组织工程人工神经诱导管的制作及其生物相容性观测

目的：观测聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[Poly(DL-lactide-co-glycolide)，PLGA]管生物相容性及其神经再生诱导作用。方法：采用肌肉包埋、雪旺细胞直接接种以及坐骨神经缺损桥接预实验的方法观察两种构成比不同的PLGA管[(85：15)或(50：50)]的生物相容性及其神经再生诱导作用。结果:①肌肉包埋条件下。PLGA早期诱发以淋巴细胞及成纤维细胞为主的轻度的非特异性炎性反应，持续到10-12周时基本消退。②采用细胞直接接种的方法，观察到雪旺细胞在PLGA膜上能良好的生长并发生增殖。③体内神经桥接情况下，硅胶管促发有明显的纤维组织增生，而形成包囊包裹于管壁，而两种PLGA管组未见类似现象。④与硅胶管组相似。PLGA(85：15)管能够顺利完成坐骨神经缺损桥接作用，再生神经电生理及组织学评价显示两组无明显差异，PLGA(50：50)管体内神经桥接4周时即出现破裂，不能为坐骨神经桥接提供良好的支持作用。结论：与硅胶管及PLGA(50：50)相比，PLGA(85：15)是一种异物反应生物相容性佳，生物降解速率合适的周围神经组织工程材料。     

GDNF基因修饰的人工神经复合体对大鼠坐骨神经缺损的修复作用研究

目的：应用体外获取的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的雪旺细胞结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)管构建的GDNF基因修饰的人工神经复合体修复大鼠坐骨神经缺损，并对其促神经再生作用予以检测评价。方法：20只成年Wistar大鼠随机分为4组，A组(n=5)细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组；B组(n=5)雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组；C组(n=5)GDNF基因修饰的雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组；D组(n=5)自体神经桥接组。损伤各组12周时应用神经电生理及甲苯胺蓝染色和透射电镜观测神经再生情况。结果：12周时再生神经运动传导速度检测、甲苯胺蓝染色轴突形态计量学分析及透射电镜超微结构观察结果提示C组优于A、B组，而与D组相比无明显差异。结论：雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足，而可能达到与自体神经移植相似的效果。     

人胚雪旺细胞组织工程神修复坐骨神经缺损的实验研究

目的探索人胚雪旺细胞作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性.方法通过组织工程方法用PLGA导管和polyglactin 910纤维负载人胚雪旺细胞预先构置好人工神经,然后用于修复大鼠20 mm的坐骨神经缺损,并与神经切断后原位缝合以及用单纯的PLGA导管进行修复的实验组进行对照.通过活体肢体功能观察、靶器官肌肉测量、电生理检测、辣根过氧化物酶示踪、连续组织切片图像分析以及透射电镜等检查神经再生情况.结果人工神经修复组神经再生良好,效果接近于神经原位缝合组,明显优于单纯的PLGA导管修复组.结论人胚雪旺细胞构建的人工神经可以修复20mm的周围神经缺损.     

共聚比不同的两种聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物材料生物相容性观测

背景近年来,α-羟基酸及其衍生物合成的脂肪族聚酯,如聚乳酸、聚羟基乙酸等已广泛用于周围神经组织工程的支架材料研究,这种支架有可能克服因自体神经移植缺乏及供区的永久性失神经支配以及供受区神经匹配等问题,提高神经诱导作用.目的对共聚比为(8515)及(5050)的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物材料的生物相容性及神经再生诱导作用进行对比观测.设计分组观察对比实验.单位解放军第三军医大学附属新桥医院骨科.材料清洁级健康成年Wistar大鼠66只,雌雄不拘,体质量180～200 kg;共聚比为(8515)及(5050)的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物.方法实验于2001-11/2002-12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所6室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成.①许旺细胞的培养及与聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜的共培养观察将培养的许旺细胞接种于聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜上,应用扫描电镜观察细胞在共聚物膜上的生长情况.②聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜材料肌肉包埋组织学观察取Wistar大鼠15只,实验动物按随机数字法分以1,2,4,8和12周为时相点分为5组,每组3只.将共聚物材料(8515)裁剪成10 mm×5 mm×0.3 mm的膜,植入大鼠椎旁肌内,各时相点切取包含聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜在内的周围组织进行苏木精-伊红染色.③聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物管材料样品桥接大鼠坐骨神经缺损预实验取Wistar大鼠51只,分为共聚物8515管组、共聚物5050管组和硅胶管组,各组以2,4.6,8和12周为观察时相点,除12周为5只大鼠外,其余各时相点均为3只大鼠.于各时相点对各组材料进行大体观察及12周对大鼠进行再生神经运动传导速度测定,并取材桥接管中新生神经中段进行甲苯胺蓝染色,光镜观察.主要观察指标主要结局①大鼠肌肉包埋条件下聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物组织学观察.②坐骨神经缺损桥接大鼠实验模型应用组织学及神经电生理学检测聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物管神经诱导作用.次要结局许旺细胞和共聚物共培养条件下许旺细胞的生长行为观察.结果66只大鼠均进入结果分析.①大鼠肌肉包埋条件下聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物组织学观察结果聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物早期诱发以淋巴细胞及成纤维细胞为主的轻度的非特异性炎性反应,持续到10～12周时基本消退.②许旺细胞的培养及与聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜的共培养观察结果许旺细胞在聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜上能良好的生长并发生增殖.③大鼠体内神经桥接实验结果大体观察硅胶管促发有明显的纤维组织增生,而形成包囊包裹于管壁,而两种聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物管组未见类似现象;12周再生神经运动传导速度聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物8515管组与硅胶管组无显著差别[(17.03±0.66),(17.15±0.76)m/s,P＞0.05];共聚物8515管组髓鞘厚度、神经纤维直径、轴突数及神经组织面积比与硅胶管组均无显著差别[(0.45±0.16)μm,(3.96±1.73)μm,(10 135±1 053)个/mm2,(23.4±2.7)%比(0.45±0.19)μm,(4.07±1.86)μm,(9 879±1 491)个/mm2,(23.6±3.1)%,P＞0.05];而聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(5050)管体内神经桥接4周时即出现破裂,不能为坐骨神经桥接提供良好的支持作用.结论与硅胶管及聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(5050)相比,聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(8515)是一种异物反应小、生物相容性佳,生物降解速率合适的周围神经组织工程材料.     

