缬沙坦抑制内质网应激对糖尿病肾损害大鼠足细胞的保护作用

 目的 探讨缬沙坦对糖尿病肾损害大鼠肾脏足细胞凋亡及内质网应激标志性蛋白GRP78、caspase12表达的影响。方法 将雄性SD大鼠随机分为正常对照组和实验组。实验组大鼠给予腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,然后随机将其分为模型组和缬沙坦组,正常对照组和模型组1次/d给予反渗水灌胃,缬沙坦组1次/d给予缬沙坦(8 mg/kg)灌胃,时间为6周。对nephrin、GRP78、caspase12表达水平进行分析,同时观察血糖、血尿素氮、肌酐、24 h尿蛋白定量等指标。结果 建模第6周,模型组大鼠肾脏较正常对照组凋亡细胞数明显增多,模型组GRP78(6.75±0.65)及caspase12(11.51±0.32)表达较正常对照组GRP78(1.57±0.39)、caspase12(2.66±0.57)增强(P＜0.05),模型组nephrin(2.29±0.15)较正常对照组(5.71±0.53)表达减少(P＜0.05)。缬沙坦组较模型组凋亡细胞数减少,GRP78(3.14±1.00)、caspase12(8.08±2.48)表达减弱(P＜0.05),nephrin(3.35±0.40)表达减少较轻(P＜0.05)。结论 缬沙坦通过减缓内质网应激并可能通过抑制内质网特有的caspase12凋亡途径,减少足细胞的凋亡,从而发挥对糖尿病肾病的保护作用。
     

长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞

目的探究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E（apolipoprotein E,ApoE ）基因敲除小鼠（ApoE-/- 小鼠）,通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠（模型组）;12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照（negative control,NC）组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达。通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase3）、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达。结果①血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功。荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组（P＜0.05）;②CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36h之后低于NC组（t36=2.683、P＜0.05,t48=2.554、P＜0.05）;划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组（t=3.136、P<0.05）;③流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组（22.6%和11.7%,χ2=4.245、P＜0.05）;④蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组（t分别为9.546、5.647、5.42,P＜0.05）,caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组（t=4.892、 P＜0.05）。结论沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖。     

PAF受体拮抗剂对内毒素血症幼年大鼠胃黏膜PGE2含量及COX-2表达的影响

目的探讨前列腺素E2(PGE2)、环氧化酶-2(COX-2)、血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂在内毒素(LPS)腹腔注射诱导的幼年大鼠急性胃黏膜损伤中的作用。方法 18日龄Wistar大鼠192只,随机分为对照组、LPS组、PAF受体拮抗剂预防组和治疗组。采用LPS(O55:B5脂多糖)5mg/kg腹腔注射制备幼年大鼠LPS血症模型,预防组和治疗组分别于LPS腹腔注射前后0.5h应用5mg/kg PAF受体拮抗剂BN52021(Ginkgolide B),对照组腹腔注射等量生理盐水。于LPS注射后1.5、3、6、24、48、72h处死动物,每组每时间点8只,肉眼及光学显微镜下观察胃黏膜损伤情况,采用放射免疫法测定胃黏膜PGE2含量,免疫组织化学SP法测定胃黏膜COX-2蛋白的表达,半定量RT-PCR法测定胃黏膜COX-2 m RNA的表达。结果 LPS组腹腔注射LPS后1.5h黏膜上皮细胞水肿,3h组织充血、水肿,6h胃黏膜损伤最重,黏膜内有出血,细胞核碎裂、固缩,凋亡小体出现;24h上皮脱落、中性粒细胞浸润,48h黏膜层变薄、腺体减少,72h未见明显异常。预防组和治疗组改变轻微。与对照组比较,LPS组胃黏膜PGE2含量在3h时明显降低(P<0.05),6h时达最低(P<0.01),预防组胃黏膜PGE2含量在3、6h明显增高(P<0.05),治疗组PGE2含量在6h时明显增高(P<0.05)。与LPS组比较,预防组、治疗组胃黏膜PGE2含量在6h时均明显增高(P<0.01)。对照组胃黏膜组织未见明显COX-2蛋白及m RNA表达;与对照组比较,LPS组腹腔注射LPS后6h胃黏膜组织胞质即有COX-2蛋白表达,24、48、72h时明显增高(P<0.01),其m RNA水平亦上调;预防组和治疗组6h COX-2蛋白、m RNA水平明显增高(P<0.01);预防组和治疗组6h COX-2蛋白、24h COX-2 m RNA与LPS组比较亦明显增高(P<0.01)。结论 PAF受体拮抗剂可上调COX-2 m RNA及蛋白表达,使PGE2含量增加,对胃黏膜有保护作用。     

