扶正化瘀方对纤维化肝脏MMP-2活性及Ⅳ型胶原表达的影响

目的:探讨扶正化瘀方影响基质金属蛋白酶-2活性和Ⅳ型胶原蛋白表达的抗肝纤维化作用机制。方法:二甲基亚硝胺腹腔注射4周诱导大鼠肝纤维化模型,成模后治疗组以扶正化瘀方灌胃4周。检测血清肝功能、肝脏病理学、羟脯氨酸含量;免疫组织化学方法检测肝组织Ⅳ型胶原表达;Western印迹法分析肝组织Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶-2/9(matrix-metalloproteinases-2,MMP-2/9)、金属蛋白酶组织抑制物-2(tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2)表达水平;明胶酶图法检测肝组织MMP-2/9活性。结果:与正常大鼠比较,模型大鼠血清肝功能异常、肝组织炎症明显、肝组织Ⅳ型胶原表达与沉积增加,TIMP-2蛋白表达增加,MMP-2蛋白表达变化不明显,而MMP-2活性水平明显上升。扶正化瘀方显著减轻肝脏炎症和胶原沉积;减少Ⅳ型胶原蛋白表达和沉积;降低TIMP-2蛋白表达;抑制MMP-2活性。结论:扶正化瘀方可通过抑制肝脏Ⅳ型胶原病理增生沉积、下调MMP-2活性水平、减轻肝组织的破坏与重构而发挥抗肝纤维化的作用。     

扶正化淤方对四氯化碳肝纤维化大鼠基膜型基质金属蛋白酶活性的影响

目的 探讨扶正化淤方通过影响基膜型基质金属蛋白酶活性而抗肝纤维化的作用机制.方法 四氯化碳(CCl4)皮下注射与高脂低蛋白饲料复合建立大鼠肝纤维化模型.随机分为正常组、模型组与扶正化淤方药物干预组.药物组自造模之日起以扶正化淤方稀释液灌胃,共用药6周.HE染色观察肝组织炎性病理变化,天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积,盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,Western 印迹法分析肝组织α-SMA、Ⅳ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-2和MT-MMP1蛋白表达水平;明胶酶图法检测肝组织MMP-2/9活性.结果 与正常大鼠比较,模型大鼠血清肝功能异常、肝组织炎症明显、肝组织IV型胶原表达与沉积增加,α-SMA、Ⅳ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-2和MT-MMP1蛋白表达升高,而MMP-2/9活性水平明显上升.扶正化瘀方显著改善模型大鼠血清肝功能、减轻肝脏炎症和胶原沉积;减少肝星状细胞活化;抑制Ⅳ型胶原蛋白表达和沉积;降低MMP-2、TIMP-2和MT1-MMP蛋白表达;抑制MMP-2/9活性.结论 扶正化瘀方可通过抑制MMP-2的激活与活性水平,并减少Ⅳ型胶原沉积,而起到减轻肝组织的破坏与重构而发挥抗肝纤维化的作用.     

扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠细胞外基质代谢的影响

目的探讨扶正化瘀胶囊治疗心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制。方法 24只大鼠随机分为模型组、扶正化瘀组、卡托普利组、假手术组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎术制备大鼠心肌梗死模型。造模后扶正化瘀组给予扶正化瘀胶囊0.4 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组均给予等体积的去离子水灌胃,各组均每日1次,连续8周。采用天狼星红染色检测心肌胶原分数(CVF),免疫组化、实时荧光定量PCR法分别检测Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)蛋白及mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠CVF、MMP-2/TIMP-2及Ⅰ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,扶正化瘀胶囊组、卡托普利组CVF、MMP-2/TIMP-2及Ⅰ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与卡托普利组比较,扶正化瘀组CVF、TIMP-1蛋白表达升高,TIMP-1 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论扶正化瘀胶囊能改善大鼠心肌梗死后心肌纤维化,其机制可能与调控MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白和mRNA表达及MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1有关。     

