U0126及地塞米松对氨培养SD乳鼠脑星形胶质细胞AQP4表达的影响

目的观察氨培养的脑星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达,地塞米松及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路抑制剂U0126对其表达的影响。方法分离、培养SD大鼠脑星形胶质细胞,分为氨培养组、氨培养+U0126组、氨培养+地塞米松组和正常对照组,采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应检测AQP4在蛋白和基因水平的表达和变化。结果氨可致培养的星形胶质细胞AQP4蛋白和AQP4 mRNA的表达增加。U0126和地塞米松均可使氨培养星形胶质细胞AQP4 mRNA和AQP4蛋白的表达减少。结论氨可致AQP4表达增加,U0126和地塞米松有细胞保护作用,可有效保护脑星形胶质细胞。     

EGFR抑制剂AG1478对胶质瘤C6细胞增殖及凋亡的影响

[目的]观察表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的影响.[方法]C6细胞中分别加入5、10、25、50 mol/L的AG1478,作用48 h.用MTT法测算C6细胞生长抑制率,倒置显微镜观察细胞形态学的改变,流式细胞术测算细胞凋亡率.[结果]AG1487能够抑制C6细胞的增殖,其抑制作用呈剂量—效应依赖关系.在50 μmol/L的AGI478作用下,C6细胞变圆、细胞突起减少,贴壁瘤细胞数量明显减少,排列稀疏.25 μmol/L的AG1478作用C6细胞48h,细胞凋亡率显著增加.[结论]EGFR抑制剂AG1478可抑制胶质瘤C6细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

β-淀粉样蛋白25～35诱导星形胶质细胞增殖模型

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ) 25～35诱导星形胶质细胞增殖的合适浓度及星形胶质细胞的体外培养。方法培养第3代大鼠星形胶质细胞,分为11组,分别加入0、5、10、20、30、40、50、60、70、100、200μmol/L Aβ25～35培养24 h后,加入噻唑蓝,培养4 h后,计算各组细胞增殖率。结果 Aβ25～35浓度为5～60μmol/L时,星形胶质细胞的增殖率明显高于0μmol/L组(P0. 05),当Aβ25～35浓度为100、200μmol/L时,星形胶质细胞的增殖率明显低于0μmol/L组(P0. 05)。结论 Aβ25～35在5～60μmol/L浓度范围内可以促进星形胶质细胞增殖,可用于阿尔茨海默病的毒性机制研究。     

全反式维甲酸对星形胶质细胞清除淀粉样蛋白的影响及机制

目的：探讨全反式维甲酸（ ATRA）对星形胶质细胞清除淀粉样蛋白（ Aβ）的影响及其机制。方法原代培养星形胶质细胞,使用Aβ42诱导原代星形胶质细胞凋亡,分别加入0．01、0．1、1、10μmol/L ATRA进行干预。采用MTT法检测细胞存活率,ELISA法检测培养基和细胞内Aβ42含量,Western blot 法检测APOE、BACE1表达变化。结果不同浓度的ATRA对Aβ42诱导的星形胶质细胞凋亡作用不同,其中0．1、1μmol/L可以显著抑制Aβ42诱导的星形胶质细胞凋亡（P＜0．05）。细胞外培养基中Aβ含量、细胞内Aβ含量均明显下降（P均＜0．01）。实验组APOE表达上调（P＜0．01）,BACE1表达无明显变化。结论 ATRA可以上调APOE表达,促进星形胶质细胞清除Aβ;低浓度ATRA对星形胶质细胞有保护性作用。     

白藜芦醇对血红素氧化酶-1诱导的离体星形胶质细胞损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对血红素氧化酶(HO)-1诱导的离体星形胶质细胞损伤的保护作用。方法体外培养、纯化获得星形胶质细胞,并构建HO-1基因转染入星形胶质细胞,在施加白藜芦醇干预后,运用CCK-8法检测细胞损伤情况,Western印迹检测HO-1蛋白的表达及普鲁士蓝染色法检测铁离子的沉积情况。结果 GFAP鉴定显示95%以上的细胞为星形胶质细胞;转染HO-1基因入星形胶质细胞后HO-1蛋白显著升高2.3倍;在施加白藜芦醇干预后,100μmol/L白藜芦醇均能降低HO-1蛋白的表达;同时,10、50μmol/L白藜芦醇也能够降低55%铁离子的沉积。结论白藜芦醇对HO-1诱导的离体星形胶质细胞损伤具有较好的保护作用。     

