豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验研究

目的：观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况。方法：对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发生凋亡。应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化。结果：应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现象,此时ABR阈值明显升高。结论：耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因：毛细胞凋亡或毛细胞坏死。     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验观察

目的观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况.方法对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发凋亡.应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化.结果应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现黎,此时ABR阈值明显升高.结论耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因毛细胞凋亡或毛细胞坏死.     

阿米卡星对豚鼠耳蜗毛细胞的损伤作用

目的研究阿米卡星（amikacin,AMK）在不同给药时间内对豚鼠耳蜗毛细胞的损伤作用,探讨AMK的耳毒性。方法豚鼠随机分为对照组、AMK3d组、AMK7d组和AMK11d组。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法,并结合听脑干反应（auditory brainstem response,ABR）测试,观察用药前后耳蜗毛细胞形态及听功能的改变。结果AMK首先损伤耳蜗底回的外毛细胞,并且随着给药时间延长,损伤逐渐向顶回发展,外毛细胞缺失明显增多,而AMK对内毛细胞的损伤要轻于外毛细胞。听功能改变与形态学变化基本一致。结论AMK可损伤豚鼠耳蜗毛细胞,导致听功能下降。     

丁胺卡那霉素对豚鼠耳蜗毛细胞凋亡及听力阈值的影响

目的探讨丁胺卡那霉素作用于耳蜗系统时毛细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法15只豚鼠随机分为3组,各组肌内注射丁胺卡那霉素400mg·kg-1·d-1,分别于用药1d,3d,6d后处死。处死前检测其听脑于反应(auditorybrainstemresponses,ABR)的变化,并利用光镜和TUNEL标记技术检测耳蜗毛细胞发生凋亡的情况。结果①豚鼠肌内注射丁胺卡那霉素1d后耳蜗毛细胞即出现凋亡现象,连续用药3～6d,毛细胞凋亡呈强阳性表达;②耳蜗毛细胞凋亡出现的早期豚鼠听力阈值无明显改变,连续用药6d后听力阈值则明显提高。结论①丁胺卡那霉素作用于耳蜗毛细胞可引起毛细胞凋亡,细胞凋亡是豚鼠耳蜗毛细胞损伤的一条途径;②丁胺卡那霉素耳毒性作用机制可能与其引起耳蜗毛细胞凋亡有关。     

儿茶素对SD大鼠卡那霉素耳神经毒性保护作用的形态学研究

目的 :动态观察卡那霉素 (kanamycin ,KM)中毒及应用儿茶素 (catechin ,CC)后耳蜗传出神经元及毛细胞的形态学改变 ,探讨氨基糖甙类抗生素 (aminoglycosideantibiotics ,AmAn)耳毒性中儿茶素对耳蜗传出神经元和毛细胞的保护作用。方法 :将 38只SD雄性大鼠随机分成 4组 :①卡那霉素组 (KM组 ) 10只 ,5 0 0mg·(kg·d) - 1 ,②儿茶素灌胃组(CC组 ) 10只 ,80 0mg·(kg·d) - 1 ,③KM +CC组 (KC组—儿茶素保护组 ) 10只 ,④生理盐水对照组 10只。电镜动态观察耳蜗传出神经纤维末梢及毛细胞亚细胞结构的改变及采用全耳蜗铺片改良的乙酰胆碱酯酶染色法观察耳蜗传出神经纤维及末梢的数量。结果 :电镜显示儿茶素保护组传出神经元及毛细胞损伤较未保护组明显减轻 ,儿茶素组和生理盐水组无损伤表现。乙酰胆碱酯酶组化染色示KM组耳蜗传出神经数量较KC组及其他对照组明显减少 (P <0 .0 5 ) ,儿茶素保护组与儿茶素组及正常对照组比较无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :儿茶素对氨基糖甙类抗生素耳蜗神经元毒性具有保护作用     

