一种基因,四种综合征

酪氨酸激酶受体基因发生结构突变，可以产生四种不贩表型。甲状腺癌综合征突变是由于ＲＥＴ位点上某个核苷酸被其他核苷酸替换所致。而ＨＳＣＲ中的ＲＥＴ突变主要是由于基因缺失而产生功能改变。利用切除鼠ｒｅｔ基因以ｒｅｔ－突变鼠的方法，可以检查查鼠发生过程中该基因的作用。     

先天性巨结肠RET基因的突变

酪氨酸激酶受体基因（ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＲＥＴ基因）被定位于染色体１０ｑ１１．２上，其突变可导致３种多发性内分泌瘤综合征和先天性巨结肠的发生。为了探讨ＲＥＴ基因突变在先天性巨结肠发病中的作用，采用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）及单链ＤＮＡ构象多态性分析（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）的方法，对３４例散发先天性巨结肠基因组ＤＮＡ进行ＲＥＴ基因第６外显子突变筛查，并对电泳条带变异的ＰＣＲ产物进行了直接核苷酸序列分析。发现１例为ＧＡＣＴＣＡＧＡＣ→ＧＡＡＴＣＡＡＡＣ碱基突变，导致两个氨基酸发生改变。表明ＲＥＴ基因突变与先天性巨结肠发病有关。     

一种快速简便的缺失突变方法

为了构建能表达稳定的、不易降解的ＴＭ－ＴＮＦ突变体（ＴＭ－ＴＮＦｍ）的基因，本文用改良的Ｓ－ＰＣＲ和ＯＥ－ＰＣＲ两种定位突变技术，成功地构建了缺失３６个碱基的ｐＢＳＫ－ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。与ＯＥ－ＰＣＲ技术（用两对引物进行两次ＰＣＲ反应）相比较，Ｓ－ＰＣＲ技术（用一对引物做一次ＰＣＲ反应）具有快速、经济、简便等优点，但其突变率较ＯＥ－ＰＣＲ低。     

2例睾丸女性化综合征患者雄激素受体基因中的突变

目的：研究２例完全型睾丸女性化综合征（ＴＦＭ）患者的外阴部皮肤成纤维细胞（ＧＳＦ）中的雄激素受体（ＡＲ）。结果：发现两患者ＡＲ的数量无明显改变，但一患者的ＡＲ亲和力明显降低。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（单链构象多态性）方法对两患者ＡＲ基因８个外显子中的７个（Ｂ－Ｈ）分别进行分析，发现两患者ＡＲ基因外显子Ｅ均存在着泳动变位，ＤＮＡ序列分析证实两患者外显子Ｅ各有一点突变，分别使得编码第７４３位和第７５２位的氨基酸发生了改变，后一突变还造成了一Ｓａｕ３ＡⅠ酶酶切位点的消失。结论：结合ＡＲ功能改变及临床表型可以认为，两患者的性分化发育异常是由于两位点的突变所致     

中国人中所见黑蒙性痴呆的新突变

在３个中国婴儿型黑蒙性痴呆（Ｔａｙ－Ｓａｃｈｓｄｉｓｅａｓｅ，ＴＳＤ）家庭中鉴定了３种突变等位基因，这３家无血缘关系，也无亲近婚配。其中两种突变等位基因是新的，第三种则为曾报道过的突变（Ｇ１４４４Ａ）。家庭１，ＤＮＡ经ＰＣＲ体外扩增后直接测序，发现为ＨＥＸＡ基因第５外显子的第５４７核苷酸处插入一个腺嘌呤所造成的移码突变，导致插入部位下游６ｂＰ处提前出现终止密码。用等位基因特异性寡核苷酸（ＡＳＯ）杂交证明先证者为突变基因纯合子。家庭２，用单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析及将扩增的第１３外显子直接测序，发现为第１４５３核苷酸Ｔ转换为Ｃ，造成第４８５位色氨酸为精氨酸取代，以Ｔ１４５３Ｃ（ｅｘｃｏｎ１３）／Ｗ４８５Ｒ表示之（Ｗ代表色氨酸，Ｒ代表精氨酸）。此突变造成了一个Ｆｎｕ４Ｈ１酶切位点。患儿则为此等位基因的纯合子。当Ｔ１４５３Ｃ定向致突变的αｃＤＮＡ在ＣＯＳ－１细胞中表达时，未能测出氨基已糖苷酶（Ｈｅｘ）Ｓ的活性。家庭３的突变为第１３外显子的１４４４核苷酸Ｇ转换为Ａ，造成第４８２位谷氨酸为赖氨酸取代，以Ｇ１４４４Ａ（ｅｘｏｎｌ３）／Ｅ４８２Ｋ表示之（Ｅ代表谷氨酸，Ｋ代表赖氨酸）。此突变发生于一个ＧｐＧ二核苷酸，以     

