弹性蛋白抗体自体免疫与肺气肿形成

目的通过弹性蛋白主动免疫及熏烟制造豚鼠肺气肿模型,观察各组模型中弹性蛋白抗体的产生及肺组织的破坏程度,探究弹性蛋白抗体自体免疫对肺气肿的影响。方法将24只雄性豚鼠随机分为3组：主动免疫组、熏烟组、对照组。主动免疫组于皮下多点注射弹性蛋白;熏烟组采用传统熏烟造模;对照组不做任何处理。造模满12周后检测各组豚鼠血清及肺泡灌洗液中的弹性蛋白抗体,并进行肺组织病理形态观察。结果主动免疫组及熏烟组肺组织结构均有不同程度的破坏。主动免疫组及熏烟组豚鼠血清及肺泡灌洗液中弹性蛋白抗体较对照组明显增多,且差异有统计学意义（P〈0.05）。结论弹性蛋白主动免疫可以造成豚鼠肺气肿模型。主动免疫组及熏烟组弹性蛋白抗体均明显增多,且两组肺组织均有不同程度破坏,表明弹性蛋白抗体自体免疫对肺气肿的发生有一定的促进作用。     

肺炎链球菌3型多糖对支气管哮喘小鼠气道炎症及Treg/Th17细胞的影响

目的观察肺炎链球菌3型多糖(T3P)对支气管哮喘小鼠气道炎症以及Treg/Th17细胞的影响,探讨T3P对哮喘小鼠的免疫调节作用。方法 BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和T3P组,每组8只。哮喘组以卵清蛋白(OVA)致敏、气道激发建立哮喘模型,对照组以PBS代替,T3P组在OVA致敏前皮下注射T3P进行干预。观察小鼠肺组织病理改变,对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-IgE)以及BALF中白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10、IL-17浓度,实时荧光定量PCR法检测肺组织中转录因子Foxp3和RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测Treg和Th17细胞占CD4~+细胞百分比。结果 T3P组小鼠肺组织炎症反应程度弱于哮喘组,血清OVA-IgE,BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞比例以及IL-4、IL-17浓度均低于哮喘组(P<0.05),IFN-γ、IL-10浓度高于哮喘组(P<0.05),小鼠肺组织Foxp3 mRNA表达水平及Treg占CD4~+细胞百分比均高于哮喘组(P<0.05),RORγt mRNA表达水平和Th17细胞占CD4~+细胞百分比均低于哮喘组(P<0.05)。哮喘组和T3P组小鼠肺组织Foxp3-mRNA/RORγt-mRNA比值及Treg/Th17细胞比例与BALF中嗜酸粒细胞数量呈负相关。结论 T3P可以通过抑制过敏原特异性IgE表达调节Th1/Th2、Treg/Th17细胞平衡,抑制气道炎症。     

B细胞转录激活因子对急性哮喘小鼠气道炎症的调控

目的 探讨B细胞转录激活因子（BATF）对急性哮喘小鼠气道炎症的调控及其与维甲酸孤儿核受体γt（RORγt）的关系。方法 将24只健康雌性BALB/c小鼠,随机分为生理盐水组（NS组）、哮喘模型组（AS组）、地塞米松治疗组（DEX组）,每组8只。卵清蛋白（OVA）致敏和激发建立哮喘小鼠模型。HE染色观察小鼠小支气管及肺组织病理改变;支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞计数和分类;酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中白细胞介素-17（IL-17）蛋白的浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中IL-17、BATF、RORγt mRNA的表达情况。结果 HE染色示AS组小支气管炎症细胞浸润较NS组多,以嗜酸性粒细胞（EOS）、中性粒细胞（PMN）及淋巴细胞为主,DEX组小支气管炎症细胞浸润情况较AS组轻。AS组、DEX组BALF中白细胞（WBC）总数、EOS及PMN均较NS组多（P<0.05）, DEX组上述细胞数较AS组少（P<0.05）。BALF中IL-17蛋白浓度及肺组织IL-17、BATF、RORγt mRNA表达水平均为AS组＞DEX组＞NS组（P<0.05）。小鼠肺组织BATF与IL-17、RORγt mRNA表达及BALF中WBC、EOS、PMN计数呈正相关（P均<0.05）。结论 在急性哮喘小鼠支气管肺组织中存在BATF、RORγt、IL-17表达的上调;BATF可能通过与RORγt的协同作用调控Th17细胞的分化发育及分泌功能发挥对小鼠气道炎症的调控作用。     