丁咯地尔对噪声性听力损伤影响的实验观察

目的观察丁咯地尔对豚鼠噪声性听力损伤的影响。方法将13只豚鼠随机分为丁咯地尔组(5只),噪声损伤组(5只),正常对照组(3只)。采用105 dB SPL(sound presure level,声压级)白噪声刺激,连续5 d(5 h/d)制造噪声性耳聋动物模型,其中丁咯地尔组在每天噪声刺激前30 min给予丁咯地尔(200 mg/kg)灌胃。豚鼠在给噪前后进行听性脑干诱发电位(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)检测,给噪后采用形态学方法观察耳蜗外毛细胞受损情况。结果噪声损伤组及丁咯地尔组豚鼠噪声刺激前后ABR阈值分别为(17.50±3.80)dB SPL、(16.00±3.94)dB SPL和(67.08±6.20)dB SPL(、49.00±4.59)dB SPL,两组豚鼠经噪声刺激后阈值的升高与正常组相比,差异有统计学意义(均P<0.01);DPOAE幅值的下降也具有统计学意义(均P<0.05)。而丁咯地尔组豚鼠ABR阈值的升高和DPOAE幅值的下降与噪声损伤组相比,差异也具有统计学意义(均P<0.05)。耳蜗基底膜铺片观察到凋亡、坏死和缺失的受损外毛细胞,计算其受损率发现,丁咯地尔组豚鼠外毛细胞受损率明显低于噪声损伤组(P<0.01)。结论预防性使用丁咯地尔可以减轻噪声对豚鼠耳蜗的损害,对噪声引起的听力损伤可能有一定的保护作用。     

磷霉素在减轻卡那霉素耳毒中的作用

为研究磷霉素减轻卡那霉素耳毒的作用机理,我们选用了50只健康豚鼠分两组进行实验,对照组用卡那霉素400mg·kg~(-1)/d 肌注,连续7天;实验组肌注卡那霉素,用量同对照组,连续7天,第四天起肌注磷霉素300mg.kg~(-1)/d,连续7天。两组豚鼠均行 ABR,再用扫描电镜、透射电镜及组织化学反应来检查耳蜗结构.ABR 示自第11天起对照组Ⅳ波消失,而实验组Ⅳ波除1例外均存在,且波形清晰。电镜检查及组织化学反应检查均显示实验组耳蜗外毛细胞损伤明显比对照组耳蜗外毛细胞损伤轻。结果表明,磷霉素可以减轻卡那霉素的耳毒性。     

天鼓冲剂对噪声性听损伤防治作用的实验研究

目的:观察补肾活血中药天鼓冲剂对豚鼠噪声性听损伤的防治作用.方法:将豚鼠随机分为正常组、模型组、预防组和治疗组,后三组豚鼠暴露在4KHz、110dB SPL的稳态白噪声中6h×6d,预防组和治疗组分别于噪声暴露前7d和噪声暴露结束后给予天鼓冲剂灌胃,模型组与预防组同期灌胃相同剂量的生理盐水,正常组不予给药.以听觉脑干诱发电位(ABR)观察各组动物反应阈、波潜伏期及波间期的变化,耳蜗基底膜铺片毛细胞计数比较各组动物毛细胞损伤率,扫描电镜观察各组动物耳蜗形态学的变化.结果:与模型组和治疗组比较,预防组豚鼠的ABR阈值、毛细胞损伤率均明显降低(P＜0.05),波潜伏期显著缩短(P＜0.01),电镜下毛细胞受损程度较轻;与模型组比较,治疗组豚鼠的ABR阈值明显降低(P＜0.05),波潜伏期显著缩短(P＜0.01),但毛细胞损伤率无明显差异(P＞0.05),电镜下两组毛细胞损伤程度均较重.结论:天鼓冲剂对噪声性听力损伤具有显著的预防作用,在改善听功能方面具有一定的治疗作用,预防效果明显优于治疗效果.     

豚鼠耳蜗微渗透压泵慢性灌注技术的改进

目的：介绍应用改进的微渗透压泵进行豚鼠耳蜗慢性灌注的方法。方法：将微渗透压泵埋置于8只豚鼠背部,经固定于耳蜗底回鼓阶内的改良微导管将人工外淋巴液缓漫注入内耳,观察豚鼠耳蜗对微渗透压泵慢性灌注人工外淋巴液的反应。结果：动物术后14d脑干诱发电反应阈值（ABR）无明显的变化,耳蜗螺旋神经节细胞及毛细胞未见损伤。结论：改进后的微渗透压泵耳蜗灌流技术完善了内耳慢性给药的实验方法。     

