SOCS1与c-myc在人肝细胞癌组织中的表达及相互关系

目的：研究细胞因子信号转导抑制因子1（SOCS1）和原癌基因c-myc在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及二者在HCC中的相互作用。方法：应用免疫组织化学技术检测SOCS1蛋白和c-myc蛋白在41例HCC癌组织、癌旁组织和11例正常肝组织中的表达;采用RT-PCR技术检测上述组织中SOCS1mRNA的表达水平;分析临床、病理资料。结果：HCC癌组织中SOCS1蛋白阳性率和SOCS1mRNA的表达水平明显低于癌旁组织和正常肝组织（P〈0.01）,SOCS1蛋白在低分化HCC癌组织中的阳性率较高分化HCC癌组织明显减低（P〈0.01）。HCC转移组SOCS1蛋白表达阳性率较未转移组低（P〈0.05）。HCC癌组织中c-myc蛋白明显高于癌旁组织和正常肝组织;在HCC癌组织中SOCS1蛋白表达强度与c-myc蛋白表达强度呈负相关（P〈0.01）。结论：SOCS1在HCC癌组织中表达下调,可能通过一系列途径造成c-myc的激活,从而造成肿瘤的发生。     

原发性肝细胞癌、癌旁及肝硬化组织中CD3+细胞的研究

摘要：为探讨CD3在原发性肝细胞癌、癌旁、肝硬化及正常肝组织中的表达，并探讨CD3+细胞与肝癌、肝硬化的关系。笔者对60例原发性肝细胞癌组织、62例单纯性肝硬化及21例正常肝组织，用SP免疫组化法进行染色，定量分析其阳性细胞数。结果示： (1)CD3+细胞平均数从高到低依次为：肝癌癌旁组织、癌组织、肝硬化及正常肝组织（P<0.05）；(2)肝癌组织中CD3+细胞平均数与组织学分级和临床TNM分期无关；(3)肝癌15个月内有转移组的癌组织中CD3+细胞数少于无转移组（P<0.01）。提示CD3+细胞可作为反映机体抗肿瘤免疫状态及判断患者预后的重要指标。     

肝癌、肝硬化组织中CD3、CD57、CD20细胞数量与临床病理表现及预后的关系

目的探讨CD3、CD57、CD20细胞在原发性肝细胞癌(HCC)、癌旁、肝硬化及正常肝组织中的数量及意义.方法HCC 60例,单纯性肝硬化62例,正常肝组织23例,以免疫组化SP法进行CD3、CD57、CD20染色,对阳性细胞数进行定量分析并与临床资料进行相关探讨.结果(1)各组CD3+细胞平均数从高到低为癌旁组织、癌组织、肝硬化组织、正常肝组织(P＜0.05);各组CD57+细胞平均数从高到低为癌组织、癌旁组织、正常肝组织、肝硬化组织(P ＜0.05);各组CD20+细胞平均数从高到低为癌组织、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织(P ＜0.01).(2)HCC中CD3+细胞、CD57+细胞、CD20+细胞与组织学分级均无明显关系.(3)HCC中CD57+细胞和CD20+细胞随着临床分期的发展有下降的趋势(P ＜0.05);HCC中CD3+细胞平均数与临床TNM分期无关.(4)HCC中15月内有转移组的CD57+、CD3+细胞数均少于无转移组(P＜0.01).HCC患者15月内有无转移与HCC和癌旁组织中的B细胞分布均无关.结论临床上,随着HCC患者的病情恶化,CD3+、CD57+、CD20+细胞逐渐减少.CD3+、CD57+、CD20+细胞可成为反映机体抗肿瘤特异性细胞免疫状态和生物学行为及判断患者预后的重要指标.     

连环蛋白P120在肝细胞癌中的表达及其意义

目的检测肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中连环蛋白P120（P120 catenin，P120ctn）的表达，分析其与临床病理特点之间的关系。方法用免疫组化技术检测58例HCC、17例癌旁肝硬化及8例正常肝组织中P120ctn的表达。结果58例HCC组织中有34例P120 ctn（58．6％）膜表达弱阳性或缺失，30例（51．7％）胞质表达，异常表达总比例为65．5％（38／58）；17例癌旁肝硬化组织中有6例（35．3％）膜表达弱阳性，8例（47．1％）胞质表达，异常表达总比例为47．1％（8／17）；8例正常肝组织全部表现为胞膜正常表达，无胞质表达。P120ctn的异常表达与HCC的包膜形成、淋巴浸润、有无卫星灶、肿瘤分化等相关（P〈0．05），而与性别、年龄、瘤体积大小、分期等无关（P〉0．05）。结论HCC中存在较高比例的P120ctn异常表达，主要表现为胞膜表达缺失伴胞质异常染色，P120ctn可以作为预测HCC转移潜能和预后状况的有价值的指标。     