BTK基因与X—染色体连锁无丙种球蛋白血症

ＢＴＫ是一种细胞内的非受体型蛋白酪氨酸激酶,与多种细胞内的功能有关。已发现ＢＴＫ基因突变是引起Ｘ染色体连锁无丙种球蛋白血症（ＸＬＡ）的重要机制。本将ＢＴＫ基因的发现、结构、编码蛋白以及ＸＬＡ患发生的ＢＴＫ基因的突变类型作一综述。     

中国株白喉杆菌白喉毒素全基因编码序列的克隆及其…

通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）从一中国株中型白喉产毒杆菌的β噬菌体基因组中克隆出１０６５碱基对的白喉毒素全基因编码序列，将ＰＣＲ产物直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ／载体系统，经有关限制性内切酶消化，核苷酸序列分析表明，成功的克隆出白喉毒素全基因编码序列。利用上下游引物中导入的Ｎｄｅ Ⅰ和ＢａｍＨ Ⅰ位点，将白喉毒素基因插入原核表达载体ＰＥＴ－３ａ，从而构建出白喉毒素表达载体ＰＥＴ／ＤＴ。以ＢＬ２１（ＤＥ３）     

外源性微卫星序列转染RER+细胞株观察肿瘤细胞遗传不稳定性的研究

目的利用ＲＥＲ（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｅｒｒｏｒ）表型的人肿瘤细胞株，在体外观察肿瘤细胞微卫星序列（ＭＳ）频发突变，研究人类肿瘤细胞基因组ＤＮＡ的遗传不稳定性。方法把含有人工合成的简单重复序列（ＣＡ）１４和ＬａｃＺ标志基因的重组质粒ｐＣＭＶ－ＣＡＲ经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ方法转染ＲＥＲ＋或ＲＥＲ－人结肠癌细胞株。（ＣＡ）１４插入ＬａｃＺ编码序列之中，干扰了ＬａｃＺ基因的正确读码。当（ＣＡ）１４序列发生碱基缺失或插入突变，碱基数变为３的倍数时ＬａｃＺ基因读码框恢复，表达产生有生物活性的β－半乳糖苷酶。后者通过Ｘ－ｇａｌ染色检出。结果转染ｐＣＭＶ－ＣＡＲ的细胞克隆经Ｈｙｇｒｏｍｉｃｉｎ筛选并建株培养，观察到部份ＲＥＲ＋的质粒转染克隆，ＬａｃＺ能正确读码表达，经Ｘ－ｇａｌ染色试验，细胞变蓝。蓝细胞在建株培养后的传代过程中持续存在。而ＲＥＲ－细胞株，ｐＣＭＶ－ＣＡＲ转染克隆用Ｘ－ｇａｌ染色未见任何蓝色细胞。结论外源性（ＣＡ）１４序列在ＲＥＲ＋细胞转染克隆中可以发生碱基丢失或插入突变。直接反映了肿瘤细胞ＤＮＡ的不稳定性和复杂的突变状态。并提示外源性（ＣＡ）１４可为研究环境因素对人体肿瘤ＤＮＡ突变影响提供直接的观察指标     

鼠抗hTNF－α单克隆抗体轻链可变区基因片段的克隆和cDNA序列测定

目的：获得鼠抗人肿瘤坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）单克隆抗体轻链可变区基因序列。方法：采用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，以一对针对鼠Ｉｇ轻链可变区（ＶＬ）基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中扩增和克隆ＶＬ基因片段，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并进行计算机分析。结果：此ＶＬ基因长３４２ｂＰ，可编码１１４个氨基酸，为开放读框；有明确的框架区（ＦＲＳ）和抗原互补决定区（ＣＤＲＳ）；含有抗体可变区特征性的两个半胱酸残基。在基因数据库（ＥＭＢＬＧｅｎｅＢａｎｋ１９９５）中，未查见相同序列的基因。结论：此ＶＬ基因系重排的鼠Ｉｇ轻链基因。     

