脾虚大鼠脑内IL-18蛋白及基因表达变化和益气扶正中药的干预研究

目的研究脾虚模型脑内白细胞介素18(IL-18)蛋白及基因表达变化和益气扶正中药的干预作用。方法 40只大鼠随机分成4组,正常组、模型组、治疗1组(四君子汤)、治疗2组(玉屏风散),每组各10只。采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立脾虚大鼠模型,采用称重法检测免疫器官指数,采用免疫组化法与原位杂交法检测下丘脑腹侧核、海马CA1区的IL-18蛋白表达与IL-18mRNA表达变化及四君子汤、玉屏风散的治疗作用。结果模型组胸腺及脾脏指数明显下降,模型组IL-18蛋白与IL-18mRNA表达在下丘脑腹侧核、海马CA1区明显降低;治疗组胸腺及脾脏指数增加,上述脑区的IL-18蛋白与IL-18mRNA表达明显增加。结论益气扶正中药四君子汤、玉屏风散可能通过影响免疫器官,调控细胞因子IL-18蛋白及基因表达而调节机体免疫功能。     

四君子汤对脾虚患者血浆细胞因子的影响

目的 观察四君子汤对脾虚患血浆细胞因子的影响。探讨脾虚与细胞因子的关系。方法 66例脾虚患分为四君子汤治疗组和六味地黄汤治疗组,采用免疫分析技术对脾虚患及其血浆IL-2,IL-2R,IL-4,IL-5,TNF-α,IgE,sICAM-1等细胞因子水平进行测定,用逆转录聚使边反应技术（RT-PCR）对外周淋巴细胞IL-4mRNA,IL-5mRNA表达进行定量分析,用斑点杂交法检测外周血CD2mRNA。结果 脾虚患ＩL-2,IL-4,IL-5,TNF-α,IgE 水平下降,sICAM-1和sIL-2R水平升高,外周淋巴细胞IL-4mRNA,IL-5mRNA和CD2mRNA弱表达,表现为免疫功能下降,经过四君子汤治疗,上述各项指标恢复正常。结论 四君子汤可通过益气健脾调节细胞因子的水平和功能。结论 四君子汤可通过益气健脾调节细胞因子的水平和功能。从而达到增强免疫功能的作用。     

脾虚模型大鼠脑内细胞因子IFN-γ活性表达与益气扶正中药干预机制

目的 研究脾虚模型大鼠脑内干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)活性表达,以及扶正益气中药的干预作用.方法 40只大鼠随机分成4组,正常组、模型组、治疗1组(四君子汤组)、治疗2组(玉屏风散),每组各10只.采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立大鼠脾虚模型,采用称重法检测免疫器官指数,采用免疫组化法与原位杂...     

益气健脾止泻汤对脾虚型溃疡性结肠炎大鼠TNF-α和 IL-8的影响

目的：探讨益气健脾止泻汤对脾虚型溃疡性结肠炎大鼠模型TNF-α和IL-8的干预调节作用。方法建立脾虚型溃疡性结肠炎大鼠模型,观察益气健脾止泻汤对溃疡性结肠炎大鼠血清TNF-α和IL-8表达水平的影响。结果与模型组比较,益气健脾止泻汤可显著降低模型大鼠血清中TNF-α、IL-8水平（P＜0．01）。结论益气健脾止泻汤治疗脾虚型溃疡性结肠炎的作用机理与下调促炎因子TNF-α、IL-8的表达有关。     

四君子汤和玉屏风散对脾虚大鼠脑内信号转导和转录激活因子1mRNA水平变化的影响

目的观察四君子汤和玉屏风散对脾虚大鼠脑内信号转导和转录激活因子1(STAT1)mRNA水平变化的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、治疗1组和治疗2组,除正常组外其余3组造脾虚模型。治疗1组和治疗2组分别给予四君子汤和玉屏风散灌胃治疗。6周后断头取脑,石蜡包埋,切片处理后采用原位杂交法检测脑内STAT1 mRNA的水平变化。结果模型组STAT1mRNA阳性细胞在海马CA1区和下丘脑腹侧核的平均光密度(MOD)均较高,与正常组比较差异显著(P<0.05);治疗1组、治疗2组在海马CA1区和下丘脑腹侧核平均光密度较低,与模型组比较差异显著(P<0.05);治疗1组与治疗2组之间无显著差异(P>0.05)。结论脾虚对免疫功能的影响与JAK-STAT通路表达有关。四君子汤、玉屏风散可通过影响JAK-STAT信号通路起到改善机体免疫功能,提高免疫能力的作用。     

