蟾毒灵通过下调c-Flip和XIAP增强TRAIL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的：研究蟾毒灵（ bufalin）对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的的影响及机制。方法：MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光实验检测DR4、DR5的表达情况,Western blot法检测c-Flip和XIAP蛋白的表达。结果：MTT结果显示bufalin作用于MDA-MB-231细胞后24h和48h的IC50分别为934nmol/L 和513nmol/L。流式分析显示50nmol/L 的 bufalin 作用24h 仅诱导4.5%的MDA-MB-231细胞凋亡,100ng/ml的TRAIL作用24h诱导5.1%的MDA-MB-231细胞凋亡,50nmol/L的bufalin与100ng/ml的TRAIL联合作用24小时后可诱导32.5%的MDA-MB-231细胞凋亡。Western blot分析显示bufalin与TRAIL联合作用后导致c-Flip和XIAP的明显下调。结论：Bufalin可通过下调c-FLIP和XIAP的表达增强TRAIL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响。方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达。结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P<0.05)。RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)%,(43.52±0.99)%和(73.60±2.80)%,与对照组的(4.13±0.25)%比较有统计学意义(P<0.05);而对MCF-7凋亡影响不明显。Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显。结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关。     

c-FLIP-L影响乳腺癌MDA-MB-231细胞对TRAIL致凋亡作用的敏感性

目的：观察c-FLIP-L对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其具体机制。方法：构建靶向c-FLIP-L 的 siRNA 质粒,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞, RT-PCR、Weston blotting验证基因抑制效果。实验分空白对照组、TRAIL组、c-FLIP-L siRNA组和c-FLIP-L siRNA+TRAIL组共4组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖情况,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率,Transwell实验检测MDA-MB-231细胞侵袭能力,RT-PCR 、Western blotting检测MDA-MB-231细胞中c-FLIP-L、caspase-3、caspase-8、MMP-2、MMP-9的表达。结果：靶向c-FLIP-L的 siRNA 质粒转染至乳腺癌细胞株可有效抑制c-FLIP-L mRNA \[(37.12±3.02) vs (183.21±8.31),(174.65±10.06);P<0.05\]及其蛋白的水平。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理MDA-MB-231细胞,与两者单独处理相比,细胞增殖抑制率显著升高\[72 h时,（75.51±2.01)% vs （3375±1.60）%,（34.31±2.01）%;均P<0.05\],凋亡率显著升高\[72 h时,（76.30±4.11）% vs （38.95±214）%,（29.28±166）%;均P<0.05\],对细胞侵袭能力的抑制也显著增强。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理后,与两者单独处理相比,乳腺癌细胞中casepase-3、casepase-8的表达显著增强,而MMP-2、MMP-9的表达明显减弱。结论：抑制c-FLIP-L表达能够增强MDA-MB-231细胞对TRAIL的敏感性,从而提高诱导肿瘤细胞凋亡的能力,其机制可能与caspase-3、caspase-8的表达上调和MMP-2、MMP-9的表达下调有关。     

c-Met抑制剂SGX523诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系的凋亡

目的:研究c-Met小分子抑制剂SGX523对人乳腺癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:以不同浓度的SGX523作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）、PARP的表达和c-Met及Akt磷酸化水平的变化。结果:SGX523能明显抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）,其对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为（0.767±0.115）μmoL/L。SGX523处理MDA-MB-231细胞48 h后,可诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞周期G₀/G₁期阻滞。同时,SGX523可促进凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的剪切,并有效抑制c-Met及AKT的磷酸化水平,呈一定的剂量依赖关系。结论:c-Met抑制剂SGX523通过诱导凋亡和G₀/G₁期阻滞来抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,其机制可能与c-Met/PI3K/AKT信号转导通路的磷酸化水平受抑制相关。     

