嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡与COX-2表达及凋亡机制初步探讨

目的研究嘌呤霉素氨基核苷（PA）诱导的足细胞凋亡及环氧合酶-2（COX-2）在足细胞中的表达情况,初步探讨足细胞凋亡的机制。方法条件永生性小鼠的足细胞,经诱导分化成熟后,采用PA诱导足细胞凋亡,分别在诱导后0、8、24和48h检测足细胞活性和凋亡水平,并检测足细胞凋亡过程中caspase-3的活性水平,同时运用Westernblot技术检测足细胞P53及COX-2的表达。结果随时间的延长,PA诱导的足细胞凋亡逐渐增多,在24h及48h较明显（P〈0.05）。各组细胞caspase-3水平无明显差异。24h及48hPA组P53表达较正常对照组明显增多（P〈0.05）。正常足细胞表达COX-2,用PA干预后,24h及48hCOX-2表达明显增加（P〈0.05）。结论PA诱导的足细胞凋亡呈时间依赖性,随时间的延长,足细胞凋亡逐渐增多;PA诱导的足细胞凋亡过程中COX-2、P53表达明显增多;足细胞凋亡过程与caspase-3无关。     

塞来昔布对嘌呤氨基核苷诱导的足细胞凋亡中COX-2表达水平的影响

目的:旨在通过特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对嘌呤氨基核苷诱导的足细胞凋亡中足细胞COX-2表达水平变化的影响,初步探讨特异性COX-2抑制剂对足细胞保护作用的机制。方法:以条件永生性小鼠足细胞为研究对象,分为6组:正常对照组(CON)、嘌呤霉素氨基核苷组(PA)、地塞米松组(DEX)、塞来昔布组(CELE)、地塞米松+嘌呤氨基核苷组(DEX+PA)、塞来昔布+嘌呤氨基核苷组(CELE+PA),分别于0h、8h、24h和48h四个时间点用Hoechst 33258染色检测足细胞凋亡率,24h抽提蛋白用于Western blot检测COX-2的蛋白表达。结果:PA组与正常对照组相比细胞凋亡率明显增多(P<0.001),DEX+PA、CELE+PA组与PA组比较细胞凋亡率明显减少(P<0.05);正常对照组表达COX-2,用PA诱导凋亡后,24h时COX-2表达明显增加,用CELE、DEX干预后COX-2表达水平有所减少(P<0.05)。结论:特异性COX-2抑制剂CELE可以减少PA诱导的足细胞的凋亡率;CELE抑制PA诱导的足细胞凋亡的作用机制可能与CELE对足细胞所表达的COX-2水平变化的影响有一定的相关性。     

P-P38MAPK、COX-2在胃癌细胞株中的表达及二者关系的研究

目的 研究磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(P-P38 mitogen-activated protein kinase,P-P38MAPK)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在胃癌细胞株中的表达及二者的关系,探讨非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)的抑癌机制.方法 体外常规培养胃癌细胞株SGC7901.实验分为空白对照组(CON组)、NS398组(NS组)、SB203580组(SB组)、SB203580和NS398共同作用组(SBNS组)以及溶剂对照组(DMSO组).用四甲基偶氮唑盐比色法检测药物对SGC7901细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞定量检测技术(flow cytometry,FCM)检测SGC7901细胞凋亡和细胞周期;应用FCM和蛋白免疫印迹(Western blot)检测SGC7901细胞中COX-2、P-P38MAPK蛋白的表达.结果 各组药物作用于SGC-7901细胞均可诱导细胞凋亡,细胞凋亡率与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);抑制细胞增殖.COX-2蛋白表达SB组、NS组和SBNS组明显低于CON组(P＜0.01);SBNS组明显低于NS组和SB组(P＜0.01或P＜0.05).P-P38MAPK蛋白表达SB组明显低于CON组(P＜0.05);而NS组和SBNS组明显高于CON组(P＜0.05).结论 胃癌细胞株SGC7901中,P-P38MAPK是COX-2的上游激酶,可上调COX-2的表达,COX-2可能对P-P38MAPK有负反馈调节作用.P-P38MAPK活化后在胃癌细胞株SGC7901中的终效应是促进肿瘤细胞增殖.     