草果知母汤加减方及其拆方对戊四唑点燃大鼠脑内NMDAR1 mRNA的影响

目的：探讨草果知母汤加减方及其拆方抗癫痫作用机制。方法：使用戊四唑（pentyle-netetrazol,PTZ）点燃大鼠模型,利用原位杂交法定量分析大鼠脑内N-甲基-口天冬氨酸受体1（N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1）mRNA的表达。结果：草果知母汤加减方及其拆方治疗4周后,与模型组比较,全方组和拆方1组海马CA1、皮质内NMDAR1 mRNA表达水平均显著下降（P〈0．01）;拆方2组仅皮质内NMDAR1 mRNA表达水平显著下降（P〈0．01）。结论：草果知母汤加减方及其拆方能降低脑内NMDAR1 mRNA表达,从而起到抗癫痫作用。     

脾虚大鼠脑神经生化指标变化的实验研究

研究中医脾虚证对大鼠脑记忆功能生化指标的影响.用泻下和劳倦法制作脾虚大鼠模型,再用四君子汤治疗,检测大鼠的脑生化指标.结果：脾虚组AchE明显升高,与正常组比较差异非常显著（P＜0.01）,与四君子汤治疗组比较,差异显著（P＜0.05）;脾虚组NO含量、NOS活性明显较正常组及四君子汤治疗组低（P＜0.05）.结论：脾虚影响大鼠脑记忆功能的生化指标.     

白芍总苷调节系膜增生性肾炎大鼠IL-1及其受体拮抗剂表达的实验研究

目的研究白芍总苷（TGP）制剂对系膜增生性肾炎（MsPGN）模型大鼠IL-1及其受体拮抗剂（IL-1Ra）表达的影响。方法采用尾静脉注射葡萄球菌肠毒素及腹腔和尾静脉交替注射牛血清白蛋白以建立MsPGN大鼠模型,随机分为正常组、模型组、TGP低、中、高剂量组和雷公藤多甙（TW）组及TGP与TW联合用药组,分别检测各组大鼠治疗前、后24h尿蛋白定量和肾功能指标,观察各组大鼠肾组织病理学改变,并采用RT-PCR法检测肾组织IL-1、IL-1RamRNA表达水平。结果TGP各治疗组大鼠24h尿蛋白定量和血肌酐水平均较模型组显著降低（P〈0.01或0.05）;肾组织系膜基底膜面密度较模型组显著减少（P〈0.01）,毛细血管袢面密度较模型组显著增加（P〈0.01）;肾组织IL-1mRNA表达水平较模型组显著减少（P〈0.01或0.05）,IL-1ramRNA表达水平显著高于模型组（P〈0.01或0.05）,并呈一定剂量依赖趋势。结论TGP可减少MsPGN模型大鼠24h尿蛋白定量,并改善肾功能和肾脏病理损害,其作用机制可能与调节肾组织IL-1和IL-1ramRNA的表达水平有关。     

四君子汤对脾虚小鼠感染念珠菌后小肠组织中IFN-γ表达影响

目的:研究小鼠在脾虚时经口感染白念珠菌后经四君子汤灌胃治疗,检测小肠组织中IFN-γ mRNA及蛋白表达含量的变化,探讨脾虚小鼠在感染白色念珠菌经中药治疗后的免疫机制。方法:选取SPF级昆明种小白鼠,随机分组,经口感染白念珠菌,中药四君子汤灌胃治疗,采用RT-PCR和western-blot法检测各组小鼠小肠组织中IFN-γ mRNA及蛋白表达水平。结果:与空白对照组比,脾虚模型组、脾虚+白念珠菌、脾虚+白念珠菌+氟康唑组、脾虚+白念珠菌+四君子汤组小鼠小肠组织当中IFN-γmRNA及蛋白的表达含量在治疗后均显著上升(P0.05或者P0.01),有统计学意义。与脾虚模型组比较,脾虚+白念珠菌组、脾虚+白念珠菌+氟康唑组、脾虚+白念珠菌+四君子汤组小鼠小肠组织当中IFN-γ mRNA及蛋白的表达含量在治疗后均升高(P0.05或P0.01),有统计学意义。与脾虚+白念珠菌组比较,脾虚+白念珠菌+氟康唑组、脾虚+白念珠菌+四君子汤组小鼠小肠组织当中IFN-γ mRNA及蛋白的表达含量在治疗后均无统计学意义。与脾虚+白念珠菌+氟康唑组比较,脾虚+白念珠菌+四君子汤组小鼠小肠组织当中IFN-γ mRNA及蛋白的表达含量在治疗后无统计学意义。结论:当机体在脾虚状态下,经消化道感染白念珠菌后会导致免疫力下降,而四君子汤通过益气健脾,增强机体免疫力,起到治疗作用。     

