FAP-1的表达与结肠癌抵抗Fas受体介导的细胞凋亡的关系

[目的]探讨结肠癌中,Fas信号传导通路的抑制因子Fas相关磷酸酯酶(Fas-associatedphosphatase-1,FAP-1)在抵抗Fas受体(Fas-R)介导的细胞凋亡中的作用.[方法]通过免疫组化方法检测28例结肠癌组织中FAP-1、Fas-R的表达;同时取此28例结肠癌组织在体外培养原代结肠癌细胞,用流式细胞仪技术定量检测FAP-1的表达.用抗Fas-R抗体CH11诱导Fas-R介导的细胞凋亡.[结果]28例结肠癌组织中,肿瘤细胞FAP-1阳性率为71.4%(20/28),按FAP-1免疫组化表达结果将28例结肠癌组织分FAP-1阴性组(A组,n=8)及阳性组(B组,n=20)两组.在原代培养的结肠癌细胞中,A组肿瘤细胞凋亡数与CH11的浓度呈剂量依赖性,较对照有显著性差异(P<0.05).而B组的结肠癌细胞中,随CH11的浓度增加细胞凋亡数无明显变化,与对照组比较无显著差异(P>0.05).[结论]结肠癌抵抗Fas介导的细胞凋亡与结肠癌细胞表达FAP-1有关,提示阻断FAP-1与FasR的相互作用可以逆转其凋亡抵抗性.     

Lin28与肝癌细胞紫杉醇耐药关系的研究

[目的]Lin28是一种重编程因子和保守的RNA结合蛋白,存在Lin28A和Lin28B两种同源基因,两者结构和功能类似。本研究旨在探讨Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药的关系。[方法]MTT法检测紫杉醇对HepG2、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞的IC50;用荧光定量PCR法（简称RTPCR）在RNA水平检测Lin28A和Lin28B在Hep3B、HepG2、SMMC-7721中的表达,蛋白质印迹法分析Lin28A和Lin28B蛋白在Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞中的表达情况。[结果]Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株对紫杉醇的IC50分别为：Hep3B为0.194μM、HepG2为19.54μM、SMMC-7721为0.444μM。HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28A基因表达量分别是Hep3B的5.06、3.10倍;HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28B基因表达量分别是Hep3B的7.16、3.16倍。Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株中Lin28A和Lin28B蛋白的表达量与从荧光定量数据显示的趋势一致。[结论]Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药密切相关,肝癌细胞中Lin28表达与肝癌细胞对紫杉醇的耐药性成正比,暗示Lin28表达可能是肝癌细胞紫杉醇耐药的潜在机制并有望成为逆转肝癌紫杉醇耐药的靶点。     

低氧时反义寡核苷酸对胰腺癌乙酰肝素酶表达及侵袭力的影响

目的 研究低氧对胰腺癌乙酰肝素酶（Hpa）表达的影响及与肿瘤细胞侵袭力的关系.方法 体外低氧培养细胞,观察低氧在不同时间胰腺导管癌细胞株BxPC-3细胞Hpa mRNA和蛋白表达的变化;以Tranwell侵袭小室实验观察低氧及应用反义寡核苷酸（AS-ODN）阻断Hpa表达后肿瘤细胞侵袭力的变化,明确低氧促进肿瘤细胞侵袭力增加是否与Hpa有关.结果 在常氧条件下,BxPC-3细胞Hpa mRNA和蛋白即有低量表达.在低氧条件下,Hpa mRNA和蛋白表达在3 h受到轻度抑制,在6 h、12 h、24 h和48 h表达明显升高,且mRNA和蛋白的表达水平一致.预先以Hpa AS-ODN序列阻断Hpa的表达,则低氧不能诱导Hpa mRNA和蛋白表达上调.低氧使穿过Transwell小室的BxPC-3细胞数量增加了96.2%（P〈0.01）,Hpa AS-ODN（400 nmol/L）对低氧诱导的侵袭细胞的抑制率为37.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 低氧可通过上调胰腺癌BxPC-3细胞Hpa mRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞侵袭力.     

