核因子kB在妊高征患者胎盘组织的定位及定量研究

目的 探讨核因子kB(NF-kB)在妊高征患者胎盘血管平滑肌及内皮细胞中表达的变化及其在妊高征发病过程中的作用。方法 HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化．免疫组织化学方法及Westem blot检测妊高征患者胎盘组织I-kB、NF-kB的表达。结果 HE染色显示妊高征胎盘绒毛血管变细、数目减少、血管合体膜增厚、胎盘细小血管平滑肌细胞增生、纤维素样坏死明显多于正常妊娠；免疫组织化学显示妊高征患者胎盘血管平滑肌细胞及内皮细胞NF-kB胞浆、胞核染色较正常妊娠明显增强；Westem blot显示妊高征患者胎盘组织胞浆、胞核NF-kB含量、胞核／总NF-kB含量比值明显高于正常妊娠；妊高征患者胎盘组织胞浆I-kB含量明显低于正常妊娠。结论 NF—kB的激活及增加可能为妊高征发病机制的重要信息途径之一。     

内皮型一氧化氮合酶运输介导物在子痫前期患者胎盘组织中的定位及定量研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial n itric oxide synthase traffic inducer,NOSTR IN)在子痫前期(pre-ec lampsia,PE)患者胎盘血管内皮细胞中表达的变化及其在子痫前期发病过程中的作用。方法HE染色后镜下观察胎盘组织及血管的病理变化,免疫组织化学方法及W estern b lot检测子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达。结果HE染色显示子痫前期患者胎盘绒毛血管变细,数目减少,血管合体膜增厚,纤维素样坏死明显多于正常妊娠;免疫组织化学显示正常妊娠和子痫前期患者胎盘血管内皮细胞中都有NOSTR IN的表达,但子痫前期患者胎盘血管内皮细胞胞浆染色较正常妊娠明显增强;W estern b lot显示子痫前期患者胎盘组织中NOSTR IN的表达显著高于正常妊娠(P<0.01)。结论胎盘组织中NOSTR IN表达增加可能是子痫前期发病机制的重要环节之一。     

妊高征患者胎盘组织中胎盘异铁蛋白表达的研究

目的观察胎盘异铁蛋白(p lacental isoferritin,PLF)在妊高征(pregnancy induced hypertension syndrom e,PIH)患者胎盘组织中的表达,探讨其在血管病变中的作用。方法HE染色观察胎盘绒毛血管病变;免疫组化染色法检测妊高征胎盘组织(妊高征组)和正常妊娠胎盘组织(正常组)中PLF的表达,通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其定量分析;W estern b lot检测胎盘血管组织中PLF蛋白质的表达。结果HE染色可见妊高征组胎盘绒毛细小血管壁增厚,管壁纤维素样坏死发生率显著高于正常组(P<0.01);免疫组化染色定量分析发现,PLF在中、重度妊高征胎盘组织中的表达明显低于轻度妊高征组和正常组(P<0.01);W estern b lot显示两组胎盘组织中均有34kDa的PLF蛋白质表达,但PIH组表达量明显降低(P<0.01)。结论妊高征患者胎盘组织中PLF表达水平降低参与了妊高征患者胎盘绒毛血管的病变过程。     

胎盘及脐血管中转化生长因子-β1水平及其对妊高征发病机理的研究

目的探讨胎盘及脐血管中TGF-β1与同征发病机理的关系.方法被研究人群由20例正常产妇和40例不同程度的妊高征患者组成,胎盘组织和脐带组织由剖宫产术后取得,用免疫组化ABC法染色观察TGF-β1在胎盘与脐带组织中的分布与定位,通过高清晰度彩色病理图文分析系统对其进行定量分析,并利用HE染色观察各组胎盘及脐血管的病理变化.结果TGF-β1在各组胎盘合体滋养细胞层及脐动脉全层中均有不同程度的表达.中,重度妊高征组胎盘组织中,其TGF-β1的含量明显高于轻度妊高征组及正常组(P＜0.05),正常组与妊高征组脐血管中TGF-β1的含量无显著性差异(P＞0.05).HE染色可见妊高征组胎盘合体细胞结节增多,纤维素样坏死,脐静脉内膜受损等病理改变.结论妊高征患者胎盘组织中TGF-β1明显升高,提示TGF-β1可能参与妊高征的发病机制.     

