刺五加叶柄的体细胞胚胎发生研究

目的 以来源广泛、原植物药用成分量可测定的刺五加叶柄为外植体,研究刺五加体细胞胚胎发生情况,为实现药用成分高产刺五加的快速繁殖奠定基础.方法 以3年生植株萌发15 d以内的刺五加复叶叶柄为外植体,考察2,4-D和BA对刺五加体细胞胚胎发生的影响.结果 28 d培养后,2,4-D 1.5 mg/L+BA 1.0 mg/L处理的叶柄外植体中71.4%直接产生或经由愈伤组织间接产生了8.5个体胚.两种产生方式均可在诱导培养基中进行,但间接发生比例较少.转入相同或降低2,4-D质量浓度的培养基后,体胚渐次发育成熟.同时新的体胚也在逐渐产生,经由间接途径产生的体胚所占比例也随之上升.结论 刺五加可以通过萌发15 d以内的复叶叶柄外植体实现体细胞胚胎发生,体胚诱导率取决于2,4-D和BA的质量浓度.     

体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究

目的 探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系.方法 将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响.结果 体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织.2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量.MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基.结论 刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度.     

不同生长素对西洋参成熟种胚及离体子叶体细胞胚发生影响研究

目的:观察不同生长素包括24,-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)对西洋参完全成熟种胚及离体子叶诱导体细胞胚发生的效应。方法:以陕西留坝西洋参的完全成熟裂口种子所获得的完整种胚及离体子叶为实验材料,接种到添加不同浓度24,-D、NAAI、AA的MS培养基中进行离体培养。结果:三种生长素诱导体细胞胚的能力为:IAANAA24,-DI,AA最高诱导率达100%;NAA、24,-D最佳浓度分别为2.0 mg/L和0.5 mg/L;离体子叶的体细胞胚发生率相对较低;2,4-D处理(30 d内)时间越长诱导率越高。结论:IAA诱导体细胞胚发生的能力最强,较高浓度的NAA和2,4-D抑制体细胞胚的发生,体细胞胚发生需要持续的生长素作用。     

基于均匀设计优化手参体细胞胚胎发生及植株再生体系

目的以手参茎尖为外植体,研究手参体细胞胚胎发生体系。方法应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果手参茎尖胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.0 mg/L+IAA 2.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,诱导率为98%;体胚发育及植株再生最适宜的培养基为:CM+6-BA 1.00 mg/L+IAA 0.10 mg/L,体胚萌发率为100%,萌发的体胚在发育培养基上继续培养50 d后全部发育成完整植株。结论对不同阶段培养材料的形态结构及超微结构的观察证明了手参体细胞胚胎的发育过程。     

党参花药愈伤组织诱导及植株再生体系的建立北大核心

目的:建立党参花药培养的植株再生体系,为党参单倍体育种提供基础研究。方法:以党参花药为外植体,研究不同浓度2,4-D、低温预处理对愈伤组织诱导的影响,并对愈伤组织进行继代培养及体细胞胚胎发生再生植株研究。结果:确定了花粉发育时期与花蕾外部形态的相关性,药瓣比(花药长/花瓣长)为0.83~0.89的党参花蕾,其花粉处于单核中央期或单核靠边期;党参花药愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+1.0~2.0 mg/L 2,4-D+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L,诱导率为37.50%~47.50%;低温预处理对愈伤组织诱导的效果不明显;合适的愈伤组织继代、胚状体分化再生植株的培养基分别为MS+0.5 mg/L 2,4-D+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L、MS+0.5 mg/L 2,4-D+椰乳100 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L。结论:初步建立了通过体细胞胚胎发生再生植株的党参花药培养技术体系,为党参新品种选育奠定了基础。     

刺五加组织培养与细胞工程进展

综述了国内外对刺五加组织培养与细胞工程研究的现状。分别从体细胞胚胎发生的影响因素外植体的发育程度和类型、培养基、植物生长调节剂的种类和浓度以及作用特点、体细胞胚胎的形态发生过程与解剖学和人工种子的包埋与萌发;茎尖外植体的离体培养与快速繁殖;根癌农杆菌和发根农杆菌对愈伤组织和新生体胚的遗化转化;毛状根培养生产刺五加次生代谢产物的研究现状进行了评述,并进一步分析了其中存在的问题,提出了一些建议。     

