系统性红斑狼疮患者糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗前后外 周血NK细胞和受体表达变化及其治疗作用机制 

目的:探讨经糖皮质激素联合免疫抑制剂干扰素γ（IFN-γ）治疗前后系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中自然杀伤细胞（CD3－CD56+NK细胞）及其
激活性、抑制性受体表达的变化,阐明其治疗SLE的作用机制。方法：选取26例SLE患者和16例健康对照者,采用流式细胞术检测2组受试者治疗前、治疗4和12周后外周血CD3－CD56+NK细胞比率及其激活性受体和抑制性受体表达率。结果：与健康对照组比较,治疗前SLE患者CD3－CD56+NK细胞比率明显降低（P<0.05）,其激活性受体NKG2C+、NKP30+和NKP46+ 的表达率均明显增高（P<0.05）,抑制性受体KIR2DL3+、 KIR3DL1+和NKG2A+的表达率均明
显降低（P<0.05）,IFN-γ+ CD3－CD56+NK细胞比率明显增高（P<0.001）。与治疗前比较,治疗4和12周后SLE患者CD3－CD56+NK细胞比率均明显增高（P<0.05）;治疗4周后SLE患者CD3－CD56+NK细胞激活性受体NKG2C+、NKP30+和NKP46+ 的表达率均明显降低（P<0.05）,治疗12周后上述受体表达率均进一步降低（P<0.05）。治疗4周后SLE患者CD3－CD56+NK细胞抑制性受体KIR2DL3+、KIR3DL1+和NKG2A+的表达率较治疗前均明显增高（P<
0.05）,治疗12周后CD3－CD56+NK细胞 KIR3DL1+、CD158a+、CD158b+和NKG2A+的表达率较治疗前均明显增高（P<0.05）。与治疗前比较,治疗4和12周后SLE患者IFN-γ+CD3－CD56+NK　细胞比率均明显降低（P<0.001）。结论：NK细胞及其受体的变化可能与SLE的发病有关,糖皮质激素联合免疫抑制剂可能通过调节NK细胞及其受体的变化发挥治疗作用。
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化疗对非小细胞肺癌患者外周血NK细胞受体表达的影响及其临床意义

［摘要］ 目的 探讨非小细胞肺癌患者外周血自然杀伤（natural killer，NK）细胞活化性受体及抑制性受体在化疗前后的变化及其临床意义。 方法 选取非小细胞肺癌患者50例（Ⅰ~ⅢA期、ⅢB~Ⅳ期各25例）及健康体检者（对照组）10例。用流式细胞仪检测外周血NK细胞活化性受体NKG2D、NCR类（NKp30、NKp44、NKp46）及抑制性受体CD158a、CD158b、CD158e，ⅢB~Ⅳ期化疗2个周期后受体表达。按CD56表达强度对CD56dim及CD56bright分别统计。 结果 非小细胞肺癌ⅢB~Ⅳ期患者CD56dim活化性受体NKG2D、NKp30低于健康体检者和Ⅰ~ⅢA期患者，非小细胞肺癌Ⅰ~ⅢA期和ⅢB~Ⅳ期CD56dim活化性受体NKp44表达低于健康体检者（P＜0.05）。3组CD56dim活化性受体NKp46差异均无统计学意义（P＞0.05）。3组CD56bright活化性受体NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46差异无统计学意义（P＞0.05）。3组CD56dim抑制性受体CD158a、CD158b、CD158e及 CD56bright抑制性受体CD158a、CD158b、CD158e差异均无统计学意义（P＞0.05）。因入组人员缺失，ⅢB~Ⅳ期化疗2个周期后患者入组14例。化疗后非小细胞肺癌ⅢB~Ⅳ期患者CD56dim活化性受体NKp30、NKp44表达均高于化疗前（P＜0.05）。化疗后CD56dim活化性受体NKp46、NKG2D及抑制性受体CD158a、CD158b、CD158e与化疗前差异均无统计学意义（P＞0.05）；化疗后CD56bright活化性受体NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D及抑制性受体CD158a、CD158b、CD158e与化疗前差异均无统计学意义（P＞0.05）。化疗2个周期后14例患者PR率达78.5%（11/14）。 结论 ⅢB~Ⅳ期CD56dimNK细胞活化性受体表达降低，可能与肿瘤微环境导致NK细胞活化性受体细胞毒性作用降低有关；化疗后可以提高NK细胞活化性受体NKp30、NKp44表达，推测化疗可通过提高机体NK细胞活性而发挥其对肿瘤的杀伤作用。     