As_2O_3对兔移植性肝脏肿瘤模型生存素表达调控的实验研究

目的 探讨As2O3在肝动脉化疗栓塞(TACE)中诱导恶性肿瘤细胞凋亡作用与生存素之间的相关性.方法 将肝脏左、右叶分别移植VX2肿瘤模型的16只13本大耳白兔.随机平均分成2组,移植瘤术后3周,经肝动脉插管分别给予超液化碘油(UFLP)1 ml加As2O32 mg(实验组)和UFLP 1 ml(对照组).给药3周后.所有动物均处死,分别取得肿瘤组织、瘤旁组织和正常肝脏组织进行末端脱氧核苷酸转移酶-生物素dUTP切口末端标记法(TUNEL)染色观察凋亡肿瘤细胞,免疫组化染色检测生存素蛋白的表达.结果 实验组肿瘤组织中有大量呈黄色的凋亡细胞,癌旁组织及正常组织中未观察到凋亡细胞;对照组肿瘤组织、癌旁组织及正常组织均未发现细胞核内有黄色颗粒的凋亡细胞.对照组肿瘤组织生存素蛋白表达率为100%(16/16),其中强阳性12例,弱阳性4例,癌旁及正常组织中生存素蛋白表达率为0.实验组肿瘤组织生存素蛋白表达为37.5%(6/16),其中强阳性2例,弱阳性4例,癌旁及正常组织中生存素蛋白表达率同样为0.两组肿瘤组织中生存素蛋白表达率差异有统计学意义(P<0.05).同时,两组癌组织与癌旁和正常组织中生存素蛋白表达率差异有统计学意义(p<0.01).结论 As2O3通过抑制肿瘤细胞内生存素蛋白表达促进肿瘤细胞凋亡.     

JAK/STAT通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤(I/R)中的作用。方法将36只SD大鼠随机分为对照组I、/R组、Ag490(JAK2激酶抑制剂)组(n=12)。I/R组和Ag490组大鼠夹闭双侧肾动脉60min,恢复再灌注24h,对照组大鼠除不钳夹双侧肾蒂外,余步骤与I/R组、Ag490组相同。Ag490组大鼠术前1h以8mg/kg Ag490灌胃,对照组和I/R组给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察肾组织的病理改变,免疫组化方法检测肾组织中STAT 3、Bcl-2蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果组织学检查发现对照组肾小管排列整齐,间质无充血水肿;I/R组可见部分肾小管上皮细胞肿胀,空泡变性,肾小管扩张,可见管型和坏死脱落细胞,间质充血水肿,大量炎细胞浸润;Ag490组组织损伤较I/R组加重。免疫组化结果显示,I/R组STAT 3、Bcl-2蛋白表达较对照组明显增多,细胞凋亡增加(P<0.05);Ag490组STAT 3、Bcl-2的蛋白水平较I/R组明显降低,细胞凋亡加重(P<0.05)。结论 I/R可通过JAK2途径诱导STAT 3激活,上调Bcl-2蛋白表达;阻断JAK2激活可抑制STAT 3表达,下调Bcl-2蛋白表达,加重细胞凋亡。     

c-fos反义寡核苷酸激活caspase 3诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的 探讨c-fos反义探针诱导人肝癌HepG2细胞凋亡以及caspase3在其中的作用.方法 人肝癌HepG2细胞分为3组,①对照组:加生理盐水10μl;②c-fos正义寡核苷酸(SO)处理组:加入SO 10μl(5μg/μl);③c-fos反义寡核苷酸(ASO)处理组:加入ASO 10μl(5μg/μl).各组细胞再培养1h后进行后续实验.采用Hoeschst 33258染色检测细胞凋亡情况,并分别运用实时荧光定量PCR和Western blotting 检测 caspese 3在mRNA和蛋白水平的表达变化.结果 Hoechst 33258细胞染色显示,对照组和SO处理组的细胞核为弥散均匀的圆形或椭圆形荧光,而ASO处理组的细胞核或细胞质内可见致密浓染的颗粒、新月体或环状荧光,核同缩,部分切片可见核碎裂.PCR和Western blotting检测显示,与对照组和SO处理相比,ASO处理组caspase 3 mRNA和蛋白的表达均明显上调.结论 c-fos反义探针可以诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,且caspase 3参与了此过程.     