金匮肾气丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的影响

目的:研究金匮肾气丸对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。方法:96只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氯沙坦组(5 mg·kg-1)和金匮肾气丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6 g·kg-1),采用腺嘌呤灌胃(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))诱导肾间质纤维化大鼠模型,2 h后灌胃给予相应药物,造模连续9周;给药连续16周。采用生化法测定血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松(Masson)染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠肾脏组组转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),钙黏蛋白(E-cadherin),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ),Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA的表达;以免疫组化法测定大鼠肾脏TGF-β1,α-SMA和E-cadherin的表达。结果:与正常组比较,模型组中SCr和BUN显著升高(P0.01),给予金匮肾气丸干预后SCr和BUN水平降低(P0.05);HE染色和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组肾间质损伤严重且肾间质胶原物质大量沉积,给予金匮肾气丸干预后肾间质小管损伤减轻,肾间质胶原物质沉积减少;Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA表达上调(P0.05),模型组E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA表达下调(P0.05),给予金匮肾气丸干预后E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达上调(P0.05),TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达明显下调(P0.05);免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组E-cadherin蛋白表达下调(P0.01),TGF-β1和α-SMA蛋白表达上调,金匮肾气丸干预后E-cadherin蛋白表达上调(P0.05),TGF-β1和α-SMA蛋白表达下调(P0.05)。结论:金匮肾气丸可有效改善肾间质纤维化并对肾脏有一定的保护作用,其改善肾间质纤维化的机制可能与降低基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1,TIMP-2)活性,TGF-β1蛋白表达,α-SMA蛋白表达,升高基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-2,MMP-9)活性,E-cadherin蛋白表达,从而减少胶原物质的沉积有关。     

扶正化瘀方对大鼠纤维化肺组织MMP-2活性与Ⅳ型胶原表达的影响

目的观察扶正化瘀方影响肺组织MMP-2活性与Ⅳ型胶原表达的抗肺纤维化作用机制.方法一次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型,分模型对照组、扶正化瘀方组、甲强龙组,每组各14只模型大鼠.另设正常组10只,一次性气管内注射等量生理盐水.造模次日扶正化瘀方组予以4.6 g·kg-1大鼠体重的扶正化瘀方灌胃;甲强龙组予以15 mg·kg-1大鼠体重的甲强龙腹腔注射,正常组和模型组灌喂等量生理盐水;每日1次,共4周.Masson染色观察肺组织胶原沉积,称量肺重量与计算肺系数,Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸含量,明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性,Western blot检测肺组织MMP-2,MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达量.结果与正常组比较,模型组肺系数明显增加,肺组织胶原沉积明显,Hyp含量、Ⅳ型胶原、MMP-2与MMP.9蛋白表达增加,MMP-2活性水平升高,尤其是活性型MMP-2活性升高明显,而MMP-9活性略有下降.与模型组比较,扶正化瘀方与甲强龙均不同程度减轻模型组肺组织胶原沉积与Ⅳ型胶原蛋白表达,减少肺系数与肺组织Hyp含量,降低MMP-蛋白与2活性水平,尤其是活性型MMP-2水平.其中,对肺系数、Ⅳ型胶原蛋白与MMP-2蛋白与活性的抑制作用以扶正化瘀方较为明显.而2种药物对MMP-9蛋白表达与活性无明显影响.结论扶正化瘀方具有良好的抗大鼠肺纤维化作用,其部分作用机制在于抑制纤维化肺组织的MMP-2蛋白及其活性,以减少组织的炎性破坏;抑制Ⅳ型胶原过度表达,以减少胶原的病理增生沉积.     

