编码破伤风毒素C片段(TetC)的DNA疫苗初免及TetC粘膜加强的免疫策略

为确定粘膜途径能用来增强 DNA疫苗初免诱生的抗原特异性应答 ,作者将 6～ 8周龄雌性 BAL B/c小鼠随机分入研究组和对照组 ,研究组小鼠于第 1、7天后四头肌注射1 0 0μg编码破伤风毒素 C片段的 DNA质粒( pc DNA3/Tet C) ,对照组按同样程序注射1 0 0 μg pc DNA3,两组于第 36和 50天肌肉注射或鼻腔途径加强接种 1 0 μg Tet C和 /或1 μg 霍乱毒素 ( CT)或磷酸盐缓冲盐水( PBS)。分别于第 0、2 1、35、4 6、6 0天采血 ,并取脾分离脾细胞。用 Tet C或百日咳杆菌抗原刺激脾细胞检测增殖应答 ,用 ELISA法检测脾细胞释放的细胞因子…     

HSV-2全长gD DNA疫苗肌内途径的优越性和共同接种GM-CSF基因的增强作用

本文报道了分别用表达 2型单纯疱疹病毒 ( HSV- 2 )全长 g D或截短 g D( Δg D)的质粒p CDNAg D或 p CDNAΔ g D通过不同途径免疫小鼠 ,比较其诱导的体液和细胞免疫应答 ,并证明与粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子(GM- CSF)基因表达盒共同接种可增强HSV DNA疫苗的保护作用。　　每组 1 0只小鼠 ,在 0、1 5和 30天分别肌内 ( i.m.)或皮内 ( i.d.)接种 p CDNAg D或p CDNAΔg D 5 0μg,有些组还将 GM- CSF表达盒 30 μg与 p CDNAg D共同接种 ,末次接种后 1 5天 ,取血清、阴道洗液 ,用间接ELISA测定 Ig G,并分析亚型。通过测…     

与TPA信号序列融合的JEV包膜蛋白编码质粒DNA在小鼠脑内病毒攻击模型中的保护效力研究

为了研究特异信号序列对乙型脑炎病毒( JEV)包膜 ( E)蛋白在小鼠脑内病毒攻击模型中的保护效力 ,作者分别构建了全长 E蛋白 ( E)和仅含 N末端 398年氨基酸 ( ΔE)的质粒 DNA p CMVE和 p CMVΔE;在此基础上 ,又构建了含来源于组织纤溶酶原激活物( TPA)的分泌型信号序列的质粒 p CMVTE和 p CMVTΔ E。将以上 4种质粒体外瞬时转染 Cos7细胞 ,检测 E蛋白表达量和亚细胞定位。分别于 0、 1 4天将 1 0 0 μg的不同质粒DNA肌肉或 1 0 0 μl的 BIKEN JEV疫苗皮下接种 4～ 6周龄的远交瑞士雄性小鼠。末针接种后 1周 ,用 1 0 L D50…     

基因枪接种质粒DNA诱导的免疫应答重复性优于肌肉注射

作者在 BALB/c小鼠中比较了基因枪接种与肌肉注射编码单个细胞毒性 T淋巴细胞 ( CTL )表位或卵白蛋白 ( OVA)的质粒DNA诱导的免疫应答重复性的异同。　　李斯特菌溶血素 O( L LO)的 91 - 99寡核苷酸残基是一个 H- 2 Kd 限制性显性 T细胞表位。含 LL O 91 - 99寡核苷酸的质粒p91 mam可表达 L LO91 - 99多肽。质粒 p CI-OVA是将 OVA的 c DNA插入到表达质粒p CICMV增强子 /启动子区域的 Eco RI酶切位点构建而成的。将 6～ 1 2周龄的 BALB/c小鼠分成两组 ,肌肉注射组小鼠免疫前先注射 5 0 μl0 .2 5 %布比卡因以增强细胞对…     