胎盘中血管紧张素Ⅱ受体1的表达及其在妊高征发病中的作用

目的探讨人胎盘组织中血管紧张素Ⅱ受体1(AT1)的表达及其在妊高征发病中的作用.方法应用免疫组织化学(SP法)检测胎盘组织中AT1的表达,并用高清晰度彩色图文分析系统 (HPIAS-1000) 对其进行定量分析.结果免疫组化及HPIAS-1000结果显示AT1在中、重度妊高征患者胎盘组织中,合体滋养层细胞及绒毛血管内皮细胞中的表达明显高于正常对照组(P<0.05), 正常妊娠组与轻度妊高征组间AT1的表达无明显差异(P>0.05).结论妊高征患者胎盘组织中AT1的表达的上升可能与妊高征的发病有关.     

妊高征胎盘、脐血管中TNF-α表达及组织病理变化的研究

目的研究妊高征患者胎盘和脐血管组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达及组织的病理变化情况.方法采用SABC法对轻、中、重度妊高征共27例和正常妊娠组10例的胎盘和脐血管组织进行TNF-α的免疫组化染色,观察各组TNF-α的定位、分布和表达量的差异.同时常规HE染色观察胎盘等形态学变化.结果各组均可见TNF的表达,其定位和分布无差异,主要见于合体滋养细胞、蜕膜细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞等.但中、重度妊高征组TNF的表达量较正常组显著升高(P<0.05,P<0.01).此外,中、重度妊高征组可见细胞滋养细胞增生,合体细胞结节、纤维素样坏死显著增多等病理变化,与正常组相比有显著性差异.结论妊高征时,胎盘、脐血管亦可能是TNF-α的重要产生释放部位.且TNF-α可能通过某些直接或间接的途径,参与了妊高征损伤和代偿并存的复杂变化,在妊高征的发生发展中起着重要作用.     

血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞表达TSLP及信号通路研究

目的:观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)是否可以刺激血管平滑肌细胞(VSMC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP),探讨核因子-κB(NF-κB)信号途径在这一过程中的作用.方法:原代培养VSMC,分别用Ang Ⅱ及Ang Ⅱ联合 NF-κB 特异性抑制剂PDTC干预.采用免疫组织化学染色检测胞浆中TSLP的表达,用ELISA法检测细胞培养上清液中TSLP的浓度,用电泳迁移率实验(EMSA)检测 NF-κB的结合活性.结果:正常未经处理的VSMC几乎不表达TSLP,经Ang Ⅱ刺激后胞浆及上清中的TSLP明显增加,并有浓度和时间依赖性,经PDTC预处理后TSLP表达量明显减少.相同条件下Ang Ⅱ可激活VSMC的NF-κB信号通路,PDTC可抑制这一过程.结论:Ang Ⅱ能够刺激血管平滑肌细胞表达TSLP,其作用机制可能是上调了NF-κB的结合活性.     

转化生长因子3β在妊高征和正常妊娠胎盘组织中的差异表达

目的探讨转化生长因子3β(TGF-3β)蛋白及mRNA在妊高征和正常妊娠胎盘组织中表达的差异.方法取10例妊高征和10例年龄配对的正常妊娠的胎盘组织,应用Western blot方法,检测妊高征和正常妊娠胎盘组织中TGF-3β蛋白的表达水平;应用定量PCR方法,检测妊高征和正常妊娠胎盘组织中TGF-3βmRNA表达水平.结果与正常妊娠胎盘组织TGF-3β蛋白和mRNA表达水平相比,妊高征胎盘组织中的TGF-3βmRNA表达水平增加,妊高征胎盘组织中的TGF-3β蛋白表达水平也明显增加.结论 TGF-3β在妊高征胎盘组织中表达增加,妊高征胎盘中TGF-3β高表达可能与妊高征的病因有关.     

