BAFF-R—IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响

目的研究BAFF—R—IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠B淋巴细胞的影响。方法体外观察BAFF-R—IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的B细胞活性的影响;100ul的PBS、200ug人IgG4和100ug BAFF-R—IgG4rout融合蛋白分别经腹腔注射10周龄雄性BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周。分别检测狼疮鼠外用血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220^＋CD5^-、CD3^＋CD4^-、CD8^＋T和CD3^＋、CD4^＋、CD8^-T细胞的表达以及狼疮鼠的存活率。结果BAFF-R—IgG4mut融合蛋白组外周血BAFF以及外周血、脾脏组织中B220＋CD5-细胞较对照组下降（P〈0．01）,实验组狼疮鼠存活率较对照组延长（P〈0．01）。结论BAFF-R—IgG4mut融合蛋白可抑制BXSB粮寤鼠B细胞活性．     

不同体质MRL/lpr狼疮鼠病情程度及Treg/Th17相关细胞因子表达

目的:区分MRL/lpr狼疮鼠体质,观察不同体质狼疮鼠病情程度及细胞因子水平的差异。方法:将12周龄MRL/lpr狼疮鼠按体质分为寒体组、常体组、热体组。16周龄时,采用CBB法酶标仪检测24 h尿蛋白;HE、PAS、PASM、MASSON染色后观察肾脏组织病理;双抗体夹心ABC-ELISA法检测不同组别狼疮鼠血清细胞因子(IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β1)水平。结果:16周龄时,寒体组MRL/lpr狼疮鼠24 h尿蛋白定量高于常体组和热体组(P0.05),寒体组肾脏组织病理表现相对严重;寒体组IL-6、TGF-β1表达水平高于常体组和热体组(P0.01),IL-10表达低于常体组和热体组(P0.01),热体组IL-23表达水平高于常体组和寒体组(P0.01),各组间IL-17表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:MRL/plr狼疮鼠存在体质差异,寒体组肾脏病变程度在3组中最为严重,不同体质狼疮鼠血清细胞因子水平存在差异。     

重组人BAFF对多发性骨髓瘤细胞BAFF-R表达调控的初步研究

目的 :研究多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中重组人B淋巴细胞刺激因子(recombinant human B lymphocyte stimulator,rh BAFF)对其特异性受体(B lymphocyte stimulator receptor,BAFF-R)基因、蛋白水平表达的影响;并进一步研究重组人BAFF与JNK信号通路之间的作用与BAFF-R之间的关系。方法:应用RT-PCR、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、细胞免疫荧光技术检测BAFF-R在MM细胞KM3中的表达、功能及调节;Western Blot分析BAFF/BAFF-R对NF-κB信号通路的激活情况。结果:细胞免疫荧光结果显示BAFF-R定位在KM3细胞的细胞膜上;重组人BAFF(50 ng/m L)能够促进BAFF-R m RNA和蛋白的表达;可溶性BAFF(50 ng/m L)促进p-JNK表达的上调,且随作用时间的延长而增加。结论 :重组人BAFF对BAFF-R表达有重要的影响,JNK信号通路可能参与了MM的发生发展过程。     

