Mig-6基因表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Mig-6对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,以探讨Mig-6在肝癌中的作用机制。方法:采用Mig-6过表达质粒和siRNA转染肝癌细胞,使用Real-time PCR和Western Blot法检测转染后的过表达或沉默效果;CCK-8实验检测细胞增殖水平的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比的变化;蛋白免疫印迹检测相关蛋白的表达变化。结果:转染Mig-6能抑制肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的凋亡;干扰Mig-6能促进肝癌细胞的增殖,抑制肝癌细胞的凋亡。上调Mig-6能增加肝癌细胞Caspase-3 的活性,抑制P-ERK的磷酸化;干扰下调Mig-6能抑制肝癌细胞Caspase-3 的活性,增加P-ERK的磷酸化。结论:在肝癌细胞中,Mig-6表现出抑制细胞增殖及促进细胞凋亡的作用,该作用可能与Mig-6能增加Caspase-3 的活性,同时抑制P-ERK的表达有关。     

白藜芦醇靶向EGFR和c-Met信号通路抑制非小细胞肺癌细胞增殖的机制

 目的 探讨白藜芦醇抑制非小细胞肺癌细胞增殖的分子机制。方法 非小细胞肺癌细胞用白藜芦醇处理24、48和72 h,MTS和软琼脂集落形成实验检测白藜芦醇对非小细胞肺癌的抑制作用,免疫印迹检测白藜芦醇对表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）和肝细胞生长因子受体（c-Met）表达水平及下游信号通路的影响,流式细胞术检测白藜芦醇对细胞周期的影响。结果 白藜芦醇剂量依赖性抑制非小细胞肺癌细胞的增殖。白藜芦醇抑制EGFR和c-Met信号通路磷酸化活化的同时下调了EGFR总蛋白及EGFR在胞膜和胞核的表达,同时降低了c-Met蛋白在胞膜的表达及c-Met蛋白60 kD大小剪切体在胞核的表达。白藜芦醇促进了A549细胞G₀/G₁期阻滞。结论 白藜芦醇通过靶向EGFR和c-Met信号通路抑制非小细胞肺癌细胞的增殖。     

非小细胞肺癌ERK、AKT蛋白磷酸化的病理意义

目的:探讨非小细胞肺癌ERK、AKT蛋白磷酸化的病理意义。方法:免疫组织化学SP法检测90例非小细胞肺癌的p-ERK和p-AKT表达状况,分析二者表达与通路上游EGFR、KRAS、PI3K表达及患者部分临床病理参数间的相关关系。结果:非小细胞肺癌中,p-ERK表达阳性率为53.33%,其与患者的性别和吸烟史及肺腺癌的分化程度相关（P<0.05）。p-ERK表达与EGFR及KRAS表达均无显著相关关系（P>0.05）。p-AKT表达阳性率为56.67%,p-AKT表达与EGFR表达显著正相关（r=0.336,P<0.05）,但与PI3K表达无显著相关关系（P>0.05）。p-ERK与p-AKT表达显著正相关（r=0.292,P<0.05）。结论:非小细胞肺癌中可能存在ERK的自身激活,检测ERK与AKT蛋白的磷酸化状态可能对筛选EGFR-TKI治疗获益人群有所帮助。     

白血病抑制因子对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）对细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法 采用荧光定量PCR和Western blot检测LIF在人NSCLC组织和癌旁组织中的表达;应用重组LIF因子处理非小细胞肺癌细胞系A549和Z793, MTT技术检测重组LIF因子对细胞增殖的影响; Transwell实验检测重组LIF因子对细胞侵袭的影响;Western blot检测重组LIF因子对肿瘤细胞中AKT/mTOR信号通路的影响。结果 LIF在肺癌组织中的表达水平较正常癌旁组织显著上调（P=0.0078）。重组LIF处理A549和Z793细胞后,肿瘤细胞增殖较对照组明显增加（P<0.01）;肿瘤细胞的侵袭能力较对照组明显增强（P<0.01）;AKT蛋白的磷酸化水平明显增加,且其下游底物mTOR的表达显著上调。结论 LIF在非小细胞肺癌中表达上调,并通过激活AKT/mTOR信号通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。     