临床研究

目的探讨As2O3在肝动脉化疗栓塞（TACE）中诱导恶性肿瘤细胞凋亡作用与生存素之间的相关性。方法将肝脏左、右叶分别移植VX2肿瘤模型的16只日本大耳白兔,随机平均分成2组．移植瘤术后3周,经肝动脉插管分别给予超液化碘油（UFLP）1ml加As2O32mg（实验组）和UFLP1ml（对照组）。给药3周后,所有动物均处死,分别取得肿瘤组织、瘤旁组织和正常肝脏组织进行末端脱氧核苷酸转移酶一生物素dUTP切口末端标记法（TUNEL）染色观察凋亡肿瘤细胞,免疫组化染色检测生存素蛋白的表达。结果实验组肿瘤组织中有大量呈黄色的凋亡细胞,癌旁组织及正常组织中未观察到凋亡细胞;对照组肿瘤组织、癌旁组织及正常组织均未发现细胞核内有黄色颗粒的凋亡细胞。对照组肿瘤组织生存素蛋白表达率为100％（16／16）,其中强阳性12例,弱阳性4例,癌旁及正常组织中生存素蛋白表达率为0。实验组肿瘤组织生存素蛋白表达为37．5％（6／16）,其中强阳性2例,弱阳性4例,癌旁及正常组织中生存素蛋白表达率同样为0。两组肿瘤组织中生存素蛋白表达率差异有统计学意义（P〈0．05）。同时,两组癌组织与癌旁和正常组织中生存素蛋白表达率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论As2O3通过抑制肿瘤细胞内生存素蛋白表达促进肿瘤细胞凋亡。     

青蒿琥酯对食管癌Ec9706细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的研究青蒿琥酯(Art)对食管癌Ec9706细胞线粒体膜电位的影响,探讨Art诱导食管癌Ec9706细胞凋亡的作用机制。方法以不同浓度(30、60、120μmol/L)的Art作用于食管鳞癌Ec9706细胞12h,对照组以生理盐水代替Art。光学显微镜下观察细胞形态变化,采用流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡水平,荧光染料罗丹明123染色检测细胞线粒体膜电位水平。采用流式细胞术检测Caspase-3蛋白表达水平。结果 Art作用后Ec9706细胞形态上呈现不同程度的变化,贴壁细胞变圆,体积变小,飘浮于细胞培养液中。不同浓度Art作用12h后,Ec9706细胞表现出不同程度的细胞凋亡且呈药物剂量依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);Ec9706细胞线粒体膜电位表现出不同程度降低且呈药物剂量依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Art组Ec9706细胞中Caspase-3蛋白表达水平显著增加(P<0.01),且呈药物剂量依赖性。结论 Art诱导Ec9706细胞凋亡的机制可能是通过降低细胞线粒体膜电位,启动内源性线粒体凋亡途径,激活Caspase-3蛋白,从而诱导细胞凋亡。     

黄体酮对海水浸泡腹部开放伤大鼠胃黏膜损伤的保护作用

目的 观察黄体酮对腹部开放伤合并海水浸泡大鼠胃黏膜炎性反应、黏膜组织破坏及细胞凋亡的影响.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组10只.A组:腹部开放伤+灭菌注射用水皮下注射;B组:腹部开放伤海水浸泡+灭菌注射用水皮下注射;C组:腹部开放伤海水浸泡+黄体酮治疗.按16mg/kg剂量分别于浸泡后1、6、12h在皮下注射灭菌注射用水或黄体酮,16h后处死全部大鼠.计算各组大鼠胃黏膜溃疡指数(UI);光镜下观察胃黏膜病理学改变;酶联免疫法测定胃黏膜炎症介质TNF-α、IL-6含量;免疫组化检测胃黏膜组织caspase-3蛋白表达变化;TUNEL法检测胃黏膜细胞凋亡情况.结果 B组大鼠UI,胃黏膜TNF-α、IL-6水平及胃黏膜病理损伤评分均显著高于A组(p＜0.01)及C组(P＜0.05).B组胃黏膜组织caspase-3蛋白表达(23.8％±3.5％)与凋亡细胞百分比(26.4％±2.8％)明显高于A组(分别为10.2％±1.6％和8.5％±1.5％,P＜0.01),C组(分别为17.1％±2.3％和19.8％±2.4％)与B组比较则明显下降(P＜0.05).结论 黄体酮能够有效抑制海水浸泡腹部开放伤大鼠胃黏膜炎性反应,保护胃黏膜上皮组织结构,减少胃黏膜细胞凋亡的发生.     

