普洱茶水提物抗肿瘤的实验研究

应用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测普洱茶水提物对6种不同肿瘤细胞株生长抑制作用以及流式细胞仪分析普洱茶水提物对Hela细胞凋亡的影响;采用裸鼠移植瘤模型,观察普洱茶水提物对宫颈癌的治疗作用。体外细胞毒活性检测显示,普洱茶水提物对人肝癌BEL-7402、胃癌MGC-823、乳腺癌MCF-7、子宫颈癌He La及结肠癌HT-29均有抗肿瘤作用,其中普洱茶水提物200μg/m L浓度下肿瘤细胞生长抑制率可达79%以上。普洱茶水提物能诱导Hela细胞发生凋亡,当浓度为100μg/m L,细胞凋亡率为(50.92±5.38)%。荷瘤鼠实验结果显示:连续给药28 d,普洱茶水提物1.0 g/kg剂量组、0.5 g/kg剂量组对人宫颈癌Hela移植瘤抑制率分别为40.3%、22.4%。普洱茶水提物在体外和体内均具有一定的抗肿瘤作用。     

紫杉醇通过上调Bim表达诱导非小细胞肺癌细胞凋亡

目的探讨紫杉醇诱导非小细胞肺癌细胞的死亡形式及B i m的作用。方法用M T T法检测细胞死亡;AnnexinⅤ染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测紫杉醇诱导前后Bim蛋白的表达水平。结果紫杉醇诱导肺癌细胞死亡具有剂量依赖性;A549细胞的死亡形式主要为细胞凋亡;Bim蛋白表达水平在紫杉醇诱导的非小细胞肺癌A549中显著升高。结论紫杉醇通过诱导细胞凋亡杀伤非小细胞肺癌,细胞凋亡可能与Bim表达上调有关。     

紫杉醇通过上调Bim表达诱导非小细胞肺癌细胞凋亡

目的 探讨紫杉醇诱导非小细胞肺癌细胞的死亡形式及Bim的作用.方法 用MTT法检测细胞死亡,Annexin V染色流式细胞术检测细胞凋亡; Western blot检测紫杉醇诱导前后Bim蛋白的表达水平.结果 紫杉醇诱导肺癌细胞死亡具有剂量依赖性;A549细胞的死亡形式主要为细胞凋亡;Bim蛋白表达水平在紫杉醇诱导的非小细胞肺癌A549中显著升高.结论 紫杉醇通过诱导细胞凋亡杀伤非小细胞肺癌,细胞凋亡可能与Bim表达上调有关.     

苦荞茶多糖诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体机制

目的：从线粒体调控机制的角度探讨苦荞茶多糖（tartary buckwheat tea polysaccharide,TBTP）对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法：应用水提醇沉法结合超声辅助技术提取的TBTP处理A549细胞,分为空白对照组和不同质量浓度TBTP处理组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡水平,采用DHE和Mito SOX染色检测细胞和线粒体活性氧簇水平,采用JC-1染色检测线粒体膜电位变化,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、Bcl-2、剪切型半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、细胞色素c的水平。结果：TBTP呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞增殖。TBTP处理A549细胞24 h可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡。TBTP处理能够显著增加A549细胞和线粒体内活性氧水平,降低线粒体膜电位;同时,TBTP能够增加促凋亡蛋白Bax和剪切型Caspase-3的表达、抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进A549细胞线粒体细胞色素c外流。结论：TBTP能够促进活性氧簇生成、降低线粒体膜电位,进而抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。     

灵芝孢子油缓解小鼠体力疲劳的作用及其机制研究

为了评价灵芝孢子油缓解小鼠体力疲劳的作用并探究其可能机制。将144只SPF级雄性KM小鼠随机分为4组,即溶剂对照组、灵芝孢子油低、中、高剂量组,每组36只,灌胃30 d。共分为4批,分别用于负重游泳实验(Ⅰ)、肝糖原(Ⅱ)、血乳酸(Ⅳ)以及血清尿素氮、肌糖原及其他指标(腓肠肌HE染色、PAS染色和TUNEL染色)测定(Ⅲ)。结果表明,与溶剂对照组相比,灵芝孢子油中剂量组小鼠负重游泳时间极显著延长(P<0.01);灵芝孢子油各剂量组小鼠的血清尿素氮水平均极显著降低(P<0.01);各组小鼠的肝糖原和肌糖原含量无显著差异(P>0.05);灵芝孢子油各剂量组小鼠的血乳酸曲线下面积均极显著降低(P<0.01)。腓肠肌HE染色结果显示各组均未见明显病理改变。PAS染色结果显示灵芝孢子油高剂量组肌糖原阳性面积显著增加(P<0.05)。TUNEL染色结果显示灵芝孢子油低剂量组凋亡细胞阳性率显著降低(P<0.05)。因此,在本实验条件下,灵芝孢子油具有缓解体力疲劳的作用,其机制可能与减少机体糖原消耗、减轻肌细胞凋亡有关。     