HOXB7对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响

目的 研究HOXB7在人非小细胞肺癌组织及细胞系中的表达水平,HOXB7表达水平改变对非小细胞肺癌细胞增殖的影响。方法 通过Real-time PCR、免疫组织化学技术检测人非小细胞肺癌及细胞系中HOXB7的表达水平,根据病理资料初步分析HOXB7与非小细胞肺癌预后的关系。通过转染si-RNA抑制HOXB7的表达水平,并通过定量PCR检测转染效率。利用流式细胞术检测抑制HOXB7对A549细胞增殖能力的影响。结果 相对正常肺组织及细胞,在非小细胞肺癌组织和细胞系中HOXB7的表达出现了显著上调,高表达HOXB7的NSCLC患者整体生存率较差。转染si-RNA能显著抑制HOXB7表达水平和人非小细胞肺癌A549细胞的增殖能力。结论 非小细胞肺癌组织及细胞系中HOXB7的表达显著上调。     

TGF-α/EGFR自分泌环调控卵巢癌细胞增殖转移的分子机制

背景与目的：TGF-α／EGFR自分泌环在许多恶性肿瘤中异常激活，与肿瘤发生、发展密切相关。本研究观察TGF-α诱导的卵巢腺癌细胞Caov-3生物学行为及相关信号分子的改变，探讨TGF-α／EGFR自分泌环在卵巢癌发生、发展中的作用机制。方法：采用M1Tr和BOYDEN小室体外侵袭实验检测Caov-3细胞增殖和侵袭能力；采用Western blot方法检测EGFR、ERK1／2、P13K、AKT、P70S6K蛋白表达情况。结果：TGF-α促进Caov-3细胞增殖和转移，0．5-25ng／ml浓度范围内，细胞增殖率与TGF-α浓度成剂量效应关系；TGF-α在短时间内可使Caov-3细胞EGFR表达量骤增，并伴随P13K、AKT、P70S6K等信号传导分子表达量的上调；但ERK1／2表达量无明显变化。结论：TGF-α／EGFR自分泌环可能通过激活P13K／AKT信号传导通路，上调P70s6k来增强卵巢癌细胞的增殖和转移能力。     

EGF调节MT1-MMP和MMP-2的表达及其信号传导机制的研究

目的:探讨表皮生长因子（EGF）在宫颈癌SiHa细胞中对膜型基质金属蛋白酶（MT1-MMP）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的调节作用,明确其相关的信号传导机制。方法:利用EGF作为干预因素,信号通路阻断剂分别阻断表皮生长因子受体（EGFR）、AKT、ERK、p38和JNK的磷酸化,来观察EGF对MT1-MMP和MMP-2表达的影响及相关信号通路。结果:EGF在mRNA和蛋白水平上诱导MT1-MMP的表达增加和抑制MMP-2的表达;MAPK和ERK激酶抑制剂在mRNA和蛋白水平上可阻断这种诱导;PI3-K抑制剂不影响EGF对MT1-MMP的诱导,但可进一步抑制MMP-2的表达。结论:EGFR通过MAPK/ERK信号通路上调MP1-MMP的表达和下调MMP-2的表达,同时还通过PI3-K/AKT的信号通路轻度上调MMP-2的表达。此外,EGF可以提高细胞培养基中MMP-2的活性。     

