三七三醇皂苷对大鼠脑缺血/再灌注脑损伤保护作用的实验研究

目的观察三七三醇皂苷（PTS）对大鼠脑缺血／再灌注损伤的脑保护作用，并初步探讨其作用机制。方法采用Longa改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞（MACO）2h、再灌注6h、24h、72h的大鼠短暂局灶性脑缺血／再灌注模型，动物随机分假手术组、生理盐水对照组、三七三醇皂苷组。免疫组化法检测IL-1-β和ICAM-1。流式细胞仪检测细胞凋亡，同时利用TTC染色法测脑梗死体积。结果三七三醇皂苷组大鼠再灌注72h时脑梗死体积显著减小，6h、24h、72h各时间点IL-1β和ICAM-1阳性细胞数及凋亡细胞数亦明显减少。结论三七三醇皂苷可抑制脑缺血／再灌注后炎症因子分泌及细胞凋亡，从而起到脑保护作用。     

国产降纤酶对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后行为学和梗死体积的影响

目的：探讨国产降纤酶对大鼠局灶性脑缺血／再灌注动物模型的神经行为学和脑梗死体积的影响，以证明其是否有脑保护作用。方法：采用线检法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型，用Zea Longa 5分制评分和TTC染色法评价神经行为学和脑梗死体积。由吉林大学第一医院和复旦大学华山医院共同进行实验研究，每部分实验动物各做一半。动物随机分为缺血3h及再灌注3h,6h,24h和72h；缺血6h及再灌注3h,6h,24h;缺血24h等共10组。降纤酶采用8U／kg腹腔注射给药。结果：行为学结果：在10组中仅于缺血6h再灌注6h组Zea Longa评分有明显改善（P＜0．05），其余各组与盐水对照组比较无显著性差异。梗死体积测定结果：在缺血3h各组中，只有缺血3h再灌注72h这个时间点比盐水组无明显缩小（P＞0．05），其余各时间点梗死体积均明显缩小（P分别＜0．05、0．01和0．001）。在缺血6h和24h组中，各时间点与盐水组比较均明显缩小（分别为P＜0．01和P＜0．05）。结论：国产降纤酶对大鼠局灶性脑缺血及再灌注损伤有一定的保护作用。     

国产降纤酶对大鼠缺血/再灌注脑损伤的保护作用

目的观察3种国产降纤酶对大鼠缺血/再灌注脑损伤的保护作用。方法采用线栓法大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型,观察3种国产降纤酶对缺血/再灌注不同时程动物脑梗死体积、血流量、神经功能缺损评分及梗死灶内肉眼出血率的影响。结果持续缺血3h,降纤酶治疗的各组动物脑梗死体积明显小于生理盐水对照组(P<0.05);缺血3h再灌注3h和72h,降纤酶治疗的各组动物脑梗死体积与生理盐水组相比无明显变化,但缺血3h再灌注6h和24h,降纤酶治疗的各组动物脑梗死体积比生理盐水组明显减少(P<0.05)。缺血3h再灌注6h、24h和72h,降纤酶治疗组动物脑血流量比生理盐水组明显增加(P<0.05)。但治疗组动物行为学评分较生理盐水组无相应改善,梗死灶内有肉眼出血的动物较生理盐水组多,但无统计意义。结论国产降纤酶能明显减小缺血/再灌注脑损伤动物的梗死体积和增加脑血流量,改善损伤后的低灌注状态,对脑组织有一定保护作用。     

缺血后处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤内质网应激通路相关分子的影响

目的探讨缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及与内质网应激通路相关分子GRP78、caspase-12的关系。方法成年雄性Wistar大鼠58只,随机分为假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和缺血后处理组(IP组),采用线栓法阻断大脑中动脉制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注(MCAO)模型。大鼠脑缺血/再灌注后24 h进行神经行为学评分和脑梗死体积测定;脑缺血/再灌注6 h、12 h、24 h后免疫组织化学方法检测脑缺血侧半暗带区GRP78、caspase-12蛋白的表达。结果与缺血/再灌注组相比,后处理组再灌注24h神经行为学评分明显降低,脑梗死体积明显减少(P<0.05);后处理组再灌注12 h、24 h GRP78蛋白表达明显增加,再灌注24 h caspase-12蛋白表达明显减少。结论脑缺血后处理可能通过减弱内质网应激过程从而对随后发生的再灌注损伤起到了神经保护作用。其机制可能是增加GRP78蛋白表达、减少caspase-12蛋白表达而减轻神经细胞的凋亡。     