Bcl—2蛋白在正常、妊高征及胎儿宫内发育迟缓胎盘中的表达

目的 通过检测Bcl-2蛋白在正常各期胎盘、妊高征胎盘和胎儿宫内发育迟缓胎盘中的表达，探讨Bcl-2蛋白在胎盘的发育过程中的功能及妊高征和胎儿宫内发育迟缓的病理机制。方法 取正常的8－10周、20－22周、足月胎盘以及妊高征和胎儿宫内发育迟结的胎盘组织固定，石蜡包坦，用ABC法抗Bcl-2免疫组织化学染色，光镜观察。结果 正常早孕绒毛合体细胞滋养怪、细胞滋养层细胞核、绒毛吵轴细胞阳性，细胞滋养层的胞质、绒毛中轴基质阴性。正常中期和足月胎盘滋养层细胞、血管内皮细胞阳性。与正常足月胎盘相比，妊高征、台儿宫内发育迟缓胎盘几科不着色。结论 Bcl-2蛋白在正常各期胎盘中均有表达，而在妊高征和胎儿宫内发育迟缓胎盘几乎不表达，Bcl-2蛋白表达异常与妊高征与胎儿宫内发育迟缓的发病机制有关。     

切应力诱导内皮细胞表达IL-8基因的信号转导

目的现已确定动脉粥样硬化是一种炎症疾病,单核/巨噬细胞在动脉内膜下集聚是导致动脉粥样硬化损伤发展的基础;血流低切应力促进其损伤的发展.趋化细胞因子MCP-1对单核/巨噬细胞起强力趋化和激活作用,并有报告切应力可诱导其基因的表达.新近报道在层流作用下IL-8亦是单核/巨噬细胞与内皮细胞相互作用的重要调节因子.本研究旨在观察切应力诱导人脐静脉血管内皮细胞IL-8mRNA的表达,探讨Toll/NF-κB信号转导通路对其基因激活的介导作用.方法4.2dyn/cm2层流切应力处理人脐静脉血管内皮细胞,提取总RNA,应用RT-PCR和Northern杂交技术检测切应力作用不同时间后IL-8、TLR-2和TLR-4mRNA的表达.免疫印迹技术检测IκB磷酸化和降解.免疫荧光细胞化学染色检测NF-κB胞核易位.结果切应力作用0.5h后IL-8mRNA表达逐渐增高,2h时达到很高水平.胞浆蛋白IκB和磷酸化IκB的免疫印迹显示4.2dyn/cm2层流切应力作用10min后磷酸化IκB水平即显著增加,30min后又逐渐下降,与之相应IκB含量随切应力作用时间而逐渐下降,到1h时几乎测不出,表明在切应力作用下内皮细胞胞浆NF-κB抑制因子IκB发生了磷酸化和降解.NF-κBp65亚基免疫细胞化学染色显示在4.2dyn/cm2切应力作用0.5h后内皮细胞核逐渐着色,1.5h时细胞核几乎全着色,表明胞浆NF-κB在切应力作用下发生了易位,从胞浆进入胞核.RT-PCR检测和Northern杂交分析显示内皮细胞固有表达TLR-2和TLR-4mRNA,在4.2dyn/cm2切应力作用1h后TLR-4mRNA的表达显著增强,而TLR-2mRNA的表达变化不明显.结论流体切应力可诱导血管内皮细胞表达IL-8,活化转录因子NF-κB.在切应力作用下内皮细胞TLR-4mRNA表达增强,提示Toll/NF-κB信号转导通路可能参与动脉粥样硬化性炎症反应.     

