丝裂霉素C影响增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡

背景:丝裂霉素C已逐渐开始应用于治疗增生性瘢痕领域中,但针对丝裂霉素C通过细胞凋亡作用于增生性瘢痕分子机制报道很少.目的:探讨丝裂霉素C对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响.方法:应用2.5,12.5,50,100和200 mg/L 丝裂霉素C作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,采用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期分布和凋亡情况;通过Western blot法检测细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达水平.结果与讨论:丝裂霉素C可使增生性瘢痕成纤维细胞的生长阻滞于G0/G1期,并且能够诱导增生性瘢痕成纤维细胞发生凋亡,有着明显的浓度依赖性.经2.5~200 mg/L丝裂霉素C作用24 h后,增生性瘢痕成纤维细胞中Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.05).说明丝裂霉素C可能通过增加增生性瘢痕成纤维细胞Bax表达,降低Bcl-2表达,促进成纤维细胞凋亡的增加.     

氦氖激光重复照射对培养瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 :从蛋白质水平探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的机制。方法 :以波长 6 32 .8nm、功率密度10 0mW /cm2 的氦氖激光照射培养瘢痕成纤维细胞 ,每日 1次 ,每次 30min ,连续照射 3天 ,然后分别采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪测定Bcl- 2、Bax、Fas、ICE、p5 3、c -myc蛋白的细胞分布与表达。 结果 :在培养增生性瘢痕成纤维细胞有多种凋亡相关基因表达蛋白分布 ,氦氖激光照射后 ,Fas、ICE表达增加 ,Bcl- 2表达降低 ,Bax、p5 3、c -myc的表达无变化。结论 :氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Fas、Bcl- 2、ICE表达蛋白有关     

凋亡相关基因在烧伤增生性瘢痕中的表达水平和组织学分布特征

目的探讨凋亡相关基因Bcl-2和Bax在增生性瘢痕(HS)中的表达水平和分布特征及其与瘢痕增生和退化关系.方法检测HS中Bcl-2和Bax的表达.结果正常皮肤不表达Bcl-2,在HS中Bcl-2和Bax的阳性率为100%.浅层Bcl-2阳性细胞率高达64%～78%,显著高于其他时间点标本和同一标本的中层和深层(P<0.01),仅成纤维细胞表达阳性;Bax在瘢痕增生的全过程和各层组织均有较高的阳性细胞率(52%～69%)和广泛的细胞分布,显著高于正常皮肤(P<0.01).结论深度烧伤创面愈合后,浅层成纤维细胞过度表达Bcl-2可能与创伤修复失控和HS形成有关,而广泛的Bax蛋白的过度表达可能具有抵抗Bcl-2活性作用,加速细胞的生理性凋亡和瘢痕成熟.     

瘢痕疙瘩和增生性瘢痕鉴别的实验研究

为寻找鉴别增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的新途径,对两种病理性瘢痕的组织形态结构进行比较,并用免疫组织化学方法检测抑凋亡蛋白Bcl-2在二者成纤维细胞上的表达,结果发现两种病理性瘢痕在光镜下均出现过多的成纤维细胞、胶原纤维及微血管.超微结构均发现各时期的成纤维细胞,多数细胞富含粗面内质网和高尔基复合体,胶原微纤维排列紊乱,证实二者在组织形态上难以区别.而Bcl-2蛋白在瘢痕疙瘩中成纤维细胞的表达明显高于增生性瘢痕(P＜0.005),提示免疫组织化学方法可能有助于鉴别二者.     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制增殖和促进凋亡的实验观察

目的：研究苦参碱（matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期和细胞核内增殖性抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达影响。方法：将不同浓度梯度Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞，利用通过流式细胞仪检测其细胞周期，DNA相对含量，利用用免疫组织化学的检测PCNA的表达。结果：不同浓度梯度的Mat作用增生性瘢痕成纤维细胞72h后，出现G0-G1期细胞数量明显增加，S期细胞，G2-M期细胞明显减少，DNA相对含量无明显变化，PCNA表达逐渐减弱，（P＜0．01），结论：Mat能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性和细胞的有丝分裂，但对DNA含量无明显影响。     

复方三七颗粒对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的：探讨复方三七颗粒对动脉粥样硬化平滑肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法：建立动脉粥样硬化大鼠模型,采用TUNNEL法检测各组细胞凋亡率,免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：复方三七颗粒组与模型组比较,平滑肌细胞凋亡率明显减少（P〈0.05）,Bcl-2蛋白表达增加（P〈0.05）,Bax蛋白表达降低（P〈0.05）。结论：复方三七颗粒可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白,从而得出复方三七颗粒拮抗动脉粥样硬化的机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡与细胞周期的影响