食用色素藻蓝蛋白对非小细胞肺癌A549细胞体外增殖和凋亡的影响

本研究以人类非小细胞肺癌A549细胞系为模型,采用藻蓝蛋白处理体外培养的细胞,分别从细胞存活率、细胞形态、细胞凋亡程度以及周期分布4?个方面阐述了藻蓝蛋白对A549细胞的影响。结果表明,藻蓝蛋白能够显著降低A549细胞的存活率与生长速率（P＜0.05）,引起细胞形态发生非正常改变;同时上调促凋亡基因Bax、Bad,下调抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl的表达而诱导细胞凋亡;此外,藻蓝蛋白能够异常调控细胞周期G1/S转换点相关基因的表达而引起细胞发生G1期阻滞。研究结果揭示了藻蓝蛋白对A549肺癌细胞具有显著的抑制作用,为开发新型抗癌类功能性食品着色剂提供了必要的理论依据。     

姜黄挥发油诱导肺癌细胞凋亡及机理研究

对姜黄挥发油诱导人肺癌A549细胞的凋亡影响及作用机制进行研究。采用二甲基噻唑蓝比色法(methl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测姜黄挥发油对A549的细胞增殖的抑制作用,采用吖啶橙(acridine orange,AO)染色法、流式细胞仪法、划痕和集落形成试验探究姜黄挥发油诱导细胞凋亡的作用机制。结果表明,姜黄挥发油以时间和剂量依赖性关系抑制癌细胞的增殖。姜黄挥发油浓度在100 mg/L时就能够使细胞结构发生变形,细胞核发生皱缩,同时与空白对照组相比,加入经不同浓度姜黄挥发油处理后的A549细胞,其早期和晚期凋亡细胞数量均有所增加,其迁移能力也受到了不同程度的抑制。     

维生素C联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响

目的探讨维生素C（VC）联合顺铂（DDP）对肺癌A549细胞增殖、侵袭与凋亡的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,给予不同浓度（0.025、0.25、2.5 m M）VC联合5.0 mg·L^-1 DDP处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测A549细胞的增殖情况,采用Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力,采用碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测A549细胞的凋亡率。结果 VC与DDP联合用药可显著抑制A549细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性,经VC与DDP联合处理的A549细胞,发生侵袭的细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著升高。结论 VC与DDP联合用药可抑制肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

皱瘤海鞘抗人肺癌A549细胞组分的分离纯化及化学成分分析

采用四氮甲唑蓝比色法检测皱瘤海鞘（Styela plicata）被囊及内脏团甲醇提取物对体外培养的人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜、流式细胞仪及荧光显微镜观察,分析其对A549细胞的形态和细胞凋亡的影响,并且用气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术分析高活性组分6号内脏团柱层析组分（column eluted fraction 6 from visceral methanol extract,VCEF-6）的化学成分。结果表明：在低质量浓度（25～75 μg/mL）范围内,被囊及内脏团醇提物对A549细胞生长没有抑制作用,当质量浓度增大到100 μg/mL以上时,被囊及内脏团醇提物表现出对A549细胞明显的生长抑制作用。醇提物柱层析组分的体外抗肿瘤检测表明,共有8 个组分在100 μg/mL时对A549细胞表现出明显的生长抑制作用,其中VCEF-6抑制A549细胞生长活性最强,24 h时半数抑制浓度为168.7 μg/mL。通过流式细胞术以及荧光显微镜观察表明,VCEF-6抑制肿瘤细胞生长与诱导细胞凋亡有关。GC-MS分析VCEF-6的化学成分结果表明,VCEF-6含有22 种已知物质,其中甾醇类6 种、烷烃类6 种、脂肪酸酯类6 种、芳香族化合物4 种。综上所述,在体外实验中VCEF-6能够抑制A549细胞生长并诱导其凋亡。     

灵芝多糖对人肺癌A549细胞增殖凋亡的作用

本研究了灵芝多糖对人肺癌A549细胞增殖凋亡的作用。将肺癌A549细胞分为空白组、药物对照组、低、中、高浓度组,对各组细胞分别进行干预,检测其凋亡、增殖能力变化情况,对细胞凋亡蛋白Bcl-2、PI3K、Akt表达进行检测。结果显示,相比其他各组,高浓度组细胞增殖率较低,且随着使用灵芝多糖干预时间延长,高浓度组细胞增殖率自44.37%下降至20.11%。相比其他各组,高浓度组细胞凋亡率较高,且随着使用灵芝多糖干预时间延长,高浓度组细胞凋亡率自46.52%上升至77.93%。相比其他各组,高浓度组细胞Bcl-2、PI3K、Akt相对表达量较低。使用灵芝多糖进行干预,能够抑制肺癌A549细胞增殖,促进肺癌A549细胞凋亡,其能力与自身细胞毒性无关,可能与调控细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、PI3K、Akt表达有关,说明灵芝多糖能够抑制肺癌A549细胞发展和扩散,对人肺癌A549细胞增殖凋亡起到调控。     

