抑制MMP-9表达与大鼠氧糖剥夺后星形胶质细胞AQP4的表达变化

目的探讨抑制星形胶质细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9表达与氧糖剥夺后水通道蛋白(AQP)4的表达变化。方法体外培养原代星形胶质细胞,建立氧糖剥夺缺血细胞模型,随机分为正常组、阴性对照组和MMP-9抑制组。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率,利用慢病毒转染抑制MMP-9的表达,实时荧光定量RT-PCR验证MMP-9的表达,通过实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹分别检测星形胶质细胞AQP4的表达变化。结果细胞经氧糖剥夺处理后,细胞存活率显著下降(P0.05);MMP-9抑制组星形胶质细胞与阴性对照组相比,MMP-9 mRNA表达显著下调(P0.05),AQP4 mRNA和蛋白表达均显著下降(P0.05)。结论氧糖剥夺使星形胶质细胞活性下降,抑制MMP-9的表达可介导AQP4表达下调,提示MMP-9和AQP4可能共同参与缺血性脑水肿的形成。     

慢病毒转染基质金属蛋白酶9对星形胶质细胞水通道蛋白4表达的研究

目的观察慢病毒转染基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)后,星形胶质细胞水通道蛋白4(aquaporin,AQP4)表达变化,探讨慢病毒转染星形胶质细胞的可行性。方法取出生2d的SD乳鼠大脑皮质进行星形胶质细胞纯化培养,利用携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的慢病毒转染细胞,通过倒置荧光显微镜观察细胞内GFP显影效果。将细胞分为正常组、阴性对照组[转染小干扰RNA(siRNA)]和MMP-9慢病毒组(转染MMP-9siRNA),用RT-PCR检测MMP-9 mRNA和AQP4 mRNA表达变化。结果 MMP-9慢病毒组细胞增殖较快,第3天细胞内GFP在倒置荧光显微镜显影90%,到达80%左右转染率的最佳感染条件为复感染指数=30～50。正常组MMP-9mRNA和AQP4mRNA表达为0.982±0.169和1.095±0.035,阴性对照组分别为1.104±0.271,1.112±0.026,MMP-9慢病毒组表达分别为0.552±0.197和0.652±0.042。正常组与阴性对照组MMP-9mRNA和AQP4mRNA表达比较,差异无统计学意义(P0.05);与阴性对照组和正常组比较,MMP-9慢病毒组细胞MMP-9mRNA和AQP4mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论慢病毒转染星形胶质细胞MMP-9可介导AQP4表达下调,为进一步利用星形胶质细胞进行缺血性脑水肿基因调节的研究提供实验依据。     

HCMV感染对人原代星形胶质细胞IL-6和IL-8表达的影响

目的观察人巨细胞病毒(HCMV)感染时人原代星形胶质细胞分泌的IL-6和IL-8的表达变化。方法分离纯化人原代星形胶质细胞并用免疫荧光法鉴定纯度。用HCMV感染原代星形胶质细胞制作HCMV感染模型,采用RT-PCR及免疫荧光法检测感染后星形胶质细胞中的即刻早期(IE)mRNA和蛋白的表达(进行模型鉴定)。RT-PCR及Western blot法检测正常培养和感染HCMV的人原代星形胶质细胞中IL-6和IL-8 mRNA和蛋白的表达。结果 HCMV能够感染人原代星形胶质细胞。正常培养的人原代星形胶质细胞能够表达IL-6 mRNA和蛋白,但不表达IL-8;HCMV感染初期的人原代星形胶质细胞中IL-6 mRNA和蛋白均表达增加,IL-8表达被激活(P均<0.05),而感染后期两种因子的表达明显下调。结论 HCMV感染能够诱导人原代星形胶质细胞IL-6和IL-8的表达异常。     

星形胶质细胞缺氧缺糖后PKC PKA PKG CaMKⅡ表达的变化及对AQP4的影响

目的探讨星形胶质细胞在缺氧、缺糖情况下蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶G(PKG)及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化情况。方法取2 d龄新生SD大鼠的大脑皮层进行星形胶质细胞的纯化与培养,通过缺氧、缺糖处理建立缺血细胞模型。以实验处理方式的不同分为对照组和模型组,通过RT-PCR法检测星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达的变化,采用Western blot法检测星形胶质细胞PKC、PKA、PKG和CaMKⅡ的表达情况。比较两组各项指标的差异。结果模型组的AQP4表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。模型组的PKC表达水平低于对照组,CaMKⅡ表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。PKA、PKG的表达水平在两组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论缺氧、缺糖导致的星形胶质细胞的PKC表达水平下降及CaMKⅡ表达水平升高,可能与星形胶质细胞水肿有关。     