共聚比不同的两种聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物材料生物相容性观测

背景：近年来，α-羟基酸及其衍生物合成的脂肪族聚酯，如聚乳酸、聚羟基乙酸等已广泛用于周围神经组织工程的支架材料研究，这种支架有可能克服因自体神经移植缺乏及供区的永久性失神经支配以及供受区神经匹配等问题，提高神经诱导作用。 目的：对共聚比为（85：15）及（50：50）的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物材料的生物相容性及神经再生诱导作用进行对比观测。 设计：分组观察对比实验。 单位：解放军第三军医大学附属新桥医院骨科。 材料：清洁级健康成年Wistar大鼠66只，雌雄不拘，体质量180～200kg；共聚比为（85：15）及（50：50）的聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物。方法：实验于2001-11／2002-12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所6室，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。①许旺细胞的培养及与聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜的共培养观察：将培养的许旺细胞接种于聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜上，应用扫描电镜观察细胞在共聚物膜上的生长情况。②聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜材料肌肉包埋组织学观察：取Wistar大鼠15只，实验动物按随机数字法分以1，2,4，8和12周为时相点分为5组，每组3只。将共聚物材料（85：15）裁剪成10mm&;#215;5mm&;#215;0．3mm的膜，植入大鼠椎旁肌内，各时相点切取包含聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜在内的周围组织进行苏木精-伊红染色。③聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物管材料样品桥接大鼠坐骨神经缺损预实验：取Wistar大鼠51只，分为共聚物85：15管组、共聚物50：50管组和硅胶管组，各组以2，4．6，8和12周为观察时相点，除12周为5只太鼠外，其余各时相点均为3只大鼠。于各时相点对各组材料进行大体观察及12周对大鼠进行再生神经运动传导速度测定，并取材桥接管中新生神经中段进行甲苯胺蓝染色，光镜观察。 主要观察指标：主要结局：①大鼠肌肉包埋条件下聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物组织学观察。②坐骨神经缺损桥接大鼠实验模型应用组织学及神经电生理学检测聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物管神经诱导作用。次要结局：许旺细胞和共聚物共培养条件下许旺细胞的生长行为观察。 结果：66只大鼠均进入结果分析。①大鼠肌肉包埋条件下聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物组织学观察结果：聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物早期诱发以淋巴细胞及成纤维细胞为主的轻度的非特异性炎性反应，持续到10～12周时基本消退。②许旺细胞的培养及与聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜的共培养观察结果：许旺细胞在聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物膜上能良好的生长并发生增殖。③大鼠体内神经桥接实验结果：大体观察：硅胶管促发有明显的纤维组织增生，而形成包囊包裹于管壁，而两种聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物管组未见类似现象；12周再生神经运动传导速度聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物85：15管组与硅胶管组无显著差别[（17．03&;#177;0．66），（17．15&;#177;0．76）m／s，P〉0．05]；共聚物85：15管组髓鞘厚度、神经纤维直径、轴突数及神经组织面积比与硅胶管组均无显著差别[（0.45&;#177;0．16）μm，（3．96&;#177;1．73）μn，（10135&;#177;1053）个／mm^2，（23．4&;#177;2．7）％比（0．45&;#177;0．19）μm，（4．07&;#177;1.86）μm，（9879&;#177;1491）个／mm^2，（23．6&;#177;3．1）％，P〉0．05];而聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物（50：50）管体内神经桥接4周时即出现破裂，不能为坐骨神经桥接提供良好的支持作用。 结论：与硅胶管及聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物（50：50）相比，聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物（85：15）是一种异物反应小、生物相容性佳，生物降解速率合适的周围神经组织工程材料。     