NK细胞与CIK细胞体外诱导扩增及其活性比较

目的：探讨体外诱导和扩增NK细胞和CIK细胞的方法,比较二者的增殖能力及其对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：提取肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMCs）,在细胞因子诱导下培养NK细胞和CIK细胞。观察2种细胞的形态学变化,采用流式细胞术检测CD3－CD56+NK细胞和CD3+CD56+ CIK细胞比例,计算细胞扩增倍数;采用ELISA法检测NK细胞和CIK细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)的水平;采用CCK-8法检测NK和CIK细胞对K562细胞株的杀伤活性。结果：经过14 d体外诱导培养后,NK细胞扩增（160.00±12.15）倍,CIK细胞扩增（110.00±15.48）倍,NK细胞的扩增能力强于CIK细胞（P<0.05）;NK和CIK细胞分泌IFN-γ量分别为（4 227.75±731.94）和（525.96±304.84） μg/L,NK细胞分泌IFN-γ的能力强于CIK细胞（P<0.01）;诱导扩增后NK和CIK细胞对K562细胞株具有较强的杀伤活性,随着效靶比的升高杀伤活性增强。在效靶比为25∶1时,NK细胞和CIK细胞对K562细胞的杀伤率分别为65.35%和57.68%,NK细胞的杀伤活性强于CIK细胞（P<0.01）。结论：在体外成功建立了NK细胞和CIK细胞的诱导扩增体系,NK细胞的扩增能力、IFN-γ分泌水平以及其对K562细胞株的杀伤作用均强于CIK细胞。     

食管鳞癌上皮细胞间质转化对NK细胞活化及其生物学作用的研究

目的 探讨食管鳞癌上皮细胞间质化（EMT）对自然杀伤（NK）细胞生物学活性的影响。方法 通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出 EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞;根据共培养不同的条件培养基分为RPMI 1640正常培养基刺激-NK组（NC组）、EC9706细胞上清液刺激-NK组（EC9706组）与KYSE150细胞上清液刺激-NK组（KYSE150组）,将不同的条件培养基加入NK细胞共培养72 h,流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达。10 ng/mL 转化生长因子-β（TGF-β）处理KYSE150细胞株7 d诱导EMT化后,收集KYSE150 EMT和KYSE150上清液,分别与NK细胞共培养,72 h后以流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达、CD107a脱颗粒能力、靶细胞K562杀伤效应、NK细胞增殖及凋亡。结果 6株细胞系中筛选出2株EMT化和4株非EMT化的食管鳞癌细胞株,从中各选出一株（EC9706和KYSE150）用于后续实验;NK细胞负性筛选达到90%以上的纯度,T细胞<1%。不同的食管鳞癌细胞上清液刺激后,3组NK细胞表面活化型、抑制型受体,效应分子结果显示:与NC组和KYSE150组比较,EC9706组活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,颗粒酶释放均降低（ P<0.05）;抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加（ P<0.05）;NKP46、CD226、CD16表达和穿孔素释放在3组间差异无统计学意义。与KYSE150上清刺激比较,KYSE150 EMT上清刺激后,NK细胞活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,穿孔素释放均降低;CD107a脱颗粒作用、靶细胞K562杀伤效应均减弱,NK细胞Ki67增殖指数下降（ P<0.05）;抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加（ P<0.05）;NKP46、CD226、CD16表达,颗粒酶释放及NK细胞凋亡在两组间差异无统计学意义。结论 食管鳞癌细胞EMT化可能通过抑制NK细胞活化、减少NK细胞杀伤效应分子的分泌来降低NK细胞杀伤效应,从机体免疫监视中逃逸。     