羊栖菜多糖通过调控miR-29b-5p/AQP9表达对过氧化氢诱导的星形胶质细胞氧化损伤的影响及机制

目的探讨羊栖菜多糖(SFPS)对过氧化氢(H₂O₂)引起星形胶质细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法用200μmol/L H₂O₂处理细胞24 h作为H₂O₂组,以正常培养细胞作为对照(Con)组;分别用15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L的SFPS培养液预处理24 h后用200μmol/L H₂O₂诱导处理24 h,分别记为H₂O₂+SFPS-L组、H₂O₂+SFPS-M组、H₂O₂+SFPS-H组。将miR-NC、miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用200μmol/L H₂O₂再诱导处理24 h,记为H₂O₂+miR-NC组、H₂O₂+miR-29b-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用60 mg/L的SFPS培养液处理24 h后再用200μmol/L H₂O₂诱导处理24 h,分别记为H₂O₂+SFPS+anti-miR-NC组、H₂O₂+SFPS+anti-miR-29b-5p组。丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒分别检测MDA含量、SOD、GSH-Px活性;Western印迹检测水通道蛋白(AQP)9水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-29b-5p和AQP9 mRNA表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-29b-5p和AQP9的靶向关系。结果与Con组相比,H₂O₂组星形胶质细胞中MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低(均P<0.05);与H₂O₂组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中MDA含量逐渐降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,呈浓度依赖性(均P<0.05)。与Con组相比,H₂O₂组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著降低,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05);与H₂O₂组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著升高,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05),与Con组相比,H₂O₂组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著降低,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);与H₂O₂组相比,不同浓度SFPS糖组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05)。miR-29b-5p组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P<0.05)。相较于miR-NC组AQP9蛋白表达水平,miR-29b-5p组显著降低;相较于anti-miR-NC组AQP9蛋白表达水平,anti-miR-29b-5p组显著升高(均P<0.05)。与H₂O₂+miR-NC组相比,H₂O₂+miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9表达水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平和细胞凋亡率显著降低(均P<0.05),与H₂O₂组相比,H₂O₂+SFPS组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著升高,AQP9水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平及细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与H₂O₂+SFPS+anti-miR-NC组相比,H₂O₂+SFPS+anti-miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著降低,AQP9水平显著升高,MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低,Bcl-2水平显著降低,Bax水平及细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。结论SFPS可抑制H₂O₂诱导的星形胶质细胞氧化应激和凋亡,保护H₂O₂引起的星形胶质细胞氧化损伤,其机制可能与miR-29b-5p和AQP9有关。     

星形胶质细胞AQP9在体外损伤反应中的表达变化

目的 通过体外培养星形胶质细胞,探讨星形胶质细胞水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP9)对损伤反应的表达变化及其所起的作用.方法 取出生后2 d的Wistar大鼠乳鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,随机分为对照组和损伤组,每组分为1、3、5、7 d共4个时间点,采用划伤的方法建立星形胶质细胞对损伤反应的实验模...     

水通道蛋白4与脑血管病

水通道蛋白4（aquaporin4,AQP4）是水通道蛋白家族成员,在中枢神经系统主要表达于星形胶质细胞终足。大量实验研究显示,AQP4表达对不同类型卒中后脑水肿的发生、发展和消退起着重要作用。此外,AQP4表达还可通过影响血脑屏障完整性以及促进星形胶质细胞迁移、神经再生、神经炎性反应等机制影响脑血管病的发展过程。探讨AQ P4在脑内物质跨膜转运和细胞内外环境平衡中的调节机制及其在脑血管病模型中的表达,对于理解临床脑血管病的发生、发展、保护和治疗具有重要的意义。     

水通道蛋白-4与脑水肿

水通道蛋白(aquaporins,AQP)是一组具有高度选择性的水通道蛋白家族.AQP4在脑内星形胶质细胞中含量最高,是中枢神经系统中最主要的水通道蛋白,参与了脑血管病、脑挫伤、肿瘤、炎症等引起的脑水肿的一系列病理学过程.AQP4在脑缺血后水肿形成中的作用机制仍存在争议.选择性调节AQP4的表达,干预其作用环节,将为临床脑缺血后水肿的治疗提供新的思路和手段.     