骨髓间充质干细胞输注对MRL/lpr狼疮鼠B淋巴细胞CXCR4表达的影响

目的：研究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）输注对狼疮鼠血浆C3、IgG浓度及B细胞、浆细胞表面CXCR4表达的影响,分析BMMSCs改善系统性红斑狼疮疾病活动的机制。方法：分离培养C57BL/6小鼠的BMMSCs,并对MRL/lpr 狼疮鼠进行尾静脉输注。实验分为C57BL/6组（C57BL/6小鼠未进行尾静脉输注）、MRL/lpr组（MRL/lpr鼠未进行尾静脉输注）、BMMSCs组（MRL/lpr鼠12周龄注射BMMSCs）和PBS 组（MRL/lpr鼠12周龄注射PBS）。在20周末取小鼠的外周血、骨髓、脾脏进行流式细胞分析,检测B细胞、浆细胞表面CXCR4表达;同时取4组血浆,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测C3、 IgG浓度。取小鼠肾脏组织行苏木精伊红（HE）染色。结果：① MRL/lpr组较C57BL/6组小鼠血浆C3浓度明显降低、IgG浓度明显增高（P均<0.01）;MRL/lpr组较C57BL/6组小鼠B细胞表面CXCR4的表达在外周血明显下降,在骨髓和脾脏明显升高（P均<0.01）;MRL/lpr组小鼠骨髓（P<0.05）及脾脏（P＜0.01）浆细胞表面CXCR4表达明显高于C57BL/6小鼠。② BMMSCs组较PBS组、MRL/lpr组C3浓度明显升高、IgG浓度明显降低（P均<0.01）; BMMSCs组较PBS组B细胞表面CXCR4表达在外周血明显增加（P<0.01）,在骨髓（P<0.01）和脾脏（P<0.05）明显下降, 较MRL/lpr组在骨髓和脾脏均明显下降（P均<0.01）。③ BMMSCs组较PBS组、MRL/lpr组浆细胞表面CXCR4表达在骨髓和脾脏均明显降低（P均<0.05）。④ 肾脏HE染色提示输注BMMSCs后狼疮鼠肾脏炎症改善。结论：BMMSCs输注可调节B细胞、浆细胞表面CXCR4的表达,改善MRL/lpr鼠病情活动指标。     

不同体质MRL/lpr狼疮鼠病情程度及卵巢激素水平的变化

目的:区分MRL/lpr狼疮鼠体质,并观察不同周龄狼疮鼠病情程度及卵巢激素水平变化。方法:将12周龄MRL/lpr小鼠按体质分为寒体组、热体组、常体组,各组分别随机分为A组和B组,每组10只。A组于12周龄时(发病前期)取材;B组于20周龄时(发病高峰期)取材。通过ELISA、放射免疫等检测方法,分别检测24 h尿蛋白、外周血ds-DNA及卵巢激素水平。结果:12周龄时,不同体质MRL/lpr狼疮小鼠24 h蛋白尿程度、外周血抗ds DNA抗体、卵巢孕酮(P)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平差异无统计学意义(P0.05),肾脏病理切片HE染色已显示出轻度损害。20周龄时,寒体组24 h蛋白尿程度、外周血抗ds DNA抗体、卵巢E2水平均低于常体组(P0.05),卵巢T、P、LH、FSH无体质差异(P0.05),肾脏病理切片HE染色显示出较为明显的肾脏病变,且寒体组肾损害表现较常体组及热体组轻微。与12周龄比较,20周龄常体组及热体组小鼠24 h蛋白尿程度、外周血抗ds DNA抗体水平均明显升高(P0.01),寒体组小鼠24 h蛋白尿程度、外周血抗ds DNA抗体水平变化无统计学意义(P0.05),不同体质组卵巢E2、T、LH、FSH均明显升高(P0.01),但P变化差异无统计学意义(P0.05)。结论:MRL/lpr狼疮鼠存在明显的体质差异;在发病高峰期,不同体质小鼠的发病程度及卵巢E2水平存在差别。     

MRL/lpr 鼠部分病理指标动态变化及SIGIRR表达与狼疮肾炎相关性研究

目的观察MRL／lpr鼠病理指标动态变化,研究MRL／lpr小鼠肾组织单个免疫球蛋白区白介1相关受体（single IgIL-1-related receptor,SIGIRR）的表达是否随病理分级加剧而变化,以提示TLR4／NF-κB通路是否参与了狼疮肾炎（iupus nephritis,LN）的发生发展。方法对照组C57BL／6小鼠和模型组MRL／lpr小鼠各12只,分别检测12、15、18、21周龄时小鼠胸腺指数、脾指数、尿蛋白,血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、抗核抗体（antinuclear antibodies,ANA）;对肾组织切片进行苏木素依红（hematoxylin and eosin,HE）和马松（Masson）染色,观察模型鼠狼疮肾炎发病情况,采用免疫印迹（westernblot）和免疫组化（immunohistochemistry,IHC）方法观察不同周龄小鼠肾脏SIGIRR的表达情况。结果MRL／lpr小鼠12、15、18、21周龄时与同龄C57BL／6鼠相比其尿蛋白水平随周龄增加而升高,血清尿素氮以及抗核抗体和对照组相比无明显差异,HE、Masson染色显示模型鼠从12周开始即表现出肾小球肾炎,血管周围炎细胞浸润,之后逐渐间质纤维化,肾小球系膜和基底膜增厚,甚至出现肾小球纤维化和硬化。Westernblot和IHC结果显示,21周龄时MRL／lpr小鼠肾组织SIGIRR蛋白表达增加,与同龄C57BL／6相比有显著性差异。结论SIGIRR蛋白表达随MRL／lpr小鼠狼疮肾炎加重而增加,其可能与TLR4／NF-κB（Toll-like receptor 4／nuclear factor-kappa B,Toll样受体4／核因子κB）通路相关。     