尼妥珠单抗联合顺铂对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及其机制研究

[目的]探讨尼妥珠单抗（泰欣生）联合顺铂对三阴性乳腺癌细胞的增殖抑制作用及可能机制。[方法]100μg/ml泰欣生、5μg/ml顺铂单独和联合作用三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot技术检测ERK1/2、pERK1/2及BRCA1蛋白表达水平。[结果]泰欣生和顺铂联合作用MDA-MB-231细胞48h后,细胞增殖抑制达82.53%±6.46%,与其余各组相比,差异有显著性（P〈0.01）。顺铂和泰欣生单药作用24h,未能明显诱导MDA-MB-231细胞凋亡;但作用48h后顺铂诱导的凋亡率为14.56%,泰欣生组的细胞凋亡仍不明显。泰欣生联合顺铂作用24h未能明显诱导MDA-MB-231细胞凋亡;48h后,细胞凋亡率明显增高,达37.57%,与其余各组相比差异有显著性（P〈0.01）。ERK1/2在对照组和各处理组中的表达无变化;pERK1/2在对照组和顺铂组的表达无变化,在泰欣生组和泰欣生＋顺铂组的表达明显降低。顺铂和泰欣生单药处理MDA-MB-231细胞后BRCA1蛋白表达量增加,泰欣生与顺铂联合作用后,BRCA1蛋白表达明显降低。[结论]尼妥珠单抗（泰欣生）与顺铂可协同抑制三阴性乳腺癌细胞,其机制可能是降低BRCA1蛋白的表达。     

AZD2281诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的实验研究

目的 观察AZD2281对乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法MTT法和流式细胞仪法观察不同浓度AZD2281（2.5、5、10 nmol/L）作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h后对细胞增殖、周期分布及细胞凋亡的影响;Western blotting检测经AZD2281处理该细胞24 h后细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达水平的变化。结果AZD2281可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性;AZD2281作用于MDA-MB-231细胞24 h后,细胞被阻滞在G0/G1期,并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。AZD2281作用MDA-MB-231细胞24 h后,凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达呈剂量依赖性下降,而凋亡促进蛋白caspase-3的表达呈剂量依赖性上升。结论AZD2281能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖和促进其凋亡,其作用机制可能是通过上调caspase-3和下调Bcl-2蛋白表达实现的。     

miR-206对三阴性乳腺癌细胞的增殖抑制作用及初步机制研究

目的 探讨miR-206对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响及其作用机制。方法 转染miR-206 mimic和miR-NC至乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测miR-206相对表达水平;应用MTT法、克隆形成实验检测miR-206对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-206对细胞周期的影响;Western blotting进一步验证miR-206对周期相关蛋白CyclinD2的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-206 mimic转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞48h后miR-206的相对表达水平为10.2±1.5。MTT法检测结果显示,miR-206 mimic转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞6、24、48、72、96h后的增殖抑制率分别为（0±0.01）％、（0.12±0.03）％、（0.21±0.08）％、（0.28±0.11）％ 和（0.39±0.16）％;克隆形成实验结果显示,miR-206 mimic和miR-NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞2周后的克隆数目分别为106±35和843±143,差异具有统计学意义（P＜0.01）。流式细胞术检测结果显示,miR-206 mimic转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞48h后,明显地阻滞细胞周期于G1期;Western blotting检测显示miR-206表达下调了细胞周期蛋白CyclinD2的表达。结论 miR-206明显抑制了三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖,其机制可能与下调细胞周期蛋白CyclinD2的表达有关,这将成为乳腺癌临床治疗一个新的靶点。     