金属硫蛋白在肝细胞癌中表达的临床意义

目的 探讨金属硫蛋白（metallothionein,MT)在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC)组织中、癌旁组织和正常肝组织中的表达及其临床意义。方法 对30例HCC病人的癌组织、10例癌旁组织和10例正常肝组织标本进行免疫组化染色，观察MT的表达状况，分析MT在HCC中的表达与癌旁组织、正常肝组织、细胞分化和预后等的关系。结果 正常肝组织有很强而稳定的MT染色；癌旁组织（包括肝硬化结节）有较高的MT着色；癌组织中MT染色很弱，甚至无MT染色。相互比较有显著性差异（P＜0．05）。MT在肝细胞癌组织中的表达与生存率之间存在着正相关关系（P＜0．05）。结论 MT在正常肝组织、癌旁组织和肝细胞癌组织中的表达呈递减趋势，肝细胞癌组织中MT表达与癌细胞分化无关，而与瘤体组织坏死及肝切除术后病人生存状况相关。     

肝细胞癌微环境中CD4+CD25+调节性T细胞的分布及其临床病理意义

目的研究CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）与肝细胞癌（HCC）临床病理之间的关系；探讨其在评价HCC侵袭性和癌症进展以及预后中的价值。方法用双重酶标免疫组织化学的方法测定52例HCC组织及癌旁组织中Treg数量分布状况。分析其临床病理学资料，研究在HCC微环境中Treg数量分布与其各项临床病理学指标间的关系。结果8例正常肝组织中未发现Treg分布，52例HCC病人的肝癌及癌旁组织标本中，在HCC组织中Treg数量明显高于癌旁组织，差异有显著意义。HCC组织的Treg数量与病人性别、年龄、肝硬化、病理学分级、包膜、术前AFP浓度无显著关系（P〉0．05），而与肿瘤的大小、癌栓、子灶、TNM分期有显著关系。25例小肝癌组和27例大肝癌组Treg细胞单个高倍视野平均数分别为7．1440±1．8535、8．0815±1．5122，两组比较在统计学上有显著差异（P〈0．001）；14例有血管癌栓组和38例无血管癌栓组Treg细胞单个高倍视野平均数分别为8．1143±2．4487、7．4526±1．8794，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05，P=0．014）；19例癌周有子灶组和33例癌周无子灶组Treg细胞单个高倍视野平均数分别为8．2211±2．4516、7．2909±1．8217，两组比较在统计学上有显著差异（P〈0．001）；不同临床病理分期18例Ⅰ期组、22例Ⅱ期组和12例Ⅲ期组中Treg细胞单个高倍视野平均数分别为6．7333±1．5980、7．8818±2．4171、8．5167±2．2480，在统计学上有显著差异（P〈0．001）。结论肝细胞癌微环境中Treg数量分布与肿瘤大小、血管癌栓、子灶，和临床分期有明显关系，而与其它指标无显著关系。HCC微环境中Treg数量与肝癌的侵袭、进展以及预后有密切关系，HCC微环境中Treg数量增多可以作为判断HCC侵袭性、进展以及预后的一个潜在重要指标。除去或减少肝癌微环境中的Treg细胞有可能提高肿瘤的免疫治疗效果。     

Heparanase-1和Syndecan-1与肝细胞癌侵袭转移的关系

目的探讨heparanase-1（HPR-1）和syndecan-1在孤立性大肝癌、结节性肝癌和小肝癌中的表达及其临床意义。方法选用30例肝细胞癌（HCC）癌组织和癌旁组织标本，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测标本中的HPR1和Syndecan-1的表达，并结合临床病理资料进行分析。结果HPR-1 mRNA在HCC中的表达较癌旁肝组织高，差异有显著性意义（P=0．037）；Syndecawl在HCC中的表达较癌旁组织低，差异有显著性意义（P=0．007）。本研究显示HPR-1的高表达和Syndecanl的低表达同有无包膜、静脉浸润密切相关，而同性别、细胞分化程度、肝硬化程度无关。将30例HCC分为孤立性大肝癌组，结节性肝癌组和小肝癌组分析发现：孤立性大肝癌组同结节性肝癌组HPR-1mRNA的表达有着显著性差异（P〈0．05）。结论HPR1基因和Syndecan-1基因与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关；孤立性大肝癌较结节性肝癌具有较好的生物学行为。     