两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠血浆中B淋巴细胞刺激因子和IL-10表达的影响

目的 探讨两种中药方剂对MRL/lpr狼疮小鼠血浆中的B淋巴细胞刺激因子(Blys)、IL-10的影响,为中药及中西医结合治疗红斑狼疮提供实验和理论基础.方法 将34只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为6组.A组:中药方1组(清热凉血、祛风除湿方);B组:中药方2组(养阴清热活血、滋补肝肾方);C组:泼尼松组;D组:中药方1加泼尼松组;E组:中药方2加泼尼松组;F组:空白对照组.ELISA法测小鼠血浆中Blys、IL-10的含量.结果 各药物组治疗后的Blys水平均显著低于F组(P＜0.01).D、E组的Blys水平与A、B、C组、激素组差异有统计学意义(P＜0.01).A、B组与F组比较,IL-10水平差异无统计学意义(P＞0.05).D、E组IL-10水平与F组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)、与C组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 中药方剂与糖皮质激素均对MRL/lpr狼疮小鼠有治疗作用,中西医综合治疗疗效优于单纯使用中药或糖皮质激素,能显著降低Blys水平.     

人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4~＋T细胞增殖活性的影响

目的观察人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4＋T淋巴细胞增殖活性的影响。方法体外分离、纯化BXSB狼疮鼠脾脏CD4＋T细胞,流式细胞技术检测CD4＋T细胞BAFF-R表达,MTT法观察不同剂量BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的CD4＋T细胞增殖活性的影响。结果台盼蓝染色分离后的BXSB狼疮鼠脾脏CD4＋T细胞活性率为（93.6±3.2）%;流式细胞技术检测BXSB狼疮鼠脾脏CD4＋T细胞表达BAFF-R;100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml BAFF-R-IgG4mut蛋白作用于BAFF和CD3抗体刺激的CD4＋T细胞后,CD4＋T细胞增殖抑制率分别是56.24%、67.07%和75.45%,较单纯BAFF＋CD3抗体组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可体外抑制BXSB狼疮鼠CD4＋T细胞增殖活性。     

解毒祛瘀滋肾方干预TLR9信号通路对MRL/lpr小鼠肾脏保护作用

目的：基于对TLR9-MyD88-NF-κB通路的干预作用,阐明解毒祛瘀滋肾方对狼疮鼠肾脏的保护作用。方法：将30只MRL/lpr狼疮鼠随机分为模型对照组、泼尼松治疗组、中药组共3组,对各治疗组进行相应的药物治疗,疗程8周。采用HE染色法、PAS染色法、Masson染色法分别对MRL/lpr小鼠肾脏切片进行病理染色,观察比较3组小鼠病理变化及治疗效果;采用Real-time PCR法观察比较各组小鼠TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达量的差异。结果：与模型组比较,中药组能明显改善MRL/lpr小鼠的肾组织病理损伤。Real-time PCR法结果显示：中药组MRL/lpr小鼠的肾组织TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达均低于模型组（均为P<0.05）。结论：解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠肾脏具有保护作用,可对其病理变化产生影响,减轻其肾脏损害,延缓病程,并与解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠TLR-9-MyD88-NF-κB信号通路的抑制作用相关。     