短期禁食诱导自噬对大鼠脑缺血损伤的保护作用

目的探讨短期禁食对大鼠脑局灶性缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法 57只成年雄性SD大鼠随机分为五组。假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、短期禁食组(Fasting组)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)和溶剂对照组(vehicle组)。I/R组采用右侧大脑中动脉阻闭120 min后再灌注72 h。Fasting组大鼠禁食但不禁水48 h后给予脑缺血再灌注损伤。3-MA组将3-MA 30μg溶于生理盐水10μl,于短期禁食前30 min行侧脑室注射给药,24 h后第二次侧脑室注射给药,共两次。脑缺血损伤检测指标为神经行为学评分和脑梗死容积。自噬的检测采用Westernblot测定微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)的表达。结果再灌注后72 h,与I/R组比较,Fasting组可改善神经行为学评分,缩小脑梗死容积。Fasting组LC3-II的蛋白表达显著高于I/R组和S组。与Fasting组比较,3-MA组神经行为学评分降低,脑梗死容积扩大,脑损伤程度3-MA组与I/R组差异无统计学意义,表明抑制短期禁食所诱导的自噬,短期禁食的脑保护作用消失。结论短期禁食通过诱导自噬的形成减轻其后发生的大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。     

人尿激肽原酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠VEGF表达影响的研究

目的 探讨人尿激肽原酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用随机数字表法将56只雄性SD大鼠分为假手术组(8只)、生理盐水组(24只)、人尿激肽原酶组(24只),其中生理盐水组、人尿激肽原酶组依据再灌注后不同取材时间又分为6 h,12 h,24 h,72 h,7 d五个亚组.采用线拴法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用神经功能评分、TTC染色、脑梗死体积测定、光镜检测等方法对不同组大鼠予以评价.采用免疫组化技术观察缺血再灌注不同时间点大鼠脑组织梗死中心区及半影区VEGF表达变化情况.结果 人尿激肽原酶组大鼠神经功能评分低于生理盐水组大鼠(P<0.05);24 h脑梗死体积测定,人尿激肽原酶组平均值为(53 261.96±7 326.75)μm3,生理盐水组平均值为(92 715.84±13 755.44)μm3,差异有统计学意义(P<0.05);人尿激肽原酶组VEGF表达在不同时间点均明显强于生理盐水组(P<0.05).结论 人尿激肽原酶能减轻脑缺血再灌注模型大鼠的神经功能损伤程度,减少脑梗死体积,促进VEGF的表达,具有脑缺血后神经保护作用.     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能损伤、细胞凋亡及caspasc-3蛋白表达的影响.方法 雄性SD大鼠24只采用随机数字表法分为假手术组、脑缺血再灌注组、生理盐水治疗组、依达拉奉治疗组,每组6只.除假手术组外,其余3组均采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型.依达拉奉治疗组于脑缺血开始时及再灌注后12 h分别腹腔注射依达拉奉3 mg/kg,生理盐水治疗组同时间注射等量生理盐水;假手术组同样过程造模,但不插入尼龙线造成缺血.造模后24 h后进行大鼠神经行为学评分;应用免疫组织化学及Western blot检测caspase-3蛋白表达水平的变化;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)研究神经细胞凋亡的变化.结果 与脑缺血再灌注组及生理盐水治疗组相比,依达拉奉治疗组大鼠神经行为学评分明显减少,caspase-3免疫阳性细胞及蛋白表达明显减少,凋亡细胞也减少,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 依达拉奉能有效减轻脑缺血灌注损伤后神经细胞凋亡.改善神经功能缺损症状,推测其机制与抑制caspase-3蛋白表达有关.     

缺血后处理下调大鼠脑缺血再灌注时TLR4和NF-кB表达

目的探讨缺血后处理(IP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和核因子-кB(NF-кB)表达的影响。方法将110只成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组(n=10)、缺血再灌注(I/R)组和后处理(IP)组,后两组根据再灌注的不同时间各分为6h、12h、24h、48h、72h 5个亚组(n=10)。建立局灶缺血再灌注和缺血后处理模型。观察大鼠的神经行为学评分、脑梗死体积、额顶叶皮层TLR4、NF-кB蛋白及mRNA表达情况。结果与I/R组相比,IP组大鼠神经行为学评分显著改善,脑梗死体积明显减少(P<0.05)。TLR4、NF-кB蛋白在I/R组和IP组的表达于再灌注6h时开始升高,24h达高峰。与I/R各相应亚组比较,IP各亚组TLR4、NF-кB蛋白表达均明显降低(P<0.05)。TLR4、NF-кB mRNA在I/R组和IP组的表达时间曲线与蛋白相一致。结论IP可通过抑制TLR4和NF-кB的表达,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,改善神经功能。     