水杨酸钠对幼年豚鼠螺旋神经节GAD蛋白表达和ABR阈值的影响

目的:观察水杨酸钠给药对幼年豚鼠螺旋神经节谷氨酸脱羧酶(GAD)蛋白表达和听性脑干诱发电位(ABR)阈值的影响.方法:将48只出生7 d的幼年健康豚鼠分为4组,每组12只.A组:对照组;B组:低剂量水杨酸钠给药组(200 mg/kg·d-1);C组:中剂量水杨酸钠给药组(300 mg/kg·d-1);D组:高剂量水杨酸钠给药组(450 mg/kg·d-1).给药前和给药15 d后检测ABR阈值,然后处死动物采用免疫组织化学染色方法检测豚鼠螺旋神经节GAD蛋白表达.结果:①给药15 d后B、C、D 3组ABR阈值较对照组均有明显提高(P<0.05), B、C、D 3组以D组ABR阈值提高最为明显,C组次之,B组ABR阈值改变最小;②B、C、D 3组GAD蛋白表达积分光密度值较对照组显著降低(P<0.01);B、C、D 3组以D组GAD蛋白表达积分光密度值降低最为明显,C组次之,B组GAD蛋白表达改变最小.结论:水杨酸钠可显著提高豚鼠ABR阈值并使豚鼠螺旋神经节GAD蛋白表达降低,其改变豚鼠螺旋神经节GAD蛋白表达以及ABR阈值与给药剂量有关.     

2型糖尿病小鼠内质网应激对耳蜗毛细胞退行性变的影响

目的：探讨内质网应激（ERS）对1%链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠耳蜗毛细胞退行性变的影响,阐明其作用机制。方法：选取清洁级1月龄雄性昆明小鼠20只,随机分为对照组和模型组,模型组小鼠采用腹腔注射40 mg·kg^-1STZ建立2型糖尿病模型。尾静脉采血测定小鼠空腹血糖,通过听觉脑干反应（ABR）检测小鼠的ABR阈值,耳声发射测试（OAE）实验检测OAE阈值,应用小鼠耳蜗铺片技术计算小鼠耳蜗外毛细胞的缺损率,采用Western blotting法检测小鼠耳蜗毛细胞中GRP78、caspase-12、p-ERK和Nrf2蛋白表达水平。结果：与对照组比较,第2次注射STZ后7和14 d模型组小鼠空腹血糖差异无统计学意义（P>0.05）,21、28和35 d空腹血糖明显升高（P<0.05）,35 d达到最高值。与对照组比较,模型组小鼠在8、12和24 kHz各个频率的ABR阈值明显升高（P<0.05）。与对照组比较,低频刺激下模型组小鼠OAE阈值无明显变化（P>0.05）,在中频和高频刺激下模型组小鼠OAE阈值明显升高（P<0.05）。小鼠耳蜗外毛细胞缺损主要集中在底回端,耳蜗中回和顶回外毛细胞缺损较少;与对照组比较,模型组小鼠耳蜗中的底回外毛细胞缺损率明显升高（P<0.05）,中回和顶回外毛细胞缺损率略有升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠耳蜗毛细胞中GRP78和caspase-12蛋白表达水平升高（P<0.05）,p-ERK和Nrf2蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：ERS能够引起糖尿病小鼠耳蜗外毛细胞缺损率和ABR脑干听力阈值升高,并降低p-ERK和Nrf2的蛋白表达水平,提示ERS可促进2型糖尿病小鼠耳蜗毛细胞的退行性病变。     

血清一氧化氮变化对豚鼠庆大霉素耳毒性作用影响的实验研究

目的:探讨豚鼠血清一氧化氮变化在药物性耳聋过程中的作用机制. 方法:24只健康豚鼠随机均分为正常组、庆大霉素组、庆大霉素加L.精氨酸(全程)组和庆大霉素加L一精氨酸(半程)组.观察各种豚鼠血清中一氧化氮、听觉脑干反应、内耳外毛细胞的形态学变化. 结果:庆大霉素组血清中一氧化氮与正常组差异无统计学意义(P＞0.05);L-精氨酸全程组和半程组治疗后血清中一氧化氮高于正常组和庆大霉素组(P＜0.05～P＜0.01).L一精氨酸组ABR反应阈较庆大霉素组降低(P＜0.05).L-精氨酸组内耳外毛细胞仅有散在损失. 结论:一氧化氮一定量升高对内耳毛细胞有细胞毒性作用,进一步升高则对外毛细胞有保护作用.L-精氨酸治疗能降低ABR阈值,减少外毛细胞损害,对耳蜗有保护作用.     