地塞米松对哮喘小鼠Th17细胞因子IL-17表达的影响

目的 初步探讨地塞米松对哮喘小鼠肺组织中Th17细胞因子IL-17的影响及其机制.方法 采用卵清蛋白致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型,Balb/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用EUSA检测小鼠肺泡灌洗液、IL-17水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症程度;RT-PCR检测肺组织IL-17、RORγtmRNA表达水平.免疫组织化学方法检测肺组织RoRγt脚蛋白表达水平.结果 哮喘组小鼠肺组织RORγt、IL-17mRNA和蛋白水平均高于对照组(P<0.01),地塞米松治疗组RORγt、IL-17mRNA和蛋白水平均低于哮喘组(P<0.05).结论 地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织RORγt表达,阻止Th17的分化,从而减少IL-17的分泌,减轻哮喘气道炎症反应.     

清肠化湿方对小鼠溃疡性结肠炎Th17/Treg平衡的调节作用

目的观察清肠化湿方对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠道Th17/Treg平衡的调节作用,以探讨其治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能机制。方法使用TNBS造模成功后,分为空白组、模型组、清肠化湿方组(12.8kg/d)、柳氮磺胺吡啶(SASP)组(0.5kg/d)。一次性ig给药,连续7d后处死小鼠;免疫组化法观察结肠组织中IL-17、Foxp3的浸润情况,Western blot法检测结肠组织RORγt和Foxp3蛋白的表达水平。结果清肠化湿方组小鼠结肠组织中IL-17表达低于模型组(P0.05);RORγt蛋白表达较模型组明显降低(P0.01),且与SASP组比较差异有统计学意义(P0.05);Foxp3蛋白表达较模型组升高(P0.05)。结论清肠化湿方可能通过下调RORγt表达抑制Th17细胞分化、IL-17产生,通过上调Foxp3表达促进Treg细胞形成,从而调节溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg平衡,抑制肠道炎症。     

壮骨止痛胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Treg／Th17平衡的调节作用

目的从骨组织调节性T细胞/辅助性T细胞(Treg/Th17)平衡角度探讨壮骨止痛胶囊抗绝经后骨质疏松作用机理。方法 72只8月龄SD雌鼠随机分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组(0.21 mg/kg),壮骨止痛胶囊高剂量组(1.28 g/kg)、中剂量组(0.64 g/kg)和低剂量组(0.32 g/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组去卵巢复制绝经后骨质疏松动物模型。术后1周开始给药,连续给药18周,最后一次给药1 h后处死,快速取左股骨检测雌二醇(E2)、白细胞介素17A(IL-17A)、白细胞介素10(IL-10),取右股骨RT-PCR检测维甲酸相关孤体受体γt(RORγt)、叉状头转录因子(Foxp3)、IL-17A、IL-10 mRNA的表达,取左胫骨病理切片免疫组化染色检测表达RORγt、Foxp3的细胞百分数。结果壮骨止痛胶囊能显著升高去卵巢雌鼠骨组织E2、IL-10水平(P0.01),降低骨组织IL-17A水平(P0.05);显著增强骨组织Foxp3、IL-10 mRNA的表达(P0.05),显著抑制骨组织RORγt、IL-17A mRNA的表达(P0.01或P0.05);显著增加骨组织内表达Foxp3的细胞百分数(P0.05),下调表达RORγt的细胞百分数(P0.05)。Foxp3阳性细胞百分数与RORγt阳性细胞百分数比值与E2水平呈正相关(r=0.990 5,P0.01)。结论壮骨止痛胶囊通过抑制去卵巢雌鼠骨组织Th17细胞数量和功能活动,增加骨组织Treg细胞数量并增强其活动而调节骨组织Treg/Th17平衡,该调节作用可能部分通过提高去卵巢雌鼠体内E2水平而实现。     