人胚雪旺细胞组织工程神经修复坐骨神经缺损的实验研究

目的：探索人胚雪旺细胞作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性。方法：通过组织工程方法用PLGA导管和polyglactin 910纤维负载人胚雪旺细胞预先构置好人工神经，然后用于修复大鼠20mm的坐骨神经缺损，并与神经切断后原位缝合以及用单纯的PLGA导管进行修复的实验组进行对照。通过活体肢体功能观察、靶器官肌肉测量、电生理检测、辣根过氧化物酶示踪、连续组织切片图像分析以及透射电镜等检查神经再生情况。结果：人工神经修复组神经再生良好，效果接近于神经原位缝合组，明显优于单纯的PLGA导管修复组。结论：人胚雪旺细胞构建的人工神经可以修复20mm的周围神经缺损。     

聚乳酸聚羟基乙酸共聚物三维神经导管修复周围神经缺损

背景:异体神经移植由于存在难以消除的宿主免疫排斥反应,限制了其使用,许多学者试图用其他组织替代来弥补以上不足,但效果均不满意.目前,尚没有研制出公认的效果满意的人工神经,自体神经移植至今仍被认为是最佳选择.目的:观察聚乳酸聚羟基乙酸共聚物(PLGA,85∶15)三维神经导管修复大鼠周围神经缺损的可行性,及神经导管内微丝支架的作用和不同数量微丝对神经再生的影响.方法:40只成年SD大鼠随机数字表法分为4组,制作大鼠12 mm的左侧坐骨神经缺损模型,用该导管桥接大鼠12 mm的坐骨神经缺损.A组:PLGA神经导管组;B组:PLGA神经导管内纵形放入20根PLGA微丝;C组:PLGA神经导管内纵形放入40根PLGA微丝;D组:自体神经移植组.A、B、C组神经导管内均注入层粘蛋白+神经生长因子混合液.造模后动态观察大鼠肌肉萎缩、跛行情况,测量神经导管内再生神经的传导速度、小腿三头肌湿质量恢复率.对再生神经中1/3段行组织学观察及图像分析以评价神经修复的效果.结果与结论:造模后各组再生神经均已通过神经导管长入远端,B、D组再生神经较A、C组粗大;再生神经的运动神经传导速度B组和D组明显快于A组和C组(P < 0.05);A组、C组肌肉萎缩最明显,而B组、D组肌肉萎缩较轻且肌肉萎缩程度基本相当.病理图像分析神经纤维计数以D组最多,B组次之,而与A组、C组相比差异均有显著性意义(P < 0.05),B组与D组的再生神经纤维数量及成熟程度均要明显优于A组和C组.提示新型的PLGA三维神经导管能有效引导SD大鼠坐骨神经长过12 mm的神经缺损,是一种较理想的神经导管;神经导管内微丝支架能有效引导神经再生,数量过多反而可能抑制神经再生.     

碱性成纤维细胞生长因子促神经再生的实验研究

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对神经再生的影响。方法:用硅胶管桥接大鼠坐骨神经6mm长的缺损,管内注入生理盐水稀释的bFGF,对照组注入等量的生理盐水,分别于术后1、3、5周作神经电生理检查及组织形态学检查。结果:bFGF组运动神经传导速度、复合肌肉动作电位振幅、神经纤维密度、轴突直径、髓鞘厚度均优于对照组。结论:bFGF能促进神经再生。     

同种异体神经修复鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的：研究无细胞基膜管桥接鼠坐骨神经缺损后的神经再生效果。方法：正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管，桥接鼠坐骨神经20mm缺损。实验分3组：无细胞基膜管移植组(A组)；自体神经移植组(B组)；异体神经移植组(C组)。术后进行肌电图、组织形态学及图像分析仪检查。结果：A组再生神经有大量轴突通过移植体，术后2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组(ta=2．101，P&;lt;0．05；tb=5．00，P&;lt;0．05)，3个月时无显著性差异。髓鞘厚度在术后3个月时亦低于B组。有显著性差异(ta=5．68，P&;lt;0．05)。轴突直径及数目两组无差异。结论：无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移，是一种良好的神经移植替代材料。     

同种异体神经修复鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的研究无细胞基膜管桥接鼠坐骨神经缺损后的神经再生效果.方法 正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管,桥接鼠坐骨神经 20 mm缺损.实验分 3组无细胞基膜管移植组(A组);自体神经移植组(B组);异体神经移植组(C组).术后进行肌电图、组织形态学及图像分析仪检查.结果 A组再生神经有大量轴突通过移植体,术后 2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于 B组(ta=2.101, P< 0.05; tb=5.00, P< 0.05), 3个月时无显著性差异.髓鞘厚度在术后 3个月时亦低于 B组,有显著性差异(ta=5.68, P< 0.05).轴突直径及数目两组无差异.结论 无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移,是一种良好的神经移植替代材料.