环磷酰胺对儿童系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群变化的影响

目的：探讨环磷酰胺对儿童系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞亚群变化的影响,为治疗儿童SLE提供依据。方法：选取30例儿童SLE患者和30例健康儿童,检测其外周血T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞和自然杀伤T(NKT)细胞水平。将SLE患者分为单纯激素治疗组和环磷酰胺联合激素治疗组,每组各15例,采用流式细胞术检测2组治疗前后儿童外周血淋巴细胞亚群比率的变化。结果：与健康对照组比较,SLE患儿组CD3+CD4+ Th细胞比率明显降低（P<0.05）;CD3+CD8+ Tc细胞比率明显升高（P<0.05）;CD3－（CD16CD56）+NK和CD3+（CD16CD56）+NKT细胞比率明显降低（P<0.05）,而CD3－CD19+ B细胞比率明显增高（P<0.01）。儿童SLE患者外周血CD3+CD8+ Tc细胞比率与SLE活动指数(SLE DAI)呈正相关关系（r=0.754 7,P<0.01）;CD3－CD19+ B细胞比率与SLEDAI亦呈明显的正相关关系（r=0.158 6,P=0.029 3）;Th、NK和NKT细胞比率与SLE DAI无明显相关性（P>0.05）。与治疗前比较,单用激素治疗组患者治疗后B细胞比率明显降低（P<0.05）;NK、NKT和Th细胞比率均有所升高,Tc细胞比率降低但差异无统计学意义（P>0.05）。环磷酰胺联合激素组治疗后患者B细胞比率较治疗前明显降低（P<0.01）,NK细胞、Th细胞比率较治疗前明显升高（均P<0.01）。结论：儿童SLE患者淋巴细胞亚群比例的失调与SLE的发病有关,环磷酰胺联合激素治疗儿童SLE效果较好。     

SiRNA沉默NK细胞CD158b表达及对异体树突状细胞的杀伤作用

目的 探讨特异性的SiRNA干扰人NK细胞CD158b基因表达对异体树突状细胞杀伤的影响.方法 将特异性的CD158b-SiRNA导入人NK细胞后,qRT-PCR及流式检测NK细胞CD158b基因mRNA及其蛋白质的表达.LDH释放法检测RNA干扰NK细胞CD158b前后对异体DC细胞杀伤效果的影响.结果 特异性siRNA片段能有效降低CD158b mRNA水平,最大干扰效率达72%;脂质体及阴性对照siRNA片段对NK细胞CD158b的表达无特异的干扰作用;流式细胞仪检测证明转染特异SiRNA-CD158b后CD158b蛋白表达明显下降.RNA干扰NK细胞CD158b的表达后能显著提高其杀伤异体DC的活性.结论 特异性的CD158b-SiRNA可有效降低NK细胞中CD158b mRNA水平.明显下调CD158b蛋白表达.RNA干扰NK细胞CD158b后所产生的异源反应性NK细胞对异体DC细胞杀伤效果显著增加,证明通过人工改变NK细胞KIR基因的表达产生KIR-HLA错配的异反应性NK细胞有望应用于异基因骨髓移植中降低GVHD.     

厄洛替尼作用后表皮生长因子受体突变的人肺腺癌HCC827细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞的杀伤敏感性

