睾丸蛋白聚糖1对胆囊癌细胞生长凋亡的影响及机制

目的研究睾丸蛋白聚糖(SPOCK)1对胆囊癌细胞生长、凋亡影响及机制。方法胆囊癌细胞GBC-SD中分别转染SPOCK1 siRNA和siRNA control,记为干扰组和阴性组,同时以不做处理的GBC-SD细胞作为对照组。Real time PCR和Western印迹法分别测定转染后的各组胆囊癌细胞中SPOCK1的表达水平,噻唑蓝(MTT)测定各组细胞增殖,克隆形成实验测定各组细胞克隆能力,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Western印迹测定各组细胞中信号转导与转录因子(STAT)3、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、磷酸化的STAT(p-STAT)3蛋白水平。结果阴性组胆囊癌细胞中的SPOCK1 mRNA和蛋白水平、细胞A值、细胞克隆形成率、凋亡率及STAT3、Cleaved Caspase-3、p-STAT3蛋白水平与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。干扰组较对照组胆囊癌细胞中的SPOCK1 mRNA和蛋白水平明显降低,细胞A值和克隆形成率也明显下降,细胞凋亡率明显升高,细胞内的Cleaved Caspase-3水平明显升高,p-STAT3蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论 SPOCK1下调可以抑制胆囊癌细胞生长,诱导Caspase-3介导的细胞凋亡,其作用机制可能与抑制STAT3信号通路的激活有关。     

Smad3对高糖环境下足细胞凋亡的影响

目的探讨果蝇Mad基因3哺乳动物类似基因(Smad3)对高糖环境下足细胞凋亡的影响。方法足细胞分为对照组、高糖组、干扰组,对照组、高糖组在实验开始前转染siRNA control,干扰组转染Smad3 siRNA。高糖组、干扰组用含有25 mmol/L的D葡萄糖细胞培养液培养,对照组用含有5 mmol/L的D葡萄糖细胞培养液培养。Western印迹检测Smad3、磷酸化的Smad3(p-Smad3)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl/白血病-x基因长片段(Bcl-xl)水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果高糖组细胞中Smad3水平与对照组相比无明显差异(P>0.05),而p-Smad3水平明显高于对照组(P<0.05)。干扰组细胞中Smad3、p-Smad3水平均明显低于高糖组(P<0.05)。高糖组细胞凋亡率明显高于对照组,干扰组明显低于高糖组(均P<0.05)。高糖组Cleaved Caspase-3、Bax水平明显高于对照组,Bcl-xl水平明显低于对照组(均P<0.05),干扰组Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显低于高糖组,Bcl-xl水平明显高于高糖组(均P<0.05)。结论高糖环境下,足细胞中Smad3磷酸化水平升高,细胞凋亡增多,而下调Smad3可以抑制高糖诱导的足细胞凋亡,抑制Cleaved Caspase-3、Bax表达,促进Bcl-xl表达。     

ANXA2 siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及ROS水平影响研究

目的探讨膜联蛋白A2(ANXA2) siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及活性氧(ROS)水平影响。方法以非小细胞肺癌细胞株A549为探讨对象,在细胞内转染ANXA2 siRNA和siRNA阴性对照,用qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达,流式细胞术测定A549细胞凋亡,Western blot测定A549细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,试剂盒测定A549细胞中己糖激酶(HK)活性、丙酮酸激酶(PK)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法测定ROS含量,生物发光法测定三磷酸腺苷(ATP)含量。结果 ANXA2 siRNA可以下调A549细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达水平。A549细胞转染ANXA2 siRNA后凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平表达上调,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性降低,ROS含量增加,ATP含量降低,与没有转染的A549细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。A549细胞转染siRNA阴性对照后细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平没有变化,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性也没有变化,细胞中ROS和ATP含量也没有变化,与没有转染的A549细胞比较,差异没有统计学意义(P 0. 05)。结论下调ANXA2细胞中ROS水平诱导非小细胞肺癌细胞凋亡并抑制细胞能量代谢。     