碱性成纤维细胞生长因子/绿色荧光蛋白基因对药物性耳蜗损害的防治作用

目的　探讨阳离子脂质体 (天然碱性脂SA)携带碱性成纤维细胞生长因子 /绿色荧光蛋白 (bFGF/GFP)基因在豚鼠耳蜗中的表达 ,以及对庆大霉素所致耳蜗损害的防治作用。方法　将 36只豚鼠分为 3组 ,预防组右耳圆窗注入SA bFGF/GFP复合物后次日肌肉注射庆大霉素 15 0mg·kg-1·d-18天 ,治疗组先用庆大霉素 8d后次日右耳给药 ,对照组单用庆大霉素 8d。分别于实验前后及处死前行听觉脑干诱发电位 (ABR)测试。荧光显微镜下观察耳蜗GFP的表达 ;用耳蜗琥珀酸脱氢酶染色铺片 ,扫描电镜观察毛细胞的缺失情况。结果　荧光显微镜下见双侧耳蜗均有GFP表达。预防和治疗组处死前的双耳ABR阈值与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,耳蜗内外毛细胞缺失数与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　SA脂质体介导的bFGF/GFP基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达 ,并对庆大霉素所致的耳蜗损害有防治作用。     

高压氧对卡那霉素致聋肾虚豚鼠耳蜗琥珀酸脱氢酶的影响

[目的]观察高压氧(HBO)对卡那霉素致聋肾虚豚鼠的耳蜗琥珀酸脱氢霉(SDH)变化的影响。[方法]将30只雄性豚鼠随机分为3组,每组10只,分别为正常对照组(正常组)、肾虚耳聋模型对照组(模型组)、肾虚耳聋高压氧治疗组(治疗组),以听性脑干反应(ABR)及SDH组织化学检测为指标。[结果]模型组豚鼠ABR反应阈明显升高,治疗组ABR反应阈升高幅度明显低于模型组,两组比较差异有统计学意义(P0.05);模型组SDH显色变淡或消失,毛细胞受损显著,治疗组SDH变化、毛细胞受损程度均明显低于模型组。[结论]HBO能提高内耳SDH的活性,促进受损细胞功能恢复,对卡那霉素致聋肾虚型豚鼠有一定的治疗作用。     

豚鼠暴露于娱乐噪声后的听觉电生理及形态学改变

目的观察豚鼠暴露于娱乐噪声后的听觉电生理及耳蜗形态学改变，探讨噪声暴露后电生理与毛细胞缺失变化之间的可能联系及其机制。方法豚鼠随机分为正常对照组及噪声实验组，各10只。实验组每日定时暴露于高强度迪厅音乐2h，连续暴露14d。观察两组听觉脑干诱发电位(auditory brainstem response，ABR)、畸变产物耳声发射(distort product otoacoustic emission，DPOAE)及耳蜗形态学的变化。结果实验组动物出现ABR反应阈上升和DPOAE幅值下降，两者都有极显著性意义；基底膜铺片示噪声组3排外毛细胞均有不同程度的缺失、琥珀酸脱氢酶活性减弱或消失，但与正常对照组相比，差异无统计学意义。螺旋神经节计数差异亦无显著性意义。扫描电镜示噪声组外毛细胞、静纤毛异常。结论所应用的娱乐噪声能引起豚鼠听觉系统的损害，表现为电生理功能异常和外毛细胞静纤毛紊乱。而光镜下所观察到的毛细胞缺失并不总与电生理变化相平行，这可能与噪声所致外毛细胞亚细胞结构非致命性损伤或耳蜗其他部位的损伤有关。     

Aminoglycoside ototoxicity in three murine strains and effects on NKCC1 of stria vascularis