扶正化瘀方对大鼠纤维化肺组织MMP-2活性与IV型胶原表达的影响

目的：观察扶正化瘀方影响肺组织MMP-2活性与IV型胶原表达的抗肺纤维化作用机制。方法：一次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型,分模型对照组、扶正化瘀方组、甲强龙组,每组各14只模型大鼠。另设正常组10只,一次性气管内注射等量生理盐水。造模次日扶正化瘀方组予以4.6 g·kg^-1大鼠体重的扶正化瘀方灌胃；甲强龙组予以15 mg·kg^-1大鼠体重的甲强龙腹腔注射,正常组和模型组灌喂等量生理盐水；每日1次,共4周。Masson染色观察肺组织胶原沉积,称量肺重量与计算肺系数,Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸含量,明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性,Western blot检测肺组织MMP-2,MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达量。结果：与正常组比较,模型组肺系数明显增加,肺组织胶原沉积明显,Hyp含量、Ⅳ型胶原、MMP-2与MMP-9蛋白表达增加,MMP-2活性水平升高,尤其是活性型MMP-2活性升高明显,而MMP-9活性略有下降。与模型组比较,扶正化瘀方与甲强龙均不同程度减轻模型组肺组织胶原沉积与Ⅳ型胶原蛋白表达,减少肺系数与肺组织Hyp含量,降低MMP-蛋白与2活性水平,尤其是活性型MMP-2水平。其中,对肺系数、Ⅳ型胶原蛋白与MMP-2蛋白与活性的抑制作用以扶正化瘀方较为明显。而2种药物对MMP-9蛋白表达与活性无明显影响。结论：扶正化瘀方具有良好的抗大鼠肺纤维化作用,其部分作用机制在于：抑制纤维化肺组织的MMP-2蛋白及其活性,以减少组织的炎性破坏；抑制Ⅳ型胶原过度表达,以减少胶原的病理增生沉积。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠治疗作用机理探讨

目的:通过对肾间质纤维化大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的研究,探讨和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠的治疗作用机理。方法:采用单侧输尿管结扎法(UUO)进行肾间质纤维化模型制备,48只W ister大鼠随机分为假手术组、模型组、中药灌胃组。术后第3、10、20、30天每组各处死4只大鼠。HE染色法观察肾脏病理改变,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,免疫组化法检测肾脏α-SMA、Ⅳ型胶原蛋白表达,采用RT—PCR法检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果:α-SMA、Ⅳ型胶原蛋白表达模型组明显增强(P<0.01),中药灌胃组各时间点的表达均少于模型组,假手术组表达无明显异常。模型组肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达明显高于假手术组(P<0.01),并随时间延长表达增强,中药灌胃组肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达亦高于假手术组(P<0.01),但较模型组表达弱(P<0.01)。MMP-9表达在模型组术后明显升高,第10天达到高峰,中药灌胃组在第20、30天时间点高于模型组(P<0.01)。结论:和络泄浊方通过调节α-SMA、Ⅳ型胶原及MMP-9/TIMP-1的基因表达,影响细胞外基质的降解过程,从而减轻肾间质纤维化。     

肾衰保肾胶囊对肾间质纤维化大鼠肾脏MMP-1表达及活性的影响

目的:研究肾衰保肾胶囊对慢性肾间质纤维化大鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)表达及活性的影响。方法:将Wistar大鼠60只随机分为空白对照组、模型对照组、肾衰保肾胶囊低剂量组和肾衰保肾胶囊高剂量组,采用腺嘌呤灌胃复制慢性肾间质纤维化大鼠模型,各组分别给药8周,采用免疫组化法、RT-PCR及酶谱分析法检测肾组织中的I、Ⅲ型胶原、MMP-1表达及MMP-1活性。结果:肾衰保肾胶囊组大鼠肾组织中的I、Ⅲ型胶原表达降低,MMP-1表达及活性增强,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:肾衰保肾胶囊可能是通过增强MMP-1表达及活性的途径来减少肾组织中I、Ⅲ型胶原的积聚,进而发挥减轻肾间质纤维化的作用。     

补肾活血中药对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织基质金属蛋白酶及组织抑制剂表达的影响

目的:研究补肾活血中药对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织基质金属蛋白酶及组织抑制剂表达的影响。方法:取雄性SD大鼠54只,实验设正常对照组、模型组、补肾活血法药物干预组,每组分2周、4周、8周时间点,每个时间点6只大鼠。肾组织切片分别行HE和PAS染色,进行常规病理学检查。免疫组化检测肾组织基质金属蛋白酶(MMP-2)、TIMP-2、MT1-MMP、TGF-β1的表达。流式细胞术检测肾皮质MMP-2、TIMP-2、MT1-MMP和TGF-β1蛋白表达。结果:模型组大鼠随病程进展肾小球逐渐增大,系膜基质增多,肾小球基底膜增厚。免疫组化染色显示模型组较对照组MMP-2、MT1-MMP表达减少,而药物干预组较模型组表达减少程度轻;模型组较对照组TIMP-2、TGF-β1表达增多,而药物干预组较模型组表达增多程度轻。流式细胞仪检测显示,4周和8周模型组MMP-2的相对值较对照组降低,在统计学上差异具有显著性(P<0.05或P<0.01),而各期模型组TIMP-2和TGF-β1的相对值较对照组升高,MT1-MMP的相对值较对照组降低,差异具有显著性(P<0.01)。结论:系膜增生性肾小球肾炎肾组织MMP-2表达降低、活性...     