外周血Th17与Treg细胞失衡与儿童EB病毒感染的相关性

【摘要】目的 探讨外周血辅助性T细胞（Th17）与调节性T细胞（Treg）失衡与儿童EB病毒（EBV）感染的相关性。方法 选取2019年12月～2020年5月秦皇岛市第一医院儿科收治的EBV感染患儿58例为EBV感染组,另选择同期本院健康体检儿童50例为对照组。采集空腹静脉血,检测并比较两组外周血Th17、Treg细胞表达率、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA相对表达水平及细胞相关特征性细胞因子白介素17（IL-17）、转化生长因子-β1（TGF-β1）水平。结果 EBV感染组患儿外周血Th17细胞表达率明显高于对照组,Treg细胞表达率和Treg/Th17细胞比率明显低于对照组（P＜0.05）;EBV感染组患儿RORγt mRNA表达率明显高于对照组,Foxp3 mRNA表达率明显低于对照组（P＜0.05）;EBV感染组患儿IL-17水平明显高于对照组,TGF-β1水平明显低于对照组（P＜0.05）。结论 EBV感染患儿的发病与Th17、Treg细胞失衡及其相关特征性细胞因子水平的变化密切相关。     

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期模型大鼠肺组织 Foxp3和 RORγt 表达的影响

目的探讨清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)模型大鼠肺组织叉头翼状螺旋转录因子P3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)表达的影响。方法 40只SPF Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组、克拉霉素组。除正常组外,其余组采取气道滴注脂多糖(LPS)联合烟熏的方法建立AECOPD气道黏液高分泌模型,并同时连续30 d分别给予生理盐水、清金化痰汤(8.4 g/kg)、克拉霉素(50 mg/kg)灌胃。实验第31天,提取大鼠肺组织,制作病理切片,并采用免疫组化法检测肺组织中黏蛋白5AC(Muc5AC)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的表达,观察Foxp3和RORγt的表达,免疫印迹法检测肺组织中Foxp3和RORγt的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组Foxp3表达量无明显差异(P0.05),RORγt、Muc5AC、NE表达显著升高,Foxp3/RORγt显著下降(P0.01);清金化痰汤组与模型组比较,Foxp3表达量无明显差异(P0.05),RORγt、Muc5AC、NE表达显著降低,Foxp3/RORγt显著升高(P0.01或P0.05)。清金化痰汤组与克拉霉素组比较,Muc5AC显著降低(P0.05)。结论清金化痰汤可显著下调模型大鼠肺组织中RORγt蛋白表达,上调Foxp3/RORγt,这可能是清金化痰汤调节AECOPD黏液高分泌的机制之一。     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+Foxp3+Treg/Th17细胞的变化及意义。方法:分别采用流式细胞术、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)法检测15例急性乙型肝炎(AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(CHB)患者、40例无症状携带者(AsC)及30例健康对照者外周血外周血Treg/Th17细胞百分率、核转录因3(Foxp3)/(RORγt)mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(TGF-β1)/白细胞介素17(IL-17)的水平。结果:AHB组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异;而CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义。CHB组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3mRNA、TGF-β1水平及CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义;与正常对照组相比,AsC组患者CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-β1水平及CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异。结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞失衡可能与HBV感染的状态、结局有关。     

迷走神经电刺激对急性呼吸窘迫综合征中Th17和Treg 蛋白变化及炎性因子的影响

目的 探讨迷走神经电刺激（Vagus nerve stimulation, VNS）调控脂多糖（LPS）诱导的急性呼吸窘迫征（acute respiratory distress syndrome, ARDS）体内Th17和Treg 蛋白变化控制炎症的机制。方法 以2mg/kg LPS 鼻管滴注SD大鼠,6h后给予左侧颈部迷走神经以10min,5V,5Hz,2ms频率刺激, 2h后取双肺及脾组织进行检测。大鼠随机分为Control组、LPS组和LPS+VNS组,每组10只。检测肺泡灌洗液总蛋白含量,测定肺部湿干比,H-E染色检测肺部炎症程度,蛋白免疫印迹法及免疫组化检测肺及脾组织Foxp3及Rorγt蛋白表达,ELISA检测肺部灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-10水平。结果 成功构建大鼠ARDS模型。与Control组相比,LPS组肺泡灌洗液总蛋白含量增高（P<0.001）,湿干比增高（P<0.001）,IL-1β、IL-6、IL-17、IL-10表达升高（均P <0.01）和TNF-α表达升高,肺和脾组织中Foxp3和Rorγt蛋白表达上升;与LPS组相比,LPS+VNS组肺泡灌洗液总蛋白含量降低（P<0.05）,湿干比下降（P<0.05）,IL-6、IL-17降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10升高（P<0.01）,肺及脾组织中Foxp3蛋白表达上调（P<0.05）和Rorγt蛋白表达下降。结论 VNS可通过调控肺和脾组织Th17和Treg蛋白进而调控炎性因子,减轻LPS诱导的ARDS病理改变,保护组织。     