灵芝生物转化蛋白核小球藻发酵粗多糖的抑瘤实验

在灵芝基础培养基中添加小球藻粉,灵芝能对小球藻细胞进行生物破壁,同时进行牛物转化：藻粉添加量以10g／L为最佳,产生的多糖最高达0．29mg／L。提取转化的多糖,并与灵芝多糖、小球藻提取多糖的混合物进行抗肿瘤实验：结果表明,产生的转化多糖抗肿瘤效果最好,仡最适剂量（0．2g／kg&#183;d）时,抑瘤率为76．2％。     

破壁与去壁灵芝孢子粉的化学成分与抗氧化活性比较

本研究以去壁灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉为原料,探究不同孢子壁加工工艺对灵芝孢子粉化学成分及抗氧化活性的影响。实验对比了两种灵芝孢子粉的水分、灰分、膳食纤维、蛋白质、总三萜、总多糖、微量元素、氨基酸等主要指标及其体外抗氧化活性。结果表明,去壁灵芝孢子粉在灰分、水溶性膳食纤维、蛋白质、总多糖、总三萜和水解氨基酸的含量分别是2.227%、8.810%、15.922%、12.129%、2.556%、6.744%,均高于破壁灵芝孢子粉,其中总多糖含量较破壁提高了近12倍。三萜的色谱图显示,去壁孢子粉中含有更丰富的萜类物质。对比两种孢子粉醇提相与水提相的抗氧化活性,去壁灵芝孢子粉醇提相显示出最强的抗氧化活性,在2 mg/mL的浓度下,总还原力和DPPH自由基清除率分别为1.114和89.860%;在0.5 mg/mL的浓度下,其ABTS+自由基清除率为99.714%,与同浓度下V_C阳性对照组结果相当;在10 mg/mL浓度时,羟基自由基清除率达到84.301%。因此,去壁技术提高了灵芝孢子粉中关键物质含量,增强了其抗氧化能力。     

破壁对灵芝孢子粉品质的影响

以灵芝孢子粉为原料,利用微波、超声对其进行破壁,以微波和超声的时间、功率、料液比为因素,灵芝孢子粉的多糖和三萜的含量为指标,得到最佳破壁工艺为料液比20∶1 (mL/g),微波功率280 W,微波时间90 s。以微波破壁所得到的灵芝孢子粉为原料,对比破壁前后的孢子粉粒度、松紧密度、比表面积、色度、休止角并用电镜观测形态;测定破壁前后孢子粉的总脂肪、总多糖、总三萜、灰分、蛋白质、多酚等营养成分含量,比较破壁前后孢子粉的品质。结果表明,破壁后灵芝孢子粉的感官状态与未破壁孢子粉差异明显:孢子粉的比表面积、松紧密度、色度均明显增加;粒度、流动性有所减小。经过破壁后的孢子粉中脂肪、多糖、三萜、灰分、蛋白质等营养物质的含量均不同程度地提高。实验证明,微波破壁处理有助于灵芝孢子粉中三萜、粗多糖、粗脂肪等功能性成分的溶出,大大增加了灵芝孢子粉有效成分的溶出。     

灵芝孢子粉生物活性成分及药理作用

灵芝孢子粉是灵芝子实体在成熟期释放出的卵型生殖细胞,含有多糖、三萜和核苷等多种活性成分,药用价值高于灵芝子实体和菌丝体,具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等药理作用。本文对灵芝孢子粉的结构、功能性成分、药理作用及产品开发现状方面的研究进行了综述,为其进一步开发与利用提供重要的理论参考。     

灵芝孢子油对羽毛球运动员运动后免疫功能的影响

以羽毛球运动员为研究对象,通过给予羽毛球运动员补充灵芝孢子油软胶囊,对比运动员运动前后免疫功能指标的变化情况。在为期21 d的高强度运动时间内,定期给予运动员服用灵芝孢子油软胶囊,实验组与对照组(未服用灵芝孢子油软胶囊的运动员)进行免疫指标测定。结果表明:羽毛球运动员服用灵芝孢子油软胶囊后,比对照组NK细胞、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+指标在不同时间段有不同程度的提高。研究表明,运动员长期运动时定期服用灵芝孢子油软胶囊可防止免疫功能的降低,降低运动时被感染的概率,使得运动员身体健康,以更多精力投入运动。     