活化T细胞膜信号分子表达与结肠癌细胞凋亡的相关性

目的：研究CpG寡脱氧核苷酸（CpGODN）作用于活化T细胞前、后的膜分子表达及与结肠癌细胞凋亡的相关性.方法：采用流式细胞术检测健康人外周血（PBLs）T细胞被刺激前、后的表型结构和结肠癌细胞凋亡指数变化;采用电镜观察肿瘤细胞超微结构变化.结果：CpGODN参与刺激作用结肠癌细胞前CD28分子表达略高于刺激前,而CD3分子表达则明显高于刺激前.电镜观察结果显示,效应细胞作用肿瘤细胞48h时部分肿瘤细胞发生坏死,部分出现凋亡;72h时肿瘤细胞凋亡明显;而结肠癌患者采用CpGODN共刺激PBLs后,CD3和CD8增高（P〈0.05）.结论：CpGODN共刺激可使T细胞表面信号分子增加,促使细胞因子及其激活的杀伤细胞分泌增加,至结肠癌细胞出现凋亡;肿瘤细胞凋亡与膜分子变化关系密切.     

二甲双胍通过NF-κB对乳腺癌细胞MDA-MB-435S的抑制作用

目的探讨二甲双胍对乳腺癌细胞MDA-MB-435S的抑制作用。方法将细胞分为四组:A组(对照组),B组(TNF-α组),C组(TNF-α+10mM二甲双胍组),D组(10mM二甲双胍组)。培养48h后,运用Western Blot检测各组乳腺癌细胞MDA-MB-435S中NF-κ B、Lin28B的表达情况,RT-PCR检测A组、D组乳腺癌细胞MDA-MB-435S中microRNA let-7下游基因HMGA2、H-Ras的转录水平。结果药物干预48h后,与A组相比,B组乳腺癌细胞中NF-κB和Lin28B的表达均明显上调(P<0.01),而D组细胞中NF-κ B(P<0.01)和Lin28B(P<0.01)表达明显下降。与B组相比,C组乳腺癌细胞中NF-κ B(P<0.05)和Lin28B(P<0.01)表达下调。D组乳腺癌细胞中与肿瘤细胞自我复制和多向分化潜能相关的基因HMGA2和H-Ras转录分别下降83%(t=6.2;P<0.05)和94%(t=34.5;P<0.01)。结论 10mM浓度的二甲双胍能够有效的降低NF-κB、Lin28B的表达,进一步抑制乳腺癌细胞中自我复制和多向分化潜能相关基因HMGA2和H-Ras的转录。     

低氧对卵巢癌A2780细胞周期阻滞的影响

目的　探讨低氧及其诱导产生的低氧诱导因子 1α(HIF -1α) 对卵巢癌细胞周期阻滞的影响。方法　低氧培养复制人卵巢癌A2780细胞低氧模型。“诱骗法” (decoy) 阻断 HIF 1α的功能。A2780 细胞分成 8 组, A1: 常氧组, A2: 常氧+decoy, B1: 5% O2 低氧组, B2: 5% O2 低氧+ decoy, C1: 3% O2 低氧, C2: 3% O2 低氧+ decoy,D1: 1% O2低氧组, D2: 1% O2低氧+decoy。免疫细胞化学及Western blot、RT- PCR和流式细胞术分别检测各组细胞HIF- 1α蛋白, mRNA表达水平和分析细胞周期。结果　免疫细胞化学染色发现 HIF- 1α蛋白在低氧培养 A2780 细胞核中表达呈阳性; Western blot 检测发现低氧明显增加 HIF 1α蛋白的表达水平且随低氧程度加重而增加 (P<0 .05), decoy对其蛋白表达无明显影响; RT PCR检测发现低氧明显增加HIF 1αmRNA的表达水平, 但随低氧程度加重, 其mRNA表达水平无明显变化 (P>0. 05), decoy对其 mRNA表达无明显影响; 流式细胞术检测发现低氧时卵巢癌A2780细胞G0/G1期比率显著增加 (P<0 .05), G0/G1期比率随着低氧程度加重而增加 (P<0 .05), decoy能明显降低 G0/G1期细胞比率 (P<0 .05)。结论　低氧能明显诱导卵巢癌 A2780 细胞 G0/G1 期阻滞和 HIF -1α的表达,HIF -1α在     