RORγt和IL-17在口腔扁平苔藓中的表达及相关性分析

目的研究维甲酸相关核孤儿受体γt（Retinoid-related orphan receptor gamma-t,RORγt）和白介素17（Interleukin 17,IL-17）在口腔扁平苔藓（Oral lichen planus,OLP）病变组织中的表达,为OLP的发病机制及治疗研究提供实验依据。方法采用免疫组化方法,检测30例口腔扁平苔藓病变组织及30例正常口腔黏膜组织中RORγt和IL-17的表达情况。结果 RORγt在固有层中OLP组的表达高于正常口腔黏膜组（P〈0.05）;IL-17在OLP组中的上皮层和固有层中的表达均高于正常口腔黏膜组（P〈0.05）。RORγt和IL-17在OLP组上皮层、固有层中表达均呈正相关（r=0.390和0.593,P=0.03和0.01）。结论 RORγt和IL-17与OLP病变的发生发展有一定关系。     

从Th17和CD4+CD25+Foxp3+T细胞功能变化探讨肺结核的耐药机制

目的 分析耐药肺结核患者外周血Th17细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例及细胞因子的变化,从免疫学角度探讨其耐药机制。 方法 分别选取33例耐药肺结核(耐药组)、49例普通肺结核(普通组)及51例健康志愿者(对照组)展开对比研究。检测Th17细胞与CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例;采用RT-PCR检测其特异性转录因子RORγt与Foxp3的mRNA表达水平;采用ELISA实验检测IL-17A、IL-17F、TGF-β1及IL-10的血清水平。 结果 普通组Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平低于对照组,耐药组低于普通组;普通组CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例和Foxp3 mRNA表达水平高于对照组,耐药组高于普通组;普通组Th17/CD4+CD25+Foxp3+T和RORγt/Foxp3低于对照组,耐药组低于普通组(P＜0.05)。普通组IL-17A、IL-17F水平低于对照组,耐药组低于普通组;普通组TGF-β1、IL-10水平高于对照组,耐药组高于普通组;其组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论 Th17/CD4+CD25+Foxp3+T平衡向CD4+CD25+Foxp3+T偏移、免疫系统功能抑制,可能是结核病慢性化和产生耐药的重要机制之一。      

栀子苷对类风湿性关节炎大鼠Th17/Treg平衡和局部炎症因子的影响

目的考察栀子苷对类风湿性关节炎大鼠Th17/Treg平衡和局部炎症因子的影响。方法建立大鼠胶原诱导关节炎模型,通过病理切片观察踝关节组织变化,ELISA检测血清TNF-α,Western blot法检测转录因子Foxp3和ROR-γt的蛋白表达,免疫组化法检测关节滑膜组织IL-10、IL-17表达。结果模型组血清TNF-α、IL-17以及ROR-γt和关节滑膜IL-17表达较正常组显著升高(P0.01),而模型组血清IL-10浓度以及Foxp3和关节滑膜IL-10表达较正常组显著降低(P0.01),栀子苷中、高剂量组血清TNF-α、IL-17浓度以及ROR-γt和关节滑膜IL-17表达较模型组显著降低(P0.05~0.01),而血清IL-10浓度、Foxp3和关节滑膜IL-10表达较模型组显著升高(P0.05~0.01)。结论大鼠胶原诱导关节炎模型成模之后Treg/Th17会失衡,栀子苷可升高IL-10、Foxp3表达,降低IL-17、ROR-γt表达,提示其可能通过诱导Treg细胞生成同时抑制Th17细胞分化,从而恢复病变部位Treg/Th17的平衡。     

