Gab2在SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖活化及其导致器官损伤中的作用

目的 观察接头蛋白Gab2对激活突变SHP-2导致的肥大细胞异常增殖活化是否具有调控作用,对激活突变SHP-2小鼠器官损伤有无影响.方法 用Gab2-/-、SHP-2D61G/+小鼠杂交建立四种基因型(SHP-2+/+、Gab2-/-、SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/+/Gab2-/-)小鼠为研究对象;取小鼠骨髓细胞用IL-3诱导建立肥大细胞,用MTS法检测不同基因型小鼠肥大细胞对细胞因子刺激增殖反应性;用ELISA法检测小鼠血清及肥大细胞分泌炎症因子水平,放射免疫法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的水平;用病理组织学技术检测小鼠组织白细胞浸润及器官损伤情况.结果 Gab2缺失后,SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖及活化现象明显改善,对细胞因子增殖反应性下降,相应细胞因子分泌减少,心脏及肝脏组织损伤减轻.结论 Gab2缺失降低了SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖活化和心脏及肝脏组织损伤.     

SHP-2激活突变促进小鼠MEFs细胞粘附迁移及增殖能力

【摘要】 目的 探讨SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/D61G激活突变对小鼠MEFs细胞粘附迁移及增殖能力的影响，并研究SHP-2激活突变的MEFs细胞其p-ERK的表达水平。方法 雌雄小鼠合笼交配建立SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变的小鼠MEFs细胞，并以SV40T抗原进行永生化；细胞粘附实验检测SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变对MEFs细胞粘附能力的影响；Transwell体外迁移实验检测SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变对MEFs细胞的迁移能力的影响；MTT法检测SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变对MEFs细胞增殖能力的影响；Western Blot法检测p-ERK的表达水平。结果 （1）与对照组相比，SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变组小鼠MEFs细胞粘附的细胞数明显增多，差异具有统计学意义；（2）与对照组相比SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变组MEFs细胞迁移的细胞数增加，差异具有统计学意义；（3）MTT结果显示，SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变的小鼠MEFs细胞增殖能力较对照组强，差异具有统计学意义；（4）Western Blot结果显示与对照组相比，无论是刚刚贴壁还是贴壁后30min和60min SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/ D61G激活突变组其p-ERK的表达水平都增加。结论 SHP-2D61G/+、SHP-2D61G/D61G激活突变促进小鼠MEFs细胞粘附迁移及增殖能力，SHP-2激活突变的MEFs细胞其p-ERK的表达水平增加。     

SHP-2酪氨酸磷酸酶在DNA损伤性放化疗引发的小鼠骨髓毒中的作用

目的研究酪氨酸磷酸酶SHP-2在放、化疗引发的骨髓毒的调节作用,初步探讨其可能的分子机制。方法分别从野生型(Wild-type,WT)、SHP-2杂合突变型(SHP-2 /-)及SHP-2纯合突变型(SHP-2-/-)胚胎鼠(9.0~9.5d)的卵黄囊中获取造血祖细胞,用细胞因子IL-3(Interleukin-3,0.5ng/ml)、SCF(stem cell factor,0.5ng/ml)将造血祖细胞定向诱导分化为粒-巨噬造血细胞系(granulocyte-macrophage,GM)。60Coγ射线及化疗药物顺铂(Cisplatin,CDDP)处理后,台盼蓝染色法观察比较三种GM细胞增殖抑制率的差异;集落形成实验(Colony-forming Units,CFU)分析比较卵黄囊造血祖细胞集落形成能力的差异;血细胞计数法检测比较WT小鼠和SHP-2 /-小鼠在照射或化疗后外周血中白细胞、红细胞及血红蛋白水平的变化;Western Blot检测Erk在WT及SHP-2-/-造血细胞中的表达与磷酸化水平。结果在CDDP或60Coγ射线导致的细胞损伤反应中,SHP-2-/-造血细胞的生存能力较SHP-2 /-和WT造血细胞增强;相比WT小鼠,SHP-2 /-组小鼠的白细胞、血红蛋白及红细胞数量降低程度减轻;SHP-2-/-造血祖细胞克隆集落形成能力较SHP-2 /-组及WT组增强;提示SHP-2-/-突变可以减轻CDDP或60Coγ导致的骨髓毒性。Western Blot显示在CDDP损伤反应中,SHP-2-/-抑制Erk的磷酸化。结论SHP-2参与调控放、化疗导致的骨髓毒性,其分子机制可能与SHP-2对Erk活化调节相关。     

Construction of SHP-2 WT/mutant eukaryotic expression vector and identification of protein phosphatase activity

目的 构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础.方法 用RT-PCR 及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入 pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染 NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用 pNPP法检测其磷酸酶活性.结果 构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01).结论 成功构建了pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高.     

SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测

目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。     

白血病相关的激活突变 SHP-2对小鼠体内血管新生能力的影响

目的 研究激活突变SHP-2对小鼠体内血管新生的影响,以进一步研究其在肿瘤发展过程中的作用.方法 利用SHP-2 D61G激活突变敲入(knock in)模型及WT(wild type)小鼠,局部皮下注射合成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的基质胶)(MatrigelTM Basement Membrane Matirx),诱导血管新生,用比色法检测基质胶内血红蛋白(HB)的含量代表血管密度,用血细胞计数仪检测相应小鼠外周血HB浓度用以标准化基质胶内HB含量;并用免疫病理学方法检测基质胶(Matrigel)内血管内皮细胞密度(CD31阳性);用Transwell方法检测小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)迁移能力.结果 SHP-2 D61G杂合突变的小鼠(SHP-2 D61G/+)体内注射的基质胶栓内HB含量明显高于WT组(P＜0.01),CD31阳性细胞也明显增多,SHP-2 D61G突变小鼠MEFs迁移能力明显增强(P＜0.01).结论 SHP-2 D61G激活突变可能促进小鼠体内血管新生,这种促进作用可能与细胞迁移能力增强有关.     

SHP-2对人绒毛膜滋养层细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的 探讨Src同源物2磷酸酶2（SHP-2）对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭、迁移和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。方法 用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测SHP-2在子痫前期（PE）组胎盘组织中的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、克隆形成实验、划痕闭合和Transwell分析检测敲低或过表达SHP-2对人绒毛膜滋养细胞（HTR-8/SVneo）增殖、集落形成、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测侵袭相关蛋白的表达和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）的磷酸化水平。结果 HP-2在PE组胚胎组织中低表达。敲低SHP-2显著抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、集落形成、侵袭和迁移,此外,基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin)的表达显著下调,E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达显著上调,PI3K和AKT的磷酸化水平显著降低,然而,过表达SHP-2具有相反的效果。结论 SHP-2在PE胎盘组织中低表达,SHP-2过表达可促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移能力,提示SHP-2可能是临床治疗PE的潜在靶点     

Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖

目的 探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响.方法 应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P＜0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P＜0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P＜0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P＜0.05).通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P＜0.05),且处于S+ G2/M期的细胞比例下降(P＜0.05).结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长.     

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变促进组织白细胞浸润和器官损伤

目的观察SHP-2D61G/+酪氨酸磷酸酶激活突变对组织白细胞浸润、细胞因子分泌及多器官损伤的影响。方法分别以SHP-2D61G/+激活突变敲入的模型小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,ELISA法检测小鼠血清和白细胞培养上清液中IL-2及TNF-α浓度;采用常规组织切片和HE染色观察心、肺、脾等组织病理学改变;放射免疫法检测血清中丙氨酸转氨酶和心肌肌钙蛋白I的水平。结果 SHP-2D61G/+激活突变小鼠脾、肺组织中白细胞浸润较野生型对照小鼠明显增加,心肌肥大,出现明显炎症损伤型组织学变化;与野生型对照相比,突变小鼠血清及白细胞培养上清液中IL-2和TNF-α浓度均显著增加(P<0.01),血清丙氨酸转氨酶及心肌肌钙蛋白I水平亦显著增高(P<0.01)。结论 SHP-2D61G/+激活突变增强白细胞分泌炎症因子的能力,促进组织白细胞严重浸润和脾、肺、心等多器官损伤,进而导致多器官功能障碍。     

O-GlcNAc糖基化修饰和Akt1对胃癌细胞体外增殖及侵袭力的影响

目的 探讨O-连接N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)糖基化修饰对胃癌细胞体外增殖及侵袭力的影响,并评价Akt1在O-GlcNAc糖基化促进胃癌细胞体外增殖及侵袭过程中的作用.方法 通过使O-GlcNAc转移酶(OGT)过表达(过表达OGT组)或沉默表达(沉默OGT组)及使用O-GlcNAc水解酶(OGA)特异性抑制剂Thiamet-G(抑制剂组)下调O-GlcNAc水解酶活性(抑制剂组)等构建O-GlcNAc糖基化水平升高或降低的细胞模型;采用MTT法检测各组胃癌细胞增殖活力;软琼脂集落形成实验观察各组胃癌细胞集落形成;Transwell细胞迁移实验各组胃癌细胞体外迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组胃癌细胞Akt1活性;Thiamet-G处理Akt1表达沉默(沉默Akt1组)的胃癌细胞以评价Akt1在O-GlcNAc糖基化促进胃癌细胞侵袭中的作用;利用Thiamet-G处理Akt1过表达(过表达Akt1组)的胃癌细胞以进一步验证Akt1在O-GlcNAc糖基化调控胃癌细胞侵袭性过程中的作用.结果 O-GlcNAc糖基化水平升高可促进胃癌细胞增殖并显著提高细胞集落形成、体外迁移和侵袭的能力;Akt1活性被由O-GlcNAc糖基化水平升高所介导的Ser473磷酸化上调而激活;Thiamet-G诱导的细胞侵袭性被Akt1 shRNA所抑制;Akt1高表达可进一步促进由Thiamet-G诱导的细胞侵袭性增强.结论 O-GlcNAc糖基化可部分通过Akt1途径增强胃癌细胞的体外增殖及侵袭力.     