PAK6基因对人乳腺癌放疗敏感性及细胞凋亡影响及机制

目的探讨P21激活的蛋白激酶(PAK)6基因对乳腺癌细胞放疗敏感性及细胞凋亡的影响。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-468为研究对象,细胞转染PAK6小干扰RNA(PAK6 siRNA组)和阴性对照序列(siRNA对照组),qRT-PCR和Western印迹检测转染效果。流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放疗敏感性,Western印迹检测细胞中β-连环蛋白(catenin)、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3表达水平。结果 siRNA对照组PAK6mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率及细胞中β-catenin、c-myc、酶切Caspase-3蛋白水平与未转染组相比差异无统计学意义(P0.05)。PAK6 siRNA组PAK6 mRNA和蛋白水平均明显低于未转染组,细胞凋亡率及细胞中酶切Caspase-3蛋白水平明显高于未转染组,细胞中β-catenin、c-myc蛋白水平明显低于未转染组(P0.01)。PAK6 siRNA组放疗敏感性较未转染组显著增加,增敏比为:1.896。结论干扰PAK6表达能够促进乳腺癌细胞凋亡,增加乳腺癌细胞放疗敏感性,作用机制可能与Wnt信号通路及酶切Caspase-3水平有关。     

miR-23b通过MAPK信号通路对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究microRNA(miR)-23b对H_2O_2诱导的人血管内皮细胞(HUVECs)损伤中的保护作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法体外培养HUVECs,利用细胞转染法对HUVECs转染miR-23b mimic,同时转染miR-23b mimic阳性对照作为对照,分别对转染的细胞用100μmol/L H_2O_2诱导造成HUVECs氧化应激损伤,qRT-PCR法检测细胞中miR-23b水平,流式细胞术检测HUVECs凋亡情况,Western印迹检测细胞中MAPKs信号通路中p38-MAPK、磷酸化(p-) p38-MAPK(p-p38)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,并测定细胞中丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。用MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs,同样的方法检测细胞中p38-MAPK、p-p38、Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及细胞中MDA、SOD、LDH活性。结果转染miR-23b-mimic后细胞中miR-23b的表达水平明显升高,与对照组差异具有统计学意义(P<0. 05)。转染后经H_2O_2处理的HUVECs miR-23b水平显著升高,细胞凋亡率明显降低,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平降低,细胞中p38-MAPK、p-p38的表达下调,SOD活性降低,MDA含量增加,LDH活性升高,与转染对照经H_2O_2处理的HUVECs相比,差异具有统计学意义(P<0. 05)。MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理后,HUVECs中p38-MAPK和p-p38表达升高,SOD活性升高,MDA含量减少,LDH活性降低,与上调miR-23b的H_2O_2诱导的HUVECs相比,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论上调miR-23b可减少H_2O_2诱导的HUVECs凋亡,减少对细胞的损伤,对H_2O_2诱导的HUVECs起到保护作用,其作用机制与抑制MAPK信号通路的激活有关。     

PBX3基因调控p38MAPK信号对肝癌细胞生长及5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因(PBX)3基因对肝癌细胞活力、凋亡及5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702为对照细胞,Western印迹法检测肝癌Huh7、HepG2、MHCC97H和SMMC7721细胞中PBX3的蛋白表达。以LipofectamineTM2000为载体,参照其转染说明将设计合成的PBX3的特异性siRNA(si-PBX3组)及阴性对照siRNA(NC组)转染SMMC7721细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测转染后的细胞PBX3的蛋白表达。SMMC7721细胞分为NC组、si-PBX3组、5-FU组和si-PBX3+5-FU组,细胞处理48 h,噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测4组细胞活力和凋亡率。Western印迹检测细胞增殖核抗原(PCNA)、Bax、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和p-p38MAPK的蛋白表达。结果 PBX3在肝癌细胞中的蛋白表达均显著高于在HL-7702细胞(P0.05)。与空白对照组相比,si-PBX3组细胞中PBX3蛋白表达显著降低(P0.05)。与NC组相比,si-PBX3组和5-FU组细胞活力及p-p38MAPK、PCNA蛋白表达水平均显著降低,而细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平均显著升高(P0.05);si-PBX3+5-FU组细胞活力及PCNA和p-p38MAPK蛋白表达均显著低于si-PBX3组和5-FU组,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达均显著高于si-PBX3组和5-FU组(P0.05)。结论抑制PBX3基因表达可降低肝癌细胞活力,诱导细胞凋亡,增强肝癌5-FU化疗敏感性,机制可能与下调p38MAPK信号通路有关。     

Caspase-3抑制剂联合葛根素对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力及磷酸化信号转导与转录因子表达的影响