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼及EGFR下游主要分子对人肺腺癌HCC827细胞表面NKG2D配体表达的影响,探讨厄洛替尼作用于肺腺癌HCC827细胞后,细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对HCC827细胞杀伤活性的变化。方法 HCC827细胞分为空白对照组及厄洛替尼5、10μmol·L-1组,应用流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体主要组织相容性复合体I类链相关蛋白(MIC)A、B及UL16结合蛋白(ULBP)1、2、3的表达。HCC827细胞培养24 h后,分别以EGFR下游分子磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY294002、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580、信号传导及转录激活因子3抑制剂STAT21、蛋白激酶C抑制剂Rottlerin进行作用,应用流式细胞仪分析HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达,并与空白对照组进行比较。乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对空白对照组和厄洛替尼组HCC827细胞的杀伤活性。结果与空白对照组比较,厄洛替尼5、10μmol·L-1组HCC827细胞表面NKG2D配体MICB、ULBP1表达显著增高(P<0.05),MICA、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P>0.05);厄洛替尼5μmol·L-1组与10μmol·L-1组比较,HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,SB203580组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P>0.05),STAT21组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB表达显著增高(P<0.05),LY294002组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA表达显著降低(P<0.05),Rottlerin组的HCC827细胞表面NKG2D配体ULBP1表达显著增高(P<0.05)。同一效靶比时,CIK细胞对厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率均显著高于未经药物作用组(P<0.05)。效靶比20∶1时经NKG2D单抗封闭后的CIK细胞对未经药物作用组和10μmol·L-1厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论厄洛替尼能增高HCC827细胞表面NKG2D配体表达,增强CIK细胞的杀伤活性。     

苦参碱对NK细胞杀伤HL60细胞的影响及其机制研究

目的:探讨苦参碱对NK细胞杀伤急性早幼粒细胞白血病细胞株HL60的影响及作用机制。方法:实时定量PCR(qRT-PCR)检测苦参碱处理前后HL60细胞表面NK细胞活化性受体凝集素样同型二聚体(NKG2D)配体分子MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3表达情况,CFSE染色流式法检测苦参碱作用前后HL60细胞对NK细胞杀伤敏感性的改变。结果:qRTPCR结果表明1.0mg/ml苦参碱处理HL60细胞24h后HL60细胞表面MICA和ULBP2表达水平较正常对照组分别增加2.34倍和2.86倍,而MICB、ULBP1和ULBP3与处理前相比差异无统计学意义(P>0.05);处理48h后HL60细胞表面MICA/B、ULBP1/2/3表达水平较处理前均有不同程度升高,尤以ULBP2和ULBP3升高最明显,较正常对照组分别增加了3.74倍和3.22倍。CFSE染色流式数据显示效靶比例5∶1和10∶1条件下,苦参碱均可加强NK细胞对HL60细胞的杀伤效率。结论:苦参碱可促进HL60细胞对NK细胞杀伤敏感性,其机制与诱导HL60细胞表面NKG2D配体表达上调密切相关。     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群比例和Th1/Th2细胞因子水平检测及其临床意义

目的：研究各型乙型肝炎患者和健康者外周血T淋巴细胞亚群和Th1/Th2细胞因子水平变及其临床意义,为诊断、治疗疾病提供实验依据。方法：采用流式细胞仪检测34例乙型肝炎患者（其中慢性乙型肝炎中度组14例,慢性乙型肝炎重度组7例,重型乙型肝炎组8例,急性乙型肝炎组5例）和20例健康对照者(对照组)的外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞占淋巴细胞的比率;采用酶联免疫吸附技术（ELISA）夹心法检测研究对象血清中IL-2、IL-4及IFN-γ水平的变化。结果：对照组比较,急性乙型肝炎患者外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞、血清IL-2、IFN-γ水平明显升高（P<0.05）;重型乙型肝炎患者CD3+、CD8+T淋巴细胞数量下降（P<0.05）,IFN-γ水平升高（P<0.05）;慢性乙型肝炎患者的IL-4和IFN-γ水平明显升高（P<0.05）。结论：Th1细胞因子在乙型肝炎病毒(HBV)感染的疾病发展中可能起一定的作用,HBV感染慢性化可能与Th2细胞因子增高有关。     