CerS2对膀胱癌细胞增殖、迁移及AKT/mTOR信号通路的影响

目的:探究CerS2基因在膀胱癌细胞中的作用及其可能的机制。方法:构建pEGFP-C1-CerS2重组表达载体,并转染膀胱癌细胞系T24,使用蛋白质免疫印迹实验检测GFP-CerS2的表达;运用CCK-8法检测细胞增殖活性;运用Annexin Ｖ荧光标记实验检测细胞凋亡水平;分别使用细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力和侵袭能力;使用蛋白质免疫印迹实验检测细胞中AKT、p-AKT、mTOR及p-mTOR的表达水平。结果:重组GFP-CerS2融合蛋白在T24细胞中可以正常表达,过表达GFP-CerS2显著抑制了膀胱癌细胞的增殖活性,且显著增加了细胞凋亡水平。过表达GFP-CerS2抑制了膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力。此外,过表达GFP-CerS2也显著抑制了膀胱癌细胞中AKT和mTOR的磷酸化修饰,但不影响总AKT及mTOR的表达水平。结论:过表达CerS2可以抑制AKT/mTOR信号通路,影响膀胱癌细胞的增殖和凋亡,并抑制细胞的迁移和侵袭能力。     

选择性COX-2抑制剂对非小细胞肺癌细胞株毒性及分子机制的研究

目的：探讨选择性环氧化酶-2（cyclooxy-genase-2,COX-2）抑制剂Celecoxib对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞株增殖与凋亡的作用以及相关分子机制。方法：对3种NSCLC细胞株A549（腺癌）、GLC82（腺癌）和SW1573（肺泡细胞癌）使用MTT法测定细胞生长抑制率;Hoechest33258荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期分布;West-ern blot法检测COX-2、磷酸化AKT（p-AKT）、总丝苏氨酸激酶（serine/threonine kinase,AKT）、磷酸化ERK（p-ERK）及总细胞外信号调节激酶（ex-tracellular signal-regulated kinase,ERK）蛋白的表达。结果：Celecoxib抑制A549、GLC82和SW1573细胞增殖的IC50值分别为14.7、10.6和18.6μmol/L;Celecoxib对3种NSCLC细胞株都有较明显的凋亡诱导作用,Celecoxib作用12h凋亡率增加,24～48h更明显,Celecoxib10～40μmol/L作用可见凋亡率明显增加;Celecoxib作用于GLC82细胞后检测到胞内p-AKT及p-ERK蛋白表达下调。结论：COX-2抑制剂Celecoxib在体外能抑制细胞信号传导AKT及ERK通路的活化,诱导NSCLC细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。     

MiR-202靶向调节EGFR介导的PI3K/AKT信号通路在紫杉醇治疗卵巢癌中的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-202靶向调节EGFR介导的PI3K/AKT信号通路在紫杉醇治疗卵巢癌中的作用机制。［方法］ 以人卵巢癌细胞株A2780细胞作为研究对象,分别转染miR-NC、miR-202 mimics及shEGFR。采用MTT和Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力。采用qRT-PCR检测细胞中miR-202和EGFR mRNA表达量。采用Western blot检测EGFR、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白水平。［结果］ qRT-PCR结果显示,与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,miR-202在卵巢癌细胞A2780/WT 及A2780/PTX中明显低表达（P<0.05）;EGFR mRNA水平显著性上调（P<0.05）。转染miR-202 mimics后,卵巢癌细胞中miR-202相对表达量显著性高于miR-NC组和shEGFR组（P<0.05）;而miR-202 mimics组和shEGFR组EGFR mRNA含量显著性低于miR-NC组（P<0.05）。过表达miR-202及转染shEGFR后,miR-202 mimics组和shEGFR组细胞增殖能力较miR-NC组均显著性降低（P<0.05）;迁移细胞和侵袭数目也随之减少（P<0.05）;且对紫杉醇的半数抑制浓度IC50降低（P<0.05）。免疫印迹测定结果显示,miR-202 mimics组和shEGFR组中EGFR蛋白、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT磷酸化水平较miR-NC组明显下调（P<0.05）。［结论］ miR-202能靶向调节EGFR表达,并且影响卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭过程,其作用机制是通过抑制EGFR下游PI3K/AKT信号通路从而发挥抑癌作用,为临床治疗提供了新方向。     

Downregulation of Mig-6 in nonsmall-cell lung cancer is associated with EGFR signaling