肾衰保肾胶囊改善腺嘌呤诱导大鼠肾间质纤维化的机制初探

目的:研究拟从肾衰保肾胶囊对慢性肾间质纤维化大鼠细胞外基质积聚的影响的角度探讨肾衰保肾胶囊保护肾功能的机制。方法:Wistar大鼠60只随机分为空白对照组、模型对照组、肾衰保肾胶囊低剂量组(0.324 g.kg-1.d-1)和肾衰保肾胶囊高剂量组(1.296 g.kg-1.d-1),采用腺嘌呤ig复制慢性肾间质纤维化大鼠模型,各组分别给药8周,检测大鼠肾功能、病理变化,采用免疫组化法检测肾组织中的I型胶原(ColⅠ)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)及纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的表达。结果:肾衰保肾胶囊能够改善模型大鼠肾脏纤维化程度,降低血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血尿酸(UA)水平,降低肾组织中的ColⅠ,TIMP-1及PAI-1蛋白表达,升高MMP-1蛋白表达,与模型组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。结论:肾衰保肾胶囊可能是通过增加MMP-1表达及减少TIMP-1,PAI-1的表达来减少模型大鼠肾组织中I胶原的积聚,进而发挥减轻肾间质纤维化保护肾功能的作用。     

扶正化瘀方对骨髓移植肝纤维化小鼠骨髓细胞肝脏迁移的影响

目的: 探讨扶正化瘀方(FZHY)对肝纤维化小鼠骨髓细胞肝脏归巢的作用。 方法: BABL/C雌性受鼠性别交叉法骨髓移植模型基础上,四氯化碳(CCl₄)诱导肝纤维化模型;成模后,治疗组以FZHY方4.6 g ·kg^-1 ·d^-1 ig 4周。 PCR,病理及肝功能检测成模情况;通过FISH法标记Y染色体,观察雌性受鼠肝脏内骨髓源性细胞含量;Western blot法检测雌性受鼠肝组织基质细胞衍生因子-1(SDF-1)蛋白相对表达量。 结果: 与模型组比较,FZHY组小鼠,肝组织损伤明显减轻。FISH法标记Y染色体观察显示,FZHY组小鼠较模型组肝内骨髓源性细胞减少(P<0.05)。Western blot结果,FZHY组小鼠较模型组肝脏SDF-1蛋白相对表达量明显减少(P<0.01)。 结论: 在肝脏损伤时,FZHY可能通过抑制肝内SDF-1蛋白的表达来阻止骨髓源性细胞迁移入肝,从而一定程度上抑制骨髓源性细胞入肝后促进肝纤维化。     

Fuzheng Huayu recipe and vitamin E reverse renal interstitial fibrosis through counteracting TGF-β1-induced epithelial-to-mesenchymal transition

Aim

To investigate the mechanism of action of Fuzheng Huayu recipe (FZHY) and vitamin E (Vit E) against renal interstitial fibrosis related to transforming growth factor-beta1 (TGF-β1) mediated tubular epithelial-to-mesenchymal transition.