TRAIL联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡影响的研究

目的:探讨 TRAIL 联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231 细胞株增殖及凋亡的影响.方法:MTT 法和软琼脂集落形成实验检测细胞增殖;DAPI染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR4、DR5蛋白表达.结果:50 ng/mL TRAIL与50和100 μmol/L白藜芦醇联合作用14 d后,MDA-MB-231细胞在软琼脂中集落形成率分别为(2.49±0.08)%和(1.38±0.07)%,与相应浓度TRAIL、白藜芦醇单独应用比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01.50 ng/mL TRAIL与50和100 μmol/L白藜芦醇联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖抑制率为(62.43±2.07)%、(87.32±1.44)%;细胞凋亡率为(53.59±1.44)%、(73.72±1.96)%,与单独应用相应浓度TRAIL、白藜芦醇比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01.50、100和200 μmol/L白藜芦醇作用后,细胞膜表面DR4、DR5的荧光指数分别为1.80±0.07、2.11±0.14、2.59±0.16和2.16士0.08、2.92±0.25、3.90±0.06,与对照组(FI 值分别为1.52±0.04和1.61±0.13)比较及组间比较差异有统计学意义,P<0.05.结论:TRAIL与白藜芦醇联合可协同抑制MDA-MB-231 细胞增殖并诱导其凋亡,DR4,DR5蛋白表达的上调可能是其协同效应的机制之一.     

人参皂苷Rg3通过人乳腺珠蛋白A促进乳腺癌MDA MB 231细胞凋亡及其可能的机制

目的:研究人参皂苷Rg3通过促进乳腺癌MDA-MB-231细胞人乳腺珠蛋白A(mammaglobin-A,MGBA)的表达从而抑制细胞增殖的作用机制.方法:MTT法和流式细胞术检测5、10、15 μg/ml Rg3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,Westernblotting检测对乳腺癌细胞内MGBA表达的影响;Rg3和siRNA-MGBA单独或联合处理MDA-MB-231细胞,MTT法和流式细胞术检测其对细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测其对细胞MGBA表达的影响,敏感硫电极法检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞H2S分泌的影响.结果:作用细胞48 h后,与对照组相比,5、10、15 μg/ml Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显增高[(18.78±0.82)％、(33.25±1.17)％、(35.11±0.94)％vs(9.72±0.91)％,均P＜0.05],Rg3可促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05),也明显增强MDA-MB-231细胞内MGBA蛋白的表达(P＜0.05).与对照组相比,Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显升高[(30.12±1.01)％ vs(10.66 ±0.59)％,P＜0.05],Rg3+ siRNA-MGBA组和siRNA-MGBA组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显降低[(6.61±0.63)％、(7.02±0.46)％ vs (10.66±0.59)％,均P＜0.05];Rg3组MGBA和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达和H2S的分泌明显增强,而Rg3+ siRNA-MGBA组、siRNA-MGBA组明显抑制(均P ＜0.05).结论:Rg3可以明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,并促进凋亡,其作用机制可能是通过增强MGBA蛋白的表达并激活H2S/CSE系统得以实现的.     

蒽贝素协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导乳腺癌细胞凋亡性死亡的实验北大核心CSCD

目的研究小分子化合物蒽贝素(Embelin)是否能协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。方法应用Embelin、TRAIL或者联合应用分别处理MDA-MB-231细胞。MTT法测定药物处理的细胞毒性,APOP-BRDU试剂盒及流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot观察Caspase3,9和PARP的表达水平。半定量PCR和Western blot分别观察Embelin处理以后X连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)mRNA、蛋白表达水平的变化。结果 MDA-MB-231细胞呈TRAIL部分耐药,Embelin的细胞毒性在MDA-MB-231细胞呈浓度依赖性。亚毒性浓度的Embelin能显著增强TRAIL诱导的细胞毒性、凋亡率、Caspase 3,9的活化和PARP的切割。但是,亚毒性浓度的Embelin未直接改变XIAP的蛋白和mRNA表达水平。结论 Embelin能显著增强TRAIL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。     