表没食子儿茶素没食子酸醋对高糖环境下小鼠足细胞增殖和凋亡作用

目的 观察作为绿茶主要活性成分的表没食子儿茶素没食子酸醋(EGCG)对高糖环境下足细胞增殖和凋亡的作用并探讨其机制.方法 将足细胞分为9组.组1:正常糖(5.6 mmol/L).组2:正常糖(5.6 mmol/L)+0.1 mmol/L H2O2.组3:DMEM高糖(25 mmol/L).组4:20 μmol/L EGCG+DMEM高糖(25 mmol/L).组5:2.0 μmol/LEGCG+DMEM高糖(25 mmol/L).组6:0.2 μmol/LEGCG+DMEM高糖(25 mmol/L).组7:0.2 mmol/L维生素E+DMEM高糖(25 mmol/L).组8:0.1 μmol/L EGCG+0.1 mmol/L维生紊E+DMEM高糖(25 mmol/L).组9:24.4 mmol/L甘露醇+5.6 mmol/L葡萄糖.采用溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞增殖,在Hoechst染色共聚焦激光显微镜下观察不同浓度EGCG作用24 h对足细胞凋亡的影响,采用Annexin V-FITC法检测足细胞凋亡,CM-H2DCFDA荧光探针检测足细胞内活性氧(ROS)生成.结果 ①足细胞增殖:与组1比较,组2在刺激24 h时的足细胞增殖的光密度(D)450值无显著变化(P＞0.05),48和72 h时D450值均显著降低(P值均＜0.05).与组2比较,组7和组8高糖刺激24 h时的D450值显著升高(P值均＜0.05),组4、组5和组6无显著变化(P值均＞0.05);组4、组7和组8在刺激48、72 h时的Dm值显著升高(P值均＜0.01).②激光共聚焦显微镜下,凋亡细胞表现为较多的核固缩,DNA浓缩并向核膜靠拢,核质比减小,以及胞膜皱缩等早期凋亡形态学变化.组2、组3的足细胞凋亡较组1增加,组7明显少于组4、组5,组9较组2无明显增加.③不同浓度EGCG作用后,组4、组5、组8的早期凋亡细胞膜联蛋白V(+)PI(-)比例和坏死细胞膜联蛋白V(+)PI(+)V(+)比例均显著低于组2(P值均＜0.05);组4、组8的早期凋亡细胞膜联蛋白V(+)PI(-)比例均显著低于组7(P值均＜0.05).④与组2比较,组4 24 h时的ROS显著减少(P＜0.05),但组6无显著改变(P＞0.05);与组7比较,组4 24 h时的ROS显著减少(P＜0.05),6、12 h时无显著变化(P值均＞0.05).结论 EGCG(20 μmol/L)作用72 h促进高糖环境下足细胞增殖,EGCG降低高糖刺激下小鼠足细胞凋亡的作用可能是通过减少足细胞ROS的生成实现的.     

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞中bcl-2、bax及p53mRNA表达的影响

目的通过检测不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞(Retinal ganglioncells,RGCs)中bcl-2,bax,p53mRNA表达情况,了解压力对视网膜神经节细胞凋亡的影响.方法用SD系大鼠脑源性星型胶质细胞同化培养液双界面法[1]培养羊抗鼠Thy1.1单克隆抗体纯化的SD系大鼠RGCs;在纯化培养的RGCs上分别施加0,20mmHg,40mmHg,60mmHg和80mmHg气压,培养24h及48h后TUNEL法检测各组细胞的凋亡,原位杂交检测细胞中bcl-2,bax及p53mRNA的表达.结果纯化的RGCs培养12h及24h用羊抗鼠FITC-Thy-1.1单克隆抗体进行鉴定阳性,纯度为97%.传三代后星型胶质细胞用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体标记和鉴定阳性.培养24h组TUNEL法检测对照组极少数细胞凋亡,20mmHg组见较多细胞凋亡,随着压力的增高细胞凋亡数增多,凋亡指数增高;与对照组相比差异均有显著性.培养48h组压力≥20mmHg各组较相同压力培养24h组凋亡指数增高,差异有显著性(P＜0.05).压力≥40mmHg时bcl-2 mRNA表达逐渐减少,压力≥20mmHg时bax及p53 mRNA表达则逐渐增加;与对照组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论高于20mmHg压力时间超过24h可激活体外培养的视网膜神经节细胞的相关凋亡基因导致细胞的凋亡.     

蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人鼻咽癌CNE-2细胞系环氧合酶-2表达的影响研究

目的 探讨蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人鼻咽癌CNE-2细胞系环氧合酶-2 (COX-2)表达的影响.方法 用不同浓度的Agkihpin处理鼻咽癌CNE-2细胞系72 h后,应用免疫细胞化学、Western Blotting、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测COX-2在CNE-2细胞系中的表达.结果 不同浓度Agkihpin处理CNE-2细胞系72 h后,COX-2的平均吸光密度比较,差异有统计学意义(P＜0.05);其中A1组、B1组和C1组较D1组均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),A1组较B1组、C1组和D1组均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western Blotting检测经不同浓度Agkihpin处理72 h后COX-2表达差异有统计学意义(P＜0.05),随着Agkihpin浓度的降低,COX-2表达水平升高,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度Agkihpin处理72 h后COX-2 mRNA的相对转录水平比较差异有统计学意义(P＜0.05),随着Agkihpin浓度的降低,COX-2 mRNA的相对转录水平升高,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在人低分化鼻咽癌CNE-2细胞系中,Agkihpin能抑制COX-2的表达,并且随着浓度的增大更明显;Agkihpin对COX-2的抑制作用,可能成为鼻咽癌化疗的有效药物.     

没食子儿茶素没食子酸酯诱导人肝癌细胞凋亡

目的 探讨没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人肝癌细胞株凋亡的作用和机制.方法 以不同浓度EGCG处理人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721细胞24 h和48 h.四甲基偶氮唑蓝比色法和锥虫蓝染色细胞计数评价细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡和环氧合酶-2(COX-2)、Bcl-2蛋白;比色法测定天冬氨酸蛋白酶-9和caspase-3活性;RT-PCR检测COX-2和Bcl-2家族mRNA的表达.结果 EGCG(50、100、200、400μg/ml)处理48 h后,HepG2细胞活性下降至93.8%±2.8%,62.3%±5.4%,33.9%±2.5%和17.6%±3.2%,与对照组(100.0%±2.8%)比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);SMMC-7721细胞活性下降至49.6%±3.5%,30.3%±3.8%,17.7%±2.2%和13.0%±2.5%,与对照组(100.0%±0.8%)比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);100 μg/ml EGCG处理细胞24、48、72和96 h后,HepG2活细胞计数(×104)分别是8.0±1.5,22.0±3.1,37.0±5.4和61.0±8.7,与对照组(15.0±2.5,45.0±5.3,86.0±11.0和210.0±23.0)相比明显减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05);SMMC-7721活细胞计数(×104)分别是7.0±2.2,13.0±2.5,20.0±3.7和31.0±4.0,与对照组(14.0±2.2,40.0±4.3,75.0±8.8和182.0±28.0)相比明显减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05).EGGG(50、100、200μg/ml)处理细胞12 h后,HepG2细胞凋亡率分别是8.7%±0.4%,18.1%±1.1%和22.1%±1.8%;SMMC-7721细胞凋亡率分别是5.9%±0.3%,7.8%±0.6%和12.2%±0.8%,与对照组(3.3%±0.3%)和(3.7%±0.4%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);EGCG(100、200μg/ml)处理细胞12 h后,HepG2细胞caspase-9活性为1.8±0.4和2.5±0.4;caspase-3活性为2.0±0.4和2.8±0.5,两者与对照组(1.0±0.1和1.0±0.2)比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);SMMC-7721细胞caspase-9活性为1.7±0.4和2.5±0.4,caspase-3活性为1.9±0.4和2.6±0.3,均显著高于对照组(1.0±0.1和1.0±0.2,P＜0.05).EGCG(200μg/ml)下调COX-2和Bcl-2的表达,而对Bcl-2家族其他成员表达无明显影响.结论 EGCG可能通过下调COX-2和Bcl-2的表达,激活caspase-9和caspase-3诱导肝癌细胞凋亡.     