刺五加离体培养中胚状体的诱导

目的：研究2，4-D及BA两种植物激素相互配比以及不同的外植体在刺五加胚状体诱导中的作用。方法：采用组织培养方法。以MS为基本培养基，附加2，4-D及BA。以刺五加种胚及无菌苗的子叶、叶柄、胚轴、胚根等不同外植体为材料。定期观察记录胚状体的发生及生长情况。结果：子叶及胚轴较易产生胚状体(1～2个月)。诱导胚状体的最佳培养基为MS 2，4-D0．5mg／L。结论：不同的外植体及激素水平诱导胚状体的效果不同，2，4-D起主导作用；培养务件以黑暗比在光照下效果好。     

杜仲不同发育时期未成熟种胚离体培养研究

目的了解激素对杜仲不同发育程度完整未成熟种胚的影响。方法以杜仲三个不同发育时期的完整未成熟种胚为实验材料(分别标记为I#:心形胚早期,胚长约0.5 mm;II#:鱼雷形胚,胚长约1~2mm;III#:胚长约5mm,约为成熟胚的1/2),以MS为基本培养基,添加不同激素及组合(包括2,4-D、NAA、6-BA、TDZ、GA3)进行离体培养,观察不同激素对完整幼胚的影响。结果实验结果显示,I#材料接种后15天几乎全部死亡,显示简单的无机盐培养基不能满足发育早期种胚离体培养的营养需求;III#材料接种后生长迅速,在附加细胞分裂素的培养基中多数萌发形成了幼苗;II#材料在培养30天及60天进行结果统计显示:1 2,4-D促进疏松愈伤组织形成,抑制不定芽形成;2细胞分裂素类,包括6-BA、TDZ,均能诱导形成不定芽,培养60天诱导率显著增加;在6-BA 2mg/L中不定芽发生率达91%;3在附加0.5mg/L 2,4-D的培养基中,在培养约90天后40个外植体中有3个形成体细胞胚。结论 II#鱼雷形胚对激素的反应与杜仲成熟胚或幼苗离体培养结果相近,该发育状态的幼胚可能适合于诱导胚状体。     

黄花乌头体细胞胚胎发生及其植株再生

目的 对不同植物激素及其配比对黄花乌头体细胞胚胎诱导及植株再生进行研究，为药用植物黄花乌头的资源开发提供理论依据。方法 以黄花乌头的茎、叶、胚轴、胚根和子叶为外植体考察不同植物激素对黄花乌头愈伤组织诱导、体细胞胚胎发生及植株再生的影响。结果 外植体接种于MS 2，4-D 1mg／L 6-BA 0．5mg／L的培养基上愈伤组织诱导率最高，愈伤组织在MS 2，4-D 0．2rng／L 6-．BA 0．5mg／L的培养基上连续继代几次后，分化出淡绿色具有圆锥状或原球状突起的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织能够在MS 6-BA2 mg／L的培养基上形成不定芽，该芽能够在MS＋IBA 0．5mg／L的培养基上生根．形成完整的再生植株。结论 利用体细胞胚胎发生技术可以成功地得到再生植株，从而为濒危植物黄花乌头的资源开发和保护提供新途径。     

檀香体胚发生及影响因素的研究

目的　探讨檀香胚性细胞发生体胚的技术。方法　以檀香实生苗的下胚轴为材料 ,MT为基本培养基 ,附加不同种类的植物激素。结果　基本培养基以 MT或 MS为好 ;IAA与 BA结合有利于胚性愈伤组织的形成 ,诱导率可达 36 .7% ;体胚发生 ,以 MT+IAA(NAA) 0 .2 mg/ L+BA1mg/ L 培养基较好 ,能诱导体胚发育 ,长出正常茎叶 ;BA浓度为 0 .5～ 1.0 mg/ L 时 ,既有利于体胚发生 ,又能保证一定的增殖速度。结论　成功地诱导出檀香胚性愈伤组织 ,通过体细胞胚胎发生长出正常茎叶 ,为利用生物技术的手段进行檀香人工种子的研究奠定基础     

Plant Regeneration through Somatic Embryo in Herpetospermum pedunculosum, an Endangered Tibetan Medicinal Herb

Objective An effective reproducible protocol for complete plant regeneration via somatic embryogenesis has been developed for Herpetospermum pedunculosum, an endangered Tibetan medicinal herb. Methods The cotyledon explants used in this study were excised from seedlings germinated in vitro. Callus was induced from cotyledon explants on Murashige and Skoog's medium, supplemented with 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D, 0.1-1.0 mg/L) alone or in combination with 6-benzylaminopurine (BA, 0.5, 1.0, and 2.0 m...     