吸烟相关慢性阻塞性肺疾病患者肺组织Th17/Treg细胞的表达及其可能意义

目的:检测吸烟致慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织T辅助细胞17(Th17)及调节性T细胞(Treg)分布及IL-17、IL-10表达水平变化,探讨吸烟导致的COPD慢性炎性反应的可能机制。方法:56例"孤立性肺结节"行手术切除肺叶患者的肺组织标本分为4组:吸烟COPD组、吸烟肺功能正常组、不吸烟COPD组和不吸烟肺功能正常组。收集各组患者肺组织标本,HE染色法观察肺组织形态,实时荧光定量PCR方法检测Th17特异性转录因子RORγt,Treg特异性转录因子FOXP3水平及炎性因子IL-17、IL-10 mRNA水平;ELISA法定量检测IL-17、IL-10蛋白水平。结果:吸烟COPD组气道炎症病理评分明显增高,其RORγt、IL-17 mRNA水平及IL-17均高于另外3组(P<0.05);吸烟COPD组肺组织中FOXP3水平稍低于其他三组,差异无统计学意义(P>0.05),但IL-10 mRNA及IL-10水平均显著低于另外三组(P<0.05);吸烟肺功能正常组较非吸烟肺功能正常组气道炎症评分及RORγt、IL-17 mRNA及IL-17细胞因子水平增高,IL-10 mRNA表达及IL-10水平无显著差异。结论:吸烟相关慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中存在以Th17优势表达为主的免疫失衡,可能在吸烟相关慢性阻塞性肺疾病发病机制中发挥重要作用。     

辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠外周血和肺泡灌洗液中 IL －17、IL －21及 RORγt 的影响

目的：观察辛伐他汀对吸烟导致慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠外周血及肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素（ IL）－17、IL－21及转录因子视黄酸相关孤儿受体γt（ RORγt）表达的影响,探讨辛伐他汀治疗COPD的价值及其作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、吸烟组及治疗组,每组10只。对照组每天自然饮食,不作任何特殊处理。吸烟组及治疗组给予烟雾干预,同时治疗组给予辛伐他汀干预。4个月后,测量大鼠体重、肺功能、计数肺泡灌洗液（ BALF）中白细胞数量及分类,观察各组大鼠肺组织的病理改变,采用酶联免疫吸附（ ELISA）方法对大鼠外周血及BALF中IL－17、IL－21及RORγt蛋白进行检测;应用流式细胞术对外周血及肺实质中CD4＋IL－17＋T细胞（ Th17）进行测定。结果实验结束后,肺功能检测显示吸烟组中动态肺顺应性（ Cdyn ）、呼气容积（FEV0.3）／用力肺活量（FVC）较对照组明显下降,呼气相气道相应阻力（Re）、吸气相气道相应阻力（Ri）明显升高。治疗组各项指标相对于吸烟组均有所改善。 ELISA 检测显示,吸烟组血浆及BALF 中IL －17、IL －21和RORγt蛋白表达明显升高;治疗组血浆及BALF中IL－17及RORγt蛋白的表达较吸烟组显著降低（ P＜0.05）。Th17细胞在吸烟组大鼠外周血及肺实质中的表达较对照组明显升高（ P＜0.05）;治疗后,大鼠外周血及肺实质中的Th17细胞有所下降。结论 COPD大鼠的外周血及BALF中IL－17、IL－21及RORγt蛋白升高,辛伐他汀能够降低COPD大鼠血及BALF中IL－17、IL－21及RORγt蛋白的表达,可能是其抑制COPD大鼠肺组织炎症反应和肺结构破坏的机制之一。     

PD-L1对过敏性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞免疫失衡调节作用研究

目的:探讨PD-L1对过敏性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞免疫失衡的调节作用。方法:将30只BALB/c小鼠随机分三组,模型组和PD-L1重组蛋白干预组给予卵清蛋白(OVA)诱发过敏性鼻炎,PD-L1重组蛋白干预组给予PD-L1重组蛋白进行处理;正常对照组在相同时间点给予生理盐水。采用叠加量化记分法进行搔鼻、喷嚏及鼻溢症状评价;采用HE染色观察鼻黏膜组织的病理变化,采用免疫组化检测鼻黏膜组织PD-1和PD-L1的表达;Western blot检测鼻粘膜组织pAKT、、AKT、mTOR、p-mTOR的表达;RT-PCR检测鼻黏膜组织调节性T细胞(Treg)和辅助性T细胞17(Th17)重要转录因子Foxp3、RORγt表达;ELISA法检测血清IL-10、IL-17A、IL-6的水平。结果:正常对照组、模型组、PD-L1重组蛋白干预组行为学评分分别为0、(6.33±1.15)、(3.67±0.58)分,组间比较具有统一学意义(P<0.05)。与正常对照组相比较,模型组鼻粘膜组织损伤严重,鼻粘膜组织中PD-1、PD-L1和Foxp3的表达下降,RORγt、p-AKT、p-mTOR的表达增加,血清IL-10水平下降,血清中IL-17A、IL-6的水平升高,AKT、mTOR的表达无明显变化。与模型组相比较,PD-L1重组蛋白干预组鼻粘膜组织损伤减轻,鼻粘膜组织中PD-1和PD-L1和Foxp3的表达上升,RORγt、p-AKT、p-mTOR表达下降,血清IL-10水平升高,血清中IL-17A、IL-6的水平下降;组间比较差异显著(P<0.05);AKT、mTOR无明显变化。结论:PD-L1通过抑制AKT-mTOR信号进而促进Treg的分化抑制过敏性鼻炎的发生和发展。     