肝细胞癌中SFRP1和APC基因启动子甲基化与其mRNA的表达

目的探讨肝细胞癌（HCC）中SFRP1和APC基因启动子甲基化状态及其mRNA表达的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测30例肝细胞癌（HCC组）及相应的癌旁组织（癌旁组）和10例正常肝组织（正常对照组）中SFRP1及APC基因启动子甲基化状态和mRNA的表达水平，分析甲基化与某些临床参数与mRNA表达的关系。结果HCC组、癌旁组及正常对照组中的SFRP1和APC基因启动子甲基化率分别是11／30，4／30，0／10和14／30，5／30，0／10；HCC组明显高于其余两组（P〈0．05）。SFRP1基因启动子甲基化与临床资料无关（P〉0．05）；APC基因启动子甲基化与年龄（〈60）岁和癌肿无假包膜有关（P〈0．05）。HCC组SFRP1基因mRNA表达明显低于其余两组（P〈0．05），各组APC基因mRNA表达差异无显著性。两基因甲基化之间无相关性。结论SFRP1和APC基因启动子甲基化与HCC的形成和进展有关，但HCC组织中基因甲基化与mRNA表达的关系尚不明确。     

抑癌基因PTEN在肝细胞癌中的表达及其意义

目的：探讨肝细胞癌（HCC）组织中抑癌基因PTEN蛋白的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学SP法，检测53例HCC组织和癌周组织中PTEN蛋白的表达水平。结果：53例HCC中PTEN蛋白阳性率（52．8％）和阳性强度明显低于癌旁组织（92．5％）（P〈0．01，P〈0．05）；HCC组织中PTEN蛋白的表达与HCC的分化程度密切相关（P〈0．05），HCC分化愈差，PTEN蛋白表达愈弱；PTEN蛋白表达还与癌拴形成有关（P〈0．005）。结论：PTEN的异常表达在HCC发生、发展过程中可能起重要作用，其表达水平有可能作为反映HCC进展和预后的生物学指标。     

原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的基因研究

目的探讨原发性肝癌癌旁组织生长激素受体（GHR）的基因表达情况或变化。方法采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应（RT—PCR）对45例原发性肝癌（HCC）的癌旁组织进行了生长激素受体（GHR）的检测，以8例正常肝组织作为对照，并随机选择12例RT—PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定。结果在蛋白表达水平，应用放射性配体法于正常肝组织与45例HCC癌旁组织中检测到单一的GH特异性结合位点（即GHR）。对照组肝组织GHR的RT值为40．2932±3。5667．fmol／mg；protein，Kd为0．6167±0．1007nmol／L。HCC癌旁组织GHR的RT为33．6283±3．6218fmol／mg。protein，Kd值为0．6319±0．1978nmol／L，与正常肝组织相比，HCC癌旁GHR的RT降低（P〈0．05）．而Kd无显著性改变（P〉0．05）。半定量的RT—PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织与HCC癌旁组织的表达率均为100％。GHRmRNA在正常肝组织与原发性肝癌癌旁组织的表达两者之间差异无显著性（P〉0．05）。结论全部肝癌癌旁组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR，在其受体功能未明的情况下，目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重，以免造成肿瘤的增殖与复发。     