Materials and methods

Renal interstitial fibrosis was induced by administration of HgCl₂ at a dose of 8 mg/kg body weight once a day for 9 weeks. Rats were randomly divided into four groups: normal, model, FZHY, and Vit E group. Rats in the latter two groups were treated with the FZHY recipe and Vit E respectively. HK-2 cells were treated with TGF-β1 for 24 h, followed by incubation with either SB-431542 (a potent and specific inhibitor of TβR-I kinase) or FZHY drug-containing serum for another 24 h. Hyp content in rat kidney tissue was assayed with Jamall's method and collagen deposition in kidney was visualized using Masson stain. Protein expression of TGF-β1, TβR-I, Smad2, p-Smad2, Smad3, and p-Smad3 was analyzed by Western blotting. Protein expression and the location of Smad3 in kidney was assayed by immunohistochemistry, E-cadherin, cytokeratin 18 (CK-18), α-SMA and TGF-β1 by immunofluorescent stain.

Results

FZHY and Vit E inhibited renal collagen deposition and reduced Hyp content significantly. They upregulated E-cadherin protein expression and down-regulated the protein expression of α-SMA, TGF-β1, p-Smad2, p-Smad3, and TβR-I. Lastly, they inhibited the nuclear translocation of Smad3 in fibrotic kidney tissue. FZHY drug-containing serum significantly upregulated the expression of CK-18 and down-regulated the expression of α-SMA, TβR-I, p-Smad2/3 in TGF-β1 stimulated HK-2 cells.

Conclusion

The mechanism of action of FZHY and Vit E against renal interstitial fibrosis is related to the reversal of tubular EMT induced by TGF-β1.     

基于关键细胞信号转导效应靶标建立抗肝纤维化中药的生物活性评价与质量控制新方法＊

中药质量是制约中医药发展的重要瓶颈，指纹图谱等基于成分分析的中药质控方法存在效应成分不明及与活性作用不符等局限，亟需发展基于生物活性评价的新方法。立足于扶正化瘀方抗肝纤维化的长期临床与药理研究积累，以及国际临床试验的重要需求，本文提出以下假说：扶正化瘀存在抗肝纤维化的主要药理靶标群，药物对该靶标群基因转录活性的影响，可良好反映其抗肝纤维化药效。首先，本研究选择肝星状细胞、肝内皮细胞、肝细胞与巨噬细胞等4种细胞系，考察溶媒、作用浓度与时间等因素对扶正化瘀细胞效应的影响，建立扶正化瘀体外标准给药方法；其次，基于细胞信号通路，蛋白芯片与网络药理相结合发现扶正化瘀抗肝纤维化的关键药理靶标；最后，构建表征中药靶标基因转录活性的报告基因质粒与稳转细胞株，比较不同批次扶正化瘀对靶标的基因转录活性、细胞生物活性与模型动物肝纤维化的影响，并指纹图谱分析其成分。以建立抗肝纤维化中药的生物活性评价与质量控制新方法，促进中药产品质量提高与创新药物研发。     

Fuzheng Huayu inhibits carbon tetrachloride-induced liver fibrosis in mice through activating hepatic NK cells

Aim of the study

Fuzheng Huayu (FZHY) is a Chinese compound herbal preparation which consists of six Chinese herbs. This study examines the preventative effects of FZHY on liver fibrosis induced by carbon tetrachloride (CCl₄) and explores its possible mechanisms of action.

Materials and methods

Liver fibrosis was induced in male C57BL/6N mice by injecting a 10% CCl₄ solution intraperitoneal twice a week for six weeks. After 6 weeks of treatment, serum ALT and AST assay, liver tissue histological examination and immunostaining were carried out to examine the liver function and fibrosis degree. The expression levels of alpha-smooth muscle actin (SMA) were measured by quantitative real-time PCR and western blot. Hepatic natural killer (NK) cells were isolated from liver and evaluated by FACS.

Results

Upon pathological examination, the FZHY-treated mice showed significantly reduced liver damage. The expression of α-SMA increased markedly upon treatment with CCl₄ and the increase was reversed by FZHY treatment. FZHY treatment also enhanced the activation of hepatic NK cells and the production of interferon-gamma (IFN-γ). The protective effects of FZHY were reversed in the mice that were depleted of NK cells by anti-ASGM-1 Ab treatment.

Conclusions

FZHY can efficiently inhibit CCl₄-induced liver fibrosis. Furthermore, the depletion of NK cells attenuates the protective effects of FZHY. We conclude that FZHY could be an effective drug for liver fibrosis, and its mechanism of action involves the activation of hepatic NK cells.     