C3d增强麻疹血凝素中和抗体滴度的研究

作者研究了表达分泌型麻疹血凝素 ( H)和补体成分 C3d融合物的 s H- 3C3d- DNA疫苗诱导中和抗体应答的情况。　　用 p TR6 0 0表达载体构建两种疫苗质粒 :一种表达麻疹病毒 Edmonston株的分泌型血凝素 ( s H) ,另一种表达 C3d和 H的融合物 ( s H- 3C3d)。 s H包含 H的胞外部分 ,但不包括跨膜区和胞质区。　　采用 6～ 8周龄 BALB/c小鼠 ,用基因枪腹部接种 2剂共 0 .1μg DNA,于 4、2 6周用相同剂量各加强 1次。用 1 2 %脂质转染胺试剂转染 2 μg DNA于人胚肾细胞 2 93T,以抗原捕捉 ELISA法检测 H。运用 EL ISA法检测血清抗 …     

HIV-gp160、HIV-1 Env CTL表位肽(E7)与粘膜佐剂LT(R192G)联合鼻腔免疫的效果

大肠杆菌不耐热肠毒素 ( LT)是良好的粘膜佐剂。作者以人类免疫缺陷病毒 ( HIV)gp1 6 0及 E7为抗原与 LT突变体 R1 92 G联合投递 ,测定了对相关抗原的免疫应答及佐剂的效力。　　 2 0 μg gp1 6 0加或不加 R1 92 G5 μg,间隔1周鼻腔接种雌性 BAL B/c小鼠 ,共 3次。末次免疫后 1周采集小鼠支气管肺泡灌洗液及阴道洗液 ,以 EL ISA测定抗原特异性抗体应答。心脏穿刺采血并收集脾脏进行体外抗原再刺激试验。免疫 E7的小鼠 ,间隔 1周鼻腔接种 1 0 0 μg E7(加或不加 R1 92 G5 μg) ,共 4次。于末次免疫后 9天或 82天收获脾细胞进行铬释…     

接种编码乙型脑炎病毒E糖蛋白的质粒DNA可提供显著保护作用

作者构建了单独编码乙型脑炎病毒(JEV)包膜 (E)糖蛋白的 DNA质粒 p CMX-ENV,该质粒转染 Vero细胞后可在细胞内表达 E蛋白。作者就其在小鼠肌内 (im)和鼻内 (in)接种对脑内 (ic) JEV攻击的防御作用进行了研究。　　对 4～ 6周龄异系交配瑞士雄性小鼠间隔两周在四头肌 im接种 5 0 μg DNA质粒 ;或间隔 1周共五次 in接种 2 0 μg DNA质粒。末次接种后两周 ,用 JEV P2 0 788株作 ic攻击(1 0 0 pfu/鼠 ) ,每日观察至攻击后 1 5天。　　经 im免疫 p CMXENV的小鼠的存活率为 33%～ 70 % ,总体存活率为 5 1± 1 2 %。经 in免疫 p CMX…     

C群脑膜炎球菌多糖与B群外膜囊结合菌苗作为候选二价脑膜炎球菌菌苗

作者将 C群脑膜炎球菌荚膜多糖 (PSC)与 B群外膜囊 (OMV)偶联 ,得到一种多糖蛋白结合菌苗 (PS C- OMV) ,其中 OMV由巴西 B群 N44/89流行株提纯获得 ,PS由C群 IMC2 1 35株提纯获得。作者将雄性C3H/Hepas小鼠随机分为五组 ,每组 1 0只 ,分别于 0、1 4和 2 8天腹腔注射 0 .5 ml以 2 5μg Al(OH) 3为佐剂的下列制剂盐溶液 :2 .5 μg PS-OMV结合物、2 .5μg PS加 1 0μg OMV、2 5μgPS、1 0 μg OMV或生理盐水。在首剂注射后0、1 4、2 8、42天经后眼眶血管丛采血 ,血清贮存于 - 2 0℃。用 EL ISA检测抗 PS C和OMV抗体 ,用…     