激活的一磷酸腺苷活化蛋白激酶对软脂酸诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:观察激活的一磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)对软脂酸(PA)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制.方法:按HUVEC培养液中成分不同,实验分为8组,分别为:空白对照组(常规培养)、PA培养组、5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(AICAR)培养组、PA AICAR培养组、二甲双胍(Met)培养组、PA Met培养组、吡格列酮(PGZ)培养组和PA PGZ培养组.HUVEC在各组培养液中分别培养24、48和72 h,MTT法测定不同时间点各组细胞的存活率,Western印迹法测定培养24 h时各组细胞的磷酸化AMPK蛋白表达水平.结果:与对照组相比,PA组细胞24、48和72 h的存活率明显降低,分别为58.95%、36.68%和15.09%(P＜0.05);培养72 h,AICAR PA组、Met PA组和PGZ PA组细胞的存活率均显著高于PA组(P＜0.05);单独应用AICAR、Met和PGZ培养对细胞的存活率影响不大,与对照组比较无显著差异.与对照组和PA组相比,培养24 h时,AICAR、Met和PGZ刺激HUVEC的磷酸化AMPK表达增加(P＜0.05).结论:AICAR、Met和PGZ可能通过激活AMPK,显著减轻PA诱导的HUVEC的损伤.     

川芎嗪对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对过氧化氢(H202)所致大鼠星形胶质细胞凋亡的保护作用.方法 利用SD新生鼠(24～48h)分离、培养星形胶质细胞,按随机数字表法分为空白对照组(以正常培养液培养)、模型组(100 μmol/L的H202作用24 h)、TMP剂量组(25、50、100 μmol/L TMP预处理48 h后,加入H202作用24 h).采用CCK-8检测各组细胞存活率;GFAP染色观察细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力;Real-time PCR 检测各组细胞中PI3K、AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA 的表达;Western blot检测各组细胞PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),LDH含量增加(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA 表达下调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达上调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高(P＜0.05);与模型组比较,TMP预处理后细胞存活率明显升高(P＜0.05),其中50 μmol/L组的细胞存活率最高(P＜0.05),细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),LDH含量降低(P＜0.05),SOD活性升高(P＜0.05),PI3K、AKT、Bcl-2 mRNA表达上调,Bax、Caspase-3 mRNA 表达下调(P＜0.05),PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 TMP对H202所致的大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤具有保护作用,可改善损伤后细胞形态并抑制凋亡,该作用可能与PI3K、p-AKT蛋白活化有关.     

柴胡皂苷D通过下调JAK2/STAT3通路抑制乳腺癌细胞的增殖并促进其凋亡

目的 探讨柴胡皂苷D通过JAK2/STAT3通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法 将乳腺癌MCF-7细胞分为对照组(0μmol/L),低(5μmol/L)、中(10 μmol/L)和高(20 μmol/L)剂量柴胡皂苷D组,采用四甲基偶氮唑盐(tetramethylazolium salt,MTT)比色法测定各组MCF-7细胞活力;用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用免疫组化检测柴胡皂苷D对MCF-7细胞JAK2和STAT3表达情况;同时用免疫蛋白印迹法检测各组细胞JAK2、STAT3和Ki-67蛋白的表达.结果 对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞活力差异有统计学意义(F=5.099、38.908、159.680、234.885、344.866、386.914,P＜0.05).与对照组相比较,在12、24、36、48、60、72 h后,低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞活力均有显著降低(P＜0.05),且低剂量组细胞活力在24、36 h均高于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞活力在24、36 h均高于高剂量组(P＜0.05).对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞凋亡率比较差异具有统计学意义(x2=21.609,P＜0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组的细胞凋亡率均升高(P＜0.05),低剂量组细胞凋亡率低于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞凋亡率低于高剂量组(P＜0.05).免疫组化结果显示,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞JAK2、STAT3蛋白相对表达量比较差异具有统计学意义(F=44.343、46.389,P＜0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞JAK2、STAT3表达均降低(P＜0.05),且低剂量组细胞JAK2、STAT3表达均高于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞JAK2、STAT3表达均高于高剂量组(P＜0.05).Western blot检测结果显示,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组MCF-7细胞JAK2、STAT3和Ki-67蛋白相对表达量比较差异具有统计学意义(F=25.241、18.102、14.997,P＜0.05);与对照组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组的细胞JAK2、STAT3和Ki-67相对表达量均降低(P＜0.05),低剂量组细胞JAK2、STAT3相对表达量均高于中剂量组和高剂量组(P＜0.05),中剂量组细胞JAK2、STAT3相对表达量均高于高剂量组(P＜0.05).结论 柴胡皂苷D能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其作用机制可能与JAK2/STAT3通路有关.     