RKIP的克隆、表达及其影响肿瘤细胞迁移性质的初步研究

目的:研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在细胞外对肿瘤细胞迁移的影响.方法:通过PCR扩增得到RKIP基因片段,使用BamH I和HindⅢ双酶切并回收,然后插入双酶切过的原核表达载体pET28a(+),得到pET28a-RKIP重组质粒.将重组质粒转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经Ni+金属螯合层析纯化得到His-RKIP重组蛋白.通过伤口愈合实验,观察不同浓度的重组RKIP在细胞外对肿瘤细胞迁移的影响.结果:重组RKIP获得了高效表达和分离纯化,伤口愈合实验表明,在低浓度重组RKIP作用下A549肿瘤细胞迁移速度增加,在高浓度下肿瘤细胞迁移速度降低.结论:重组RKIP在细胞外具有促进和抑制A549肿瘤细胞迁移的双重作用,具体表现为低浓度时促进A549肿瘤细胞迁移,高浓度时抑制A549肿瘤细胞迁移.     

Lin28的功能研究进展

Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,在let-7的转录调节过程中起重要的负性调控作用,可以抑制let-7的 加工合成。Lin28促进胚胎干细胞的快速增长,参与干细胞的增殖,在肿瘤干细胞的形成中发挥重要作用。Lin28在多 种肿瘤组织或肿瘤细胞系中高表达,可以促进肿瘤细胞的增殖和肿瘤的进展,与患者预后不良有关。另外Lin28能够 促进组织修复。     

低氧条件下HIF-1α及P-gp在结肠癌组织及多种细胞系中的表达

目的 探讨肿瘤低氧环境对低氧诱导因子1α(HIF-1α)及P-糖蛋白(P-gp)表达的影响及二者的相关性.方法 选取2013年6月至2015年6月邢台市人民医院58例结肠癌患者手术切除后标本,采用免疫组织化学法检测HIF-1α与P-gp在结肠癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关系;采用细胞爬片法检测常氧与低氧条件下HIF-1α与P-gp在结肠癌细胞株中的表达情况,并分析HIF-1α与P-gp表达的相关性.结果 58例患者结肠癌组织标本HIF-1α蛋白阳性表达率为58.62％,P-gp阳性表达率为46.55％;HIF-1α与P-gp阳性表达率在Dukes分期C+D期者均明显高于A+B期者,且有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α与P-gp的表达呈正相关(r=0.574,P＜0.01).同一细胞株中,低氧下HIF-1α及P-gp表达水平均高于常氧,差异均有统计学意义(P＜0.01);而相同氧环境下不同结肠癌细胞株间HIF-1α及P-gp表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 HIF-1α与P-gp在结肠癌组织中存在过表达和共表达现象,在不同Dukes分期和是否伴随淋巴结转移等因素中二者阳性表达率存在明显差异,且HIF-1α与P-gp表达呈明显正相关;低氧可诱导结肠癌细胞中HIF-1α与P-gp蛋白表达水平的升高.     

苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及RhoA基因表达的影响

目的 研究苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及Rho A基因表达的影响。方法 利用Cell Counting Kit-8检测不同浓度苦参碱对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测SW620细胞内Rho A mRNA表达的水平。结果 苦参碱能明显抑制SW620细胞的增殖,呈现剂量和时间依赖性关系,随着浓度增加能使SW620细胞的凋亡率增加,并且使SW620细胞内Rho A mRNA表达下降。结论 苦参碱能显著抑制人结肠癌SW620细胞的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡、下调Rho A mRNA的表达有关。     

紫草素诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及机制研究

目的探讨紫草素诱导人结肠癌细胞株SW620凋亡及分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞株SW620,加入终浓度分别为2.5～15μmol/L的紫草素。采用MTT法测定紫草素对肿瘤细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,Western blot方法测定对bcl-2、bax蛋白表达水平。结果紫草素随时间和浓度的增加对SW620细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率增加（P〈0.05）。Western blot法检测发现bax蛋白表达升高同时bcl-2蛋白表达下降。结论紫草素有抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的作用,可以通过调控bax和bcl-2蛋白的表达经线粒体途径诱导细胞凋亡。     

干扰Nrf2可增强Hirsutanols A对肿瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨干扰Nrf2对HirsutanolsA抑制人结肠癌细胞SW480、肝癌细胞HepG2细胞增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测不同浓度Hirsutanols A对细胞增殖抑制作用。流式细胞仪检测细胞内ROS的含量;Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;Western blot检测siRNA干扰NRF2蛋白表达的效果。结果 HirsutanolsA(1.25、2.5、5、10、20和40μmol/L)对SW480、HepG2细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现剂量依赖关系;Hirsutanols A处理SW480(15μmol/L)、HepG2(30μmol/L)细胞后,诱导细胞中过氧化氢迅速增加,并引起细胞凋亡,用自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(5 mmol/L)预处理完全抑制HirsutanolsA诱导的ROS增加及细胞凋亡。siRNA有效地干扰Nrf2表达后可极大增强Hirsutanols A对肿瘤细胞的增殖抑制作用。结论Hirsutanols A通过增加细胞内ROS诱导其凋亡同时激活Nrf2,Nrf2在维持细胞氧化还原稳态中起重要作用,干扰其表达可增强Hirsutanols A的凋亡诱导作用。     

乌梅黄连复方对人结肠癌细胞HT29增殖和迁移的影响

目的观察乌梅黄连复方对人结肠癌细胞株HT29细胞增殖和迁移的影响。方法采用乌梅黄连复方对体外培养结肠癌细胞株HT29进行干预,MTT法检测复方对结肠癌细胞株增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,划痕试验观察复方对结肠癌细胞迁移能力的影响,采用Real-time PCR测定药物干预后细胞cox-2mRNA表达。结果乌梅黄连复方对HT29细胞具有明显的抗增殖作用,IC50为(4.55±0.25)mg/mL;抑制TPA诱导的HT29细胞的迁移(P0.01);该复方能显著诱导HT29细胞凋亡,引起HT29细胞G2/M期阻滞,显著下调HT29细胞中cox-2mRNA的表达(P0.05)。结论乌梅黄连方可能通过诱导肿瘤细胞凋亡,引起肿瘤细胞G2/M期阻滞,抑制肿瘤细胞cox-2通路对人结肠癌HT29细胞增殖和迁移产生抑制作用。     

微小RNALet-7/Lin28调节环在鼻咽癌中的表达及意义

目的：观察miRNA Let‐7和Lin28在鼻咽癌组织中的相对表达并分析其相关性,探讨该调节环在鼻咽癌病理机制中的可能作用和意义。方法以正常鼻咽组织为对照,运用实时定量聚合酶链反应（Real‐time PCR）方法分别检查鼻咽癌组织中Lin28A/B和Let‐7a miRNA的相对表达量,并对两组数据进行相关性分析。采用免疫组织化学技术检查Lin28 A/B在鼻咽癌组织中的表达部位和水平。结果 Real‐time PCR实验显示,Lin28 miRNA在鼻咽癌组织中的相对表达量较对照组升高,而Let‐7a miRNA在鼻咽癌组织的相对表达量较对照组降低,差异有统计学意义;鼻咽癌组织中Lin28A/B miRNA和Let‐7a miRNA的相对表达量呈负相关。免疫组织化学分析证实,Lin28蛋白在鼻咽癌组织呈阳性表达,定位于细胞质中;而在正常鼻咽组织中,Lin28无表达。结论在鼻咽癌组织中Lin28表达上调而Let‐7a miRNA表达下调,且二者呈显著的负相关,提示Let‐7/Lin28双向负反馈调节异常可能参与了鼻咽癌的发生发展。     