大鼠全脑缺血/再灌注后TLR3mRNA与IL-6mRNA的表达及其相关性

目的 观察大鼠全脑缺血/再灌注（I/R）后海马Toll样受体3（TLR3）mRNA与白细胞介素-6（IL-6）mRNA的表达并分析其相关性,探讨TLR3在大鼠脑I/R损伤中的作用.方法 将SD大鼠随机分为假手术组（sham组）和I/R组,采用Pulsinelli-Brierley 4动脉阻断方法制作大鼠全脑I/R损伤模型,在全脑缺血15 min后,分别再灌注6、12、24、48、72、96 h,采用RT-PCR方法检测不同时间点海马TLR3 mRNA与IL-6 mRNA的表达情况并做相关性分析.结果 与sham组相比,大鼠全脑I/R 12 h,海马TLR3 mRNA与IL-6 mRNA表达均开始增加,72 h达到高峰,96 h下降,仍高于sham组（P〈0.01）,6 h时与sham组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.TLR3 mRNA与IL-6 mRNA的表达呈正相关（r=0.959,P〈0.01）.结论 大鼠脑I/R后TLR3 mRNA表达上调,可能通过促使炎性细胞因子的分泌介导脑I/R炎性损伤.     

四君子汤对脾虚证大鼠胃肠电活动的影响

【目的】观察四君子汤对脾虚证大鼠胃肠电活动变化的影响,探讨四君子汤健脾益气作用机制。【方法】大鼠随机分3组：正常对照组、脾虚模型组、四君子汤组,每组各10只,用利血平制作实验性脾虚证大鼠模型14d后,四君子汤组灌胃四君子汤治疗,正常对照组和脾虚模型组予生理盐水灌胃。用双极银丝电极记录胃窦、十二指肠电活动。【结果】脾虚模型组与正常对照组比较,胃电慢波节律、振幅及运动指数均下降（P〈0．01,P〈0．05）。四君子汤组治疗后上述各值均恢复正常,与正常对照组比较无统计学差异。【结论】四君子汤能调整脾虚大鼠紊乱的胃肠电活动。     

肝硬化大鼠腹腔感染时脾脏TNF-α、IL-6基因的表达

目的探讨肝硬化腹腔感染时脾脏肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）mRNA的表达。方法60只SD大自鼠建立对照、肝硬化两组动物模型，用盲肠结扎加穿刺法（CLP）形成腹腔感染模型，用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测肝硬化大鼠脾脏组织中TNF-α和IL-6mRNA的表达，并行病理形态学检查。结果（1）肝硬化组脾组织中TNF-α、IL-6mRNA的表达均显著低于对照组，差异有高度统计学意义（P〈0．01）；（2）肝硬化大鼠脾组织中TNF-α mRNA的表达在CLP后迅速上升，3h达高峰（P〈0．01），后呈缓慢下降趋势；IL-6mRNA的表达则缓慢上升，12h达高峰（P〈0．01），之后下降。对照组TNF-α mRNA在CLP后迅速上升，IL-6mRNA则缓慢上升，24h仍维持高水平（P〈0．01）；（3）肝硬化大鼠CLP后有显著的腹腔感染及心、肺、肝、肾组织病理改变。结论（1）在病理状态下，脾脏的免疫功能受损，脾组织TNF-α mRNA和IL-6 mRNA的表达显著下调；（2）肝硬化大鼠在腹腔感染时抗感染能力下降，更易发生MODS，且与CARS状态有关。     

益气健脾法对脾虚证大鼠模型骨骼肌线粒体ATPase活性的影响

目的观察益气健脾法代表方剂对实验性脾虚证大鼠模型骨骼肌线粒体腺苷三磷酸酶（ATPase）活性的影响。方法取SD大鼠60只随机分为6组,即正常对照组、脾虚模型组、四君子汤组、当归补血汤组、黄芪四君子汤组、当归补血汤合四君子汤组,采用破气苦降加饥饱失常法复制脾虚证大鼠模型,用定磷法检测大鼠骨骼肌线粒体ATPase的活性。结果益气健脾方药能显著升高脾虚证大鼠模型骨骼肌线粒体ATPase的活性。结论从微观的角度验证了中医“脾主四肢”“脾主肌肉”的理论。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

动脉粥样硬化大鼠主动脉IL-1β、TNFα、IL-10及IL-10R的表达及银杏叶提取物的作用

目的:研究动脉粥样硬化(AS)大鼠主动脉IL-1β、TNFα、IL-10及IL-10R的表达及观察银杏叶提取物(EGB)对它们的作用.方法:建立AS大鼠模型,动物分成3组,即对照组、AS组和EGB组,每组6只.EGB组每天灌胃给予EGB 100 mg/kg,对照组、AS组每日给予同体积水.8周后,采用ELISA、RT-PCR方法检测IL-1β、TNFα、IL-10及IL-10R水平及mRNA表达.结果:AS大鼠主动脉IL-1β、TNFα、IL-10、IL-10R水平及mRNA表达均显著高于对照组(P＜0.01),EGB组主动脉IL-1β、TNFα水平及mRNA表达均低于AS组,IL-10、IL-10R水平及mRNA表达均高于AS组(P＜0.01).结论:EGB对致炎细胞因子IL-1β、TNFα表达的显著抑制作用,对抗炎细胞因子IL-10及IL-10R表达的显著上调作用可能是其抗AS的机制之一.     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6 mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