IL-18能增强IL-12在诱导抗重组抗原Th1型免疫应答时的佐剂性

为探讨白细胞介素 1 8(IL- 1 8)在 Th1型免疫应答中的作用 ,作者用大肠杆菌 M1 5表达的重组曼氏血吸虫肌球蛋白 2 .3号片段为抗原进行研究 ,免疫动物为 C5 7BL /6雌性小鼠。作者将实验小鼠分成 3组 ,第 1组颈部皮下注射氢氧化铝、2 .3号抗原 (1 0μg)和 IL - 1 2(0 .5 μg)的混合液 ,第 2组皮下注射氢氧化铝和 IL- 1 8(0 .5 μg)和 /或 IL- 1 2 (0 .5 μg)的混合物 (佐剂对照组 ) ,第 3组注射无佐剂的 2 .3号抗原 (1 0 μg,抗原对照组 )。 1 4天后各组再注射第 2剂。 4天后通过心脏穿刺采集血清 ,取腋部淋巴结 (LN)和脾脏进行分析。结…     

编码配体-抗原融合体的DNA疫苗的定点免疫应答

作者以结合了淋巴结内皮小静脉 CD34的 L -选择蛋白 (Lsel)和结合了抗原提呈细胞 (APC) CD80和 CD86的 CTL A4作为配体 ,并以 CD5信号肽 (分泌必需 )为非定向对照 ,分别构建表达配体 -人免疫球蛋白 (h Ig)融合体的 Lsel- h Ig、CTL A4- h Ig和 CD5 L-h Ig质粒。分别将 1 0 0μg上述质粒于 0和 1 4天注射 6～ 8周龄雌性小鼠的股四头肌 ,用ELISA检测抗体 ,用51 Cr释放法检测细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL)应答。研究显示 ,抗体和 CD4T细胞的应答均增强 ,且抗体产生速度加快。免后 2周 ,免疫 CTL A4- h Ig质粒的3种不同品系 H- …     

以rCTB为佐剂与rHBsAg共同鼻内接种的粘膜免疫

重组霍乱毒素 B亚单位 ( r CTB)由p NU2 1 2 - CTB转化短芽孢杆菌经 30℃培养5天 ,亲和层析法纯化所得 ;而重组 HBs Ag( r HBs)由酵母表达 (属 adr型 )。取 7周龄雌性 BALB/ c小鼠 ,分为 4个组 (每组 5或 6只 ) ,在第 0、1 4、2 1、2 8天分别用 1μg r HBs、1 μg r HBs+ 1 0 μg r CTB、 5μg r HBs及 5μgr HBs+ 1 0 μg r CTB鼻内免疫 ,第 35天处死。另取 5只未免疫的 BALB/ c小鼠作为对照。每次免疫及处死前收集各组小鼠的肺部、鼻腔、小肠、大肠灌洗液、唾液、阴道分泌物及血清标本 ,用 EL ISA法测定抗 - HBs。　　…     

结合电穿孔术的肌肉DNA免疫可增强抗结核杆菌抗原的细胞及体液免疫应答

6组 B6 D2小鼠分别注射 1 0 0 μg、1 0 μg或 1μg插入了编码结核杆菌抗原 85B序列( ag85b)的 v1 Jns- tp A质粒或插入了编码牛分枝杆菌抗原 MPB70序列 ( mpb70 )的pc DNA3质粒 ,每个剂量注射两组小鼠 ,其中一组在 DNA注射时结合电穿孔术 ,另一组则不采用电穿孔术。对照小鼠注射盐水并结合电穿孔术。在注射 DNA后 4和 8周分别取小鼠血清 ,用 ELISA法检测其亚类抗体水平。　　取 6只 BALB/c小鼠注射 1 2 0μg插入了编码结核杆菌抗原 85A序列 ( ag85a)的VR1 0 2 0质粒 ,其中 3只结合电穿孔术。同样取 6只小鼠注射 1 0 0 μg编码…     