Downregulation of Mig-6 expression has been implicated in several human cancers and its loss can lead to prolonged activation of EGFR and carcinogenesis. The present study aimed to investigate the clinical significance of loss of Mig-6 expression in nonsmall-cell lung cancer (NSCLC) and the biological functions of Mig-6 in NSCLC cell lines. Mig-6 expression was downregulated in 47/91 (51.6%) cases of NSCLC that were examined. Mig-6 downregulation significantly correlated with poor differentiation (P = 0.0131), histological type (P = 0.0021), and EGFR expression (P = 0.003). In addition, knockdown of Mig-6 expression in H1299 and BE1 cells promoted EGF-induced tumor cell proliferation and migration. Furthermore, Mig-6 knockdown led to a significant increase in phospho-AKT, phospho-ERK, phospho-EGFR as well as MMP-2 and MMP-9 levels. These results indicate that downregulated Mig-6 in NSCLC tissues may serve as a new marker that can predict the activation of EGFR signaling pathway.     

黄卡瓦胡椒素B促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移

目的:研究黄卡瓦胡椒素B对肺癌细胞H1975增殖及迁移的影响并探讨其机制。方法:培养H1975肺癌细胞株，用不同浓度的黄卡瓦胡椒素B处理细胞24、48和72 h后，采用CCK-8法检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞增殖的影响。Transwell实验检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞迁移能力的影响。Western blotting 检测20 μmol/L和40 μmol/L黄卡瓦胡椒素B处理16 h后对H1975细胞EGFR-AKT信号通路相关蛋白表达的影响。采用qPCR技术检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞EGFR mRNA水平的影响。Western blotting 检测黄卡瓦胡椒素B对H1975细胞LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达的影响。CCK-8实验和Transwell实验分别检测黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用对H1975细胞增殖和迁移的影响。结果:黄卡瓦胡椒素B在体外能抑制H1975细胞的增殖，且抑制作用呈浓度依赖性。黄卡瓦胡椒素B处理组细胞迁移数明显减少（P＜0.05）。Western blotting结果显示，使用黄卡瓦胡椒素B 处理16 h后，H1975肺癌细胞的EGFR、p-AKT和AKT蛋白表达水平明显降低(P＜0.05)，但EGFR mRNA水平无显著改变。当巴佛洛霉素A1（Bafilomycin A1，BAF）或氯喹 (Chloroquine,CQ)阻断自噬时，黄卡瓦胡椒素B诱导的对EGFR蛋白的抑制作用被逆转，并且10、20和40 μmol/L黄卡瓦胡椒素B可促进H1975细胞LC3-Ⅱ蛋白表达。黄卡瓦胡椒素B与EGFR小分子抑制剂联用能够抑制H1975细胞的增殖和迁移以及p-EGFR和p-AKT的表达。结论:黄卡瓦胡椒素B通过促进EGFR的降解进而抑制H1975肺癌细胞的增殖和迁移。     

吉非替尼对非小细胞肺癌细胞的体外抑制作用

目的研究体外吉非替尼对非小细胞肺癌细胞株的作用机制。方法观察吉非替尼作用于A549、SPC-A-1、H460、H1229、95D5株人类非小细胞肺癌细胞株,应用活细胞计数试剂盒CCK8测定各组细胞增殖抑制情况;选择A549、SPC-A-1细胞株,PI标记后应用流式细胞术观察细胞凋亡状况,Transweu方法检测细胞侵袭情况;Westernblot检测药物对增殖相关信号通路蛋白表达的变化。结果吉非替尼抑制了各株肺癌细胞的增殖和侵袭（P〈0．05）;吉非替尼组中A549和SPC-A-1细胞的凋亡率分别为（9．6±0．73）％和（14．3±1．12）％,高于对照组的（3．1±0．29）％（t=11．16,P=0．001;t－4．726,P=0．009）;吉非替尼作用于A549细胞72h后,能明显降低p-AKT、P—EGFR、p-MAPK蛋白的表达水平（t=6．656,P=0．003;t=16．441,P=0．0001;t=3．736,P=0．020）。结论吉非替尼能抑制肺癌细胞在体外的增殖、侵袭,可诱导肿瘤细胞的凋亡,其作用可能与下调活化的表皮生长因子受体（EGFR）信号转导通路关键酶的表达有关。     