不同品种灵芝子实体及孢子粉元素成分分析及重金属安全性评价

针对我国鲁西地区主栽灵芝品种,利用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定不同品种灵芝子实体、孢子粉及破壁孢子粉中元素及重金属含量,开展元素成分分析及重金属安全性评价。元素成分分析结果表明,藏芝和香血芝子实体中大部分元素含量明显高于赤芝、美芝和新大片子实体中元素含量,特别是Fe、Cu、Zn、Mn、Se、B、V、Co、Sr 9种人体必需微量元素,其中藏芝子实体中Fe元素含量达到234 mg/kg、Zn元素含量达到57.9 mg/kg、Se含量达到0.309 mg/kg,香血芝子实体样品Sr元素含量最高,达到3.60 mg/kg。赤芝粉和赤芝椴木粉元素营养质量高于美芝粉和新大片孢子粉元素营养质量,赤芝粉和赤芝椴木粉中硒含量分别是美芝粉中硒含量的3倍和2倍。重金属安全性分析结果表明5种灵芝子实体与4种孢子粉样品Pb、Hg 2种重金属含量远低于相关标准,安全性较高,藏芝及香血芝子实体、新大片孢子粉样品As元素含量较高,具有一定的安全性风险。破壁技术会造成孢子粉中As、Pb、Cd、Cr、Cu、Ni金属元素含量不同程度的提高,孢子粉破壁过程中重金属存在一定的安全风险。     

长白山有机灵芝破壁孢子粉的毒理学安全性评价

目的对长白山有机灵芝破壁孢子粉作为保健食品进行毒性实验研究。方法采用小鼠急性毒性试验、遗传毒性试验,以及大鼠30 d喂养实验来评价长白山有机灵芝破壁孢子粉的毒理学安全性。结果样品给药后,ICR种雌、雄小鼠的最大耐受剂量(MTD)大于20.00 g/kg·bw,属于无毒级;遗传毒性试验结果中Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验均表现为阴性;大鼠30 d喂养实验中,动物生长发育良好,各剂量组体重、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器重量和系数以及病理组织学等指标均未见毒性作用。结论长白山有机灵芝破壁孢子粉均未见明显毒副作用,具有服用安全性。     

Investigation and comparison of the anti-tumor activities of lactoferrin, α-lactalbumin,and β-lactoglobulin in A549, HT29, HepG2, and MDA231-LM2 tumor models

To investigate the anti-tumor activities of lactoferrin, α-lactalbumin, and β-lactoglobulin, 4 types of human tumor cells (lung tumor cell A549, intestinal epithelial tumor cell HT29, hepatocellular cell HepG2, and breast cancer cell MDA231-LM2) were exposed to 3 proteins, respectively. The effects on cell proliferation, migration, and apoptosis were detected in vitro, and nude mice bearing tumors were administered the 3 proteins in vivo. Results showed that the 3 proteins (20 g/L) inhibited viability and migration, as well as induced apoptosis, in 4 tumor cells to different degrees (compared with the control). In vivo, tumor weights in the HT29 group (0.84 ± 0.22 g vs. control 2.05 ± 0.49 g) and MDA231-LM2 group (1.11 ± 0.25 g vs. control 2.49 ± 0.57 g) were significantly reduced by lactoferrin; tumor weights in the A549 group (1.07 ± 0.19 g vs. control 3.11 ± 0.73 g) and HepG2 group (2.32 ± 0.46 g vs. control 3.50 ± 0.74 g) were significantly reduced by α-lactalbumin. Moreover, the roles of lactoferrin, α-lactalbumin, and β-lactoglobulin in regulating apoptotic proteins were validated. In summary, lactoferrin, α-lactalbumin, and β-lactoglobulin were proven to inhibit growth and development of A549, HT29, HepG2, and MDA231-LM2 tumors to different degrees via induction of cell apoptosis.     

拉曼光谱法检测灵芝孢子油氧化酸败

采用拉曼光谱法直接监测灵芝孢子油中氧化酸败过程中不饱和双键特征峰的变化规律,研究了特征峰的强度与孢子油氧化酸败程度的关系。结果表明,特征峰强度随孢子油酸值、过氧化值的增加而下降,特征峰的面积与孢子油酸值之间存在着良好的线性关系,并进一步测定了灵芝孢子油氧化酸败的动力学参数。建立了用拉曼光谱快速检测灵芝孢子油氧化酸败度的新方法。对该方法的有效性进行评估,并用该方法筛选出有效的灵芝孢子油抗氧化剂。