D-氨基葡萄糖衍生物通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡中的作用及机制.方法:体外培养Eca-109细胞,用COPADG及特异性JNK抑制剂SP600125对Eca-109细胞进行处理;Western印迹法检测P-JNK蛋白表达的变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:Western印迹显示随着COPADG作用浓度增加P-JNK蛋白表达逐渐增强,经SP600125预处理后,COPADG诱导Eca-109细胞P-JNK蛋白表达明显减弱(P＜0.01),COPADG诱导的细胞凋亡率明显减低,细胞增殖抑制率显著下降,与COPADG单作用组之间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:JNK信号转导通路在COPADG诱导Eca-109细胞凋亡过程中发挥重要作用,COPADG通过JNK信号通路诱导Eca-109细胞凋亡.     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.     

星半通膈散诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及其机制研究

目的 研究星半通膈散药液诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及其作用机制.方法 采用MIT法测定细胞生长抑制率,通过流式细胞仪观察凋亡细胞及检测p53、bcl-2基因表达.结果 星半通膈散不同剂量药液均可抑制人食管癌Eca-109细胞生长,诱导细胞凋亡,降低p53(突变型)、bcl-2蛋白表达率.结论 星半通膈散能诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡,而抑制p53基因突变、下调bcl-2基因表达可能是其重要机制.     

2-甲基-3-羟基蒽醌诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制

为探讨2-甲基-3-羟基蒽醌抗肿瘤作用及其机制,本研究采用锥虫蓝法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期变化、细胞凋亡率、线粒体膜电位及细胞内游离钙的变化,Western blot方法检测凋亡相关蛋白caspase-4、caspase-7、caspase-9、Bcl-2、Bax、JNK、细胞色素C的表达。结果发现：2-甲基-3-羟基蒽醌时间依赖性地抑制乳腺癌细胞的生长,升高细胞内游离钙含量,降低线粒体膜电位并诱导其凋亡;药物上调Bax并下调Bcl-2蛋白的表达;诱导caspase-4、caspase-7、caspase-9、calpain的活化及细胞色素C的释放。结果提示2-甲基-3-羟基蒽醌可能通过Ca²⁺/calpain/caspase-4途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 PG-PIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强。结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关。     

蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western-Blot法检测凋亡抑制蛋白survivin,caspeas-3蛋白的表达.结果 随着蟾蜍灵浓度及作用时间的增加,细胞存活率逐渐降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);随着药物浓度增加,survivin蛋白表达逐渐下降,同时活化caspase-3.结论 蟾蜍灵可诱导食管癌ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin蛋白和活化caspase-3有关.     

Fas诱导MML-1凋亡时活化caspase-3表达与细胞周期的关系

目的研究Fas诱导的B淋巴细胞瘤细胞株MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3表达与细胞周期的关系。方法抗Fas抗体孵育MML-1不同时间以诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率并验证MML-1对Fas诱导凋亡的敏感性。采用PI—Triton X和FITC—active caspase-3双染色分析经Fas诱导凋亡的MML—1内活化caspase-3的表达。以细胞周期蛋白cyclin A、B1、E标记Fas诱导凋亡的处于不同增殖周期MML-1（S、G2／M和G1期细胞）,流式细胞术检测细胞内活化caspase-3的表达。结果Fas诱导6h后,MML-1凋亡率达到56％。Fas诱导4h后,活化caspase-3在G1期细胞内表达显著升高,仅有少量S期和G,／M期细胞表达活化caspase-3。Cyclin A、B1阴性而cyclinE阳性MML-1表达活化caspase-3。结论Fas诱导MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3的表达与细胞周期有关。G1后期和S早期的MML-1最先表达活化caspase-3,且对Fas诱导凋亡的敏感性最高。     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖诱导人结肠癌SWlll6凋亡的作用

目的:研究D-葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人结肠癌SWlll6细胞生长增殖的影响,进而探讨COPADG诱导SWlll6细胞凋亡的作用.方法:用不同浓度的COPADG处理SWlll6,采用MTT法测定其对SWlll6细胞生长增殖的抑制作用,通过DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察其对SWlll6细胞诱导凋亡的效应.结果:COPADG能抑制SWlll6细胞的生长增殖,并呈一定的浓度、时间依赖性;COPADG能诱导结肠癌SWlll6细胞凋亡;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱;流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰.结论:COPADG在体外可显著诱导结肠癌SWlll6细胞凋亡.     