雄芍汤抗大鼠免疫性肝纤维化作用研究

目的研究雄芍汤抗大鼠免疫性肝纤维化的作用。方法 84只SD大鼠随机分为对照组、模型组、扶正化瘀胶囊阳性对照组、雄芍汤预防组和雄芍汤高、低剂量(生药15.8、7.9 g/kg)组(造模后给药)。采用ip猪血清法制备大鼠肝纤维化模型,观察雄芍汤对肝纤维化大鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、白蛋白与球蛋白比值(A/G)和肝纤维化血清标志物透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、III型前胶原(PCIII)、IV型胶原(CIV)水平,以及肝组织病理学的影响。结果与模型组比较,雄芍汤各给药组血清ALT、AST、HA、LN、PCIII水平明显降低(P<0.05、0.01),血清ALB水平和A/G值明显升高(P<0.01);雄芍汤预防组血清CIV水平明显降低(P<0.05);所有给药组肝细胞变性和坏死程度轻微,肝组织纤维增生较少,雄芍汤高剂量组和预防组的作用尤为明显。结论雄芍汤能减轻免疫性肝纤维化大鼠的肝细胞损伤,改善肝功能,调节细胞外基质的代谢,阻止或逆转肝纤维化。     

雄芍汤保肝降酶及抗氧化有效部位的研究

目的：研究雄芍汤抗肝纤维化的药效物质基础,分别筛选其保肝降酶及抗氧化的有效部位。方法：Wistar 雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶正组、雄芍组、多糖组、总碱组和总苷组,采用DMN 腹腔注射法制备大鼠肝纤维化模型,造模成功后灌胃给药,治疗组分别给予扶正化瘀胶囊（0.105 g·mL-1）、雄芍汤药液（1.610 g·mL-1）、雄芍汤粗多糖提取物（35.420 mg·mL-1）、雄芍汤总苷提取物（25.725 mg·mL-1）、雄芍汤总生物碱提取物（0.196 mg·mL-1）,正常组与模型组灌服等量生理盐水,每日1 次,疗程4 周。4 周后处死取材,全自动生化分析仪检测血清肝功能指标ALT、AST、TIBL 和ALB;黄嘌呤氧化酶法检测血清SOD活力;DTNB 还原法检测血清GSH-PX 活力;TBA 法检测血清MDA 含量;HE 染色及Masson 染色观察肝组织病理学改变。结果：与模型组比较,除总碱组无显著性差异外,其余各治疗组ALT、AST 及TBIL 均显著降低（P<0.05 或P<0.01）,ALB 均显著升高（P<0.05 或P<0.01）。与模型组比较,扶正组、雄芍组和总碱组SOD 及GSH-PX 均显著升高（P<0.01）,MDA 均显著降低（P<0.05 或P<0.01）,多糖组、总苷组无显著性意义。结论：粗多糖部位和总苷部位为雄芍汤保肝降酶的有效部位,总生物碱部位为雄芍汤抗氧化的有效部位。     

人工冬虫夏草菌液对博莱霉素致小鼠肺纤维化的保护作用

目的：研究人工冬虫夏草菌液(cordyceps sinensi)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠的保护作用。方法：小鼠随机分为4组,模型组经鼻滴入博莱霉素5 mg·kg^-1建立肺间质纤维化模型,人工冬虫夏草菌液预防治疗组于滴入BLM前48 h予人工冬虫夏草菌液灌胃,人工冬虫夏草菌液治疗组于滴入BLM后第14天给人工冬虫夏草菌液灌胃,并与正常小鼠进行对照。第28天收获其支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,右肺行苏木精-伊红(HE)和Masson三色染色,并观察电镜下细胞超微结构的改变,左肺经酸解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中转化生长因子-β(transforming growth factor-β1,TGF-β1),干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ),白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)的浓度。结果：虫草菌液干预组与模型组比较,小鼠肺系数明显下降(P<005)；肺泡炎、纤维化程度均有改善(P<005),其中人工冬虫夏草菌液防治组改善最明显；肺HYP含量下降(P<005)；BALF中TGF-β,IL-4含量亦明显下降(P<005)；防治组可使IFN-γ含量升高(P<005)。结论：人工冬虫夏草菌液可以在某种程度上减轻BLM诱导的肺泡炎及肺纤维化程度,对肺纤维化有一定预防作用；其作用机制可能是通过抑制TGF-β1在肺组织中的表达,并调整Ⅰ型/Ⅱ型细胞因子平衡达到的。     