RNA干扰CYP1B1基因沉默抑制多不饱和脂肪酸诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖

目的:探讨小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)介导的细胞色素P450 1B1(cytochrome P-4501B1,GYP1B1)基因沉默对二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和花生四烯酸(arachidonic acid,AA)作用下乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法:应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测经EPA和AA处理后MDA-MB-231细胞的增殖情况.采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术干扰CYP1B1的表达,随后应用荧光实时定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)和蛋白免疫印迹法检测转染效率,以及siRNA干扰后EPA和AA作用下MDA-MB-231细胞中CYP1B1和儿茶酚氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)mRNA和蛋白的表达情况.采用CCK-8法检测siRNA干扰后EPA和AA作用下MDA-MB-231细胞的增殖情况.结果:EPA处理组的MDA-MB-231细胞数明显少于对照组,而AA处理组的MDA-MB-231细胞则明显多于对照组(P＜0.05).转染CYP1B1 siRNA的MDA-MB-231细胞中,CYP1B1 mRNA和蛋白的表达均有所下降,而COMT mRNA和蛋白的表达水平则有所上升.CYP1B1 siRNA转染的MDA-MB-231细胞的增殖能力下降,且EPA处理组的MDA-MB-231细胞数明显多于阴性对照组(P＜0.05).结论:CYP1B1基因沉默能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,逆转EPA对细胞增殖的抑制作用.EPA可能通过调节CYP1B1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖.     

Cox-2在乳腺癌多药耐药中的作用及其与P-gp、MRP1的关系

目的通过检测环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,Cox-2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的对化疗药物敏感性及其对P-gp、MRP1表达的影响,探讨Cox-2在乳腺癌细胞肿瘤多药耐药（multidrug resistance,MDR）中的作用及其作用机制。方法 （1）MTT法检测丝裂霉素（MMC）及其与不同浓度Cox-2抑制剂nimesulide联合作用对MDA-MB-231的抑制作用（IC50）;（2）流式细胞术检测不同浓度nimesulide作用后,细胞凋亡率的变化及Cox-2、P-gp、MRP1的表达情况。结果 （1）以25、50μmol/L的nimesulide与MMC联合作用,MDA-MB-231细胞的IC50值（5.89±0.66、3.31±0.30）小于MMC单独作用的IC50值（8.59±1.16）且呈剂量依赖性,差异有统计学意义;（2）nimesulide可诱导细胞凋亡,且随着浓度的增加,凋亡率也随之增加（0.13±0.15至29.2±0.95）,差异有统计学意义;（3）25、50μmol/L nimesulide作用于MDA-MB-231细胞后,Cox-2、P-gp、MRP1的表达值均下降。结论 nimesulide能增加乳腺癌细胞株MDA-MB-231对化疗的敏感性,诱导细胞凋亡;Cox-2参与肿瘤多药耐药（MDR）,且可能通过影响P-gp、MRP1的表达来实现。     

FGFR1抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究FGFR1(成纤维生长因子受体1)抑制剂Ponatinib对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响以及机制.方法:依据前期Western Blot结果筛选出实验组和对照组,用不同浓度Ponatinib处理人乳腺癌细胞株实验组和对照组.CCK-8法检测乳腺癌细胞增殖抑制率;流式细胞术检测乳腺癌细胞凋亡的影响;WesternBlot法检测Poantinib对FGFR1及其下游通路及凋亡相关蛋白的影响.结果:依据前期Western Blot结果,选取不表达FGFR1的MCF-7为对照组细胞,高表达FGFR1的MDA-MB-231、BT-549为实验组细胞.CCK-8结果及Annexin V-APC/7-AAD法结合流式细胞仪检测结果显示:Ponatinib呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖抑制和凋亡,对MCF-7细胞也有一定的增殖抑制和诱导凋亡作用,实验组细胞的增殖抑制率及凋亡率较对照组细胞高.Western Blot结果显示:MDA-MB-231、BT-549细胞中,p-FGFR1、p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量均明显下调;Bcl-2、Mcl-1表达量下调,Bak表达量上调(BT-549中Bak、Bax表达量均上调).MCF-7细胞中,p-Stat5、p-PLCγ1蛋白表达量下调.结论:Ponatinib抑制MDA-MB-231、BT-549细胞增殖可能与下调p-FGFR1,进而下调p-Stat5、p-PLCy1有关,促进细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2、Mcl-1,上调Bak有关.     