Conditional Knockout of Src Homology 2 Domain-containing Protein Tyrosine Phosphatase-2 in Myeloid Cells Attenuates Renal Fibrosis after Unilateral Ureter Obstruction

Background:

Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase-2 (SHP-2) is a kind of intracellular protein tyrosine phosphatase. Studies have revealed its roles in various disease, however, whether SHP-2 involves in renal fibrosis remains unclear. The aim of this study was to explore the roles of myeloid cells SHP-2 in renal interstitial fibrosis.

Methods:

Myeloid cells SHP-2 gene was conditionally knocked-out (CKO) in mice using loxP-Cre system, and renal interstitial fibrosis was induced by unilateral ureter obstruction (UUO). The total collagen deposition in the renal interstitium was assessed using picrosirius red stain. F4/80 immunostaing was used to evaluate macrophage infiltration in renal tubular interstitium. Quantitative real-time polymerase chain reaction and enzyme linked immunosorbent assay were used to analyze the production of cytokines in the kidney. Transferase-mediated dUTP nick-end labeling stain was used to assess the apoptotic renal tubular epithelial cells.

Results:

Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase-2 gene CKO in myeloid cells significantly reduced collagen deposition in the renal interstitium after UUO. Macrophage infiltration was evidently decreased in renal tubular interstitium of SHP-2 CKO mice. Meanwhile, the production of pro-inflammatory cytokines was significantly suppressed in SHP-2 CKO mice. However, no significant difference was observed in the number of apoptotic renal tubular epithelial cells between wild-type and SHP-2 CKO mice.

Conclusions:

Our observations suggested that SHP-2 in myeloid cells plays a pivotal role in the pathogenesis of renal fibrosis, and that silencing of SHP-2 gene in myeloid cells may protect renal from inflammatory damage and prevent renal fibrosis after renal injury.     

SHP-2C459/S突变体在三氧化二砷诱导的HEK293T细胞凋亡中的作用

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对293T细胞凋亡和增殖的影响并探讨SHP-2在其中的作用.方法 显性负性SHP-2突变体SHP-2C459/S与具有绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP-C1共转染人HEK293T细胞,Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,细胞计数及荧光分光光度法检测细胞增殖.结果 SHP-2C459/S突变体能增强细胞凋亡和减轻增殖抑制.结论 SHP-2可能参与到As2O3诱导的细胞凋亡和增殖抑制的信号转导通路中.     

Flt3、c-kit和SHP-1基因在急性白血病中的作用

目的探讨Flt3、造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例髓系白血病患者（实验组）及33例正常对照组Flt3、SHP-1与c-kitmRNA表达。结果急性髓系白血病（AML）患者的Flt3及c-kit平均表达水平高于对照组,SHP-1平均表达水平均低于对照组（P〈0.05）;34例初治AML患者中,Flt3＋及c-kit＋的完全缓解率低于Flt3-及c-kit-者,而SHP-1则相反。结论Flt3、c-kit对于白血病的转归、预测白血病的复发、监测微小残留病变有重要的意义,SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与Flt3、c-kit基因参与白血病的发生。     

SHP-1对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响及机制初步探讨

目的探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响。方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列;然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞干扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变化;通过Transwell小室实验检测干扰SHP-1对细胞侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实SHP-1在人乳腺癌细胞株MCF-7中有表达以及SHP-1SiRNA的干扰效率;干扰SHP-1后,MMP-9的表达量上调;Transwell小室实验证实,与MCF-7阴性干扰对照及空白对照细胞相比,siRNA组的侵袭能力显著增强(P<0.001)。结论乳腺癌MCF-7中SHP-1的表达水平高低和该细胞侵袭能力高低呈负相关,其侵袭可能和MMP-9的表达呈正相关。     

白细胞介素2的检测及其诱生条件的分析

用白细胞介素2(interteukin 2,IL2)依赖细胞株(Cytotoxic T-lymphocyte line,CTLL)检测IL2并滴定标本中IL2的活性单位,同时观察诱导IL2产生的条件和影响因素。结果表明CTLL对IL2绝对依赖,对植物血凝素(PHA)和伴刀豆球蛋白A(Con A)无反应。CTLL的增殖与IL2的量成正比。Con A刺激大鼠脾细胞的培养上清液(又称大鼠因子,RF)中有可透析的小分子抑制因子存在,如不除去会影响IL2活性单位的滴定。大鼠IL2的诱生受下列因素影响:①个体差异;②Con A浓度,IL2的产量随Con A浓度的增加(3μg～50μg/ml)而增加;③牛血清白蛋白(BSA)可以替代小牛血清(FCS),但IL2的产生受到影响。     