α1抗胰蛋白酶变异型Etokyo的基因结构特征

Ｅｔｏｋｙｏ型是东北亚地区蒙古人种特有的α１抗胰蛋白酶（α１－ＡＴ）变异型，也是我国北方汉族人群中最常见的α１－ＡＴ变异型。采用ＰＣＲ直接测序技术首次对Ｅｔｏｋｙｏ型的基因结构特征进行了分析，结果表明Ｅｔｏｋｙｏ基因的编码区的第２８０位密码子发生了单碱基替换，即：ＧＡＣ→ＴＡＣ，所编码氨基酸由天门冬氨酸＾２８０变为酪氨酸，讨论了Ｅｔｏｋｙｏ基因突变性质及该型在人群中的分布特点。     

CD45 MOLECULE AND GENERATION OF EPIDERMAL γδ T CELLS FROM MICE

为探讨ＣＤ４５蛋白酪氨酸磷酸酶在γδＴ细胞发育过程中的作用，观察ＣＤ４５基因敲除变种鼠体内树突状表皮Ｔ细胞（ＤＥＴＣ）等γδＴ细胞。以原位免疫标记法检查小鼠表皮内ＤＥＴＣ的形状、数量及免疫表型；以ＲＴ－ＰＣＲ测定表皮细胞中Ｖγ３ＴＣＲｍＲＮＡ之表达水平；ＦＣＭ检测ＤＥＴＣ在表皮细胞中以及另一组γδＴ细胞、Ｖγ２Ｔ细胞在淋巴结细胞中所占比例。结果显示，ＣＤ４５缺失鼠与野生型鼠相比，上述各项指标仍无明显差异。提示ＣＤ４５分子虽在αβＴ细胞发育过程中起重要作用，但对包括ＤＥＴＣ及Ｖγ２Ｔ细胞在内的γδＴ细胞发育成熟可能并非必需。     

结直肠癌细胞中脾酪氨酸激酶基因甲基化状态和表达的关系

目的：探讨结直肠癌细胞中脾酪氨酸激酶基因甲基化和表达的关系。方法：应用亚硫酸盐修饰测序、甲基化特异性聚合酶链反应和蛋白印迹技术检测结直肠癌细胞脾酪氨酸激酶的甲基化状态以及表达情况；荧光素酶报告分析法研究启动子区域CpG岛的甲基化与启动子活性的关系；甲基化转移酶抑制剂处理脾酪氨酸激酶甲基化失表达的结直肠癌细胞株，观察处理前后细胞内脾酪氨酸激酶基因甲基化状态和表达情况。结果：（1）23个结直肠癌细胞中，9个细胞启动子发生甲基化而失去蛋白质表达；其余则正常表达，甲基化发生率为39.2％；（2）9个甲基化的细胞中，7个存在微卫星不稳定；而14个未发生甲基化的细胞中，仅有4个存在微卫星不稳定。二者之间的差异显著（P<0.05）；（3）脾酪氨酸激酶启动子全长和未甲基化启动子荧光素酶的活性分别是甲基化组的4.5和4.7倍；5-Aza-CdR可恢复甲基化启动子的活性；（4）5-Aza-CdR可去甲基化而使脾酪氨酸激酶基因重新表达，而且具有时间依从性。结论：结直肠癌细胞中，启动子区域的甲基化导致Syk基因丧失表达，5-Aza-CdR可以去甲基化而恢复脾酪氨酸激酶基因的表达。     

DOG1是一种敏感和特异性的胃肠道间质瘤的标记物

胃肠道间质瘤（GIST）是胃肠道最常见的间叶性肿瘤，大多数含有受体酪氨酸激酶基因c-KIT或PDGFRA的活化突变。GIST的诊断主要依赖于免疫组化KIT／CD117蛋白的表达，然而有4％～15％的GIST不表达CD117，导致诊断困难。DOG1是应用基因表达谱技术发现的一种高度表达于GIST的基因，作者采用2种新的鼠单克隆DOGI抗体（DOG1．1和DOG1．3），     

PCR-RFLP技术检测产Vero细胞毒大肠杆菌及其毒素基因分型

ＰＣＲ┐ＲＦＬＰ技术检测产Ｖｅｒｏ细胞毒大肠杆菌及其毒素基因分型王国棠孙新婷沈宝铨产Ｖｅｒｏ细胞毒大肠杆菌（ＶＴＥＣ）是近十年来发现的一种新的病原菌，因其可产生ＶＴ毒素而命名。ＶＴＥＣ可引起腹泻、出血性结肠炎及溶血尿毒综合症。ＶＴＥＣ有多个血清型，其...     