黄疸大鼠脾细胞白细胞介素-4、Υ-干扰素、蛋白激酶CαmRNA的表达及茵陈蒿汤的干预效应

目的探索黄疸大鼠脾脏Th1/Th2细胞因子、蛋白激酶C（PKC）αmRNA的表达情况及茵陈蒿汤的干预效应。方法大鼠随机分为3组：正常对照组、黄疸模型组、茵陈蒿汤组。ELISA法、原位杂交法检测大鼠脾细胞分泌IL-4、IFN-Υ水平及PKCαmRNA表达。结果黄疸模型组IFN-Υ/IL-4比值明显低于正常对照组（P〈0.01）,而茵陈蒿汤IFN-Υ/IL-4比值与正常对照组比较无显著差异（P〉0.05）。黄疸模型组脾细胞PKCαmRNA表达明显高于正常组（P〈0.01）,而茵陈蒿汤治疗后,脾细胞PKCαmRNA表达明显减少。结论黄疸大鼠脾脏ThI/Th2细胞因子分泌呈紊乱状态,与PKCαmRNA表达水平有关,而茵陈蒿汤具有调节作用,可能是其治疗黄疸的机制之一。     

培土生金法对脾气虚变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织STAT-6 mRNA表达的影响

目的：通过培土生金中药对脾虚型变态反应性鼻炎（AR）大鼠STAT-6 mRNA、IL-13 mRNA表达影响的研究,为临床运用培土生金法治疗AR提供理论依据。方法：采用病证结合的方法造模,用RT-PCR法检测鼻黏膜STAT-6 mRNA、IL-13mRNA的表达。结果：培土生金中药能够降低实验性AR大鼠鼻黏膜STAT-6 mRNA、IL-13 mRNA的表达。结论：培土生金中药可能通过调节STAT-6 mRNA、IL-13 mRNA的表达,对实验性AR大鼠发挥治疗作用。     

脑溢安颗粒对脑出血大鼠脑内IL-6mRNA及蛋白表达的影响

目的：探讨脑溢安颗粒 (简称脑溢安)对脑出血的保护作用机制。方法：采用胶原酶注射建立大鼠脑出血模型,以原位杂交及Western blotting方法检测实验性脑出血大鼠脑内白介素6（interleukin-6,IL-6）mRNA与蛋白的表达及脑溢安的影响。结果：脑溢安治疗组脑内IL-6 mRNA表达信号在术后4~7 d较模型组增强,且IL-6蛋白表达在术后6 h~7 d均明显高于模型组(P<0.01)。 结论：上调IL-6蛋白的表达、维持IL-6 mRNA及蛋白的高水平表达可能是脑溢安保护脑出血损伤的作用机制之一。     

益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂对肾间质纤维化大鼠TGF-β1/Smad通路及TRB3的影响

目的：观察益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂———益气化瘀化痰制剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruc－tion,UUO）模型大鼠肾间质纤维化的影响及其可能机制。方法：42只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、替米沙坦组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用UUO法建立肾间质纤维化模型。UUO术后3周,模型组及假手术组以等量生理盐水灌胃,其余各组以相应制剂灌胃治疗,每日1次,连续用药12周后处死大鼠。检测大鼠血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、肌酐（serum creatinine,Scr）水平。取大鼠术侧肾组织,HE染色观察组织形态学改变,Masson染色观察胶原纤维沉积情况,Western blot检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达水平;qRT-PCR 检测TGF-β1、Smad3、Smad7、TRB3、α-SMA、E-cadherin mRNA 表达水平。结果：与假手术组比较,模型组肾间质纤维化明显,BUN、Scr水平明显升高（P<0.01）,而各药物干预组肾间质纤维化程度及BUN、Scr水平均较模型组明显改善,其中益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组改善较明显（P<0.05）。与模型组相比,益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组TGF-β1、Smad3、TRB3、α-SMA mRNA表达明显降低（P<0.05）,E-cadherin mRNA表达明显升高（P<0.05）。各组间Smad7 mRNA表达无显著差异。TGF-β1、α-SMA、E-cadherin的蛋白表达与其mRNA表达趋势一致。结论：益气、化瘀、化痰及益气化瘀化痰中药制剂和替米沙坦均能改善UUO大鼠肾间质纤维化,且以益气化瘀化痰制剂、替米沙坦及益气制剂的改善作用较为明显,其机制可能是通过调控TRB3、TGF-β1/Smad信号通路,进而抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。