胶体金标记免疫层析法检测O:9型小肠结肠炎耶尔森菌

目的建立一种简便快速的胶体金标记免疫层析（GICA）条用于检测标O：9血清型小肠结肠炎耶尔森氏菌。方法采用柠檬酸三钠还原法制备肢体金颗粒，标记抗小肠结肠炎耶尔森菌单克隆抗体，以硝酸纤维膜作为抗小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体的包被载体，制成GICA检测条。被检小肠结肠炎耶尔森菌与检测卡上金标记抗体（Au-Ab）结合后，利用硝酸纤维膜的层析作用，与膜上的固相抗体结合形成可见的红色条带。结果GICA小肠结肠炎耶尔森菌检测条灵敏度可达10^4～10^5CFU／ml，与其他所选择肠杆菌科细菌均未发现交叉反应，仅与布鲁菌出现交叉。检测了50株O：9血清型小肠结肠炎耶尔森氏菌，符合率为100％。结论GICA小肠结肠炎耶尔森菌检测条对小肠结肠炎耶尔森菌特异性强；简便快速，不需任何仪器设备；结果易于判断，可望用于标本快速筛查。     

肠出血性大肠杆菌O157胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测方法用于食品样品中肠出血性大肠杆菌O157的快速筛查。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以抗EHEC O157 LPS单克隆抗体标记,以兔抗O157多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,利用双抗夹心法,制成O157胶体金免疫层析检测试纸条,并进行了特异性和敏感性试验。结果该试纸条仅与O157反应,与其他受试菌株均不反应。检测敏感性为106CFU/mL,对人工污染EHEC O157模拟牛肉样品增菌后检测,敏感性为56 CFU/g。结论成功研制出EHEC O157胶体金免疫层析试纸条,敏感性高,特异性强,检测速度快,10min可出结果,操作简便,可用于现场大量样品的检测。     

检测狂犬病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的 建立一种简易快速、适用于野外的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测动物脑或唾液中的狂犬病街毒抗原。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗狂犬病毒单抗。制成免疫层析测试条。样品中的狂犬病毒抗原与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果 GICA测试条只与狂犬病毒抗原有特异性反应，与乙型脑炎病毒、正常小鼠脑组织等无交叉反应。GICA与EIA比较检测了48份可疑狂犬病犬唾液样品，两法的符合率为88．2％。结论 GICA检测样品中的狂犬病毒抗原特异性强、灵敏度高、简便快速、无需仪器设备，对基层单位开展初步鉴定狂犬病毒样品工作而言。不失为一种有效的方法。     

胶体金免疫层析法诊断鼠疫的特异性试验

目的研究胶体金免疫层析法用于鼠疫快速诊断的特异性。方法采用胶体金免疫层析测试条和鼠疫反向间接血凝试验(RIHA)平行检测。结果检测鼠疫菌F1抗原具有很强的特异性,不与包括小肠结肠炎和假结核耶尔森等其他细菌发生交叉免疫反应。结论该方法简便、快速、敏感,适合现场鼠疫监测。     

吉林省耶尔森氏菌O∶3和O∶9血清型主要毒力基因分布调查

目的了解吉林省致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌血清型毒力基因的分布情况。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术进行基因检测。结果实验证实在吉林省分离到的主要流行血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因分布特征为:ail 、ystA 、ystB-、yadA 、virF 占60%;ail 、ystA 、ystB-、yadA-、virF-占26.2%;其他型占13.8%。结论血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因的分布主要为ail 、ystA 、ystB-、yadA 、virF 型,其次是ail 、ystA 、ystB-、yadA-、virF-型,其他型很有可能是非致病的菌株。     