Background After establishing a murine model of aminoglycoside antibiotic （AmAn） induced ototoxicity, the sensitivity of AmAn induced ototoxicity in three murine strains and the effect of kanamycin on the expression of Na-K-2Cl cotransporter-1 （NKCC1） in stria vascularis were investigated. Methods C57BL/6J, CBA/CaJ, NKCC1^＋/- mice （24 of each strain） were randomly divided into four experimental groups： A： kanamycin alone; B： kanamycin plus 2,3-dihydroxybenzoate; C： 2,3-dihydroxybenzoate alone; and D： control group. Mice were injected with kanamycin or/and 2,3-dihydroxybenzoate twice daily for 14 days. Auditory brainstem response （ABR） was measured and morphology of cochlea delineated with succinate dehydrogenase staining. Expression of NKCC1 in stria vascularis was detected immunohistochemically. Results All three strains in groups A and B developed significant ABR threshold shifts （P〈0.01）, which were accompanied by outer hair cell loss. NKCC 1 expression in stria vascularis was the weakest in group A （A cf D, P〈0.01） and the strongest in groups C and D （P〈0.05）. CBA/CaJ mice had the highest sensitivity to AmAn. Conclusions Administration of kanamycin established AmAn induced ototoxicity. Kanamycin inhibited the expression of NKCC1 in stria vascularis. 2, 3-dihydroxybenzoate attenuated AmAn induced ototoxicity-possibly by enhancing the expression of NKCC 1. Age related hearing loss did not show additional sensitivity to AmAn induced ototoxicity in murine model.     

聚天冬氨酸对庆大霉素所致耳蜗磷脂沉积的拮抗作用

目的　观察聚天冬氨酸（PAA）对庆大霉素（GM）所致耳蜗组织磷脂沉积的拮抗作用,进一步探讨PAA对庆大霉素耳毒性拮抗作用机制。方法　采用高效液相色谱分析法（HPLC）测定不同给药组、不同给药时间后豚鼠耳蜗组织各类磷脂的含量;记录听性脑干诱发应答(ABR),用透射电镜观察耳蜗Corti器毛细胞溶酶体形态改变。结果　给药5d后耳蜗组织磷酸肌醇(PI)（19.7μg±6.6μg）、一磷酸肌醇(PIP)(121μg±21μg)、给药10d后PIP（126μg±8μg）含量较其他3组明显升高（P<0.01）;超微结构Ⅰ组耳蜗Corti′s器外毛细胞表皮板下溶酶体改变给药10d较给药5d更明显,可见较多溶酶体聚集,体积略增大;Ⅰ组ABR阈值改变随用药时间延长而升高。结论　PAA对GM干扰耳蜗组织磷脂代谢有抑制作用,从而拮抗了GM所致溶酶体磷脂沉积病态及耳蜗毒性的发生。     

顺铂对豚鼠耳蜗损害作用实验研究

目的观察顺铂对耳廓反射正常的健康豚鼠耳蜗功能的损害作用，以探讨顺铂对豚鼠耳蜗毒性作用及其损伤机制，为防治顺铂耳毒性作用提供理论依据。方法将60只耳廓反射灵敏的健康豚鼠随机分成两组，顺铂组腹腔注射顺铂4mg／（k·d），1次／d，连续注射5d。正常对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水。实验前和实验5d后分别行耳廓反射和听性脑干反应测听。测定麻醉状态下豚鼠听觉脑干诱发电位，比较实验前后两组听觉诱发电位阈值及各波潜伏期、波幅变化。结果顺铂组豚鼠听性脑干反应测试听闽明显提高，各波潜伏期延长，波幅降低，甚至出现波形变异不易辨认，两组比较差异有显著性。结论顺铂可导致豚鼠耳蜗功能损害，表现为豚鼠耳蜗听性脑干反应阂值显著提高，各波潜伏期延长。波幅降低。     

自由基在卡那霉素内耳中毒中的作用

探讨自由基在卡那霉素（ＫＭ）内耳中毒中的作用，方法：豚鼠６６只，分正常对照组，ＫＭ组，ＫＭ＋尼莫地平（ＮＤ）组，ＫＭ＋超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）组，连续用药１２ｄ，停药４ｄ后，分别测试听性脑干反应（ＡＢＲ）阈移，血清ＳＯＤ和耳蜗组织丙二醛（ＭＤＡ），同时也对耳蜗组织作扫描电镜观察，结果：ＫＭ组ＡＢＲ阈移和耳蜗ＭＤＡ显著高于对照组，ＮＤ和ＳＯＤ组（Ｐ〈０．０１），其血清ＳＯＤ明显低于对照组（Ｐ〈０．０