目的探讨含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3抑制剂联合葛根素对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力及磷酸化信号转导与转录因子(p-STAT)3表达影响。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环细胞,用白细胞介素(IL)-1β诱导颈椎间盘纤维环细胞,用葛根素、Caspase-3抑制剂、葛根素联合Caspase-3抑制剂分别处理细胞,Western印迹法检测细胞中酶切Caspase-3、信号转导与转录因子(STAT)3、p-STAT3表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 IL-1β作用后的颈椎间盘纤维环细胞光密度值(OD值)由原来的(1.12±0.13)降至(0.63±0.07),细胞凋亡率从(3.15±0.36)%升至(39.54±1.69)%。葛根素和Caspase-3抑制剂单独作用后的细胞OD值分别升至(0.79±0.05)、(0.85±0.07),而细胞凋亡率分别降至(22.47±1.32)%、(20.84±2.01)%;葛根素和Caspase-3抑制剂联合使用后细胞OD值升到(1.05±0.11),细胞凋亡率降为(14.32±1.12)%。葛根素、Caspase-3抑制剂单独作用或者是联合使用后细胞中p-STAT3/STAT3水平较模型组明显下降,并且二者联合使用后p-STAT3/STAT3水平下降最多。结论 Caspase-3抑制剂、葛根素能够降低IL-1β对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力抑制作用,抑制IL-1β诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,且二者联合使用效果更明显,STAT3可能是其作用机制之一。     

SB431542对高糖环境中小鼠足细胞Cdk5/p35表达的影响

目的应用SB431542及Roscovitine处理高糖培养的足细胞,观察抑制转化生长因子(TGF)-β1通路对高糖培养足细胞中Cdk5/p35表达的影响及抑制Cdk5激酶活性对高糖和TGF-β1诱导足细胞凋亡的影响。方法采用不同浓度SB431542(0.1,1.0,10μmol/L)处理高糖培养的足细胞,Western印迹法及RT-PCR技术检测各处理组Cdk5及p35蛋白和mRNA的表达变化情况。应用流式细胞术检测Roscovitine对高糖及TGF-β1刺激足细胞凋亡的影响。结果高糖(HG组)Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平明显增高,显著高于正常血糖组(NG)组和甘露醇组(M组)(P0.05),并且呈时间依赖性升高。加入SB431542后,高糖培养导致的足细胞内Smad-2蛋白磷酸化水平明显降低。同时,HG+SB431542组足细胞内Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平呈浓度依赖性显著降低,明显低于HG组(P0.05)。加入Roscovitine后,高糖及TGF-β1诱导足细胞的足细胞凋亡水平显著下降(P0.05)。结论高糖可能通过活化TGF-β1通路上调Cdk5/p35表达从而诱导足细胞凋亡。     

lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的 探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法 将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mR...     

SOX9对肺腺癌细胞生长影响及机制研究

目的性别决定区Y框蛋白9(SOX9)对肺腺癌细胞生长的影响及机制研究。方法肺腺癌细胞A549转染SOX9小干扰RNA1和小干扰RNA2,同时转染小干扰RNA阴性对照,qRT-PCR和Western blot检测细胞中的SOX9 mRNA和蛋白,筛选干扰效率较高的小干扰RNA,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc蛋白水平。结果转染SOX9小干扰RNA1和小干扰RNA2后的A549细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平均明显低于没有转染的细胞(P 0. 05),并且转染SOX9小干扰RNA1后的细胞SOX9 mRNA和蛋白水平下调更多,而转染小干扰RNA阴性对照的细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平与没有转染的细胞相比差异没有统计学意义(P 0. 05),后续选用转染SOX9小干扰RNA1后的A549细胞。下调SOX9表达后的A549细胞增殖活性较没有转染的细胞相比明显降低(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9水平升高(P0. 05),β-catenin、c-myc水平降低(P 0. 05)。结论下调SOX9抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,促进细胞中Caspase-3、Caspase-9活化,抑制细胞中Wnt/β-catenin信号通路激活。     

PHLPP1对结直肠癌细胞生长抑制及细胞周期阻滞的作用

目的探讨PHLPP1对结直肠癌细胞生长和细胞周期的影响。方法以荧光定量PCR和Western印迹方法检测结直肠癌细胞HT29、Lovo、SW480和人正常结肠上皮细胞FHC中PHLPP1表达水平。在结直肠癌细胞中转染pcDNA3.1-PHLPP1,筛选稳定转染的细胞株用荧光定量PCR和Western印迹方法测定细胞中PHLPP1水平。MTT测定结直肠癌细胞增殖情况,PI单染法测定结直肠癌细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测结直肠癌细胞凋亡情况,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞周期依赖性蛋白激酶(Cdk)4和凋亡蛋白活化型Caspase-3、活化型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)表达水平。结果 PHLPP1表达水平由高到低依次为:FHCSW480HT29Lovo,选用Lovo细胞做后续实验。pcDNA3.1-PHLPP1转染可以上调结直肠癌细胞中PHLPP1表达水平。高表达PHLPP1的结直肠癌细胞的增殖能力降低,细胞G0/G1期比例升高,细胞中CyclinD1、Cdk4蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3、活化型Caspase-9蛋白水平也升高。结论 PHLPP1在结直肠癌细胞中表达下调,上调其表达可以将结直肠癌细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导结直肠癌细胞凋亡,降低结直肠癌细胞增殖能力。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子3表达的影响