胶体金免疫层析检测犬、猫抗狂犬病病毒IgG抗体的研究

目的建立检测犬、猫抗狂犬病病毒(RV)IgG抗体的胶体金免疫层析方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金用以标记SPA,同时将重组RVN蛋白、抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,制备一种检测犬、猫抗RVIgG抗体的胶体金检测卡,进行了特异性和灵敏度试验,并与ELISA同时检测临床样品、统计结果。结果 GICA试纸条检测灵敏度为0.5IU/mL,与犬瘟热病毒、犬细小病毒等阳性血清无交叉反应,并与ELISA相比,两者的符合率为94.6%。结论成功建立了检测犬、猫抗RVIgG抗体的通用型胶体金免疫层析方法 ,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,操作简便,可广泛应用于基层。     

快速诊断滴虫性阴道炎免疫层析试纸条的初步研制

目的 用胶体金标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体制备金标AP33 mAb,研制开发出一种能快速、简便、有效检测阴道毛滴虫感染的免疫层析（GICA）试纸条。方法 采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗阴道毛滴虫重组AP33单克隆抗体,选择最佳反应模式组装试纸条。用该试纸条检测滴虫性阴道炎患者及非滴虫性阴道炎患者白带中的靶抗原,鉴定方法的敏感性和特异性。结果 用制备的免疫层析试纸条检测重组AP33抗原的最低量为20 ng/ml,其中以单克隆抗体4A2为包被抗体、单克隆抗体4F8为金标抗体的试纸条检测效果最佳。以湿片法为标准,用该试纸条检测60例滴虫性阴道炎患者白带,敏感性为90.0%（54/60）;检测60例非滴虫性阴道炎患者白带,特异性为95.0%（57/60）。两法的总符合率为92.5%。结论 GICA检测阴道毛滴虫特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

小肠结肠炎耶尔森菌尿素酶基因多态性及尿素酶活性分析

目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌尿素酶基因的多态性以及不同致病力菌株尿素酶活性之间的关联性。方法 选取43株不同致病能力的小肠结肠炎耶尔森菌用PCR扩增尿素酶基因并进行序列测定。连同4株NCBI上尿素酶基因参考序列一起进行比对和构建聚类树。同时选取8株不同致病力的小肠结肠炎耶尔森菌进行尿素酶活性实验。 结果 在低致病性小肠结肠炎耶尔森菌中,全部的18株O∶3血清型菌株的尿素酶基因7个开放读码框(ureABCEFGD)的基因序列完全一致;在全部17株O∶9血清型菌株中,尿素酶基因7个开放读码框(ureABCEFGD)的基因序列完全一致的有16株,仅1株2/O∶9(NX1997-IE419)与其他血清型菌株的尿素酶基因序列不同;高致病性的O∶8血清型小肠结肠炎耶尔森菌以及非致病菌的尿素酶基因序列与低致病性O∶3、O∶9血清型菌株的尿素酶基因序列不同且各菌株之间基因序列差异也较大。尿素酶活性实验显示不同致病能力的小肠结肠炎耶尔森菌尿素酶活性存在多样性,无明显的规律发现。结论 低致病性O∶3、O∶9血清型的小肠结肠炎耶尔森菌的尿素酶基因分别表现出高度的保守性,NX1997-IE419的尿素酶基因可能是由O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌的尿素酶基因演变而来。高致病性的1B/O∶8小肠结肠炎耶尔森菌及非致病性小肠结肠炎的尿素酶基因相对不保守。尿素酶活性试验提示我们小肠结肠炎耶尔森菌的尿素酶活性大小与其致病性的强弱可能无关联。     

河南省2011-2013年小肠结肠炎耶尔森菌监测结果分析北大核心CSCD

目的了解河南省小肠结肠炎耶尔森菌的宿主分布、血清学及毒力基因情况。方法于2011—2013年采集腹泻病人粪便、各类家禽家畜粪便、苍蝇以及生熟肉制品涂抹标本,共6 057份,采用冷增菌方法进行目的菌分离。对不同宿主样本中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行系统生化鉴定、血清学分型和毒力基因PCR检测。结果 6 057份样本中共分离出288株小肠结肠炎耶尔森菌,检出率为4.75%。所分离的小肠结肠炎耶尔森菌主要血清型是O∶8和O∶5,生物分型以1A为主。O∶3血清型多具有致病性,其中以猪分离株最多。结论河南省小肠结肠炎耶尔森菌在人群和各类动物中均有存在,猪是小肠结肠炎耶尔森菌致病性菌株的主要宿主。     

徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌病原学初步研究

目的了解徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌分布及病原学特征。方法对本地区分离到的菌株进行血清学分型、生化、药敏试验,并使用聚合酶链反应(PCR)技术检测毒力基因,同时对致病性血清型(O∶3和O∶9型)菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果2014份标本中共检出32株(分布17个血清型)小肠结肠炎耶尔森菌,总检出率为1.59%。致病菌株占18.75%,携带ystB基因的占21.87%。32株小肠结肠炎耶尔森菌分为3个生物型别,其中1A型占78.12%,3型18.75%,2型为3.12%。本地区分离的3株O∶3血清型菌株的PFGE带型相同。结论该地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌以及由此引起的腹泻疾病,尤其O∶3型菌株属于我国O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌的主要克隆系,本地区应当进一步加强该菌的监测工作。     

中国致病性小肠结肠炎耶尔森菌生物分型研究

目的初步了解我国致病性小肠结肠炎耶尔森菌O∶3、O∶9血清型菌株的生物型分布,掌握我国致病性小肠结肠炎耶尔森菌的生物学特征。方法用文献报道方法对1986-2008年从我国不同地区的腹泻病人、家禽家畜、鼠类、食品、环境等各类宿主中分离到的427株致病性小肠结肠炎耶尔森菌进行生物分型。结果 427株致病性小肠结肠炎耶尔森中213株属于生物2型(49.9%),全部为O∶9血清型;208株属于生物3型(48.7%),其中191株为O∶3血清型,17株为O∶9血清型;6株属于生物4型(1.4%),全部为O∶3血清型。没有发现生物1A型、1B型与5型的致病性菌株。结论我国O∶3血清型致病性小肠结肠炎耶尔森菌以生物3型为主、O∶9血清型致病性菌株以生物2型为主,没有生物1B型菌株,与国外致病性菌株的生物血清型分布有一定差异。     

2008-2013年宁夏小肠结肠炎耶尔森菌分布特征分析

目的了解宁夏小肠结肠炎耶尔森菌的分布特征。方法按照《全国小肠结肠炎耶尔森菌病监测方案》对宁夏2008-2013年采集的各类样本进行分离培养,将分离株送中国疾病预防控制中心传染病所进行血清分型、毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型。结果采集各类样本9 643份,检出173株小肠结肠炎耶尔森氏菌,总检出率1.79%;各年度和各样本检出率差异均有统计学意义(P0.01)。血清型O∶3和O∶9均携带ail和ystA基因,全部从猪和腹泻病人样本中检出;血清型O∶5、O∶8和未分型菌株均没有携带ail和ystA基因,在猪、牛、羊、鸡和狗样本中都有检出。结论小肠结肠炎耶尔森菌在宁夏分布较为广泛,猪是主要宿主,流行的致病性血清型以O∶3为主,O∶9为辅,且在我区的分布没有时间、地域上差异。     

斑点金免疫渗滤法检测鼠疫菌的方法研究

目的　建立一种简便、快速的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)用于鼠疫菌的快速诊断。方法　用柠檬酸钠还原法制备 10nm的胶体金标记鼠疫多价抗体 ,制备成鼠疫抗体金探针。结果　鼠疫胶体金渗滤法对鼠疫FI抗原的最低检出限为 10ng/ml;对EV76的最低检出限为 2 .4× 10 5cfu ;除 4株鼠疫菌外 ,不与包括小肠结肠炎和假结核耶尔森菌等其他细菌发生交叉免疫反应 ;整个反应过程在 10min内完成。结论　该方法简便、快速、特异、敏感 ,不需任何特殊仪器设备 ,适合于现场鼠疫监测。     

吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌脉冲场凝胶电泳分析

目的对小肠结肠炎耶尔森氏菌全DNA进行酶切，了解吉林省小肠结肠炎耶尔森氏菌在核酸水平的差异。方法用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法进行分析。结果用PFGE将33株小肠结肠炎耶尔森氏菌分成7个核型，其中0：3血清型分出5个核型；0：9血清型2个核型。结论提示脉冲场凝胶电泳分析可用于小肠结肠炎耶尔森氏菌遗传关系的研究，以及分析暴发流行和常规监测，追踪传染源。     

胶体金免疫层析法快速诊断鼠疫的实验研究

目的建立一种快速、简易的检测鼠疫F1抗原的胶体金免疫层析法(GICA).方法采用直径为20nm胶体金颗粒,标记F1单克隆抗体,并将标记物以6μL/cm喷于玻璃纤维;将另1株F1单克隆抗体与羊抗鼠IgG以1μL/cm喷线固定于硝酸纤维素膜上,装配后以4mm/条切割制成免疫层析检测试条.分别用粗制F1抗原和EV菌对该试纸条的敏感性进行测定,同时用44株鼠疫近缘菌及昆明小鼠、黄胸鼠、褐家鼠、大足鼠的正常血清等标本进行特异性检测.结果本试纸条可在15min之内完成实验,检测粗制F1抗原的浓度可达0.5ng/mL,最小检出EV菌菌量为10万个;本方法的特异性为100%.结论 GICA检测鼠疫F1抗原特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值.     

胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体

目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。     

利用间接血凝吸收试验鉴别布氏菌和小肠结肠炎耶氏菌抗体

<正> 牛种布氏菌与O∶9血清型小肠结肠炎耶氏菌(以下简称O∶9型耶氏菌)的交叉反应已有许多学者研究。但尚未找到一种简单实用的方法,能鉴别这两种菌的交叉抗体。 前文利用凝集吸收试验鉴别布病患者血清,获得比较满意的结果。本文报告间接血凝吸收试验来鉴别这两种菌的交叉抗体。     

鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒的研制

目的 研制一种敏感、特异、快速并适用于非专业人员的鼠疫胶体金法快速诊断鼠疫FI抗体的试剂盒。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记金黄色葡萄球菌A蛋白作为探针，同时用鼠疫多糖抗原致敏硝酸纤维素膜，共同组装成基于免疫层析原理的胶体金法快速诊断盒。结果 间接血凝法检测阳性300份血清标本，胶体金法检测全部为阳性，间接血凝法检测阴性100份血清标本，胶体金法检测全部为阴性，两种方法符合率100％；并且鼠疫胶体金法快速诊断盒不与假结核耶尔森氏菌等相关细菌的免疫血清发生交叉反应。结论 鼠疫胶体金法快速诊断盒具有较好的特异性和敏感性，并且具有更简便快速的优点，适合基层单位现场使用。     

布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析法快速检测技术的建立

目的建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的新方法。方法利用胶体金免疫层析技术,以大肠埃希菌表达、纯化的OMP31与BP26重组蛋白作为检测抗原,以金黄葡萄球菌A蛋白(SPA)作为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁氏菌抗体,并分析方法的敏感性和特异性。结果以粒径为40nm胶体金制备的试纸条检测布鲁氏菌抗体的敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.2,SPA蛋白最适标记量为6μg/ml。交叉试验证明试纸条不与其他非相关疾病感染血清反应,特异性高。试纸条检测结果与琥红平板试验方法的符合率为92%。结论制备的布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,可用于鉴别布鲁氏菌自然感染和人工免疫,并可区分牛、羊种布鲁氏菌感染,可在基层推广使用。     

吉林省耶尔森氏菌O: 3和O: 9血清型主要毒力基因分布调查

目的 了解吉林省致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌血清型毒力基因的分布情况。方法 利用聚合酶链反应（PCR）技术进行基因检测。结果 实验证实在吉林省分离到的主要流行血清型O：3和O：9小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因分布特征为：ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^＋、virF^＋占60％；ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-占26．2％；其他型占13．8％。结论 血清型O：3和O：9小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因的分布主要为ail^＋、ystA^＋ vslB^-、yadA^＋、virF^＋型，其次是ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-型，其他型很有可能是非致病的菌株。