目的 探讨阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡与细胞周期的影响。方法 将处于生长对数期的人脐静脉内皮细胞分为正常组(给予不含任何药物的培养基),模型组(给予33.3 mmol/L葡萄糖),阿卡波糖组(给予33.3 mmol/L葡萄糖+1μg/L,3μg/L,10μg/L阿卡波糖)。MTT法及流式双染检测细胞活力及细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p21及细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达量。结果 与正常组比较,模型组中细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞在G1期,Bax及p21表达量上调,Bcl-2及Cyclin D1表达量下调;与模型组比较,阿卡波糖组中细胞活力提高,细胞凋亡率降低,G1期延长,Bax及p21表达量下调,Bcl-2及Cyclin D1表达量上调,且呈剂量依赖性。结论 阿卡波糖能抑制高糖诱导的HUVEC凋亡,并缩短G1期,与调节细胞凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。     

氦氖激光重复照射对瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的从蛋白质水平探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的机制。方法以632.8nm波长、100mW/cm2功率密度氦氖激光照射培养瘢痕成纤维细胞,1次/d,30min/次,连续照射3d,然后分别采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪测定bcl-2,Fas,ICE蛋白的细胞分布与表达。结果在培养增生性瘢痕成纤维细胞有多种凋亡相关基因表达蛋白分布,氦氖激光照射后,Fas,ICE表达增加,bcl-2表达降低。结论氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Fas,bcl-2,ICE表达蛋白有关。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制增殖和促进凋亡的实验观察

目的研究苦参碱(matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期和细胞核内增殖性抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达影响。方法将不同浓度梯度Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,利用通过流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量,利用用免疫组织化学的检测PCNA的表达。结果不同浓度梯度的Mat作用增生性瘢痕成纤维细胞72h后,出现G0～G1期细胞数量明显增加,S期细胞、G2～M期细胞明显减少,DNA相对含量无明显变化,PCNA表达逐渐减弱,(P<0.01)。结论Mat能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性和细胞的有丝分裂,但对DNA含量无明显影响。     

RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。     

黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响

目的 观察不同浓度﹑不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验﹑流式细胞仪﹑细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测.结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调, Bax蛋白表达上调.结论 黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现.     

黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的影响

[目的]探讨黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因与蛋白表达的影响.[方法]Balb/C小鼠50只随机分5组（每组10只）,A组空白对照组：腹腔无菌注射不含病毒的Eagle＇s培养基0.1 mL,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;B组病毒性心肌炎对照组：小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含50%组织感染率（TCID50） 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组（分别为C、D、E组）,在腹腔注射0.1 mL内含TCID50 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/（kg·d）]0.1 mL灌胃,共7 d.采用缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.[结果]与A组比较,B组心肌细胞凋亡发生率增高（0.57±0.16vs 0.06±0.02,P〈0.01）;抑制凋亡因子Bcl-2基因（0.52±0.12 vs 0.76±0.11,P〈0.01）及蛋白（6.08±1.15 vs 12.38±3.05, P 〈0.01）表达下降,而促进凋亡因子Bax基因（0.79±0.12 vs 0.61±0.14, P 〈0.01）及蛋白（6.21±1.52 vs 3.01±0.75, P 〈0.01）表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低（0.58±0.14vs0.87±0.12,P〈0.05）.与B组比较,E组CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数（0.09±0.03vs 0.57±0.16,P〈0.05）降低,Bcl-2基因（0.74±0.12 vs 0.52±0.12,P〈0.05）及蛋白水平（11.82±2.96 vs 6.08±1.15, P 〈0.05）表达增强,Bax基因（0.63±0.13 vs 0.79±0.12,P〈0.05）及蛋白（3.15±0.72 vs 6.21±1.52,P〈0.05）水平表达下降.[结论]黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进抑制凋亡基因Bcl-2表达,而抑制促凋亡Bax基因表达.     

葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响

目的探讨葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法以雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物分为5组：即假手术组、心肌缺血再灌注模型组（I/P）、葛根素2mg/Kg给药组（A组）、葛根素5mg/Kg给药组（B组）和葛根素10mg/Kg给药组（C组）。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支（LAD）的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;采用免疫组织化学方法检测,大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白含量采用RT-PCR法,检测大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达水平。结果与假手术组相比较,心肌缺血再灌注模型组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和BaxmRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）;B、C组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达水平均未见显著差异（P〉0.01）;A组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和Bax mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）。结论葛根素能够通过提高Bcl-2、Caspase-3的表达及降低Bax的表达调控心肌组织细胞的凋亡,从而起到保护心肌组织的功能。     

大鼠髁突软骨细胞凋亡与胰岛素样生长因子1的影响

背景：胰岛素样生长因子 1 参与了髁突软骨生长与改建,是软骨发育关键因子。目的：探索胰岛素样生长因子 1 对体外培养大鼠髁突软骨细胞凋亡的作用,以及对凋亡相关因子 Bcl-2 和 BaxmRNA 及蛋白表达变化的影响。方法：体外培养并鉴定出生后 1,28 d 大鼠髁突软骨细胞后,将每个年龄组的髁突软骨细胞分别分为实验组和对照组。饥饿培养 24 h 后,实验组加入 100 μg/L 重组大鼠胰岛素样生长因子 1 细胞因子孵育 48 h,对照组正常培养。结果与结论：与对照组相比,实验组加入重组胰岛素样生长因子 1 后,髁突软骨细胞数量增多,增殖速度显著增加（P 〈 0.05）。实时 PCR 和 Western blot 检测显示,加入重组胰岛素样生长因子 1 培养 48 h 后,各组髁突软骨细胞中 bcl-2 mRNA 和蛋白表达增加,bax mRNA 和蛋白表达减少（P 〈 0.05）。提示胰岛素样生长因子 1 可以促进新出生及青春期大鼠髁突软骨细胞增殖,抑制其凋亡,并可能通过 Bcl-2 和 Bax 介导抑制凋亡。     

SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38 MAPK及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠肠缺血再灌注（IR）时p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞表达的影响。方法：Wistar大鼠30只随机分为对照组（C组）、缺血再灌注组（Ⅰ组）和SB203580组（S组）（n=10）,采用肠IR模型检测p38 MAPK、Bcl-2、Bax、TNF-及凋亡指数的水平。结果：Ⅰ组中p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞的表达均显著高于C组（P〈0.05）,而S组中p38 MAPK、TNF-α及凋亡细胞的表达减少,Bcl-2/Bax比值增高（P〈0.05）。结论：SB203580抑制了小肠组织中p38 MAPK通路的活化,从而增加了Bcl-2的表达、减少了Bax和TNF-α的释放,在缓解细胞凋亡的过程中起到了重要的作用。     

低氧增强骨髓间充质干细胞对缺氧诱导心肌细胞凋亡的可能性

背景：骨髓间充质干细胞移植入缺血心肌后存活率低,而低氧有可能增强骨髓间充质干细胞的增殖,促进其存活。目的：体外模拟心肌细胞缺血微环境,探索低氧预处理后,骨髓间充质干细胞对持续缺氧诱导的心肌细胞凋亡的保护作用。方法：取第4代SD大鼠骨髓间充质干细胞用于制备条件培养液。取胚胎大鼠心肌细胞株,随机分成4组：对照组：心肌细胞正常培养组;模型组：心肌细胞单纯缺氧;骨髓间充质干细胞组：心肌细胞与骨髓间充质干细胞条件培养液共缺氧;低氧组：心肌细胞与骨髓间充质干细胞低氧条件培养液共缺氧。MTT检测各组细胞活力变化,AnnexinV-FITC双染标记心肌细胞凋亡,免疫组化检测各组Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果与结论：免疫组化显示,低氧组的Bcl-2表达较其他各组增强,而Bax的表达比模型组和骨髓间充质干细胞组减弱,Bcl-2/Bax比值最大。与对照组和骨髓间充质干细胞组相比,低氧组的细胞活力高（P〈0.05）,凋亡率降低（P〈0.05）。提示低氧可能是通过增强旁分泌机制,从而对Bax和Bcl-2进行调节,对心肌细胞凋亡有保护效应。     

“双固一通”温针灸实验性膝骨性关节炎模型兔Bcl-2及Bax蛋白的表达

背景：软骨细胞凋亡在骨性关节炎的发生发展中起到关键作用。目的：观察＂双固一通＂温针灸预防兔膝骨性关节炎过程中对兔膝关节软骨Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法：采用结扎股静脉法建立兔膝骨性关节炎模型,造模后采用＂双固一通＂温针灸法进行干预,针灸穴位包括关元（CV4）、足三里（ST36）、内膝眼（EX-LE4）、犊鼻（ST35）和阳陵泉（GB34）,1次/d,留针20min,连续8周。结果与结论：膝骨性关节炎后,兔的软骨细胞凋亡指数明显升高（P〈0.01）,＂双固一通＂温针灸可降低软骨细胞凋亡指数（P〈0.01）。免疫组织化学染色显示：＂双固一通＂温针灸兔和模型兔关节软骨Bcl-2表达明显增高（P〈0.05）,而＂双固一通＂温针灸兔和正常兔关节软骨Bax的表达明显低于模型兔（P〈0.05）,＂双固一通＂温针灸兔Bcl-2/Bax高于模型兔和正常兔（P〈0.05）。说明＂双固一通＂温针灸可上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达抑制软骨细胞过度凋亡,对兔膝骨性关节炎起防治作用。     

TREK-1通道活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察双孔钾通道TREK-1活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:45只大鼠随机分为假手术组(10只)、对照组(10只)和干预组(25只)。建立大鼠光化学脑缺血模型,假手术组不注射玫瑰红,干预组侧脑室注射不同浓度(100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1 mmol/L)亚麻酸(LIN),对照组注射等量生理盐水。应用免疫荧光双标法观察正常生理情况下TREK-1在大脑神经细胞中的表达,TUNEL及DAPI双标法检测缺血边缘区细胞凋亡,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-erk)表达。结果:正常生理情况下,TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。与假手术组相比,对照组大量细胞凋亡,Bcl-2/Bax值下降,p-erk蛋白增加(P<0.05);与对照组比较,干预组细胞凋亡显著减少,Bcl-2/Bax值上升,p-erk蛋白降低(P<0.05)。结论:TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。TREK-1激动剂LIN可显著抑制脑缺血后细胞凋亡,上调Bcl-2与Bax比值,抑制erk磷酸化。