原癌基因HER2／neu表达产物p185蛋白免疫原性研究

用表达ｐ１８５蛋白ＨＥＲ２／ｎｅｕ转基因３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞裂解物免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经３次免疫后，免疫小鼠脾细胞对表达ｐ１８５蛋白的３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞呈现较强的增殖反应（平均刺激指数分别为ＳＩ＝３．１５±１．８８），而对未转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ基因的３Ｔ３细胞的应答较弱（ＳＩ＝１．１４±０．９７）。并检测到１号免疫鼠脾细胞对３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞有特异杀伤作用。免疫鼠血清中出现高水平的抗ｐ１８５抗体（ＯＤ均值＝１．０２±０．１６），较正常对照组（ＯＤ均值＝０．３６±０．１０）有显著差异（Ｐ＜０．００１），表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ表达产物ｐ１８５蛋白具有免疫原性，用于免疫小鼠可诱导出对ｐ１８５蛋白的特异免疫应答反应。     

性联免疫缺陷症的分子和遗传基础

本文介绍导致人类３种性联免疫缺陷症的特异性基因缺陷，其中无γ球蛋白血症（ＸＬＡ）由编码Ｂ细胞的特异性的酪氨酸激酶（ＢＴＫ）基因突变所致。高ＩｇＭ综合征（ＨＩＧＭ）系编码Ｔ细胞ＣＤ４０配体（ＣＤ４０Ｌ）基因突变引起，而严重联合免疫缺陷症（ＸＳＣＴＤ）则源自编码ＩＬ－２受体Ｖ链基因的突变，对这些患者分析所得的结果，既对遗传学诊断和处理该类疾病有所启迪，又是分析相关蛋白分子功能区和了解基因产物生理功能的重要资料。     

性联免疫缺陷症的分子和遗传基础

本文介绍导致人类３种性联免疫缺陷症的特异性基因缺陷，其中无γ球蛋白血症（ＸＬＡ）由编码Ｂ细胞的特异性的酪氨酸激酶（ＢＴＫ）基因突变所致。高ＩｇＭ综合征（ＨＩＧＭ）系编码Ｔ细胞ＣＤ４０配体（ＣＤ４０Ｌ）基因突变引起，而严重联合免疫缺陷症（ＸＳＣＴＤ）则源自编码ＩＬ－２受体Ｖ链基因的突变，对这些患者分析所得的结果，既对遗传学诊断和处理该类疾病有所启迪，又是分析相关蛋白分子功能区和了解基因产物生理功能的     

鼠抗hTNF—α单克隆抗体轻链可变区基因片段的克隆和cDNA…

目的：获得鼠抗人肿瘤坏死因子－α（ｈＴＮＦ－α）单克隆抗体轻链可变区基因序列。方法：采用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，以一对针对鼠Ｉｇ轻链可变区（ＶＬ）基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中扩增和克隆ＶＬ基因片段，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并进行计算机分析。结果：此ＶＬ基因长３４２ｂｐ，可编码１１４个氨基酸，为开放读框；有明确的框架区（ＦＲｓ）和抗原互补决定区     

人源肠毒素大肠杆菌CS3伞毛抗原结构基因的克隆…

利用体外基因扩增技术（ＰＣＲ）和ＤＮＡ重组技术，扩增克隆了人源肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的ＣＳ３伞毛抗原的结构基因。核苷酸序列分析证实克隆的ＤＮＡ片段长度为６０４核苷酸对（ｂｐ）。在该序列中含有单个开放阅读框架，并具有－１０区和－３５区启动子序列以及核糖体结合位点。根据核苷酸序列推导，ＣＳ３结构基因编码１６８个氨基酸。其中前１５个氨基酸为可能的信号肽部分。在该基因编码的氨基酸中，疏水氨基酸约占４６     

中国地方株人乳头瘤病毒16型E7基因一级结构及其…

从湖北地区一宫颈癌活检组织中提取ＤＮＡ，采取加端聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，获得了人乳头瘤病毒１６型Ｅ７基因（ＨＰＶ１６Ｅ７）。将该基因克隆于载体ｐＵＣ１８后，进行了该基因一级结构顺序分析。完整的ＨＰＶ１６Ｅ７湖北株基因（ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ）全长２９４ｂｐ，与已发表的德国株（ＧＳ）大小一致，但其核苷酸顺序中有２处发生了变异，均为Ｃ→Ｔ变异。第４３位ＣＡＡ→ＴＡＡ使相应的谷氨酰胺密码子变为终止密码