目的探讨氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子3(STAT3)及STAT3 mRNA表达的影响。方法30只大鼠随机分成正常对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组(每日灌胃给予氯沙坦40mg／kg，共2周)。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型，采用免疫组化和Western印迹检测磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达，Western印迹检测STAT3蛋白表达，半定量RT—PCR检测STAT3 mRNA的表达。结果糖尿病组肾小球STAT3、p-STAT3及STAT3 mRNA表达较正常对照组明显增强；氯沙坦治疗组p-STAT3表达较糖尿病组降低，但对STAT3蛋白及STAT3 mRNA的表达无明显影响。结论氯沙坦的肾脏保护作用可能是部分通过影响STAT3磷酸化，抑制信号通道而发挥作用。     

波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法将INS-1细胞随机分为三组。正常对照组(NG):含5.5 mmol/L葡萄糖;持续高糖组(SHG):含33.3 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG):含5.5 mmol/L或33.3 mmol/L葡萄糖,每24 h交替换液1次,均培养3 d。3 d后检测各组INS-1细胞活性及凋亡百分率,胰岛素分泌量,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及胰岛素(insulin)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)mRNA表达水平。结果与NG组相比,SHG组与IHG组凋亡率均明显升高,细胞活性明显降低,Bax、CytC及Caspase-3表达明显增强,胰岛素分泌量及insulin、PDX-1 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.01);与SHG组相比,IHG组细胞活性及胰岛素分泌量明显降低,凋亡率及Caspase-3明显增加(P均<0.01),Bax、CytC表达水平与insulin及PDX-1 mRNA表达水平均未见统计学差异。结论波动性高糖能导致胰岛细胞凋亡增加和功能障碍,其机制可能与上调Bax、CytC、Caspase-3及降低insulin与PDX-1基因表达等相关。     

FoxO3a对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究叉头框转录因子O3a(FoxO3a)对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法胆管癌细胞RBE中转染FoxO3a过表达载体,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中FoxO3a mRNA和蛋白水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果转染FoxO3a过表达载体后,RBE细胞中FoxO3a表达水平明显高于未转染的RBE细胞(P0.05),而转染对照载体的RBE细胞中FoxO3a表达水平与未转染的细胞相比,差异无统计学意义(P0.05)。转染FoxO3a过表达载体后RBE细胞A值从0.73±0.12降低至0.52±0.04,细胞凋亡率从(8.36±0.68)%升高至(25.62±2.52)%,细胞中Cleaved Caspase-3水平也升高,β-catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白水平降低,与未转染的细胞相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论 FoxO3a表达上调后可以抑制胆管癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,增加Cleaved Caspase-3的活化水平,抑制Wnt信号通路激活。     

JAK/STAT信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的观察JAK/STAT信号途径对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和JAK抑制剂AG490干预,Western印迹检测α-SMA、E-Cadherin及STAT1、STAT3、p-STAT1和p-STAT3的表达;ELISA法测定上清液中TGF-β1、I型胶原的分泌,RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调;E-Cadherin表达明显下调;TGF-β1mRNA表达增加;上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原增加。AG490明显抑制α-SMA表达升高,减轻E-Cadherin表达;降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK/STAT信号途径可能参与高糖诱导HKC转分化。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