信号传导和转录激活因子3及其蛋白抑制剂在狼疮小鼠肾组织中的表达

目的探讨信号传导和转录激活因子3(STAT3)及其蛋白抑制剂(PIAS3)在MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中的表达。方法以18周龄雌性MRL/lpr小鼠作为狼疮肾炎组,相同周龄的BALB/C小鼠作为正常对照组。分别取两组小鼠肾组织,应用荧光定量RT-PCR法检测STAT3和PIAS3 mRNA的表达,采用Western blot和免疫组织化学方法检测磷酸化STAT3(p-STAT3)和STAT3的蛋白表达,同时检测小鼠实验室指标以及肾脏组织病理的表现。结果 MRL/lpr小鼠尿蛋白、血尿素氮、血肌酐均高于BALB/C小鼠(P<0.05)。MRL/lpr小鼠肾脏组织病理主要表现为肾小球系膜细胞增生,肾小管间质炎症细胞浸润,而BALB/C小鼠肾小球、肾小管无异常。MRL/lpr小鼠肾组织STAT3 mRNA和p-STAT3蛋白的表达均较BALB/C小鼠升高(P<0.05),其PIAS3mRNA表达则较BALB/C小鼠明显降低(P<0.01),而两组小鼠STAT3总蛋白的表达无明显差别。结论 MRL/lpr小鼠肾组织STAT3 mRNA和p-STAT3蛋白的表达均高于对照组,而其PIAS3 mRNA表达低于对照组。     

MRL/lpr小鼠肾组织胸腺和活化调节趋化因子表达检测

目的研究胸腺和活化调节趋化因子(TARC)在红斑狼疮小鼠肾组织中的表达与作用。方法16周龄MRL/lpr小鼠和BALB/c小鼠各4只,比较两组小鼠24h尿蛋白,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和蛋白印迹的方法检测两组小鼠肾组织中TARC mRNA及蛋白表达情况。结果MRL/lpr小鼠24h尿蛋白高于BALB/c小鼠(P<0.05);MRL/lpr小鼠肾组织TARC mRNA表达较BALB/c小鼠明显升高(P<0.05);MRL/lpr小鼠肾组织中可检测出TARC蛋白条带,而BALB/c小鼠肾脏组织中未能测得。结论TARC在红斑狼疮小鼠肾脏组织中表达增高,并可能参与介导小鼠狼疮性肾炎的发病。     

甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用

目的 探讨甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮肾炎是否具有保护作用及其机制.方法 MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(20 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(40 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只.采用ELISA法检测各组小鼠血清中尿酸(UA)与肌酐(Cr)含量,各组小鼠血清及肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子水平;采用HE染色法检测肾脏病理改变;采用Western blot技术检测各组小鼠脾脏NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、NF-κB、p-IκBα、IκBα蛋白的表达.结果 甘草酸能显著降低血清尿酸、肌酐含量;减少血清及肾脏IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子表达,改善肾脏病理改变;并能显著抑制NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、p-IκBα表达.结论 甘草酸对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏起到保护作用.     

中药狼疮定方对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞凋亡和Bcl-2/Bax基因表达的影响

目的探讨中药狼疮定方对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞（PBLC）凋亡及其Bcl-2/BaxmRNA表达的影响。方法将80只MRL/lpr小鼠随机分为模型组、中药组、西药组和中西药组,分别以0.9%氯化钠溶液、狼疮定悬液、强的松混悬液、狼疮定悬液联合强的松混悬液灌胃;另取20只正常昆明小鼠以0.9%氯化钠溶液灌胃。连续饲养用药12周后取血,以梯度离心法分离外周血单个核细胞,培养48h后取PBLC悬液,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;另以RT-PCR法检测PBLC中Bcl-2/BaxmRNA的表达水平。结果正常组、中药组、西药组和中西药组PBLC培养0h和48h时凋亡率高于模型组（P〈0.05或0.01）,0h时西药组、正常组与中西药组的PBLC凋亡率无明显差异,但中药组和模型组凋亡率显著低于中西药组（P〈0.05）,48时中药组、模型组和西药组凋亡率明显低于中西药组（P〈0.05或0.01）;正常组、中药组和中西药组PBLC中Bcl-2/BaxmRNA比值水平均明显低于模型组和西药组（P〈0.05或0.01）。结论狼疮定方对MRL/lpr小鼠的PBLC凋亡率及其Bcl-2/Bax比值均可起到调节作用。     