环孢素A对大鼠脑缺血再灌注后IL-1β表达的影响

目的探讨环孢素A对大鼠脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用及其对IL-1β表达的影响.方法将72只大鼠分为假手术组、生理盐水对照组和环孢素A治疗组,参照Zealonga线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠脑缺血2 h再灌注22 h和70 h后,分别对各组各时间点大鼠进行脑TTC染色评价脑梗死体积、采用RT-PCR和放免法分别对缺血区皮层IL-1β基因表达和蛋白表达进行测定.结果各时间点环孢素A治疗组与生理盐水对照组相比,环孢素A治疗组脑梗死灶体积比对照组明显减小(P＜0.05);环孢素A可有效降低大鼠局灶性脑缺血再灌后脑组织中IL-1β基因和蛋白的表达(P＜0.01);与上述两组相比,假手术组各项观察指标则无明显异常.结论IL-1β参与脑缺血再灌注损伤,环孢素A对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用,环孢素A的脑保护机制可能与抑制缺血区内IL-1β的表达有关.     

莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型,分别于MCAO后1h腹腔注射莱菔硫烷2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg.于缺血2h再灌注24h时进行神经行为缺损评分,TTC染色评价脑梗死体积,测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.免疫荧光组织化学染色法检测黄核蛋白NQ01和脂质过氧化酶Prx6的表达.结果 莱菔硫烷给药组与对照组相比均能改善大鼠脑缺血再灌注后神经行为缺损评分,减少脑梗死体积.其中5mg/kg组能显著改善大鼠脑缺血再灌注后神经行为缺损评分,减少脑梗死体积,增强SOD活性,降低MDA含量.免疫荧光组织化学染色法提示NQ01和Prx6的表达明显增强.结论 莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能与上调内源性抗氧化蛋白NQ01和Prx6的表达有关.     

白果内酯对高血糖大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察白果内酯对高血糖大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法 采用50%的葡萄糖溶液腹腔注射(6 ml/kg)建立急性高血糖模型.采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,按随机数字表方法将40只大鼠分为高血糖假手术组(假手术组),高血糖+缺血再灌注损伤组(模型组),高血糖+缺血再灌注损伤+白果内酯组(白果内酯组),白果内酯分三个剂量组(2.5,5,10 mg/kg),每组各8只.白果内酯组于术前3 d连续给予白果内酯腹腔注射,术前1 h再给予腹腔注射1次.脑缺血2 h,再灌注24 h后行神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑含水量测定,同时测定脑组织中水通道蛋白-4(AQP4)mRNA的表达,超氧化物歧化酶(SOD)的活力,计算脑组织中丙二醛(MDA)的含量及去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)的表达.结果 白果内酯(5,10 mg/kg)组大鼠与模型组相比,神经功能缺损评分下降,脑梗死体积缩小,脑含水量降低,缺血侧脑组织中AQP4 mRNA的表达下调,SOD活力提高,MDA含量减低,NE、DA及5-HT的含量增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 白果内酯对高血糖条件下的局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

润坦注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经元凋亡的影响

目的研究润坦对局灶性脑缺血再灌注的神经保护效应.方法制备线栓法大脑中动脉闭塞再灌注模型,干预组每天给予润坦3 mg/kg,对照组给予等量生理盐水,每日对大鼠神经功能缺损进行评分,于再灌注12 h、24 h、48 h和5 d处死动物,切片作TUNEL原位凋亡检测.结果润坦可以显著改善术后第2 d大鼠的神经功能缺损(P＜0.05),降低致死率,减少再灌注24 h以后的细胞凋亡数目(P＜0.05).结论润坦可以抑制大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡,对急性期脑梗死可能有神经保护效应.     

An optimal dose of tea polyphenols protects against global cerebral ischemia/reperfusion injury

Previous studies addressing the protection of tea polyphenols against cerebral ischemia/ reperfusion injury often use focal cerebral ischemia models, and the optimal dose is not unified. In this experiment, a cerebral ischemia/reperfusion injury rat model was established using a modified four-vessel occlusion method. Rats were treated with different doses of tea polyphenols (25, 50, 100, 150, 200 mg/kg) via intraperitoneal injection. Results showed that after 2, 6, 12, 24, 48 and 72 hours of reperfusion, peroxide dismutase activity and total antioxidant capacity in brain tissue gradually increased, while malondialdehyde content gradually decreased after tea polyphenol intervention. Tea polyphenols at 200 mg/kg resulted in the most apparent changes. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling and flow cytometry showed that 200 mg/kg tea polyphenols significantly reduced the number and percentage of apoptotic cells in the hippocampal CA1 region of rats after cerebral ischemia/reperfusion injury. The open field test and elevated plus maze experiments showed that tea polyphenols at 200 mg/kg strengthened exploratory behavior and reduced anxiety of cerebral ischemia/reperfusion injured rats. Experimental findings indicate that tea polyphenols protected rats against cerebral ischemia/ reperfusion injury and 200 mg/kg is regarded as the optimal dose.     