截短的HCV核心蛋白DNA疫苗在小鼠诱导迟缓但强烈的免疫应答

将编码丙型肝炎病毒 ( HCV)核心蛋白 1～ 1 76位氨基酸的 DNA片段插入真核表达质粒载体 p AEC- K6 ,得到质粒 p IDKCo。以 6～ 8周龄雌性 BAL B/c小鼠为动物模型 ,实验组和对照组各 6只。实验组于四头肌注射p IDKCo,对照组注射空载体 p AEC- K6。两组小鼠分别在 0、3、7、1 4和 2 1周注射质粒1 0 0μg。在初次免疫后的 0、2、4、6、8、1 0、1 2、1 6、2 3及 2 7周取小鼠血清 ,用含 HCV核心蛋白 1～ 1 2 0位氨基酸的重组蛋白 Co.1 2 0作为捕获抗原 ,用 EL ISA和竞争 ELISA检测小鼠血清的抗 HCV核心抗体 ,并还用Co.1 2 0作…     

能增强抗原特异性免疫应答的新局部接种法

DNA疫苗局部接种于皮肤是一种有用的接种方法 ,但其诱导的免疫应答水平较低。为了克服这一难题 ,作者采用了一种新的局部接种技术 ,即先用快速作用粘合剂去除小鼠皮肤角质细胞 ,然后再将表达细胞因子〔白细胞介素 1 2 ( IL- 1 2 )和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ( GM- CSF)〕的质粒 ( p IL- 1 2和p GM- CSF)和 1型人类免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) DNA质粒 ( p CMV1 6 0 B/pc REV)涂于皮肤进行局部接种。　　作者分别在 0、7和 1 4天将 1 0～ 1 0 0 μgDNA表达质粒涂于去除角质层的雌性BALB/c小鼠皮肤 ,于末次加强后 7天和 3个月…     

多价小基因DNA疫苗诱导免疫应答的定量定性分析

作者比较了多价小基因 DNA疫苗与全长蛋白疫苗诱导的 CD8+T细胞应答及保护效力 ,并证实了位于翻译起始密码子侧翼的Kozak序列对小基因疫苗的重要性。　　作者用淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒( LCMV)感染 8～ 1 2周龄 CB/ 6小鼠后 7天 ,取小鼠脾细胞与转染了 p CMV- SV(具有Kozak- GCCATGA序列的质粒 )、p CMV-SV- (具有 GCCCATG序列的质粒 )或p CMV- β(表达 β-半乳糖苷酶的质粒 ,阴性对照 )的组织培养细胞 BAL B c1 7( H- 2 d)和 KO(H- 2 b)一起培育。细胞毒性试验结果显示 :转染了 p CMV- SV的 KO细胞被细胞毒性 T…     

局部涂抹流感DNA疫苗的保护作用

流感疫苗一般采用血凝素 ( HA)和神经氨酸酶 ( NA)作抗原 ,肌肉注射。但 HA基因易突变 ,也有以突变率较小的核蛋白 ( NP)为抗原的疫苗。基质 ( M)基因产物有比 NP更低的突变率和分子量 ,因此作者选用编码流感病毒 M蛋白等的 DNA疫苗 ,研究经皮免疫的效果。　　作者将 6～ 8周龄 BALB/c小鼠背部皮肤用粘胶除去表皮层后 ,分别以 5、2 0、1 0 0μg剂量于 0、7、1 4天三次局部涂抹流感病毒 A/PR/8/34株 M基因 DNA疫苗 p ME1 8S- M。在免疫前和免疫的第 2 1天采集血液和粪便样品 ,用 EL ISA检测抗体滴度 ;通过细胞毒性 T细胞 ( C…     