GRIM-19在肝细胞癌组织中的低表达及对其侵袭能力的影响

目的：检测GRIM-19在肝细咆癌（HCC）中的表达,分析其与HCC生物学行为的关系,并探讨GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。方法：应用实时定量PCR技术检测83例HCC及其相对应的癌旁组织和8例正常肝组织中GRIM-19mRNA的表达,分析其与HCC临床病理因素之间的关系。用Westernblot法检测低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L和高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7中GRIM-19蛋白的表达。应用细胞转染技术将GRIM-19shRNA转入HL-7702和Huh-7,从而构建HL-7702和Huh-7的GRIM-19kd细胞系,并用Westernblot法检测转染效果。应用Transwell细胞迁移实验研究GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。结果：实时定量PCR结果显示,83例HCC组织中有52例（62．65％）GRIM-19的表达低于相对应的癌旁组织（P〈O．01）,其表达水平也低于8例正常肝组织（P〈005）。GRIM-19的表达与HCC的TNM临床分期（P=O．011）、微血管浸润（P=O．047）和包膜浸润（P=O．013）密切相关。Westernblot显示HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh-7细胞系表达GRIM-19蛋白,且低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L中GRIM-19表达高于高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7。细胞侵袭实验显示GRIM-19低表达促进了HCC的侵袭能力。结论：GRIM-19在HCC的侵袭中起重要作用,可能为检测HCC的侵袭潜能提供新的研究思路。     

Caveolin-1在肝细胞癌表达及与肿瘤血管生成的关系

目的：探讨caveolin-1与肝细胞癌（HCC）侵袭转移的关系及其可能的机制。方法：应用实时PCR方法检测伴肝内转移的 HCC组织、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织中 caveolin-1 mRNA的表达;用Western blot方法检测伴肝内转移的 HCC组织、癌旁组织中caveolin-1蛋白的表达;用免疫组化方法检测75例HCC组织中caveolin-1,血管内皮生长因子（VEGF）,CD34,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,分析caveolin-1,VEGF的表达以及肿瘤微血管密度（MVD）,非成对动脉（UA）计数与临床病理因素的关系。结果：在伴肝内转移的HCC组织中,caveolin-1 mRNA表达明显高于癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织（均P<0.05）,其蛋白表达明显高于癌旁组织;caveolin-1表达水平的升高与肿瘤转移有关（P<0.05）,且caveolin-1的表达与VEGF表达及MVD和UA计数呈正相关（r=0.293,P=0.011;r=0.361,P=0.001;r=0.388,P=0.001）。结论：caveolin-1表达升高促进HCC的侵袭转移,其机制可能是通过诱导HCC表达VEGF,促进肿瘤新生血管生成而实现的。     

新辅助化疗联合同期放疗对直肠癌CD44v6表达的影响和意义

目的：探讨新辅助化疗联合同期放疗对直肠癌CD44v6表达的影响和意义。方法：采用免疫组化SP法测定36例研究组（术前接受化放疗）及36例对照组（术前未行放化疗）直肠癌患者癌组织、正常组织中CD44v6的表达。结果：两组72例患者正常直肠黏膜上皮细胞中CD44v6表达均阴性。研究组中CD44v6表达显著低于对照组（P〈0.05）。两组72例患者中侵润至浆膜层和有淋巴结转移的直肠癌组织CD44v6阳性表达率明显高于侵润至肌层和无淋巴结转移者（P〈0.05）。手术并发症两组比较差异无显著性（P〉0.05）。研究组保肛率80.6%（29/36）明显高于对照组55.6%（20/36）（P〈0.05）。结论：CD44v6在直肠癌的侵袭和转移中起重要作用,检测CD44v6的表达情况是判断直肠癌转移能力的重要指标。新辅助化疗联合同期放疗能有效降低直肠癌组织CD44v6表达水平,从而有效降低了直肠癌细胞的侵袭与转移;同时能使肿瘤降期,提高保肛率,手术并发症无增加。     

焦点粘附激酶在肝细胞癌中的表达、活化及其临床意义

目的　研究焦点粘附激酶 (FAK )在肝细胞癌 (HCC)中的表达、活化及其临床意义。方法　采用原位分子杂交法检测 3 5例肝细胞癌 ,8例肝硬变及 5例正常肝组织中FAKmRNA的表达 ,并通过Western印迹杂交法分析肝癌组织中FAK的磷酸化 (Tyr -3 97)状态。 结果　肝癌组织中FAKmRNA水平明显高于肝硬变、正常肝组织 ( P <0 .0 1) ;同时低分化、存在转移的肝癌组织中FAK磷酸化水平明显高于高分化、无转移的肝癌 (P <0 .0 5 )。结论　FAK的高表达及磷酸化水平的上调可能参与了肝癌的发生发展 ,检测FAK的磷酸化 (Tyr -3 97)水平具有一定的临床病理意义     