Fas诱导MML-1凋亡时活化caspase-3 表达与细胞周期的关系

目的 研究Fas诱导的B淋巴细胞瘤细胞株MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3表达与细胞周期的关系.方法 抗Fas抗体孵育MML-1不同时间以诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率并验证MML-1对Fas诱导凋亡的敏感性.采用PI-Triton X和FITC-active caspase-3双染色分析经Fas诱导凋亡的MML-1内活化caspase-3的表达.以细胞周期蛋白cyclin A、B_1、E 标记Fas诱导凋亡的处于不同增殖周期MML-1(S、G_2/M和G_1期细胞),流式细胞术检测细胞内活化caspase-3的表达.结果 Fas诱导6 h后,MML-1凋亡率达到56%.Fas诱导4 h后,活化caspase-3在G_1期细胞内表达显著升高,仅有少量S期和G_2/M期细胞表达活化caspase-3.Cyclin A、B_1阴性而cyclin E阳性MML-1表达活化caspase-3.结论 Fas诱导MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3的表达与细胞周期有关.G_1后期和S早期的MML-1最先表达活化caspase-3,且对Fas诱导凋亡的敏感性最高.     

三氧化二砷诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨三氧化二砷体外诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡的作用及其可能的机制. 方法:梯度浓度三氧化二砷处理视网膜母细胞瘤细胞系HXO-RB44,MTT法观察增殖的变化,AO/EB染色法、Annexin V PI法流式细胞仪检测细胞凋亡.活性比色法检测caspase-3活性变化,Western 免疫印迹法测定bcl-2和bax蛋白的表达. 结果:三氧化二砷处理后的HXO-RB44细胞增殖抑制,抑制率呈剂量时间依赖性;其细胞凋亡率显著增加;caspase-3活性增加,bcl-2/bax的比值下调. 结论:三氧化二砷在体外可通过诱导HXO-RB44细胞凋亡达到抑制其增殖的作用;其诱导凋亡的作用可能与激活caspase-3和下调bcl-2/bax比值有关.     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

目的：探讨8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法：采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8—Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果：8—Br—cAMP作用48h后可显著诱导Eca—109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl—2、c—myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas—IR减弱。结论：8—Br—cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca—109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。     

SIRT1通过调控Snail表达参与食管癌EC-9706和Eca-109细胞的上皮间质转化

目的探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）诱导食管癌EC-9706和Eca-109细胞上皮间质转化（EMT）发生中的作用和机制。 方法转染3条化学合成SIRT1 siRNA入食管癌EC-9706和Eca-109细胞,以空白细胞和转染阴性对照siRNA细胞作为对照, real-time PCR和western blot 检测转染效果。Transwell 侵袭小室和划痕实验检测各组细胞的侵袭转移能力变化。Real-time PCR和Western blot检测各组细胞上皮间质转化相关分子E-cadherin和vimentin的表达变化,同时进一步检测E-cadherin转录 抑制因子Snail、twist1 和ZEB的表达变化。结果与空白组和阴性对照组细胞相比,转染SIRT1 siRNA1 和SIRT1 siRNA3 的 EC-9706和Eca-109细胞SIRT1 mRNA和蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。Transwell侵袭小室和划痕实验 结果显示转染SIRT1 siRNA1和SIRT1 siRNA3组EC-9706和Eca-109细胞穿膜细胞数和划痕愈合能力较空白组和阴性对照组 细胞下降,差异有统计学意义（P<0.05）。转染SIRT1 siRNA1和SIRT1 siRNA3组EC-9706和Eca-109细胞E-cadherin表达明显 升高,而vimentin 表达下降,与空白组和阴性对照组细胞相比差异有统计学意义（P<0.05）。转染SIRT1 siRNA1 和SIRT1 siRNA3组EC-9706细胞Snail表达下降,与空白组和阴性对照组细胞相比差异有统计学意义（P<0.01）。转染SIRT1 siRNA1和 SIRT1 siRNA3 组Eca-109 细胞Snail 和twist1 表达下降,与空白组和阴性对照组细胞相比差异有统计学意义（P<0.01）。结论 SIRT1有可能通过调控Snail表达诱导EMT发生从而在食管癌细胞侵袭转移中发挥作用。     

