苦参碱对前列腺癌PC-3M细胞生长抑制和凋亡的影响

目的:探讨苦参碱治疗前列腺癌的可行性及机制。方法:用不同药物浓度苦参碱诱导PC-3M细胞不同时间后,在相差倒置显微镜观察细胞形态;用MTT法测细胞的增殖抑制情况;用流式细胞仪(FCM)进行细胞凋亡率检测;RT-PCR法检测PC-3M细胞内bcl-2、bax基因表达水平。结果:用苦参碱干预后随着药物浓度增加PC-3M细胞株生长明显受抑制;在FCM上可见凋亡率逐渐增加;PC-3M细胞中bcl-2 mRNA表达水平逐渐下调,bax mRNA表达水平逐渐上调,且呈时间-浓度依赖性。结论:苦参碱体外能有效抑制前列腺癌细胞株生长,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调bcl-2表达及上调bax水平有关。     

苦参碱诱导人肺鳞癌SK-MES-1细胞凋亡作用及其可能机制

目的：探讨苦参碱（MT）诱导人肺鳞癌细胞株SK-MES-1凋亡作用及其抗肿瘤机制。方法：培养人肺鳞癌细胞株SK-MES-1,用不同浓度的MT处理SK-MES-1细胞,用MTT法检测MT对SK-MES-1细胞生长增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;流式细胞术检测细胞相关凋亡蛋白Bcl-2、bax、caspase-3表达。结果：MT抑制SK-MES-1细胞增殖和诱导SK-MES-1细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性。与对照组相比,苦参碱处理后的SK-MES-1细胞G0/G1期百分比明显增高,S期细胞比例下降。Bax和capase-3表达增强,Bcl-2表达下调。结论：MT在体外能抑制人肺鳞癌细胞株SK-MES-1增殖,诱导细胞凋亡,其诱导作用具有明显的量效和时效关系,可能与抑制Bcl-2活性、激活bax和capase-3有关。     

乳铁蛋白抗菌肽抑制胃癌细胞增殖诱导其凋亡的体外研究

目的 探讨乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)对人胃癌细胞株MGC803细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 用CCK-8法测定不同浓度LfcinB对胃癌细胞株MGC803 24、48和72 h细胞增殖影响.用流式细胞术检测胃癌MGC803细胞凋亡的变化.用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的变化情况.用Western blot检测MGC803细胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果 LfcinB对胃癌细胞株MGC803的增殖具有抑制作用,促进胃癌细胞株MGC803细胞凋亡,并且具有时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);LfcinB能显著抑制胃癌细胞株MGC803 bcl-2 mRNA表达,同时促进bax和caspase-3 mRNA表达,并且随着LfcinB浓度的增高相关基因下降或上升越明显(P<0.05,P<0.01);Western blot结果也显示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3和Bax蛋白表达,其变化规律与mRNA相同(P<0.05,P<0.01).结论 LfcinB通过调控相关基因,抑制胃癌细胞MGC803增殖,并诱导其细胞凋亡.     

全反式维甲酸对前列腺癌PC-3细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖的抑制作用及其Bel-2和Bax表达的影响。方法以不同浓度的ATRA处理PC-3细胞，甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖抑制情况；流式细胞仪和免疫细胞化学法检测PC-3细胞Bax和Bcl-2的表达。结果ATRA浓度为（10^-6～10^-4）mol／L时，可明显抑制PC-3细胞的增殖（P〈0．01），并具有时间-剂量依赖性。ATRA处理后PC-3细胞Bcl-2表达下调，Bax表达上调。随ATRA浓度增加，Bcl-2／Bax的比值不同程度地下降（P〈0．05）。结论ATRA对PC-3细胞具有明显的增殖抑制作用，并且与ATRA下调Bcl-2表达、上调Bax表达有关。     