B细胞淋巴瘤SHP-1基因甲基化状态及其意义

 【目的】探讨JAK/STAT信号转导途径负调控子SHP-1基因启动子区域CpG岛异常甲基化在B细胞淋巴瘤中的意义。【方法】收集存档石蜡包埋组织标本61例(52例B细胞非霍奇金淋巴瘤标本,9例良性增生淋巴结标本),健康人外周血单个核细胞DNA标本15例,用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)和非甲基化特异性PCR(unmethylation-specific PCR,un-MSP)检测SHP-1启动子区域CpG岛甲基化状态,MSP、un-MSP和RT-PCR方法分别检测接受或未接受去甲基化处理的Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的甲基化状态及mRNA的表达,MTT法检测接受去甲基化干预后细胞生长受抑情况。【结果】SHP-1基因启动子区域在弥漫性大B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤甲基化频率分别为94%及97%,对照组9例淋巴结良性增生标本和15例正常人外周血单个核细胞标本中SHP-1基因启动子区域甲基化频率为0。经去甲基化干预后,Raji细胞SHP-1基因启动子区域呈去甲基化状态,基因恢复表达,细胞生长受到抑制。【结论】SHP-1基因启动子区域启动子区域CpG岛在B细胞淋巴瘤中存在高度甲基化，由其所致的SHP-1基因沉默可能是B细胞淋巴瘤发生的一个重要因素，SHP-1基因的甲基化可作为一个良好的分子诊断标记及可能的治疗靶点。     

抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭力的影响

目的 研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P。观察细胞的生长状态,测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率、细胞侵袭力实验、裸鼠体内致瘤性,以及RT-PCR检测细胞中COX-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,同时,免疫组化检测3种细胞COX-2、VEGF抗原表达,分析特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭力的影响。结果 CaSKi、CaSKi-P细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、致瘤性和侵袭力相近,而CaSKi-R细胞的细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、致瘤性和侵袭力与以上两种细胞相比却明显降低。RT-PCR检测CaSKi-R细胞的COX-2、VEGF表达水平也低于CaSKi、CaSKi-P细胞的表达。细胞免疫组化测定CaSKi、CaSKi-P和CaSKi-R细胞都有COX-2、VEGF抗原表达,而CaSKi-R细胞的抗原染色程度较弱。结论 特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌CaSKi细胞的增殖和侵袭表型,可能与宫颈癌CaSKi细胞内COX-2、VEGF的表达水平降低有关。     

1,25-二羟维生素D_3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法:1,25-二羟维生素D3作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期。结果:1,25-二羟维生素D3作用后胃腺癌细胞生长受抑制,细胞集落形成率明显下降(P<0.05);处理48 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变。结论:1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有抑制增殖、诱导分化作用。     

外源性mIκBα基因抑制肝癌细胞HepG2的生长

OBJECTIVE: To observe the expression of mIkappaBalpha, the inhibitor of NFkappaB, in HepG2 heptocellular carcinoma cells and the inhibitory effect of mIkappaBalpha on HepG2 cell growth. METHODS: The adenovirus containing mIkappaBalpha or the packaging vector were harvested from 293 packaging cells to infect HepG2 cells, in which the expression of green fluorescence protein (GFP) and mIkappaBalpha protein were detected. The plating efficiency and colony-forming ability in soft agar were evaluated, cell growth curve was generated and the tumor growth observed in nude mice. RESULTS: HepG2 cells infected by the packaged adenovirus (HepG2/Adv cells) had positive GFP expression, and those infected by the adenovirus containing mIkappaBalpha (HepG2/Ad-mIkappaBalpha cells) showed mIkappaBalpha protein expression, as demonstrated by Western blot analysis. HepG2/Adv cells exhibited markedly lowered colony-forming ability as compared with that of the HepG2/Adv and HepG2 cells, and the latter two cells, but not the former cells, could survive in soft agar and form colonies in the shape of mulberries. Cell growth curve showed that the Hep G2/Ad-mIkappaBalpha cells had also significantly reduced growth rate, but their saturation density in culture was comparable with the other two cells. Four weeks after inoculation in nude mice, HepG2/Ad-mIkappaBalpha and HepG2/Adv cells showed no significant difference in tumorigenicity (80% vs 100%, respectively), but the tumor volume generated by the former cells was significantly smaller (P<0.05). CONCLUSION: mIkappaBalpha gene can inhibit the growth of HepG2 heptocellular carcinoma cells.