平喘方对哮喘模型小鼠pDC/cDC通路的干预作用研究

[目的]通过观察平喘方对支气管哮喘模型小鼠肺组织浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)/传统DC(conventional DC,cDC)通路各因子的影响,阐释平喘方治疗哮喘的机制及药物间的相互作用。[方法]将40只雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、地米组和平喘方组,每组10只。采用10%鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液腹腔注射致敏和5%OVA雾化吸入激发,建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型。小鼠激发开始时按20mL/kg·d灌胃相应的药物,用药1周后处死小鼠,采集支气管肺泡灌洗液,以ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的含量;分离小鼠肺组织,HE染色后镜下观察肺组织形态,Western blot检测肺组织中维甲酸相关孤儿受体(retinoid-related orphan nuclear receptor,RORγt)及叉头蛋白P3(forkhead box P3,FOXP3)的蛋白表达量;Real-time PCR测定肺组织中吲哚胺-2,3-二氧化酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)、肿瘤坏死因子超家族4(tumor necrosis factor superfamily4,TNFSF4)的基因相对表达量;Masson染色检测肺组织胶原蛋白面积、气道平滑肌面积(airway smooth muscle area,WAm)、气道内壁面积(airway inner wall area,WAi)。[结果]与空白组比较,模型组支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β的含量以及肺组织中RORγt、TNFSF4表达均增高,FOXP3、IDO表达均降低,胶原蛋白面积、WAm、WAi均增加,差异有统计学意义(P＜0.05)。与模型组比较,地米组、平喘方组病理切片表现均有所改善,支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β的含量、肺组织中RORγt、TNFSF4表达均减低,FOXP3、IDO表达均增高,差异有统计学意义(P＜0.05);与地米组比较,平喘方组IL-17的含量、RORγt、TNFSF4、FOXP3、IDO的表达量及胶原蛋白面积、WAm、WAi差异无统计学意义(P＞0.05)。[结论]平喘方对pDC/cDC的干预可能是诱导气道免疫耐受的一个切入点,从而抑制T细胞表达失衡,改善气道炎症及气道重建。     

补中益气颗粒对EAT大鼠Treg/Th17细胞因子表达的影响

目的探讨补中益气颗粒对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)细胞因子表达的影响,从Treg/Th17细胞因子失衡角度探讨其治疗桥本氏甲状腺炎的机制。方法运用猪甲状腺球蛋白与完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂混合免疫注射法及高碘喂养法复制EAT大鼠模型,随机分为空白组、模型组、补中益气组、优甲乐组、补中益气+优甲乐组,药物干预2个月后,取大鼠脾脏组织,采用荧光定量PCR、蛋白质印迹(Western blot)法分别检测大鼠脾脏转化生长因子-β(TGF-β)、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)、维甲酸相关孤儿受体γT(RORγT)、白细胞介素-17(IL-17)基因和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组RORγT、IL-17基因和蛋白表达上调(P0.05),Foxp3、TGF-β基因表达减少(P0.05),蛋白表达无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,补中益气组、优甲乐组、补中益气+优甲乐组RORγT、IL-17基因表达下调(P0.05),蛋白表达减少,RORγT改变具有统计学意义(P0.05);Foxp3、TGF-β基因表达上调(P0.05),蛋白表达无统计学意义(P0.05)。药物各组组间比较,仅优甲乐组Foxp3蛋白表达高于补中益气组(P0.05),RORγT、IL-17、TGF-β蛋白和基因表达3组间无统计学意义。结论补中益气颗粒能够抑制甲状腺自身免疫性炎症,其作用机制可能与调节Treg/Th17相关细胞因子的平衡状态有关。