缺氧诱导因子-1与泌尿系肿瘤

1992年Semenza和Wang在低氧的肝癌细胞株Hep3B细胞的核提取物中发现一种蛋白特异性地结合于红细胞生成紊(EPO)基因增强子的寡核苷酸序列．命名为缺氧诱导因子-1(HIF-1)。缺氧诱导因子-1(hypoxia—inducible factor L HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子。作为细胞氧平衡和缺氧诱导基因表达的中心调节子。HIF-1在缺氧条件下。其α蛋白水平和与DNA结合活性增加。缺氧的微环境存在于多数肿瘤组织中．近年研究表明HIF-1与肿瘤发生、发展密切相关。它不仅在肿瘤细胞及其转移灶细胞中过度表达；而且能诱导肿瘤组织中异常基因的表达；同时对肿瘤细胞生长与凋亡均有重要影响。     

RNA干扰抑制DLL4基因表达对低氧诱导的脉络膜-视网膜血管内皮细胞增殖、迁移和管型形成的影响

研究背景： Delta-like 4 (DLL4)是近年新发现的可由低氧诱导的血管生长调控因子,属特异性表达于血管内皮细胞上的NOTCH受体的配体。最近研究表明DLL4/NOTCH信号在生理性和病理性血管新生过程中起着关键的调控作用,它可抑制新生血管的分支和出芽并促进血管的正常分化,从而阻止过度的血管新生。脉络膜新生血管(CNV)实际上也是一种有低氧参与的病理性血管新生的过程,但DLL4基因在CNV形成中的表达和作用目前报道甚少,本文研究拟在体外细胞水平观察DLL4基因在低氧培养的脉络膜血管内皮细胞中的表达规律,并通过RNA干扰技术抑制DLL4基因表达,进而评估DLL4基因对低氧诱导的脉络膜血管内皮细胞在血管新生中的生物学行为包括增殖、迁移和管型形成能力的影响。 研究方法： 以参与CNV形成的主要细胞--脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞系）作为研究DLL4基因在CNV中表达和作用的体外细胞模型。通过200uM CoCl2化学诱导产生的低氧来模拟CNV体内的低氧环境。分别利用RT-PCR、real-time quantitative PCR和Western blot方法定性和定量检测低氧诱导下的RF/6A细胞中DLL4基因mRNA和蛋白水平的时程表达规律。设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamine 2000介导DLL4 siRNA转染低氧培养12h的RF/6A细胞。利用流式细胞仪检测荧光标记的siRNA的转染效率。分5组①空白对照组;②转染液对照组;③100nmol/l DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组;④100nmol/l DLL4 siRNA-duplex1;⑤100nmol/l DLL4 siRNA-duplex2检测RNA干扰后的DLL4 mRNA和蛋白的表达水平,筛选RNA干扰抑制效率高的DLL4 siRNA-duplex用于转染低氧诱导的RF/6A细胞。进一步观察siRNA特异性干扰DLL4基因表达对DLL4-NOTCH-HES1-HEY1信号级联反应下游的关键靶基因HES1和HEY1 mRNA表达的调控。通过MTT和流式细胞周期分析技术观察RNA干扰抑制DLL4基因表达对低氧诱导的RF/6A细胞增殖能力的影响;利用transwell小室的体外细胞跨膜迁移实验,检测下调DLL4基因表达对低氧诱导的RF/6A细胞迁移能力的影响;通过Matrigel体外管型形成实验观察RNA干扰后的RF/6A细胞在低氧培养下形成小管样结构的长度,以反映细胞体外管型形成能力的变化。 研究结果：RF/6A细胞中可检测到DLL4基因的表达,且受低氧因素的诱导调控。