Caspase在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的检测caspase8和caspase3在原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)患者外周血单个核细胞中的表达,探讨其与PBC疾病进展的相关性。方法采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法,检测30例PBC和30例正常对照者的外周血单个核细胞(PBMCs)中caspase8和caspase3的基因和蛋白表达。结果PBC患者PBMCs中的caspase8和caspase3的mRNA和蛋白的表达明显低于健康对照组(P<0.05)。结论PBC患者caspase8,3的表达与疾病的发生发展存在一定的相关性,可以为PBC的诊断和预防提供新线索。     

Knee injury and Osteoarthritis Outcome Score (KOOS) - validation of a Swedish version

The Knee injury and Osteoarthritis Outcome Score (KOOS) is a self-administered instrument measuring outcome after knee injury at impairment, disability, and handicap level in five subscales. Reliability, validity, and responsiveness of a Swedish version was assessed in 142 patients who underwent arthroscopy because of injury to the menisci, anterior cruciate ligament, or cartilage of the knee. The clinimetric properties were found to be good and comparable to the American version of the KOOS. Comparison to the Short Form-36 and the Lysholm knee scoring scale revealed expected correlations and construct validity. Item by item, symptoms and functional limitations were compared between diagnostic groups. High responsiveness was found three months after arthroscopic partial meniscectomy for all subscales but Activities of Daily Living.     

Endovascular management of carotid-cavernous fistulas

Objective To investigate endovascular treatment of traumatic direct carotid-cavernous fistulas （CCF） and their complications such as pseudoaneurysms. Methods： Over a five-year period, 22 patients with traumatic direct CCFs were treated endovascularly in our institution. Thirteen patients were treated once with the result of CCF occluded, 8 twice and 1 three times. Treatment modalities included balloon occlusion of the CCF, sacrifice of the ipsilateral internal carotid artery with detachable balloon, coll embolization of the cavernous sinus and secondary pseudoaneurysms, and covered-stem management of the pseudoaneurysms. Results All the direct CCFs were successfully managed endovascularly. Four patients developed a pseudoaneurysm after the occlusion of the CCF with an incidence of pseudoaneurysm formation of 18.2% （4/22）. A total number of 8 patients experienced permanent occlusion of the ICA with a rate of ICA occlusion reaching 36.4% （8/22）. Followed up through telephone consultation from 6 months to 5 years, all did well with no recurrence of CCF symptoms and signs. Conclusion Traumatic direct CCFs can be successfully managed with endovascular means. The pseudoaneurysms secondary to the occlusion of the CCFs can be occluded with stent-assisted coiling and implantation of covered stents.     

The role of interventional radiology in trauma

Introduction Interventional Radiology has evolved into a specialty having enormous input into the care of the traumatized patient.In all hospitals,regardless of size,the Interventional Radiologist must consider their relationships with the trauma service in order to     

The acutely limping child

Acute limping may be the result of multiple pathologies in children. The differential diagnosis varies based on the age of the child. Irrespective of age, the initial imaging work-up includes AP and frog leg radiographs of the pelvis and ultrasound; MRI may sometimes be helpful. In children less than 3 years, infections and trauma are most frequent. MRI is the imaging modality of choice when osteomyelitis is clinically suspected. Between the ages of 3 and 10 years, transient synovitis of the hip and Legg-Calvé-Perthes disease are main considerations but infection, inflammation and focal bony lesions are also considered. In children over 10 years, slipped capital femoral epiphysis also is considered.     

Diagnóstico ecográfico del neumotórax

The ultrasonographic diagnosis of pneumothorax is based on the analysis of artifacts. It is possible to confirm or rule out pneumothorax by combining the following signs: lung sliding, the A and B lines, and the lung point. One fundamental advantage of lung ultrasonography is its easy access in any critical situation, especially in patients in the intensive care unit. For this reason, chest ultrasonography can be used as an alternative to plain-film X-rays and computed tomography in critical patients and in patients with normal plain films in whom pneumothorax is strongly suspected, as well as to evaluate the extent of the pneumothorax and monitor its evolution.     

Carbohydrate Supplementation during Exercise: Does It Help? How Much is Too Much?

KEY POINTS· Carbohydrate intake during exercise can delay the onset of fatigue and improve performance of prolonged exercise as well as exercise of shorter duration and greater intensity (e.g., continuous exercise lasting about 1h and intermittent high-intensity exercise), but the mechanisms by which performance is improved are different.