香加皮宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109侵袭力的影响

目的探索宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109侵袭力及TFPI-2基因表达的影响。方法以12.5、25、50μg/ml浓度的宝藿苷-I处理Eca-109细胞48h,分别采用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力、RT-PCR法检测细胞TFPI-2mRNA表达水平以及Westernblot法检测TFPI-2蛋白表达水平等。结果 12.5、25、50μg/ml宝藿苷-I均可抑制人食管癌细胞Eca-109的侵袭力并能上调TFPI-2mRNA及蛋白的表达,25、50μg/ml组与对照组相比均有显著差异（P〈0.05）。结论宝藿苷-I能抑制人食管癌细胞Eca-109的侵袭力,可能与上调TFPI-2基因的表达有关。     

siRNA干扰对Eca-109食管癌细胞株Skp2表达的影响

目的：探讨siRNA干扰后食管癌Eca-109细胞株Skp2 mRNA表达及肿瘤细胞增殖活性的影响.方法：通过siRNA转染食管癌Eca-109细胞株后,分别用RT-PCR和CCK-8检测Skp2 mRNA的表达和细胞增殖的活性.结果：食管癌Eca-109细胞株增殖活性及Skp2 mRNA明显减少.结论：运用siRNA可以有效抑制Skp2 mRNA的表达及细胞增殖活性.siRNA有望成为治疗食管癌的重要手段.     

Skp2-siRNA构建及其对食管癌细胞Eca-109 p27和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究siRNA抑制Skp2基因在食管癌细胞中表达,探讨Skp2在肿瘤发生过程中的作用。方法:在Skp2基因编码区选择4个RNAi作用位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPER-retro(pRS),转染包装细胞PT67,收集含病毒颗粒的培养上清感染食管癌Eca-109细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后形成稳定克隆。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR和免疫印迹法检测Eca-109细胞内Skp2 mRNA、p27和Bcl-2表达。结果:与正常细胞和空载细胞相比,筛选得到的2个克隆细胞Skp2 mRNA表达水平下降(P<0.01),p27表达增高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05)。结论:Skp2 siRNA促进食管癌细胞凋亡与p27上调有关。     

PAR4在食管癌细胞中的表达及其机制

目的 探讨PAR4在食管癌细胞中的表达及其机制.方法 (1)分别用PCR和蛋白印迹法检测四株细胞中PAR4 mRNA和蛋白的表达;(2)BSP法检测4株细胞中PAR4基因CpG岛的甲基化状态.结果 (1)在TE-10、TE-11、Eca-109 3株食管癌细胞中PAR4的表达明显低于正常食管上皮细胞HEEpiC;2.PAR4基因的19个CpG位点在HEEpiC、TE-10、TE-11、Eca-109细胞中的甲基化频率分别为35.4%、83.8%、87.6%、94.3%.结论 PAR4在食管癌细胞中表达降低,其表达降低可能与PAR4基因启动子区高甲基化有关.     

Slug对食管癌细胞Eca-109侵袭能力的影响及其分子机制探讨

目的研究Slug与食管癌侵袭转移间的关系并探讨其分子机制。方法构建正义全长Slug真核表达载体pcDNA3.1-Slug并转染食管癌细胞系Eca-109;光镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫细胞化学、Westernblot分别检测细胞中上皮标志物E-钙粘素(E-cadherin)与间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达变化,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果转染pcDNA3.1-Slug真核表达载体后,Eca-109细胞形态变得细长;免疫细胞化学和Western blot结果显示E-cadherin表达明显下调,Vimentin表达则上调;Transwell小室显示转染pcDNA3.1-Slug载体的Eca-109细胞穿透matrigel胶的细胞数明显增多。结论转录因子Slug能促进食管癌上皮细胞间质化转变(epithelial-mesenchymaltransition,EMT),并提高其侵袭转移能力。     

RNA干扰抑制人食管鳞癌细胞PLK1基因的表达

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术,研究Polo样激酶l（PLK1）基因特异的siRNA对人食管鳞癌细胞Eca-109 PLKl基因表达的影响.方法将PLKI基因特异性siRNA转染入人食管鳞癌细胞Eta-109,采用RT、-PCR和Western-blot技术检测siRNA处理前后Eca-109细胞PLK1基因表达变化,并构建PI.K1基因特异性siRNA质粒表达载体.结果转染R后T-PCR和Western-blot结果均显示Eca-109细胞PLK1基因的表达明显下降,PLKI基因特异性siRNA质粒表达载体构建成功.结论 PLKl特异性siRNA对Eca-109细胞PLK1基因的表达有抑制作用.