NBD多肽预处理对局灶脑缺血再灌注大鼠脑内核因子-κB核转位活化的影响

目的探讨NBD多肽预处理对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑缺血皮质细胞内核因子-κB活化的影响。方法将SD健康雄性大鼠（280～300g）共36只随机分为假手术组（n=6）、模型组（n=15）、药物组（n=15）。缺血模型制备前2h经右侧侧脑室注射NBD多肽25μl进行预处理。运用改良线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞再灌注大鼠模型。运用免疫组化检测再灌注后72hNF-κBp65在胞浆／胞核的蛋白表达变化;运用免疫荧光定位及Western印迹（半定量）检测NF-κB p65及IκBα的蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示与假手术组比较,再灌注72h模型组胞浆／胞核内NF-κB p65大量表达（P〈0．05）;NBD多肽预处理后NF-κB p65主要在胞浆表达,胞核内表达明显减少（P〈0．05）;免疫荧光双标定位及Western印迹半定量检测显示模型组胞浆／胞核内NF-κB p65蛋白均大量表达（P〈0．05）,IκBα蛋白呈现低表达（P〈0．05）;NBD多肽预处理后胞核内NF-κB p65蛋白表达明显减少,主要以胞浆表达为主（P〈0．05）,IκBα胞浆／胞核内表达显著增加（P〈0．05）。结论局灶脑缺血再灌注72hNF-κB p65蛋白胞核表达明显增加．NF-κB核转位／活化过程被激活：NBD多肽预处理后通过增加胞核／胞浆内IκBα表达有效阻止NF-κB的核转位／活化过程,从而有效地减轻再灌注后72h局灶脑缺血再灌注对脑组织的损害。     

积雪草苷通过抑制NF-κB核转移影响糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：观察积雪草苷是否通过抑制核因子-κB（NF-κB）核转移而影响糖尿病大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。方法：通过连续喂养高脂饮食8w后一次性腹腔注射链脲佐菌素40mg.kg^-1建立2型糖尿病大鼠模型,取模型成功大鼠胸主动脉中膜血管平滑肌细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,SMA免疫组化染色鉴定细胞后给予40、80、160、320μg·ml^-1积雪草苷干预,计数法描绘血管平滑肌细胞生长曲线,共聚焦显微镜下观察积雪草苷对NF-κB核转移影响,CCK-8法测定积雪草苷IC50。结果：与正常组对比,糖尿病组VSMC生长速度快;同模型组比较,积雪草苷40μg.ml-1以上剂量组能明显抑制糖尿病VSMC中NF-κB从胞浆转移到胞核。积雪草苷抑制糖尿病血管平滑肌细胞增殖IC50为209.26μg·ml^-1。结论：积雪草苷抑制糖尿病VSMC增殖可能与NF-κB核转移有关。     

妊高征胎盘组织的病理改变

目的观察妊娠高血压综合征(妊高征)胎盘组织病理改变,探讨妊高征胎盘缺血缺氧的病理基础.方法采用HE染色法观察正常胎盘30例、妊高征胎盘25 例的病理表现,比较出妊高征胎盘的病理改变.结果与正常足月胎盘比较,妊高征胎盘中细胞滋养细胞明显增生,滋养细胞下基底膜增厚,绒毛间质纤维蛋白沉积,合体细胞结节增多,合体细胞出芽,发生纤维素样坏死的绒毛增多,绒毛血管增多,绒毛大部分不成熟.结论妊高征胎盘组织发生细胞滋养细胞增生等改变是其胎盘缺血缺氧的病理基础.     