MRL/lpr狼疮鼠骨TNF-α/NF-κB信号通路的表达

目的: 探讨系统性红斑狼疮小鼠(MRL/lpr)骨肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)/细胞核因子-κB p50 (nuclear factor-κB p50,NF-κB p50)信号通路的表达。方法: 选取C3He/HeJ小鼠(对照组)和MRL/lpr狼疮小鼠(狼疮组)各6只,饲养4个月后常规制备小鼠股骨组织切片,HE染色观察骨质情况,免疫组织化学染色检测TNF-α、NF-κB p50蛋白表达情况;密度梯度离心法分离和贴壁法筛选骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs),然后培养;免疫细胞化学染色观察BMMSCs中TNF-α、NF-κB p50表达情况。结果： 与对照组比较,狼疮组小鼠骨小梁松散,出现骨质疏松,股骨TNF-α和NF-κB p50蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01),BMMSCs中TNF-α和NF-κB p50蛋白表达亦升高(P<0.05或P<0.01)。结论：狼疮鼠骨TNF-α/NF-κB信号通路处于异常活化状态。     

解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4+T细胞DNA甲基化敏感基因表达的影响

目的:观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4~+T细胞DNA甲基化敏感基因白介素10(IL-10)、蛋白磷酸酶2Ac(protein phosphatase 2Ac,PP2Ac)、CD70表达水平的影响。方法:40只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为对照组和解毒祛瘀滋阴方中药组,分别予解毒祛瘀滋阴方中药和生理盐水灌胃8周。干预结束后,观察小鼠皮损及血清抗ds DNA抗体、C3浓度、尿蛋白水平变化;HE染色及荧光染色后观察肾脏病理改变;荧光定量PCR检测小鼠脾脏CD4~+T细胞甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,中药组小鼠血清抗ds DNA抗体、C3浓度和肾脏病理损伤明显改善,CD70、PP2Ac和IL-10的mRNA表达水平明显降低(P0.05)。结论:解毒祛瘀滋阴方具有对MRL/lpr狼疮鼠的治疗作用,其作用机制可能与其抑制下游甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10的过度表达有关。     

解毒祛瘀滋阴方对MRL／lpr小鼠粘附分子表达的影响

目的探讨解毒祛瘀滋阴方可能的作用机制。方法以MRL/lpr小鼠80只,分成4组采用RT—PCR技术检测各组肾组织ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平。结果解毒祛瘀滋阴方合用激素组ICAM-1和VCAM—1mRNA表达低于其他各组。结论解毒祛瘀滋阴方合用激素能有效降低MRL／lpr小鼠肾组织ICAM-1和VCAM—1mRNA表达水平。     

地塞米松对MRL/lpr狼疮小鼠认知功能的保护作用

目的：探讨地塞米松对MRL/lpr狼疮小鼠认知功能的影响。方法：MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr 组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只。采用 Morris水迷宫观察 各组小鼠认知功能和行为。检测各组小鼠血清、海马组织中炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介 素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)含量;检测各组小鼠海马组织中磷脂酰 肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/核因子-κB p65(nuclear factor-kappabinding p65,NF-κB p65)相关蛋白P-PI3K,P-Akt和磷酸化核转录因子κB抑制蛋白a(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa Ba,P-IκBa)及P-NF-κB p65的表达。免疫组织化学法观察各组小鼠海马区P-NF-κB p65阳性表达。结果：地塞米松能缓 解MRL/lpr狼疮小鼠认知功能障碍,降低血清及海马组织IL-6,IL-1β,TNF-α的表达;抑制 P-PI3K,P-Akt,P-IκBa和 P-NF-κB p65的表达。结论：地塞米松可能通过降低MRL/lpr狼疮小鼠海马区TNF-α和IL-1β水平,从而对其认知功能起 保护作用。