新型冠状病毒肺炎患者Mg~(2+)水平对CD8~+T淋巴细胞和NK细胞功能的影响

目的:探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者血清及外周血单个核细胞(PBMCs)中Mg~(2+)水平变化及其对CD8~+ T淋巴细胞和NK细胞功能的影响。方法:选取2020年1月20日～2月20日期间鄂州市中心医院收治的COVID-19确诊患者165例,其中轻型/普通型组98例,重型/危重型组67例,另选34例健康体检者作为对照组。采集外周血,分离PBMCs,检测各组血清及PBMCs中Mg~(2+)水平;流式细胞术检测各组外周血CD8~+ T淋巴细胞和NK细胞亚群以及其表面抑制分子程序性死亡受体1(PD-1)和激活分子自然杀伤细胞活化受体(NKG2D)的表达水平;并分析Mg~(2+)水平与PD-1和NKG2D表达水平的相关性。结果:与对照组比较,轻型/普通型组和重型/危重型组患者血清及PBMCs中Mg~(2+)水平、CD8~+T淋巴细胞和NK细胞计数均明显降低(P<0.05),同时CD8~+T淋巴细胞和NK细胞表面抑制分子PD-1表达水平明显升高(P<0.05),而活化分子NKG2D表达水平均明显降低(P<0.05)。重型/危重型组患者以上各指标改变幅度又大于轻型/普通型组(P<0.05),且COVID-19患者Mg~(2+)水平与CD8~+T淋巴细胞和NK细胞表面分子PD-1表达水平呈负相关性(P<0.05),与NKG2D表达水平呈正相关性(P<0.05)。结论:COVID-19患者血清及PBMCs中Mg~(2+)水平会明显降低,其可能会导致CD8~+ T淋巴细胞和NK细胞功能被抑制。     

帕瑞昔布联合吗啡术后静脉镇痛对胃癌患者淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞活性的影响

目的观察帕瑞昔布联合吗啡术后静脉镇痛对胃癌患者淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(NK细胞)的影响。方法选择胃癌根治术患者40例,随机分为帕瑞昔布联合吗啡镇痛组(PM组,n=20)和吗啡镇痛组(M组,n=20)。两组患者均接受相同的麻醉方法。术毕分别用帕瑞昔布联合吗啡和单纯吗啡行静脉术后镇痛,采用视觉模拟评分法(VAS)镇痛评分评价镇痛效果,并分别于麻醉前、术毕、术后24h及术后48h抽取静脉血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值及NK细胞(CD16+、CD56+/CD45+)的变化。结果两组患者术后VAS评分比较差异无统计学意义(P>0.05);两组患者CD3+、CD4+淋巴细胞在术毕、术后24h及48h均较麻醉前明显降低(P<0.05),两组患者的NK细胞(CD16+、CD56+/CD45+)、CD4+/CD8+在术毕及术后24h也低于麻醉前(P<0.05)。CD8+在各时点变化差异无统计学意义(P>0.05)。与M组相比,PM组在术后24hNK细胞(CD16+、CD56+/CD45+)、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显增高(P<0.05);PM组在术后48hNK细胞(CD16+、CD56+/CD45+)、CD4+/CD8+已恢复到麻醉前水平(P>0.05),而M组仍处于较低水平(P<0.05)。结论帕瑞昔布联合吗啡和单纯吗啡术后镇痛都取得良好的镇痛效果,但前者更有利于胃癌患者术后细胞免疫功能的恢复。     

同种异体NK细胞对CD34+早期急性髓系白血病细胞的细胞毒效应

目的 探讨同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞的细胞毒效应.方法 免疫磁珠法分离5例健康个体NK细胞,乳酸脱氢酶释放法测定不同效靶比时NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞KG1a的杀伤活性,甲基纤维素克隆形成实验检测NK细胞对KG1a细胞的克隆形成抑制率,同时与NK杀伤敏感细胞株K562比较.结果 急性髓系白血病细胞株KG1a中CD34抗原表达率为(98.0±1.1)%,分选后的NK细胞(CD3CDl6 CD56 细胞)纯度为(93.2±3.7)%.不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞均有杀伤活性,均能抑制其克隆形成.随着效靶比的增高,其杀伤活性和克隆抑制率随之增高(P＜0.05).同一效靶比时,NK细胞对KG1a的杀伤活性和克隆抑制率低于K562(P＜0.05).结论 同种异体NK细胞对CD34 早期急性髓系白血病细胞具有细胞毒效应.     