miR-340对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的：既往研究表明,微小RNA-340(miR-340)能负性调控多种肿瘤的进展,但其在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的研究较少,本研究旨在探讨miR-340对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和凋亡的作用。方法：利用脂质体LipofectamineTM2000将pre-miR-340或anti-miR-340瞬时转染至乳腺癌MDA-MB231细胞,通过RT-PCR检测miR-340 mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测cleaved-caspase-3蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：Pre-miR-340增加了MDA-MB231细胞中miR-340表达,同时增加cleaved-caspase-3蛋白表达、抑制MDA-MB231细胞增殖并促进其凋亡。而anti-miR-340抑制了MDAMB231细胞中miR-340表达,并且抑制cleaved-caspase-3蛋白表达,促进了MDA-MB231细胞增殖,抑制了MDAMB231细胞的凋亡。结论：miR-340转染后能上调MDA-MB231细胞中cleaved-caspase-3蛋白的表达从而抑制细胞增殖,促进其凋亡。     

Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响

目的：研究环靶明（cyclopamine）抑制Sonic Hedgehog（SHH）信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法：抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组（231组）和转染LKB1基因的MDA-MB-231（LKB1组）两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 ：在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 ：抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的观察雌激素受体β1（ERβ1）被阻断后对Bax和Bcl-2表达的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法,将针对人ERβl基因的siRNA转染人类乳腺癌细胞株MDA—MB-231。分别用Real time-PCR、Western Blot检测ERβ1被干扰前后细胞中ERβ1、Bcl-2、Bax等基因mRNA和蛋白表达水平的变化;通过细胞增殖曲线观察ERβ1基因被干扰后细胞增殖活性的变化;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。计量资料的比较采用t检验或单因素方差分析。结果RNA干扰技术阻断乳腺癌MDA—MB-231细胞ERβ1基因的表达后,ERβ1 mRNA和蛋白水平显著下降（P〈0．05）,生长曲线显示细胞增殖能力明显增强（P〈0．05）;pSilencer—ERβ1转染组细胞的Bax基因mRNA及蛋白水平显著下降（P〈0．01）,Bcl-2基因的表达未发生变化,Bcl-2／Bax比值明显上升;pSilencer-ERβ1转染组细胞凋亡率较未转染组明显减少（t=6．22,P=0．00）。结论ERβ1可通过调控细胞凋亡相关基因Bax而促进细胞的凋亡,是ERβ1抑制细胞增殖的原因之一。     

过表达lncRNA LINC00886靶向调控miR-451a影响乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为

目的:探究过表达长链非编码RNA（lncRNA）LINC00886通过调控微小RNA-451a（miR-451a）对乳腺癌（BC）MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法:荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人乳腺上皮细胞系（MCF-12A）和4种BC细胞系（HCC1937、SUM159、SK-BR-3和MDA-MB-231）中lncRNA LINC00886、miR-451a表达。将MDA-MB-231细胞分为对照组、LINC00886-NC组、LINC00886组、LINC00886+miR-NC组、LINC00886+miR-451a组。qRT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中lncRNA LINC00886、miR-451a表达水平;克隆形成实验和EdU染色检测MDA-MB-231细胞增殖能力;流式细胞术、Transwell小室实验、划痕愈合实验分别用来检测MDA-MB-231细胞凋亡、侵袭、迁移;蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测lncRNA LINC00886与miR-451a的靶向关系。结果:与人乳腺上皮细胞MCF-12A相比,BC细胞系中lncRNA LINC00886表达水平降低,miR-451a表达水平升高（P＜0.05）;过表达lncRNA LINC00886可升高MDA-MB-231细胞凋亡率、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达,降低miR-451a表达、集落形成数、EdU阳性细胞百分比、侵袭细胞数、迁移率以及PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）;上调miR-451a表达可减弱lncRNA LINC00886过表达对MDA-MB-231细胞的影响（P＜0.05）;lncRNA LINC00886可靶向调控miR-451a表达。结论:过表达lncRNA LINC00886可通过靶向抑制miR-451a表达促进MDA-MB-231细胞凋亡并抑制MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移。     

