制作用最显著。参芪扶正注射液将MDA-MB~(-2)31细胞阻滞于细胞周期的S期,进而诱导MDA-MB~(-2)31细胞凋亡。Real-time PCR和Western blot发现参芪扶正注射液可上调MDA-MB~(-2)31细胞PUMA蛋白和基因表达。结论:参芪扶正注射液可显著抑制人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖,导致细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调PUMA基因有关。