渐危药用植物珊瑚菜胚状体途径再生植株的研究

目的:研究离体条件下珊瑚菜种子休眠的原因,建立胚状体途径再生植株的方法。方法:研究离体条件下胚乳因素和外源激素在解除珊瑚菜种子休眠过程中的作用,以及激素浓度对胚性愈伤组织诱导及胚状体再生植株的影响。结果:保留1/3胚乳的珊瑚菜种子萌发率最高,可以达到31%。而TDZ,6-BA,GA3处理不仅对解除珊瑚菜种子休眠的作用不大,同时容易导致出现畸形苗。在附加1.0 mg.L-1 2,4-D的MS培养基上,胚性愈伤的诱导率可以达到57%。将培养20 d左右胚性愈伤组织转入MS培养基上40 d左右就可分化形成子叶期胚状体,然后再继代培养20 d即可得到再生植株。结论:建立一套有效的珊瑚菜再生植株体系。     

怀槐愈伤组织形成与异黄酮积累

目的 :考察怀槐愈伤组织形成与总异黄酮积累的关系。方法 :不同培养基诱导怀槐子叶和下胚轴产生愈伤组织 ,紫外分光光度术测定愈伤组织中总异黄酮并含量。结果 :NAA /BA及含 2 ,4-D组合有利子叶愈伤组织的诱导 ;MS ,N6 ,B5培养基适宜子叶形成愈伤组织 ,而SH较适宜下胚轴产生愈伤组织。愈伤组织具有异黄酮合成能力 ,含有NAA激素组合诱导的子叶愈伤组织总异黄酮含量较高 ,而 2 ,4-D/BA组合诱导的下胚轴愈伤组织总异黄酮含量较高 ,高浓度 2 ,4-D/KT组合抑制子叶和下胚轴愈伤组织积累异黄酮。愈伤组织根据发育的形态特征可分为 4种类型 ,以黄色、疏松、颗粒状的Ⅱ型愈伤组织中总异黄酮含量最高。结论 :培养基与激素组合影响愈伤组织的形成及发育形态特征 ,并反映在愈伤组织异黄酮合成差异上 ,获得的黄色、疏松颗粒状愈伤组织为后续的细胞液体悬浮培养及异黄酮合成代谢的调控研究奠定了基础。     

喜树愈伤组织的诱导与培养

目的：研究喜树叶片、茎段和带芽茎段的愈伤组织诱导效果以及愈伤组织继代培养条件。方法：以MS为基本培养基,附加不同质量浓度6-BA,NAA和2,4-D,通过正交试验研究愈伤组织继代培养的适宜条件。结果与结论：MS+6-BA 2 mg·L^-1+NAA 2 mg·L^{-1+2,4-D 2 mg·L-1的诱导效果较好,容易诱导出愈伤组织,其中叶片的诱导率可达80%以上。愈伤组织在MS+６-BA 1 mg·L-1+2,4-D 1 mg·L-1培养基上继代培养生长快速,疏松易分散,适合用于细胞培养。}     

秦艽愈伤组织的培养及其龙胆苦苷含量的研究

目的:为扩大和提高甘肃道地药材秦艽资源的利用效率。方法:以秦艽种子的萌发所获得的幼芽作为外植体,诱导形成愈伤组织;筛选诱导愈伤组织产生的不同培养基和培养条件,并继代培养;应用HPLC法测定龙胆苦苷的含量。结果:秦艽愈伤组织生长的最佳培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L),最佳继代培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.5 mg/L),最佳继代时间为30 d。龙胆苦苷积累量在指数生长后期(28～30 d)达最高,为0.78 mg/g DW。结论:筛选出了适宜的秦艽愈伤组织培养方法。秦艽愈伤组织在固体培养基上的生长曲线呈"S"型,且愈伤组织中龙胆苦苷的积累量随愈伤组织增殖而不断增加。