miR-424对非小细胞肺癌A549细胞生长和侵袭的影响及分子机制

背景与目的已有的研究表明miR-424可抑制肾癌细胞增殖,抑制宫颈鳞癌细胞的迁移和侵袭能力,而其对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）细胞的影响目前尚无系统研究。本研究探讨miR-424对NSCLC A549细胞生长和侵袭迁移能力的影响并进一步研讨其分子机制。方法应用CCK8检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞增殖的影响。应用Transwell检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞侵袭能力的影响。应用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞中MMP9和MMP2蛋白水平的影响。构建E2F63’UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-424对E2F6的靶向作用。采用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达后,A549细胞中E2F6的表达。结果过表达miR-424后,A549的生长和侵袭能力显著降低。过表达miR-424后,A549细胞的MMP-2和MMP-9表达下降。荧光素酶活性检测表明miR-424能够抑制E2F6的荧光素酶活性。过表达miR-424后,细胞内E2F6的表达降低。结论 miR-424能够通过调控E2F6而抑制A549的生长和侵袭能力。     

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的：探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法：通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果：MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达（均P<0.01）,选取表达水平较高的A...     

培美曲塞和吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用和机制

目的 探讨培美曲塞与吉非替尼不同时序应用对肺腺癌细胞A549和PC-9生长及凋亡的影响, 并阐述其可能机制。方法 MTT法检测各组细胞的增殖抑制情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡及细胞周期分布,Western印迹法检测对EGFR下游信号通路及TS酶蛋白水平表达的影响。结果 培美曲塞序贯吉非替尼、培美曲塞同步联合吉非替尼对PC-9和A549细胞增殖抑制率及凋亡率较单药组均提高（P<0.05）,培美曲塞可以提高EGFR、AKT 、ERK磷酸化水平,而吉非替尼表现为抑制作用, 同时吉非替尼降低TS酶表达。培美曲塞序贯吉非替尼,培美曲塞同步联合吉非替尼抑制EGFR、AKT 、ERK磷酸化水平较单药更强。吉非替尼主要将PC-9、A549细胞阻滞在G0/G1期;培美曲塞主要将细胞阻滞在S期。培美曲塞序贯吉非替尼、培美曲塞同步联合吉非替尼较其他组G2/M期细胞比例提高（P<0.05）。结论 培美曲赛序贯吉非替尼、培美曲赛同步联合吉非替尼在PC-9、A549细胞中均起到协同增效作用,且培美曲赛序贯吉非替尼协同作用更为显著,可能主要与培美曲赛诱导EGFR、AKT 、ERK磷酸化及吉非替尼降低TS酶作用有关。     

EGFR inhibitors sensitize non-small cell lung cancer cells to TRAIL-induced apoptosis

Apoptosis induced by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) can be regulated by the epidermal growth factor (EGF) signaling pathway. In this study, recombinant adenoviral vectors that encode TRAIL gene from the hTERT/RGD promoter (AdTRAIL) was combined with drugs including gefitinib, elotinib, and cetuximab that inhibit EGFR and the EGF signaling pathway in non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines to investigate their antitumor activity. In vitro, compared to single reagent, AdTRAIL combined with EGFR inhibitors reduced proliferation and enhanced apoptosis in H460, A549, and SW1573 cell lines. Western blot results suggested that these effects were relative to up-regulation of pro-apoptosis protein BAX and down-regulation of p-AKT. In vivo, AdTRAIL combined with cetuximab resulted in a significant growth reduction in H460 xenografts without damage to the main organs of nude mice. Histological examination and TUNEL analyses of xenografts showed that cetuximab enhanced cell apoptosis induced by AdTRAIL. These results indicate that EGFR inhibitors enhanced AdTRAIL anti-tumor activity in NSCLC cell lines and that inhibiting the AKT pathway played an important role in this enhancement.     