靶向survivin的siRNA诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 采用RNA干扰技术（siRNA）阻断survivin基因的表达,观察其抑制胰腺癌细胞增殖及诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。方法 构建靶向survivin的siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine^TM2000转染胰腺癌细胞PC-2,采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后PC-2细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对PC-2细胞增殖的抑制作用：采用流式细胞术检测其诱导PC-2细胞凋亡的作用。结果 靶向survivin的序列特异性的siRNA可以高效地抑制PC-2细胞survivin基因表达,在mRNA水平其表达抑制率为81．25％,在蛋白质水平其表达抑制率为74．24％。转染靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以显著抑制PC-2细胞的增殖,细胞接种24、48h后其增殖抑制率分别为28．00％和33.38％：转染后24、48h可以诱导8．46％、7．53％的细胞凋亡。结论 所构建的靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以有效地阻断PC-2细胞survivin基因表达。阻断survivin基因表达可以显著地抑制PC-2细胞的增殖并在一定程度上诱导其凋亡,靶向survivin的siRNA在胰腺癌的基因治疗中具有一定的价值。     

TRAIL诱导结肠癌SW480细胞的凋亡

目的探讨TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡的影响。方法实验分rmhTRAIL处理组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果 TRAIL能明显呈浓度依赖性地抑制结肠癌SW480细胞增殖（P〈0.05）,SW480细胞经rmhTRAIL处理后,流式细胞术分析显示其凋亡率明显上升（P〈0.01）,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况,显示Bcl-2蛋白表达明显下降,而Bax蛋白的表达明显升高（P〈0.05）。结论 TRAIL可以诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

苦参碱对乳腺癌细胞杀伤作用的体外实验研究

目的 研究苦参碱(matrine)对体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及相关机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的苦参碱对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的苦参碱作用于MCF-7细胞后细胞周期分布、凋亡率及Bax,Bcl-2蛋白的表达水平.结果 苦参碱对MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05),并呈现时间和剂量依赖性;细胞周期被阻滞于G0/G1期;苦参碱能够诱导细胞凋亡,并且上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达.结论 苦参碱可显著抑制MCF-7细胞的增殖,且抑制作用呈剂量和时间依赖性.苦参碱对MCF-7细胞的增殖抑制作用可能与其诱导细胞周期阻滞及凋亡有关,诱导凋亡可能与其上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

苦参碱诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察苦参碱抑制人肺腺癌细胞A549的增殖作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Bax及caspase-3蛋白表达水平.结果:苦参碱对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖关系;电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;细胞周期分析显示细胞增殖发生S/G2期阻滞;苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01);而显著升高Bax蛋白表达水平及caspase-3活性.结论:苦参碱可显著抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达水平改变线粒体膜通透性有关.     

白毛藤诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡作用及其机制研究

目的研究白毛藤水提液抑制BGC-823细胞增殖及诱导其细胞凋亡情况及其机制。方法不同浓度白毛藤水提液作用于BGC-823细胞,荧光显微镜观察BGC-823细胞凋亡情况,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果白毛藤水提液具有抑制BGC-823细胞增殖活性,能诱导BGC-823细胞凋亡,上调Fas基因、降低Bcl-2基因mRNA的表达,实验组与对照组比较有显著性差异（P〈0.01）。结论白毛藤具有抑制胃癌细胞增殖活性,能促进BGC-823细胞凋亡,其机制可能与调控Fas基因、Bcl-2基因表达有关。     

白藜芦醇诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的探讨白藜芦醇（resveratroi，Res）诱导人前列腺癌细胞系PC-3凋亡及其机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、软琼脂集落生长试验和流式细胞术测定Res对PC-3的增殖抑制、集落生长抑制、周期阻滞和诱导凋亡作用，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测对凋亡相关基因bcl-2和bax表达的影响。结果Res具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G0／G1期阻滞和诱导凋亡作用，作用72hIC50为0．39g／L，Res0．1g／L作用2天对PC-3细胞集落生长抑制率为88．9％，Res0．5g／L作用2天G0／G1期细胞比例从42．30％增高至75．20％。Res可以下调beb2基因／蛋白，上调bax的表达。结论Res可能通过抑制PC-3细胞的集落生长、增殖抑制、G0／G1期阻滞、下调bcl-2基因，上调bax基因表达等作用机制诱导前列腺癌细胞凋亡。     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞凋亡及Bcl-2/bax基因mRNA表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响及对凋亡相关基因的作用。方法培养人宫颈癌Hela细胞,用不同浓度Rg3进行干预,用Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪方法定量检测细胞的凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2/bax表达。结果 Rg3对Hela细胞增殖的抑制率随作用时间的延长和药物浓度的增加而增加;Rg3作用后Hela细胞出现了典型的凋亡形态学变化,可见凋亡小体;不同浓度的Rg3处理细胞48 h后,流式细胞术(FCM)显示细胞的凋亡呈剂量依赖性;同时细胞被阻断在G2/M期,细胞周期发生明显改变;Rg3作用后的Hela细胞的凋亡相关基因Bcl-2表达降低,bax基因表达升高。结论 Rg3能抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,且Rg3诱导Hela细胞凋亡是通过下调Bc1-2表达和上调bax表达,而达到抗肿瘤的作用。     

苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子和低氧诱导因子1α表达的影响

目的研究不同浓度苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞株MRC-5的增殖及结缔组织生长因子(CTGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法采用MRC-5常规体外培养传代,细胞培养至80%融合时,将细胞分组,分别在常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)及低氧(1%O2,94%N2,5%CO2)下采用不同浓度苦参碱(终浓度0～3.2mmol/L)干预24h。按培养条件不同分为8组:常氧组(N0组)、常氧+苦参碱0.2mmol/L组(N0.2组)、常氧+苦参碱0.4mmol/L组(N0.4组)、常氧+苦参碱0.8mmol/L组(N0.8组)、低氧组(H0组)、低氧+苦参碱0.2mmol/L组(H0.2组)、低氧+苦参碱0.4mmol/L组(H0.4组)和低氧+苦参碱0.8mmol/L组(H0.8组)。采用四氮甲基唑蓝比色法(MTT法)检测细胞活性,采用Westernblot法检测细胞CTGF、HIF-1α蛋白表达情况。结果低氧对各组细胞增殖有促进作用(P0.05);苦参碱对常氧及低氧下细胞增殖有抑制作用(P0.05),具有浓度依赖性。CTGF、HIF-1α在常氧下有低水平表达,低氧下表达明显增强(P0.01);苦参碱对常氧及低氧下CTGF、HIF-1α的表达均有抑制作用(P0.05)。结论苦参碱对常氧及低氧下培养的MRC-5细胞增殖有抑制作用,对细胞CTGF和HIF-1α表达有抑制作用,且具有一定浓度依赖性。     

蟾蜍灵对EAhy926细胞增殖、凋亡及Caspase3,Bcl-2表达的影响

[目的]探讨蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926的增殖抑制作用及其机制.[方法]体外培养血管内皮细胞EAhy926,用不同浓度蟾蜍灵进行干预.通过四甲基偶氮唑盐(MTI)法检测细胞增殖抑制率;用倒置光显微镜观察细胞形态变化;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化;以流式细胞术检测细胞凋亡的比率;应用半定量逆转录PCR检测EAhy926细胞中Caspase3和Bcl-2的mRNA表达.[结果]蟾蜍灵对EAhy926细胞生长具有抑制作用;且在0.0625-1μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性;荧光显微镜下可见0.1μmol/L的蟾蜍灵作用24 h可诱导EAhy926细胞凋亡,作用48h可引起细胞部分坏死;流式细胞术检测出典型的“凋亡峰”,凋亡率8.2％～36.5％,且呈时间依赖性.半定量RT-PCR显示Caspase3 mRNA表达较对照组明显增强,Bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱,且二者均呈剂量依赖性.[结论]蟾蜍灵抑制EAhy926细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase3和下调Bcl-2基因表达有关.     

MST1基因在肾癌中的表达及对细胞凋亡影响的研究

目的探讨Mst1基因与肾癌的相关性及其表达增高对肾癌细胞凋亡、增殖能力的影响。方法荧光定量PCR检测47例肾癌及相应的癌旁正常组织中Mst1基因的表达;真核表达载体pcDNA3.1-Mst1转染769-P细胞;western检测转染后Mst1基因的表达;MTT法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 Mst1基因在肾癌组织中表达明显下调;成功构建重组载体;转染后Mst1基因表达增强明显,凋亡明显升高,增殖能力明显下降（P〈0.05）。结论 Mst1基因的表达异常与肾癌的发生相关,是肾癌潜在的肿瘤抑制基因,其表达增高能够抑制肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