Toll样受体9在嘌呤霉素氨基核苷导致足细胞损伤中的作用

目的:我们发现Toll样受体9(TLR9)在嘌呤霉素氨基核苷(PAN)处理的足细胞中上调。本研究试图确定TLR9是否参与PAN对足细胞的损伤作用。方法:(1)用PAN诱导体外培养的足细胞损伤模型,以定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测足细胞TLR9及该通路其他组分的变化。同时,利用流式细胞术检查足细胞凋亡情况。用PAN诱导大鼠足细胞损伤,以qRT-PCR和免疫组化法检测大鼠肾小球中TLR9表达变化。(2)将TLR9干扰RNA(siRNA)表达质粒和对照质粒分别转染足细胞,用Western Blot检测比较核因子κB(NF-κB)p65和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化、qRT-PCR比较白细胞介素12(IL-12)的mRNA变化,流式细胞仪比较足细胞凋亡情况。结果:(1)与对照组相比,经PAN刺激的足细胞,其TLR9、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、IL-12的mRNA水平明显上调,磷酸化p65和磷酸化p38显著增加,细胞凋亡增加。PAN大鼠模型的肾小球中TLR9 mRNA表达上调,免疫组化显示TLR9蛋白显著增加。(2)足细胞转染TLR9干扰质粒后,TLR9的mRNA和蛋白表达水平降低;而经PAN处理后,该细胞与转染对照siRNA的细胞相比,其磷酸化p65和磷酸化p38的水平降低,IL-12 mRNA表达降低,足细胞凋亡减少。结论:TLR9信号通路参与了PAN诱导的足细胞损伤过程,其机制可能是促进炎症因子产生及p38 MAPK依赖的细胞凋亡。     

姜黄素通过调控JAK2/STAT3信号通路对高糖环境下心肌细胞生物学特性的影响

目的探讨姜黄素对高糖环境下的心肌细胞生物学特性影响。方法以心肌细胞HCM为研究对象,分别用高糖和低糖细胞生长液培养心肌细胞,同时在细胞生长液中加入姜黄素。MTT检测作用24 h、48 h、72 h的细胞增殖情况。流式细胞仪检测48 h的心肌细胞凋亡情况。DCFH-DA探针检测心肌细胞内活性氧水平。Western印迹检测相关蛋白表达水平。结果高糖组心肌细胞增殖与对照组相比明显受到抑制(P<0.01)。实验组中心肌细胞增殖情况明显高于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞中Bcl-2的表达水平明显低于对照组(P<0.01);高糖组心肌细胞中Bax的表达水平明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞中Bcl-2的表达水平明显高于高糖组(P<0.01);实验组心肌细胞中Bax的表达水平明显低于高糖组(P<0.01)。高糖组心肌细胞中荧光强度明显高于对照组(P<0.01);实验组心肌细胞中荧光强度明显低于高糖组(P<0.01)。对照组、高糖组和实验组心肌细胞中JAK2、STAT3表达水平没有明显变化。高糖组心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3表达水平显著低于对照组(P<0.01)。实验组心肌细胞中p-JAK2、p-STAT3表达水平明显高于高糖组(P<0.01)。结论高糖对心肌细胞增殖具有抑制作用,对细胞凋亡具有促进作用。姜黄素可以通过作用于JAK2/STAT3信号通路改善高糖环境下的心肌细胞损伤。     

天麻素对缺氧缺糖星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的探讨天麻素对缺氧缺糖星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法分离培养乳鼠星形胶质细胞,建立缺氧缺糖星形胶质细胞模型,同时在缺氧缺糖处理前给予天麻素预处理,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测LDH的漏出率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Western印迹检测胞质中细胞色素(Cyt)C蛋白水平。结果缺氧缺糖处理后的星形胶质细胞中LDH漏出率显著升高,细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡显著增多,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著升高,细胞线粒体膜电位显著降低,胞质中CytC蛋白水平显著升高(均P0.05)。天麻素预处理后的缺氧缺糖星形胶质细胞增殖活性升高,细胞LDH漏出率显著降低,细胞凋亡显著减少,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著下降,细胞线粒体膜电位显著升高,CytC蛋白水平显著降低,与未经天麻素处理的星形胶质细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论天麻素能降低缺氧缺糖星形胶质细胞氧化损伤,减少细胞凋亡。     

TGIF2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响

目的探讨同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2对高糖诱导的血管内皮细胞生物学行为的影响。方法将培养的人脐静脉内皮(HUVECs)细胞分为对照组(未处理)、高糖组(葡萄糖处理)、空载体阴性对照质粒(NC)高糖组(葡萄糖+转染NC质粒)和TGIF2高糖组(葡萄糖+转染psiC HECK2-TGIF2 3'-UTR质粒),处理24 h和48 h后,以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖;处理48 h后,以RT-PCR和Western印迹检测各组细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达,Transwell法检测细胞迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与对照组相比,高糖组、NC高糖组和TGIF2高糖组HUVECs细胞中TGIF2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、迁移能力均显著降低,凋亡率显著升高(P0.05);与高糖组相比,TGIF2高糖组中TGIF2 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移能力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论高糖诱导下,TGIF2在血管内皮细胞中表达下降,上调其表达对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡具有一定的保护作用。