脑胶质瘤细胞、组织中PGAM1 mRNA、蛋白的表达变化及意义

目的观察脑胶质瘤细胞、组织中磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)mRNA及其蛋白的表达变化。方法用半定量RT-PCR检测大鼠C6胶质瘤组织和星形胶质细胞中的PGAM1 mRNA。用免疫组化法检测43例人脑胶质瘤组织标本(胶质瘤组)和15例瘤周脑组织(对照组)中的PGAM1蛋白。结果星形胶质细胞中PGAM1 mRNA表达量为1.26±0.05,C6胶质瘤细胞中为0.75±0.07,二者相比P<0.05。对照组、胶质瘤组PGAM1蛋白阳性表达分别为3、29例,两组相比,P<0.05。结论脑胶质瘤组织中PGAM1 mRNA、蛋白表达增高,可能与脑胶质瘤的发病有关。     

黄芩素联合U0126调控人膀胱癌T24细胞凋亡的分子机制

目的探讨黄芩素联合U0126促进人膀胱癌T24细胞系凋亡的分子机制。方法将膀胱癌T24细胞株随机分为对照组,黄芩素组(加入20μmol/L黄芩素培养24 h),U0126组(加入20μmol/L U0126培养24 h),黄芩素联合U0126组(加入20μmol/L黄芩素和20μmol/L U0126共同培养24 h)。CCK8检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测T24细胞周期和凋亡;Real Time PCR和Western印迹检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2和P38 mRNA和蛋白的表达。结果黄芩素或U0126及黄芩素联合U0126作用可显著抑制T24细胞增殖,G0～G1期细胞增多,S期细胞减少,诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡,Bax表达增加,Bcl-2表达减少,ERK1/2和P38 mRNA水平显著降低,ERK1/2和P38磷酸化水平显著降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0. 05);而黄芩素联合U0126作用对细胞的改变更加显著(P0. 01)。结论黄芩素联合U0126均可通过调控ERK1/2和P38信号通路,抑制人膀胱癌细胞增殖,改变细胞周期,进而诱导肿瘤细胞凋亡。     

Research and Evaluation of the Influence of the Construction of the Gate and the Influence of the Piston Velocity on the Distribution of Gases into the Volume of the Casting

Distribution of gasses to the cast volume and volume of pores can be maintained within the acceptable limits by means of correct setting of technological parameters of casting and by selection of suitable structure and gating system arrangement. The main idea of this paper solves the issue of suitability of die casting adjustment—i.e., change of technological parameters or change of structural solution of the gating system—with regards to inner soundness of casts produced in die casting process. Parameters which were compared included height of a gate and velocity of a piston. The melt velocity in the gate was used as a correlating factor between the gate height and piston velocity. The evaluated parameter was gas entrapment in the cast at the end of the filling phase of die casting cycle and at the same time percentage of porosity in the samples taken from the main runner. On the basis of the performed experiments it was proved that the change of technological parameters, particularly of pressing velocity of the piston, directly influences distribution of gasses to the cast volume.     

Characterization of the beta-adrenoceptor of the adipose cell of the rat

The dose-response curves of the beta-adrenergic agonists isoprenaline (mixed beta 1 and beta 2), prenalterol (beta 1-selective), noradrenaline (more beta 1 than beta 2) and salbutamol (beta 2-selective) were studied on adipose cells of the rat, in vitro. The observed lipolytic potencies were in the order: isoprenaline greater than noradrenaline greater than salbutamol greater than prenalterol. The effects of beta-adrenergic antagonists betaxolol (beta 1-selective) propranolol (non-selective) and ICI 118551 (beta 2-selective) on lipolysis stimulated by the various beta-adrenergic agonists showed that in each case propranolol was the most potent blocking agent. These observations are not compatible with the concept that regulation of lipolysis in adipose tissue is mediated exclusively either by adrenergic receptors of the classical beta 1 type, or of the classical beta 2 type. We propose therefore, that this beta-adrenergic receptor, because of its non-compliance with the current classification system, be termed a 'beta-3' or beta-hybrid' adrenoceptor. Thus cardio-selective beta-adrenergic blocking agents, like betaxolol, may offer a hitherto unrecognized clinical advantage in obese patients undergoing anti-hypertensive therapy by offering a reduced impediment to hormone-induced utilization of calorie stores in adipose tissue.