氯喹增强乳腺癌细胞对他莫昔芬化疗敏感性的作用研究

目的:探讨氯喹(chloroquine,CQ)增强乳腺癌细胞对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)化疗敏感性的作用及其机制.方法:以雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,分为空白对照组、TAM组、CQ组和CQ+TAM组,空白对照组不加药物,仅用培养基培养,其余各组加入相应药物培养.采用MTT法检测各组细胞存活率;通过集落克隆形成实验观察低浓度CQ、TAM及其联用对MCF-7细胞增殖的抑制作用;溴化丙啶单染检测各组细胞凋亡率;Western blot法检测各组蛋白表达情况.结果:TAM组、CQ组和TAM+CQ组24 h、48 h、72 h细胞存活率均明显低于空白对照组(P<0.01),TAM+CQ组24 h、48 h、72 h细胞存活率亦均明显低于TAM组和CQ组(P<0.01),TAM组24 h存活率低于CQ组(P<0.05).集落克隆形成实验结果显示,低浓度CQ抑制MCF-7细胞集落形成不明显,但CQ可明显增强TAM的抑制作用.4组间细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),其中TAM组、CQ组和TAM+CQ组细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.01),TAM+CQ组细胞凋亡率亦均明显高于TAM组和CQ组(P<0.01).Western blot结果显示,随时间增加,TAM组Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达升高,p62蛋白表达降低;与空白对照组比较,TAM组LC3Ⅱ蛋白表达明显升高,p62蛋白表达降低;而CQ+TAM组LC3Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白表达均较TAM组升高,Bcl-2蛋白表达降低.结论:CQ可增强乳腺癌细胞对TAM化疗的敏感性,其机制可能是通过下调Bcl-2表达,抑制细胞自噬反应.     

细胞因子诱导的杀伤细胞对食管癌EC9706细胞杀伤作用的实验研究

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对食管癌EC9706细胞的杀伤作用.方法:流式细胞仪检测EC9706细胞NKG2D配体的表达,乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,裸鼠体内实验验证CIK细胞对肿瘤的影响.结果:EC9706细胞表达MICA和ULBP2,不表达MICB,ULBP1和ULBP...     

2型糖尿病伴感染患者T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞的测定及意义

目的 探讨2型糖尿病伴感染患者T淋巴细胞亚群 (CD3+、CD4+、CD8+细胞 )和自然杀伤 (NK)细胞百分率的变化及意义。方法 采用流式细胞仪单克隆免疫荧光法检测2型糖尿病合并感染患者31例 (感染组 )和未合并感染患者34例 (非感染组 )T淋巴细胞亚群及NK细胞百分率 ,并与体检健康者对照。结果 2型糖尿病非感染组CD4+细胞百分率、CD4+/CD8+细胞比值低于对照组 (P<0.05) ;2型糖尿病感染组CD3+、CD4+细胞百分率和CD4 +/CD8 +细胞比值低于对照组 (P<0.01) ,而CD8 +细胞百分率高于对照组 (P<0.05) ;2型糖尿病感染组CD3 +细胞百分率、CD4 +/CD8 +细胞比值均低于非感染组 (P<0.05)。2型糖尿病患者NK细胞百分率与对照组比较差别无显著性意义 (P<0.05)。 结论 2型糖尿病患者存在T淋巴细胞亚群的变化 ,存在着细胞免疫功能缺陷 ,这可能是2型糖尿病患者易合并感染的重要原因。表13组一般资料和血糖检测结果餐后2h血糖 (mmol/L)16.95±6.9416.33±8.17n323431组别对照组非感染组感染组男性/女性18/1419/1517/14年龄 (岁 )58.88±9.2661.82±10.2562.09±12.03病程 (年 )8.54±6.687.88±4.04使用胰岛素例数/口服降糖药例数19/1518/1     