Celecoxib Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis via Cyclooxygenase-2 Pathway in Human Pancreatic Carcinoma Cells

In order to evaluate the effects and mechanisms of celecoxib in inhibiting proliferation and inducing apoptosis on human pancreatic carcinoma cells, the anti-proliferative effect was measured by using methabenzthiazuron (MTT) assay. Cell cycle and apoptosis were analyzed by using flow cytometry (FCM), and the PGE2 levels in the supernatant of cultured pancreatic carcinoma cells were quantitated by enzyme-linked immunoabsordent assay (ELISA). Our results showed that celecoxib suppressed the production of PGE2 and inhibited the growth of JF-305 cells, and the anti-proliferative effect of celecoxib could be abolished by addition of PGE2. FCM revealed that celecoxib could inhibit proliferation and induce apoptosis by G1 S cell cycle arrest. It was concluded that cyclooxygenase-2 specific inhibitor celecoxib could inhibit proliferation and induced apoptosis of human pancreatic carcinoma cells via suppression of PGE2 production in vitro.     

Cox-2抑制剂对骨肉瘤细胞及乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的:观察Cox-2抑制剂(塞来昔布、罗非昔布)对人骨肉瘤细胞株HOS-8603、乳腺癌细胞株MDA的作用。方法:采用MTT比色法测定体外培养的细胞株HOS-8603、MDA-MB-435S对不同浓度的罗非昔布和塞来昔布的敏感性。流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响。结果:选择性环氧化酶-2(Cox-2)抑制剂明显抑制HOS-8603、MDA-MB-435S的生长(P<0.05),抑制效应呈现浓度依赖型和时间依赖型,HOS-8603在Cox-2抑制剂作用下,细胞分裂阻滞在G2/M期,有一定的诱导细胞发生凋亡作用,塞来昔布强于罗非昔布对HOS-8603的作用。结论:选择性环氧化酶-2抑制剂对骨肉瘤细胞、乳腺癌细胞的生长可能起着十分重要的作用,有望成为成骨肉瘤治疗和抑制骨肉瘤转移的新药物。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与c-Jun-N末端激酶信号通路反向调控血管紧张素Ⅱ诱导的人足细胞凋亡

目的:研究不同亚型的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),即p38MAPK、细胞外信号调节激酶(ERK)和cJun-N末端激酶(JNK)在血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的培养人体足细胞凋亡中的作用.方法:体外培养条件下,分别用ANGⅡ(10-8mol/L)或ANGⅡ与不同的MAPK抑制剂(SB02190、Pl98059、SP600125)处理人体足细胞;应用H-33342和碘化丙啶双染色形态学方法和DNA片段测定法检测细胞凋亡;应用Western印迹检测ANCⅡ刺激的MAPK活性改变.结果:ANGⅡ诱导足细胞凋亡呈时间和剂量依赖性;ANGⅡ刺激p38MAPK,而抑制JNK活性;p38MAPK抑制剂(SB202190)抑制ANGⅡ诱导的足细胞凋亡和p38MAPK活性;SP600125抑制JNK活性而促进了ANGⅡ诱导的足细胞凋亡.结论:ANGⅡ通过激活p38MAPK和抑制JNK活性诱导人体足细胞凋亡.     

塞莱西布诱导胆囊癌细胞凋亡和生长抑制的作用

目的:研究塞莱西布对人胆囊癌细胞生长抑制及诱导凋亡的作用.方法:应用TUNEL,MTT法,流式细胞技术等方法对经塞莱西布作用的人胆囊癌细胞进行观察和检测.结果:塞莱西布对人胆囊癌细胞具有明显的生长抑制和促进调亡作用(P<0.05),在一定范围内存在时间依赖关系和剂量依赖关系(P<0.05).结论:塞莱西布诱导肿瘤细胞产生凋亡,是其对肿瘤细胞生长抑制作用的基础.     