低氧培养1h后,DLL4 mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高,低氧培养12h时表达水平达到最高峰并持续高表达至24h。相对于DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组,DLL4 siRNA-duplex1和DLL4 siRNA-duplex2转染RF/6A细胞 48小时后低氧培养12h,DLL4基因的mRNA表达抑制率分别为91.4％和82.5％,DLL4蛋白的表达抑制率分别为86.2％和75.3％。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组三组之间的DLL4基因表达水平无显著性差异(P=0.139),DLL4 siRNA-duplex1能特异性抑制DLL4基因表达。HES1和HEY1的mRNA表达水平也相应分别下降75.1％ (P=0.004)和86.3％ (P=0.004),表明DLL4基因具有调控DLL4-NOTCH-HES1-HEY1信号级联反应的作用。 MTT结果显示：siRNA转染48h的RF/6A细胞继续低氧培养72h和96h的吸光度（A）值较scrambled 阴性对照组明显增加(P=0.031, P=0.006), 且相应的细胞周期分析显示RF/6A细胞阻滞在S期;转染DLL4 siRNA-duplex1的RF/6A细胞低氧培养8h后,迁移过膜的细胞数明显增多,为scrambled 阴性对照组的1.6倍,其细胞数差异具有统计学意义 (P<0.001)。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组之间的跨膜迁移细胞数无显著变化 (P=0.137)。转染DLL4 siRNA scrambled negative control的RF/6A细胞低氧培养24h后在体外Matrigel上多形成条索状或不连续且稀疏的小管样结构,而转染DLL4 siRNA-duplex1的RF/6A细胞可形成环形完整的网状小管样结构,且管型长度明显增加了82.3％,其差异有统计学意义 (P<0.001)。空白对照组、转染液对照组和DLL4 siRNA scrambled 阴性对照组之间的管型长度则无明显差异(P=0.178)。 研究结论：DLL4是受低氧诱导的新生血管分支和出芽的负性调控因子。靶向DLL4基因的siRNA可抑制低氧培养的RF/6A细胞中DLL4、HES1和HEY1基因的表达水平,并促进RF/6A细胞体外增殖、迁移和管型形成。DLL4可望成为脉络膜新生血管治疗策略中的新靶点。     

小鼠Lin28基因的克隆及原核表达

目的 探讨获取小鼠Lin28蛋白的方法.方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点(Nco Ⅰ及Xho Ⅰ)引物,从该cDNA中扩增出Lin28基因编码区序列;将获得的Lin28基因编码区序列克隆到pMD18-T载体上.对质粒双酶切回收其中Lin28基因片段,与pET-30a(+)载体相连接并转化Rosetta( DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对表达结果进行分析.结果 对所克隆的Lin28蛋白编码区的DNA序列分析表明,Lin28 CDS区包括终止密码子在内为630 bp,与参照DNA( NM_145833)相比同源性为99.37％,与参照氨基酸序列相比同源性为100％;在IPTG诱导下pET-30a(+)-Lin28重组质粒可表达与预期相符的约为27.5×103的蛋白质.结论 利用克隆的小鼠Lin28基因,采用原核表达方法,成功获得小鼠Lin28蛋白,为进一步开展以重组蛋白诱导体细胞重编程研究奠定基础.     