低表达DJ-1调控PI3K/AKT通路对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨低表达DJ-1对肺癌细胞增殖凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:采用Western blot检测肺癌细胞系中DJ-1蛋白的表达;以脂质体法转染干扰SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达后,MTT法检测细胞的增殖变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达水平;将PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理SK-MES-1细胞48 h后,MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达。结果:与正常肺上皮BEAS-2B细胞相比,肺腺癌A549细胞和肺鳞癌SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的相对表达量均显著升高,且SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达量高于A549细胞,差异均有统计学意义（P＜0.05）。转染后siRNA DJ-1组细胞中DJ-1蛋白的表达量明显低于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,转染24 h后siRNA DJ-1组细胞的吸光值（OD值）变化不显著（P＞0.05）,而转染48 h和72 h后细胞的OD值明显降低（P＜0.05）;转染48 h后,与对照组相比,siRNA DJ-1组细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,p-AKT/AKT值显著降低（P＜0.05）。SK-MES-1细胞经抑制剂LY294002处理48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与下调DJ-1表达的结果相一致。结论:DJ-1在肺癌细胞中高表达,下调其表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

大黄素逆转非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的机制研究

目的 探讨大黄素逆转非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR TKI）耐药的作用机制。方法 应用持续诱导的方法构建NSCLC EGFR-TKI耐药细胞株HCC827／GR;应用MTS法检测大黄素（30μmol／L）、吉非替尼（1μmol／L）及两药联合处理HCC827和HCC827／GR细胞48h后细胞增殖能力的变化;应用Western blotting法检测HCC827和 HCC827／GR细胞中p EGFR、p-AKT、p-ERK1／2及p-MET蛋白表达水平的变化。结果 MTS法检测结果显示,经单药吉非替尼或大黄素处理后,HCC827／GR细胞增殖能力未减弱,而两药联合处理组的细胞增殖能力明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示,HCC827、HCC827／GR细胞中p-EGFR、p-ERK1/2明显表达,而p-AKT表达微弱;HCC827／GR 中p-MET表达水平较HCC827明显上调。经单药吉非替尼处理后,HCC827细胞株p-EGFR、p-ERK1/2表达水平下调,HCC827／GR细胞株p-EGFR表达明显下调;大黄素可显著下调HCC827／GR细胞株p-MET表达,但对p-EGFR、p-ERK1/2的表达无影响;而大黄素与吉非替尼两药联用可明显抑制HCC827／GR细胞株p-EGFR、p-ERK1/2以及p-MET的表达。结论 大黄素可以逆转NSCLC EGFR-TKI耐药,可能是通过抑制c-Met的活化来实现。     

磷酸化AKT与磷酸化EGFR在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:评价磷酸化表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factor receptor,p-EGFR)及其信号转导通路下游分子AKT的活化形式磷酸化AKT(phosphorylated AKT,p-AKT)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其意义.方法:免疫组织化学法检测95例NSCLC组织中p-AKT和p-EGFR蛋白的表达,并分析2种蛋白表达之间的关系及与预后的相关性.结果: p-EGFR的阳性表达率为57.89%(55/95),在低年龄组(33/46)、女性组(24/30)和腺癌组(35/52)的表达率较高,差异有统计学意义(P=0.008, P=0.003, P=0.009).p-AKT的阳性表达率为66.32%(63/95),在低分化组(20/23)、有淋巴结转移组(29/37)和肿瘤较小(≤3 cm)组(36/46)的表达率较高,差异有统计学意义(P=0.036,P=0.047,P=0.017).单因素分析显示,p-AKT和p-EGFR蛋白表达与预后无关(P=0.854,P=0.729).多因素分析显示,2种蛋白表达与生存时间也无关(P=0.497,P=0.731).p-AKT表达与p-EGFR表达呈正相关性(r=0.204,P=0.047).结论:p-EGFR和p-AKT的阳性表达率对NSCLC患者预后无提示意义,二者均不能成为预后指标.