塞来昔布通过调节PI3K/Akt通路活化影响人膀胱肿瘤细胞株T24的增殖和凋亡

探讨PI3K/Akt通路在选择性环氧化酶2(Cox-2)抑制剂塞来昔布抗膀胱肿瘤机制中的可能作用。方法常规培养的贴壁生长的T24细胞,加入不同浓度PI3K抑制剂LY294002共培养,MTT法测定其对T24细胞增殖活性的影响;贴壁生长及悬浮培养的T24细胞,分别加入塞来昔布、PGE2、LY294002等共培养,流式细胞仪测定T24细胞凋亡率。Western blot检测塞来昔布及PGE2作用后悬浮生长的T24细胞Akt活化情况。结果塞来昔布对贴壁及悬浮培养的T24细胞均可诱导其凋亡;PGE2及LY294002均对贴壁的T24细胞增殖和凋亡无明显影响,但PGE2对悬浮生长的T24细胞可减少其凋亡,而LY294002可显著增加T24细胞的失巢凋亡率。Western blot结果提示塞来昔布显著降低而PGE2增加Akt的活化。结论塞来昔布对PI3K/Akt信号通路的主要作用是阻遏Akt的磷酸化,通过阻止Akt活化抑制T24细胞增殖并诱导其产生凋亡。更多还原     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度〉40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

选择性COX-2抑制剂对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响

目的：观察塞来昔布对胃癌细胞株BGC-823细胞增殖和凋亡的影响，寻找安全有效的治疗胃癌的化疗药物。方法：常规培养胃癌细胞株BGC-823至80％融合，加入不同浓度塞来昔布继续培养，采用噻唑蓝（MTT）比色法观察其对胃癌BGC-823细胞生长的影响。流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。RT-PCR技术检测p21和Fas的表达。结果：MTT比色法显示体外不同浓度塞来昔布均能抑制胃癌BGC-823细胞生长，呈浓度和时间依赖性，各浓度组间比较有显著差异（P＜0．05）。流式细胞仪检测发现在0～100tzmol／L内，随浓度增加G，期细胞数增加，S期细胞数减少；RT—PCR显示塞来昔布干预后胃癌BGC-823细胞p21和Fas的表达增强且呈浓度依赖性，各浓度组间比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：体外塞来昔布抑制胃癌BGC-823细胞增殖和促进其凋亡，可能与p21上调阻止细胞周期进展和促进Fas表达诱导细胞凋亡有关。     

塞来昔布与吉西他滨合用对胰腺癌的抑制作用及其机制

目的探讨环氧合酶2(COX2)选择性抑制剂塞来昔布和吉西他滨抑制胰腺癌生长的影响及其机制。方法观察塞来昔布与吉西他滨联合作用对裸鼠SW1990胰腺癌细胞移植瘤生长的影响,并与两者单独应用作比较,免疫组织化学染色观察肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1表达的变化;四唑蓝法、克隆形成试验观察塞来昔布和吉西他滨体外对SW1990细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化;Western印迹检测细胞周期蛋白D1、A和B1表达的变化。结果药物作用于裸鼠移植瘤32d后,对照组、吉西他滨组、塞来昔布组和联合组肿瘤体积分别为(2.31±0.41)cm3、(0.41±0.12)cm3、(1.56±0.17)cm3、(0.05±0.04)cm3,塞来昔布和吉西他滨联合可明显抑制胰腺癌移植瘤的生长,对照组PCNA、细胞周期蛋白D1呈强阳性表达,吉西他滨组PCNA、细胞周期蛋白D1阳性细胞数明显减少,塞来昔布组PCNA阳性细胞数较对照组略有减少,细胞周期蛋白D1阳性细胞数则无明显减少,而联合组中PCNA、细胞周期蛋白D1阳性细胞数较前3组明显减少。塞来昔布和吉西他滨剂量依赖性抑制SW1990细胞增殖,两药联合应用,对细胞增殖的抑制有增强作用。药物作用24h或72h后,塞来昔布组和联合组凋亡细胞数较对照组及吉西他滨组明显增加(P<0.05)。药物作用24h后,塞来昔布组和联合组G0/G1期细胞比例明显增加,G2/M期细胞明显减少,吉西他滨组G0/G1期细胞明显减少,而S期和G2/M期细胞明显增加,药物作用72h后,塞来昔布组和联合组G0/G1期细胞进一步增加,S期细胞明显减少,G2/M期细胞进一步减少,而联合组在作用24h和72h,G2/M期细胞比例均为0。细胞周期素的表达与细胞周期的分布相一致。结论COX2选择性抑制剂塞来昔布可增强吉西他滨对胰腺癌增殖的抑制作用,其机制可能部分通过调节细胞周期素的表达,诱导细胞周期阻滞和胰腺癌细胞凋亡而实现的。