转化生长因子α对小鼠气道平滑肌细胞的促增殖作用

目的 探讨转化生长因子α(transforming growth factog alphg,TGF-α)对小鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMC)促增殖作用及其机制.方法 用四唑盐(MTT)比色法和3H-TdR掺人法测定加入TGF-α后小鼠ASMC的增殖情况.本实验采用3H-TdR掺入法和MTT比色法观察选择性表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)、EGFR中和抗体225(225mAb)、MEK抑制剂(U0126)、PI-3K抑制剂(Wonmannin)对加入TGF-α后促ASMC增殖的影响.通过Western Blot方法测定加入TGF-α及加用AG1478、225mAb后ASMC磷酸化EGFR蛋白表达.结果 用MTT比色法和3H-TdR掺入法测定ASMC培养液中加入TGF-α后ASMC增殖情况比对照组明显增加.加入AG1478、225mAb、U0126、Wortmannin可抑制TGF-α促ASMC增殖作用(P＜0.01).经Western Blot检测,TGF-α引起ASMC磷酸化EGFR蛋白表达增高.AG1478、225mAb抑制TGF-α所致ASMC磷酸化EGFR蛋白表达的增加(P＜0.01).结论 TGF-α激活EGFR为磷酸化EGFR,从而通过:①ras-raf-MEK-erk/MAPK途径;②PI3K-PKC-IKK途径;促进体外培养的小鼠ASMC的增殖.     

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的 探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白(GP)130/Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)通路对脊髓星形胶质细胞损伤的影响。方法 原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞，并利用免疫荧光检测胶原纤维酸性蛋白(GFAP)。分别加入50、100、150μmol/L毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入H₂O₂处理24 h造氧化损伤模型，CCK8检测各组细胞增殖情况，选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分组：空白对照(Control)组、模型(H₂O₂)组、模型+毛蕊异黄酮预处理(H₂O₂+Calycosin)组、模型+毛蕊异黄酮预处理+抑制剂Ly294002(H₂O₂+Calycosin+Ly294002)组、模型+毛蕊异黄酮处理+抑制剂Stattic(H₂O₂+Calycosin+Stattic)组。CCK8检测各组细胞增殖情况，流式检测各组细胞凋...     

海分枝杆菌感染活化星形胶质细胞对VEGFA表达的研究

目的研究分枝杆菌感染巨噬细胞后的条件培养基活化星形胶质细胞表达血管内皮生长因子A(VEGFA)作用及其可能的机制。方法用海分枝杆菌感染小鼠腹腔巨噬细胞后的条件培养基感染星形胶质细胞,采用qRT-PCR及ELISA检测VEGFA mRNA和VEGFA蛋白的表达情况,采用Western blot检测低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1α)的表达,ELISA检测加入HIF-1α抑制剂后VEGFA的表达。结果海分枝杆菌感染巨噬细胞后的条件培养基能活化星形胶质细胞,并在感染后12h~24h诱导HIF-1α明显表达,同时随着感染时间的延长,VEGFA表达逐渐增多,24h达到峰值。使用HIF-1α的抑制剂不能完全阻断VEGFA的合成。结论 HIF-1α可能参与分枝杆菌感染后星形胶质细胞表达VEGFA,且还可能有其他转录因子参与这一过程。     

纤溶酶原对星形胶质细胞纤溶酶原激活因子及其抑制的调节作用

目的 探讨纤溶酶原（PGn)对大鼠脑星菜胶质细胞纤溶酶原激活因子（PAI）及其抑制剂(PA)的调节作用。方法 利用大鼠血纤溶酶原对体外培养的星形胶质细胞进行诱导刺激,采用酶谱分析法、反射酶谱分析法、免疫印迹法对所产生的PAs和PAIs进行分析测定。结果 实验所用PGn调uPA和PAI－1,下调tPA活性,并且诱导产生一个28kDa的低分子量的uPA活性分子。结论 在体外,纤溶酶原有调节星形胶质细胞的功能。     

实验性氟中毒对SH-SY5Y细胞NMDA受体、Ca~(2+)及凋亡的影响

目的研究氟对SH-SY5Y细胞中NMDA受体、细胞内Ca~(2+)浓度及细胞凋亡的影响,探讨高氟蓄积对神经系统损伤的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,加入终浓度为0.2 mmol/L和2 mmol/L的氟化钠,并用10μmol/L的NMDA受体拮抗剂MK801对染氟组进行干预。免疫荧光检测细胞内Ca~(2+)的浓度变化,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot法检测NMDA受体亚型NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达。结果与对照组相比,高氟组中细胞凋亡率和细胞内Ca~(2+)平均荧光值明显增加,NR1和NR2A蛋白表达增加(P0.05)。对高氟组进行MK801干预后,细胞凋亡率和细胞内Ca~(2+)浓度减低(P0.05)。结论在SH-SY5Y细胞中NMDA受体亚型NR1和NR2A的过度表达参与了高氟诱导的神经细胞凋亡和坏死的过程,这种损伤机制可能是由于细胞内Ca~(2+)大量聚集所致。