硼替佐米诱导前列腺癌细胞株PC-3细胞凋亡的研究

目的探讨硼替佐米诱导前列腺癌细胞株PC-3细胞的凋亡作用。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法观察2.6、10.4、41.6、166.4、260、665.6、1040、2662.4及10 649.6 nmol/L浓度硼替佐米对PC-3细胞的生长抑制作用,采用Annexin-V标记检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR方法检测665.6 nmol/L硼替佐米作用PC-3细胞0、6、24及48 h bax、bcl-2和bim基因表达的变化。结果 2.6 nmol/L硼替佐米对PC-3细胞就有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性抑制。665.6 nmol/L硼替佐米作用PC-3细胞24 h后,可见明显细胞核凝聚、固缩和碎裂;Annexin-V阳性表达率为18.5%,明显高于对照组（2.04%）。RT-PCR检测显示665.6nmol/L硼替佐米作用PC-3细胞24 h bax表达增强,而bcl-2和bim表达减弱。讨论硼替佐米可以抑制PC-3细胞生长,并通过上调bax表达,下调bcl-2和bim表达来诱导凋亡。     

复方苦参方剂对大肠癌LoVo细胞体外增殖凋亡的影响

目的：探讨复方苦参方剂对大肠癌LoVo细胞体外增殖及凋亡的影响．方法：台盼蓝染色法和MTT法测定中药对LoVo细胞抑制作用与时间和剂量的关系,用荧光显微镜、流式细胞仪对细胞凋亡进行检测．结果：复方苦参方剂可抑制Lovo细胞的生长,实验范围内其抑制作用呈时间与剂量依赖关系．经中药作用48h后,LoVo细胞可检测细胞凋亡峰．中药组凋亡率为（7．3±1．5）％,与对照组（2．1±0．5）％相比有明显升高（P〈0．05）．结论：复方苦参方剂具有一定的抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的作用．     

补肾方含药血清对人肝癌SK-HEP-1细胞增殖与凋亡的影响

目的:评价补肾方含药血清对人肝癌细胞株SK-HEP-1细胞增殖和细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:用SD大鼠制备空白组、补肾组、索拉非尼组含药血清;培养并建立VEGF诱导的SK-HEP-1细胞模型,分别予药物血清干预。以MTT比色法检测各组对SK-HEP-1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡,荧光Real-time PCR法检测细胞凋亡基因bax mRNA、bcl-2 mRNA的表达。结果:与空白血清组和VEGF组比较,补肾组含药血清可明显抑制SK-HEP-1细胞增殖(P0.01),提高SK-HEP-1细胞G1期的细胞比率(P0.05)以及细胞的早期凋亡率(P0.05)和总凋亡率(P0.05),上调bax mRNA基因表达(P0.05)和下调bcl-2 mRNA基因表达(P0.01),且补肾组和索拉非尼组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾方对人肝癌细胞株SK-HEP-1具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用;其作用机制可能与阻滞细胞由G1期进入S期和G2期,以及上调bax和下调bcl-2基因表达,促进SK-HEP-1细胞的凋亡有关。     

鬼臼毒素衍生物NY-3诱导HeLa细胞凋亡及其机制探究

【目的】研究鬼臼毒素衍生物NY-3对人宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性并探讨其机制。【方法】MTT法检测NY-3及阳性对照药物VP-16（依托泊苷）对HeLa细胞体外增殖的抑制作用及对其生长曲线的影响;Hoechst 33342/PI双染、琼脂糖凝胶电泳技术和流式细胞术等方法进行细胞凋亡检测;RT-PCR检测NY-3对HeLa细胞凋亡相关基因表达的影响;动物移植肿瘤模型研究NY-3体内抗肿瘤作用。【结果】NY-3在体外对HeLa细胞具有明显的抑制作用,IC50值为（2.73±1.28）μmol/L,优于VP-16,其诱导细胞产生凋亡小体并呈现典型的＂DNA ladder＂,流式细胞术检测出细胞被阻断在G2/M期,发现NY-3可以上调HeLa细胞Bax/Bcl-2比值及Caspase-3 mRNA表达水平,小鼠体内抗肿瘤研究NY-3在肿瘤抑制率、动物存活率等方面均优于阳性药物VP-16。【结论】NY-3在体外及体内实验表现均优于成熟阳性药物VP-16,其可能通过影响Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关基因表达诱导HeLa细胞凋亡。     

苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.