卵巢癌表达Bcl-xL与其化疗耐受性及复发相关

对化疗药物耐受肿瘤细胞的出现,降低了卵巢上皮癌患者的长期存活率。假定Bcl-2家族的Bcl-xL表达可以抑制化疗诱导的细胞凋亡,因此可用来预测患者对治疗的临床反应,同时化疗可能使肿瘤细胞选择性的过度表达该蛋白。检测28例早期卵巢上皮癌患者首次剖腹术中和这些患者接受铂类药物化疗后复发肿瘤中Bcl-xL的表达。用这些数据来确定Bcl-xL表达能否预测临床预后。A2780卵巢癌细胞可稳定转染Bcl-xL或对照质粒。体外试验和异种移植模型证实在A2780卵巢癌细胞可发现化疗药物诱导的细胞凋亡。与肿瘤不表达Bcl-xL的患者相比,有Bcl-xL表达的原发…     

糖化终末产物对人结肠癌HCT116细胞中ChREBP表达的影响

目的 研究糖化终末产物（advanced glycation end products, AGEs）对人结肠癌HCT116细胞中碳水化合物反应元件结合蛋白（carbohydrate responsive element binding protein, ChREBP）表达的影响。方法 采用RT-PCR检测AGEs处理的人结肠癌HCT116细胞中ChREBP及其下游基因的表达;使用N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预氧化应激状态;运用Western印迹法观察在HCT116细胞中AGEs诱导对ChREBP表达的影响;运用MTS比色法观察AGEs诱导对HCT116细胞增殖的影响。结果 AGEs刺激后人结肠癌HCT116细胞中转录因子ChREBP表达增加（P<0.05）;细胞经抗氧化剂NAC处理后,AGEs刺激所致ChREBP表达增加和HCT116细胞增殖均被明显抑制（P<0.05）。结论 AGEs通过激活氧化应激反应来上调人结肠癌HCT116细胞中的ChREBP表达。     

低氧对胰腺癌PANC-1细胞株中TWIST表达的影响

目的: 探讨低氧条件对胰腺癌PANC-1细胞中TWIST表达的影响及可能的机制。方法：低氧浓度下培养PANC-1细胞,蛋白质印迹检测不同时间点TWIST蛋白的表达水平,免疫荧光检测TWIST、E-钙黏蛋白、 α-平滑肌肌动蛋白（α SMA）和波形蛋白的表达;转染TWIST siRNA后,在常氧及低氧条件下培养,蛋白质印迹检测E-钙黏蛋白, α-SMA和波形蛋白的表达。qRT-PCR及蛋白质印迹检测低氧浓度下PANC-1细胞甲基转移酶样分子3（METTL3）的表达,比色法检测细胞总的N6甲基腺嘌呤（m6A）水平;转染METTL3 siRNA后,在常氧及低氧条件下培养,比色法检测细胞总的m6A水平。在低氧条件下,转染METTL3 siRNA后,qRT-PCR及蛋白质印迹检测TWIST的mRNA和蛋白表达,MeRIP-qPCR检测TWIST mRNA m6A水平;转染METTL3野生型和突变型质粒后,蛋白质印迹检测TWIST蛋白的表达。结果：低氧处理胰腺癌细胞,TWIST表达增加,E-钙黏蛋白的表达下降, α-SMA和波形蛋白的表达升高;而同等低氧条件下敲低TWIST表达后E 钙黏蛋白的表达增加,α-SMA和波形蛋白的表达下降。低氧处理后,胰腺癌细胞中METTL3的mRNA和蛋白表达均显著升高,同时细胞总的m6A水平也显著升高。常氧条件下敲低METTL3表达后胰腺癌细胞总m6A水平轻度下降,而低氧条件下敲低METTL3则显著抑制细胞总m6A水平。低氧条件下敲低胰腺癌细胞METTL3表达对TWIST mRNA表达无显著影响,但其显著降低TWIST mRNA的m6A水平,抑制TWIST蛋白表达;过表达METTL3显著上调TWIST蛋白的表达,而转入METTL3 突变质粒未见相关改变。结论：低氧诱导METTL3表达,后者通过m6A依赖的方式调控TWIST蛋白表达。