CD3+CD16+CD56+自然杀伤T淋巴细胞与移植肾免疫状态的关系

目的 探讨肾移植患者CD3+CD16+CD56+自然杀伤T细胞(NKT)在外周血中的表达与移植肾免疫状态的关系,以及钙调磷酸酶抑制剂(CNI)不同的血药浓度下NKT细胞的水平。 方法 将92例肾移植患者根据CNI血药浓度水平及有无排斥反应分为3组：正常血药浓度的无排斥组（A组,58例）、低血药浓度的无排斥组（B组,8例）、排斥组(C组,26例),10例正常人群作为对照组(D组),采用流式细胞术检测各组外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+自然杀伤（NK）和CD3+CD16+CD56+NKT细胞及人白细胞抗原（HLA）抗体的水平。结果 A、B、C、D组CD3+CD16+CD56+NKT细胞的百分数分别是（4.29±2.57）%、（4.31±2.08）%、（1.23±1.06）%、（3.98±2.26）%。A、B组与D组比较,NKT细胞百分数、NK细胞百分数及CD4+/CD8+无差异,HLA抗体阳性比率无显著升高;C组NKT细胞的百分数与正常对照组相比降低(P＜0.05),NK细胞、CD4+/CD8+均显著高于D组(P＜0.05),HLA抗体阳性比率显著升高。结论 肾移植后排斥反应时NKT细胞低表达,出现HLA抗体;无排斥反应时NKT细胞表达正常,不受低血药浓度的影响。CD3+CD16+CD56+NKT细胞在抑制移植肾免疫激活中起着重要作用。     

舒尼替尼联合NK细胞对肾透明细胞癌细胞株的协同杀伤作用及其机制

目的: 探讨舒尼替尼联合NK细胞对肾透明细胞癌786-0细胞的协同杀伤作用,并阐明其机制。方法: 常规体外培养786-0细胞,分为未处理组和舒尼替尼组,同时设阳性对照组(K562细胞);免疫磁珠技术分离人外周血NK细胞。MTT法检测舒尼替尼对786-0细胞的药物敏感性,流式细胞术检测NK细胞纯度及经舒尼替尼处理前后786-0细胞NKG2D配体(NKG2DLs)表达率,LDH释放测定法检测NK细胞对未处理组、阳性对照组和舒尼替尼组786-0细胞的杀伤活性。结果: 786-0细胞对舒尼替尼的半数抑制浓度(IC₅₀)为(4.45±0.65)μmol·L^-1。分选后NK细胞中CD3^-CD16⁺CD56⁺细胞的纯度达72%以上;经舒尼替尼处理后靶细胞NKG2DLs中MICA、MICB和ULBP2 表达率明显高于处理前(P<0.05)。当效靶比为10:1和20:1时,各组靶细胞的杀伤活性比较差异均有统计学意义 (F=166.18, P＝0.000;F=52.87, P＝0.000),且NK细胞对舒尼替尼组786-0细胞的杀伤活性明显高于未处理组(P<0.05)。结论: 舒尼替尼使肿瘤细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强,其协同作用可能与舒尼替尼选择性诱导肿瘤细胞高表达NKG2DLs(MICA、MICB和ULBP2)有关。     

基于NK细胞亚群与调节性T细胞的前列腺癌风险评估研究

目的 探讨自然杀伤（natural killer，NK）细胞亚群和调节性T（regulatory T，Treg）细胞在前列腺癌患者外周血中的表达及其与前列腺癌的关系。方法 选取2020年9月至2022年2月绍兴市中心医院收治的51例前列腺癌患者作为观察组，52例同期健康体检者作为对照组。采用流式细胞术检测两组患者外周血中NK细胞亚群和Treg细胞比例，分析不同TNM分期和Gleason评分的前列腺癌中NK细胞亚群、Treg细胞表达差异及相关性。结果 观察组CD56brightCD16-、CD56dimCD16+明显小于对照组（P<0.05），Treg细胞水平明显大于对照组（P<0.05）；不同TNM分期和Gleason评分的前列腺癌患者CD56brightCD16-、Treg细胞水平比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关性分析显示，CD56brightCD16-与前列腺癌TNM分期及Gleason评分呈负相关（P<0.05），Treg细胞与前列腺癌TNM分期及Gleason评分呈正相关（P<0.05）。结论 CD56brightCD16-水平的下降以及Treg水平的升高，与前列腺癌的发生、发展密切相关，其可能成为临床评估前列腺癌恶性程度及判断预后的特异性指标，为前列腺癌的诊治提供新思路。