CD146与VEGF在人肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的 该研究旨在观察人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中CD146与VEGF的表达及其关系,探讨它们在HCC中与血管生成的关系及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测60例HCC癌组织及癌旁肝组织中CD146、VEGF的表达情况,用CD34标记免疫组化法检测微血管密度(microvessel density,MVD),分析它们的表达与临床病理指标的关系.结果 CD146、VEGF在癌组织中的阳性率分别为66.67%和63.33%,而在癌旁组织中的阳性率分别为30%和33.33%,癌组织与癌旁组织比较差异有显著性(P＜0.05).癌组织的MVD为54.92±8.55/200倍视野,癌旁组织的MVD为21.36±6.63/200倍视野,两者差异有显著性(P＜0.05).与癌旁组织相比,癌组织中CD146、VEGF表达及MVD明显增加.CD146在人肝癌组织中的表达与临床分期、门静脉癌栓及肝外转移明显有关,而与术后复发、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平及肿瘤分化程度无明显关系.VEGF在人肝癌组织中的表达与术后复发、肝外转移、临床分期、门静脉癌栓、肿瘤直径相关,而与肿瘤个数、血清AFP水平及肿瘤分化程度无明显关系.在癌组织中MVD与CD146、VEGF的表达呈正相关,CD146与VEGF亦呈正相关.结论 肝癌组织中CD146及VEGF高表达,与肿瘤血管形成和转移密切相关,分析它们的表达有助于综合判断HCC的预后.     

新生血管生成与肝细胞癌侵袭、转移和预后的关系

目的　探讨原发性肝细胞癌 (HCC)新生血管生成与临床病理指标的关系及其可否用于预测HCC侵袭、转移和预后。方法　采用免疫组织化学方法 ,检测了 2 0例正常肝组织、2 0例肝硬化组织、85例HCC及癌旁组织中CD34的表达 ,以及HCC的微血管密度 (MVD)。结果　CD34的染色定位在血管内皮细胞上 ,HCC窦样血管CD34表达为强阳性 ;除门管区小血管分支及中央静脉外 ,癌旁肝组织、肝硬化组织、正常肝组织基本不表达CD34 ;HCC的MVD范围 (18～ 36 0 ) / 0 74mm2 、(15 6 5±6 2 4) / 0 74mm2 。HCC的MVD与肿瘤大小、病灶数目、分化程度、门静脉瘤栓形成、包膜状况均有显著关系 (P <0 0 5或 0 0 1) ;与HBsAg是否阳性、术前AFP水平无关 (P >0 0 5 ) ;与预后亦有关 ,少血管组(MVD <15 6 )预后显著优于多血管组 (MVD≥ 15 6 ) ,术后平均无瘤生存期少血管组为 5 3个月 ,多血管组为 14个月 ,(P <0 0 0 1)。结论　CD34的表达反映了HCC的新生血管化 ,与HCC的发展有关。MVD可作为判断HCC侵袭、转移和预后的指标。     

EphA7基因在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌中EphA7 mRNA的表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR法检测EphA7 mRNA在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达,并分析其与肝癌临床病理因素之间的关系.结果 40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphA7 mRNA的表达.实时荧光定量PCR分析显示EphA7 mRNA在肝癌组织(20.0711±32.0232)中的表达显著高于癌旁肝组织(4.5184±9.4738,P＜0.05)和正常肝组织(4.1764±4.7193,P＜0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).EphA7 mRNA的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关(P＜0.05).结论 EphA7的过表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥作用.     

磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达及其意义

目的 探讨人肝细胞肝癌组织中磷酸化蛋白p27的表达及其与临床病理特征的关系.方法 利用Ti4+-IMAC富集和LC-MS2-MS3检测磷酸化蛋白的方法鉴定人肝细胞肝癌组织磷酸化蛋白,进一步利用Western blot检测40例肝细胞肝癌、相应癌旁组织和12例正常肝组织中T187、S10磷酸化p27蛋白(P-p27T187、P-p27S10)的表达.结果在肝癌组织磷酸化蛋白的筛选中鉴定到磷酸化蛋白p27,并确定IPI、磷酸化位点、蛋白激酶等信息,Western blot检测提示P-p27T187与P-p27S10在肝细胞肝癌组织表达明显高于癌旁、正常肝组织,其相对表达量分别为0.635±0.108、0.306±0.078和0.149±0.031,差异有统计学意义(P<0.05).且P-p27T187和P-p27S10与肝癌病理分级、临床分期及转移相关,而与发病年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目等无明显相关(P>0.05).结论 磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达水平明显升高,与肝癌的发生发展及转移相关.