HPLC测定人血浆中螺旋霉素的浓度及其药代动力学研究

目的 :建立人血浆中螺旋霉素 (SPM )浓度的测定方法及进行人体药代动力学的研究。方法 :采用高效液相色谱法 ,色谱柱 :phenomenex C1 8色谱柱 (5 μm,2 5 0 mm× 4 .6 mm) ,以乙腈∶磷酸二氢钾缓冲液(0 .0 5 mol/ L,p H为 2 .86 ) =5∶ 18(v/ v)为流动相 ,以乳酸司帕沙星为内标 ,流速 1.0 ml/ min,柱温为 2 0℃ ,紫外检测波长 2 32 nm,用螺旋霉素与内标的峰面积比进行定量。线性范围 2 5～ 32 0 0μg/ L ,最低检测浓度为2 0μg/ L ,对 18名健康受试者单次口服 4 5 0万 u螺旋霉素片剂后的药代动力学进行研究。结果 :18名健康受试者的血药浓度数据经 3p97拟合 ,符合血管外给药一室模型 ,AU C0～ t为 (44 72 .0± 6 74 .3) μg· h/ L,Cmax为(16 14 .4± 2 98.2 ) μg/ L,Tmax为 (2 .75± 0 .31) h,T1 /2 ke为 (2 .6 4± 0 .70 ) h。结论 :该方法简便 ,稳定性好 ,噪音小 ,灵敏度和准确度高 ,能够满足人体内低浓度药物的测定及药代动力学研究的要求。     

注射用盐酸头孢吡肟中L-精氨酸的HPLC测定

采用 HPL C法测定注射用盐酸头孢吡肟中 L-精氨酸的含量。采用 L i Chrospher Diol色谱柱 (2 5 0× 4 .0 m m,5 μm) ,0 .0 1m ol/L磷酸二氢铵溶液 (用磷酸调节 p H至 2 .0± 0 .1) -乙腈 (30∶ 70 )为流动相 ,检测波长 2 0 6 nm。L-精氨酸在 5 0～ 4 0 0 μg/ml范围内线性关系良好 (r=0 .9999) ;方法的平均回收率为 10 0 .8% (RSD1.0 % )。     

用重组卡介苗抑制小鼠爪垫中麻风杆菌增殖

本文首次报道重组卡介苗 ( r BCG)能在动物模型中控制分枝杆菌感染。根据 BCG分泌的主要抗原成分 Ag85 A、 Ag85 B及Ag85 C可诱生强烈 T细胞应答和 γ干扰素( IFN-γ) ,以及用 Ag85 A成分免疫能提供抵抗结核杆菌或麻风杆菌攻击的保护作用 ,作者构建了质粒 p85 A和包含 p85 A的 r BCG( r BCG/85 A) ,后者产生的 Ag85 A量比亲本BCG高 8倍。　　作者首先检测了 BCG和 r BCG/85 A的短期效力。分别将 5 .0× 10 7BCG或 r BCG/85 A皮内注射 6周龄 C5 7BL /6小鼠 ,1个月后 ,用 5 .0× 10 3活麻风杆菌爪垫内攻击 ,2 5周后杀死小…     

鼻内免疫新型佐剂与多肽疫苗后的抗体应答

毒性是限制人用粘膜接种疫苗有效佐剂研制和应用的主要因素。作者研究了两种新型佐剂大肠杆菌不耐热肠毒素突变体( L TR72 )和含未甲基化 Cp G基序的合成寡脱氧核苷酸 ( Cp G ODN )与含麻疹病毒( MV) F蛋白构象 B细胞表位肽模拟物的多抗原肽结构 ( MAP- M2 )一起鼻内接种的效果。　　将 5～ 8周龄雌性 BAL B/ c小鼠随机分成 5组 ,每组 4只 ,各组均于 0、7、1 4和 2 8天鼻内接种 5 0 μg MAP- M2 ,佐剂分别为 :A组生理盐水 (阴性对照 ) ;B组 1 0 μg L TR72 ;C组 1 0μg Cp G ODN;D组 1 0μg L TR72 +1 0 μg Cp G ODN;E…