Neuroprotective effect of Spirulina in cerebral ischemia–reperfusion injury in rats

Epidemiological studies indicate that the intake of Mediterranean-style diet is inversely associated with risk of stroke, cardiovascular diseases, and cancer. Spirulina is widely used nutritional supplement rich in proteins and antioxidants. Evidence demonstrates that the impaired energy metabolism and the excessive generation of reactive oxygen radicals contribute to the brain injury associated with cerebral ischemia. In the present study, the protective effect of Spirulina was investigated in transient middle cerebral artery occlusion (MCAO)-induced focal cerebral ischemia–reperfusion injury in rats. Male albino rats were divided into six groups: control, sham-operated group, ischemic control group, and Spirulina-pretreated groups (45, 90 and 180 mg/kg/p.o.). Spirulina was administered once a day, for 7 days. The rats were subjected to a 2-h right MCAO via the intraluminal filament technique and 22 h of reperfusion. Pretreatment with Spirulina significantly reduced the histological changes and neurological deficits. Spirulina at a dose of 180 mg/kg significantly reversed the elevated brain malondialdehyde (MDA) content and restored the decreased activities of brain superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and reduced glutathione (GSH) indicating that Spirulina has the protective potential against cerebral ischemia injury and its protective effects may be due to its antioxidant property.     

钙拮抗剂对大鼠脑缺血后血脑屏障通透性的影响

目的 研究钙离子拮抗剂对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(BBB)通透性和脑梗死灶体积的影响. 方法 插线法制作大鼠脑缺血再灌注模型.缺血2 h后再灌注.将150只大鼠按随机数字表法分尼莫地平组和对照组,每组分再灌注6h、12h、24 h、48h、72 h五个时间段,再灌注后尼莫地平组和对照组立即分别腹腔注射尼莫地平和生理盐水2 mg/kg.每12小时注射一次,用甲酰胺荧光法及透射电镜观察不同时段BBB通透性破坏的情况,TTC染色后计算梗死灶体积百分比.结果 大鼠脑缺血再灌注后BBB通透性和梗死灶体积百分比随时间延长逐渐增加.且BBB通透性的增加呈现两个高峰,第一个高峰在再灌注后12 h,第二个高峰在再灌注后48 h.尼莫地平组BBB通透性及脑梗死灶体积百分比的增加均较对照组明显,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 脑缺血再灌注增加BBB的通透性和脑梗死灶体积百分比.再灌注后给予尼莫地平可加重这些病理变化.     

神经生长因子对兔局灶性脑缺血再灌注损伤的治疗时间窗及MR影像学评价

目的研究神经生长因子(NGF)对脑缺血再灌注损伤保护作用的有效时间窗,同时利用MR成像技术对其进行评价。方法采用兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血2 h再灌注72 h模型,分别于缺血再灌注0、1、36、h应用微量进样器将NGF立体定向导入梗死灶周,并于再灌注不同时间点应用MR影像学、TTC染色和流式细胞术评价家兔梗死体积、神经功能缺损和凋亡状态。结果缺血再灌注0、13、h组梗死灶周注射NGF后,经MRI检查所测梗死体积分别为(229.9±17.1)(、260.7±24.2)、(314.6±25.3)mm3,与对照组[(468.6±29.7)mm3]比较差异有统计学意义(均P<0.01);缺血再灌注6 h组梗死体积为(441.1±14.8)mm3,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。采用TTC染色所测梗死体积与MRI检查结果一致。脑缺血再灌注3 h内注射NGF,其神经功能缺损评分明显降低,凋亡率明显下降;再灌注6 h后注射NGF则无明显作用。结论NGF对兔局灶性脑缺血再灌注损伤的有效时间窗为再灌注损伤3 h内,MR影像学检查可作为定量评价基因疗效的可靠指标。     

病变侧亚低温对大鼠局脑缺血再灌注后Akt、Survivin表达的影响

目的 通过检测Akt及Survivin蛋白的表达,探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响.方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）局脑缺血再灌注模型,将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血组分别缺血2,6 h再灌注4,24,72 h,1周,2周后处死,亚低温组于缺血后13～14 min实施病灶侧亚低温持续4 h.免疫组织化学法检测Akt、Survivin 蛋白的表达.结果 相同缺血再灌注时间点,亚低温组比常温组缺血侧Akt、Survivin、表达水平显著增高（P＜0.05）.结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt、Survivin表达的核内移,从而抑制神经元凋亡,促进脑缺血后神经功能恢复.