姜黄素对三阴性乳腺癌细胞系药物敏感性的影响及其相关机制探讨

目的:研究姜黄素对三阴性乳腺癌细胞系药物敏感性的影响及其相关机制。方法:姜黄素作用三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后,MTT法检测姜黄素药物毒性;应用Hoechst33342染色及FCM观察姜黄素联合表柔比星对细胞凋亡及细胞周期的影响,应用Transwell实验检测姜黄素对细胞侵袭能力的影响;应用 RT-PCR、Westen blot检测姜黄素对癌基因PTN和凋亡相关基因caspase-9表达的影响。结果:姜黄素能增强表柔比星对MDA-MB-231细胞的促凋亡作用及细胞周期阻滞;Transwell结果显示姜黄素可抑制MDA-MB-231细胞侵袭,这一作用可能是通过下调PTN的表达及促进凋亡相关基因caspase-9的激活,促进了细胞的凋亡。结论:姜黄素能够通过抑制癌基因PTN的表达及上调凋亡相关基因caspase-9活性,对三阴性乳腺癌细胞起到了药物增敏作用。     

Indole-3-carbinol-induced modulation of NF-κB signalling is breast cancer cell-specific and does not correlate with cell death

Indole-3-carbinol (I3C), a dietary chemopreventive compound, induces cell death in human breast cancer cells by modulating activities of Src and epidermal growth factor receptor (EGFR). The effect of I3C on NF-kappaB, constitutively activated in breast cancer cells, was investigated. Nuclear extracts of MDA-MB-468, MDA-MB-231 and HBL100 cells contained all of the Rel proteins with similar expression patterns in the latter two. The level of NF-kappaB-regulated reporter gene expression was in the order HBL100 < MDA-MB-468 < MDA-MB-231. Upstream inhibition, using PI3K, EGFR or IKKbeta inhibitors, resulted in cell-specific effects on expression of the NF-kappaB-regulated reporter gene and endogenous genes Bcl-xL, IkappaBalpha and IL-6, as well as on cell viability. The expression patterns of Rel and several NF-kappaB-regulated genes and the response to LY249002 in MDA-MB-468 cells contrasted with those in other cells. I3C induced NF-kappaB-regulated reporter gene expression at 12 h in MDA-MB-468 cells. Conversely, it was reduced at 24 h in HBL100 cells. I3C treatment for 6 h alone or in combination with TNFalpha induced NF-kappaB-regulated reporter gene expression, detected 5 h later, in MDA-MB-468, but not HBL100 cells. I3C induced NF-kappaB p65/p50 DNA binding at 6.5 h, preceded by association of IKKbeta with the Src/EGFR complex and increased phospho-IkappaBalpha in MDA-MB468 cells. TNFalpha increased I3C-induced apoptosis in MDA-MB-468 and MDA-MB-231 cells. It also induced apoptosis, enhanced by I3C, in HBL100 cells. Hence, regulation of constitutive NF-kappaB was cell-specific. I3C influenced the NF-kappaB pathway in a cell-specific manner, which was not related to apoptosis. However, the combination of I3C and TNFalpha increased apoptosis in all cell lines.     

雌激素受体β1上调p21基因表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的将雌激素受体(ER)β1真核表达质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对p21基因表达和细胞增殖能力的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化;分别用实时聚合酶连锁反应(RT-PCR)、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、p21mRNA和蛋白表达的变化;细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。统计分析采用t检验和单因素方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、p21mRNA和p21蛋白水平明显增强(P0.010),细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率从1.4%升至6.14%(t=-7.960,P=0.001)。结论 ERβ1可以通过上调p21基因抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。