肾复康Ⅱ号对大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β1的影响

目的:观察肾复康Ⅱ号胶囊对大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β1的表达情况的影响。方法:采用单侧输尿管结扎的方法制造大鼠肾间质纤维化模型。90只SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、模型组、肾复康Ⅱ号2.25g/kg组、4.5g/kg组、9g/kg组,肾复康Ⅱ号胶囊各组分别以以上剂量水溶剂灌胃,假手术组及模型组每天同时间以等体积的蒸馏水灌胃。给药7、14、21天后分别将造模大鼠的肾脏进行HE、Masson染色,观察肾间质纤维化的面积的变化;通过免疫组化的方法检测肾间质中转化生长因子-β1的表达情况。结果:模型组和肾复康Ⅱ号胶囊各组均出现肾间质纤维化病理改变,各剂量组(有效剂量2.25g/kg～9g/kg)病变程度与模型组相比较轻,具有显著性差异。肾复康Ⅱ号胶囊各组之间无显著性差异。TGF-β1表达在模型组和肾复康Ⅱ号胶囊组明显强于假手术组,肾复康Ⅱ号胶囊各组(有效剂量2.25g/kg～9g/kg)TGF-β1表达较模型组明显减少。结论:肾复康Ⅱ号胶囊可以有效抑制肾间质纤维化及转化生长因子-β1的表达,这可能是益肾散结法抗肾间质纤维化的部分途径。     

Investigation of the absorbed and metabolized components of Danshen from Fuzheng Huayu recipe and study on the anti-hepatic fibrosis effects of these components

Ethnopharmacology

Fuzheng Huayu recipe (FZHY) was formulated on the basis of Chinese medicine theory in treating liver fibrosis. It has a significant efficacy against liver fibrosis caused by chronic hepatitis B, with the action mechanisms of inhibition of hepatic stellate cell activation, protection of hepatocyte oxidative injury and regulations of hepatic matrix remodeling etc.

Aim of the study

To identify the absorbed components and metabolites of Danshen in FZHY in rat serum, and find their active components for anti-liver fibrosis.

Material and methods

A valid high performance liquid chromatography–electrospray ionization ion trap mass spectrometry (HPLC-ESI/MSⁿ) method was established to investigate the absorbed and metabolized compounds of Danshen in FZHY in rat serum after oral administration. Mass spectra were acquired in both negative and positive modes. Otherwise, to evaluate the anti-hepatic fibrosis efficacies of absorbed and metabolized compounds, the LX-2 cell line of hepatic stellate cell (HSC), which was crucial cellular basis of fibrogenesis, was cultured and incubated with absorbed compounds, the cytotoxicity was determined with the cellomics Multiparameter Cytotoxicity Kit 1 by High Content Screening (HCS), the cell proliferation was assayed with EdU-DNA incorporation, and the cell activation was analyzed through α-smooth muscle actin (α–SMA) expression with high content screening technology.

Results

More than 11 compounds and 2 metabolites from Danshen were identified in the serum after oral administration of FZHY by comparing their mass spectra and retention behavior with reference compounds or literature data. Among these compounds, there were no obvious changes in nuclear morphology, membrane permeability with blow 96 μM of six polar compounds treatment in comparison with control cells, respectively. And the salvianolic acid B (6 μM, 48 μM), caffeic acid (6 μM, 48 μM) and rosmarinic acid (48 μM) could obviously inhibit LX-2 cells proliferation, down-regulate α–SMA expression.

Conclusion

The results proved that the established method could be applied to analyze the absorbed into blood compounds of Danshen after oral administration FZHY. These absorbed compounds included 11 compounds and 2 metabolites of Danshen. Among them, the salvianolic acid B, caffeic acid and rosmarinic acid were the effective components of FZHY to anti-hepatic fibrosis effects.