小檗碱对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖影响研究

目的:观察小檗碱(Berberine)对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖影响及对核因子-κB(NF-κB)的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素55mg.kg-1诱发糖尿病大鼠模型,取建模成功大鼠胸主动脉中膜血管平滑肌细胞进行培养,倒置显微镜下观察细胞形态,SMA免疫组化染色鉴定细胞,计数法观察细胞的生长曲线,CCK-8法测定小檗碱IC50,共聚焦显微镜下观察小檗碱对VSMC中NF-κB核转移的影响。结果:与正常组对比,糖尿病组VSMC生长速度快,小檗碱能明显抑制糖尿病血管平滑肌细胞增殖,IC50为6.001±0.853μmol.L-1,而对正常大鼠VSMC增殖的IC50为18.229±0.434μmol.L-1(P<0.05)有剂量依赖性;小檗碱能抑制糖尿病VSMC中NF-κB从胞浆转移到胞核。结论:小檗碱呈剂量依赖性能抑制糖尿病VSMC增殖与NF-κB的核转移。揭示小檗碱可能有抑制糖尿病大血管病变作用,而此作用可能与抑制NF-κB激活有关。     

妊高征患者胎盘组织中瘦素mRNA表达与NO含量的测定及临床研究

目的检测正常妊娠、妊高征妇女胎盘组织中瘦素mRNA的表达及与一氧化氮含量的关系,探讨瘦素在妊高征发病中的作用.方法用逆转录-聚合酶链技术(RT-PCR)测定38例正常妊娠妇女、62例妊高征妇女分娩时胎盘组织中瘦素mRNA表达水平;用硝酸还原酶法测定胎盘组织NO的含量.结果(1)正常晚孕及妊高征妇女胎盘瘦素mRNA表达水平分别为:0.139±0.12、0.603±0.287(其中轻、中、重度妊高征胎盘瘦素水平分别为:0.145±0.056、0.38±0.122、0.75±0.199).(2)妊高征组胎盘瘦素水平明显高于正常晚孕组,差异有显著性(P＜0.01),妊高征患者胎盘瘦素水平随病情加重而升高;重、中、轻度之间差异均有显著性(P＜0.01、P＜0.05).(3)妊高征胎盘组织中NO含量低于正常晚孕妇女,差异有显著性(P＜0.05);重度妊高征患者胎盘NO含量明显低于中度、中度低于轻度,差异有显著性(P＜0.01、P＜0.05),(4)妊高征胎盘瘦素mR-NA表达与NO含量呈负相关(r=-0.6294,P＜0.01),与收缩压、舒张压、平均动脉压、尿蛋白呈正相关(r=0.547,0.377,0.45,0.517;P=0.015,0.015,0.020,0.040),重度妊高征组与新生儿体重呈负相关(r=-0.447,P=0.018).结论胎盘瘦素mRNA表达水平在妊高征组中明显升高,随着妊高征病情加重,胎盘瘦素mRNA表达逐渐增加;同时,胎盘组织中NO含量在妊高征妇女中明显降低,胎盘瘦素mRNA表达与胎盘组织中NO含量呈负相关.因此,瘦素可能与妊高征发病有关,可望成为妊高征病情发展的检测指标之一.     

血红素加氧酶-2在妊娠高血压综合征发病中的作用研究

目的探讨血红素加氧酶-2与妊娠高血压综合征发病机理的关系.方法应用ABC免疫组化染色法检测42例妊高征和14例正常妊娠孕妇胎盘组织中HO-2的表达,通过高清晰彩色病理图文分析系统对其定量分析.结果 HO-2在正常妊娠胎盘的合体滋养层细胞及绒毛细胞内皮细胞中均有表达.中、重度妊高征胎盘组织中HO-2的表达明显低于正常组(P<0.01).结论胎盘组织中HO-2表达水平降低可能参与了妊高征的发病过程.     

NF-κB激活在宫颈重度非典型性增生及鳞癌中的作用

目的：探讨核因子NF-κB激活在人宫颈鳞癌发生及发展中的作用。方法:125例不同组织学分级的人类宫颈标本为实验对象，包括32例轻度鳞状上皮非典型增生( LSILs/CIN-Ⅰ),33例重度鳞状上皮非典型增生(HSILs 或 CIN-Ⅱ/CIN-Ⅲ),38 例鳞状细胞癌（SCCs）,22例正常宫颈（normal)。SCCs中包括分化良好宫颈鳞癌（WDSCC）9例，中等程度分化（MDSCC）20例，分化较差（PDSCC）9例。应用免疫组织化学方法，免疫印迹方法检测NF-κB p65在不同组织学分级中的表达水平。结果:① 免疫组织化学显示在正常宫颈组织及轻度宫颈上皮内非典型增生组织中，RelA主要定位于胞浆，而在重度宫颈上皮内非典型增生及宫颈鳞状细胞癌中，RelA主要位于胞核中。② 免疫印记方法显示在正常宫颈组织及轻度宫颈上皮内非典型增生组织中RelA主要在胞浆提取物中，而在重度宫颈上皮内非典型增生及宫颈鳞状细胞癌中胞核提取物中表达增强，而在胞浆提取物中相对减少，差异显著（P＜0.05） 。结论：NF-κB活化与宫颈癌的发生及发展有关，NF-κB p65可能成为人类宫颈癌治疗的新靶点。     

细胞色素c在妊高征发病中的作用

目的探讨细胞色素c在妊娠高血压综合征发病中的作用。方法取妊高征患者和正常健康产妇产后胎盘组织,用改良的张均田法测定组织中细胞色素c含量。结果重度妊高征组胎盘组织细胞色素c含量显著低于中度妊高征组(P<0.05);重度和中度妊高征组胎盘组织细胞色素c含量均显著低于正常组(P<0.05)。结论妊高征妇女胎盘组织细胞色素c含量明显低于正常孕妇,提示妊高征发病机制中有能量代谢传递障碍,线粒体能量产生异常参与妊高征发病过程。     

核因子κB p65和p50在正常豚鼠耳蜗中的定位表达

目的:研究核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的亚单位p65和p50在正常豚鼠耳蜗中的定位与表达。方法:应用免疫组织化学SP法。结果:NF-κB p65免疫反应活性细胞位于螺旋韧带Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型纤维细胞和根细胞,而螺旋神经节、血管纹和螺旋器均未见染色;NF-κB p50免疫反应活性细胞位于耳蜗螺旋器的内、外毛细胞和支持细胞,此外,螺旋神经节、螺旋韧带和血管纹中也有p50表达,在耳蜗的上述部位中,NF-κB p50免疫染色多位于胞质内,胞核极少。结论:NF-κB p65和p50在正常豚鼠耳蜗的多种细胞中都有表达。     

子痫前期患者胎盘上HO-2及TNF-α表达的研究

目的探讨妊娠高血压疾病子痫前期患者胎盘中HO-2及TNF-α表达及其与妊高病发病机制之间的关系。方法采用免疫组织化学方法测定24例子痫患者和24例正常妊娠妇女(对照组)胎盘中HO-2、TNF-α表达水平,并分析两者相关性。结果 1.HO-2主要表达于血管内皮细胞、平滑肌细胞胞浆及胞膜上、而滋养细胞及间质细胞中表达较少。且HO-2在轻度及重度子痫前期患者表达均低于正常妊娠妇女,两者分别与正常晚孕组比较,轻度子痫前期与正常对照组相比差别无显著性,而重度子痫前期与正常对照组比较,差别有显著性。2.TNF-α主要表达于滋养细胞、血管内皮细胞胞膜中,而间质细胞内表达最少。且TNF-α在轻度及重度子痫前期患者表达均低于正常妊娠妇女,两者分别与正常晚孕组比较,差别均有显著性。3.正常组、PIH组HO-2及TNF-α存在负相关关系(r=-0.536、-0.574)。结论 HO-2可能是胎盘血管内皮细胞的保护性因素,而TNF-α可能引起胎盘血管内皮细胞损伤,可导致血管调节因子失衡,两者存在负相关关系,在妊高病发病过程中起一定作用。