lncRNA FOXCUT调控Notch通路抑制结肠癌细胞增殖、侵袭的实验研究#br#

目的　研究长链非编码RNA（lncRNA）FOXC1启动子临近转录体（FOXCUT）对结肠癌细胞（HCT116）增殖、侵袭的影响及作用机制。方法　向HCT116细胞转染FOXCUT siRNA（FOXCUT siRNA组）,以转染阴性siRNA为阴性对照组（FOXCUT siRNA-NC组）,未转染组为正常对照组（NC组）,通过qPCR法确定FOXCUT干扰效果,并检测结肠癌及癌旁组织、人结肠癌细胞株（SW480、SW620、HCT116、HT29）和人正常结肠上皮细胞（NCM460）中FOXCUT mRNA表达水平;通过CCK-8、集落形成实验和Transwell实验检测沉默FOXCUT对HCT116细胞增殖、集落形成能力及侵袭能力的影响;qPCR检测沉默FOXCUT后HCT116细胞中Notch1、Hes1 mRNA表达变化;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测HCT116细胞中Notch1、Hes1蛋白表达情况。结果　与癌旁组织比较,结肠癌组织中FOXCUT mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）;与NCM460细胞比较,SW480、SW620、HCT116、HT29结肠癌细胞株中FOXCUT mRNA表达水平均显著增高（P＜0.05）,其中以HCT116细胞中表达水平最高;与FOXCUT siRNA-NC组比较,FOXCUT siRNA组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平显著降低（P＜0.01）;NC组、FOXCUT siRNA-NC组HCT116细胞中FOXCUT mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）;沉默FOXCUT可显著抑制细胞增殖、集落形成能力及侵袭（P＜0.05）,并抑制Notch1、Hes1 mRNA及蛋白表达（P＜0.01）。结论　沉默FOXCUT可抑制结肠癌HCT116细胞增殖及侵袭,可能与抑制Notch通路有关。     

雷公藤红素通过活性氧诱导结肠癌SW620细胞凋亡

目的:探讨雷公藤红素(celestrol)诱导KRAS驱动的结肠癌SW620细胞产生凋亡的作用和机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法检测细胞增殖;免疫印迹法检测蛋白表达;流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡、细胞周期、线粒体膜电位;荧光显微镜检测细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)。结果:雷公藤红素明显抑制SW620细胞的增殖活性;雷公藤红素下调SW620胞内的p-Akt、NF-κB、Survivin表达,激活caspase-7、caspase-3 和PARP;雷公藤红素增加SW620细胞内的ROS、降低线粒体膜电位、阻滞细胞周期于G₂/M期和诱导凋亡。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制雷公藤红素引起的上述作用。结论:通过诱导细胞内ROS的累积导致细胞内线粒体膜电位的下降进而触发细胞发生凋亡是雷公藤红素诱导SW620细胞凋亡的作用机制之一。     

槐定碱对人结肠腺癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响

目的考察槐定碱对人结肠癌SW620细胞的增殖影响及探讨其诱导凋亡作用。方法MTT法测定槐定碱对SW620细胞的半数抑制浓度;光学显微镜、荧光显微镜及电镜观察细胞凋亡形态变化;流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果实验结果显示槐定碱对体外培养的SW620细胞增殖具有明显抑制作用,并可诱导其发生凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,48hIC50=2.8mmol.L-1。凋亡细胞表现为细胞固缩、变圆、核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化。DNA ladder结果显示有凋亡引起的"梯状"条带出现。流式细胞仪细胞周期分析结果表明,随着槐定碱作用时间的延长,G0-G1期细胞增多,同时S期细胞比例也相应增高。结论槐定碱对体外培养SW620细胞生长增殖有明显抑制作用,其作用机制与阻滞细胞周期的进程,诱导细胞凋亡相关。     

LncRNA-ANCR介导的组蛋白甲基化酶EZH2对结直肠癌侵袭与转移的调控

目的　探讨lncRNA-ANCR 与组蛋白甲基转移酶EZH2 的表达及其与结直肠癌细胞侵袭与转移的关系。方法　培养结肠癌SW620 细胞系，转染ANCR-siRNA 至细胞，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测ANCR 和EZH2 表达，Western blot 检测EZH2 蛋白表达水平，采用RNA pull-down 和免疫共沉淀的方法检测ANCR 与EZH2 的相互作用关系，Transwell 实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移能力。结果　结肠癌SW620 细胞中ANCR 和EZH2 的表达均显著高于正常结肠上皮细胞（P< 0.05）。转染ANCR-siRNA 的SW620 细胞中ANCR 的表达较转染阴性对照质粒的SW620 细胞显著降低，且EZH2 的mRNA 和蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。RNA pull-down 与免疫共沉淀的结果显示ANCR 可与EZH2 特异性结合。而Transwell 实验和划痕实验显示转染ANCR-siRNA 的SW620 细胞的侵袭和迁移能力均显著低于转染阴性对照质粒的SW620 细胞（P<0.05）。结论　结直肠癌细胞中ANCR 与EZH2 的表达均上调，ANCR 可能通过特异性结合EZH2 调节结直肠癌细胞的侵袭和转移。     

苦参碱对结肠癌细胞SW620增殖侵袭及TGF-β1/Smad4蛋白表达的影响

目的 探讨苦参碱对结肠癌细胞株SW620增殖、侵袭能力及对TGF-β1、Smad4蛋白表达的影响。方法 采用CCK8及平板细胞克隆形成实验来研究苦参碱对SW620细胞增殖的影响,采用Transwell小室细胞运动实验来研究苦参碱对SW620细胞侵袭转移的影响,采用细胞蜡块免疫组化定量分析苦参碱对SW620细胞TGF-β1、Smad4、Ki-67及E-cadherin蛋白表达的影响。结果 苦参碱处理后结肠癌细胞株SW620的增殖及侵袭能力明显减弱,结肠癌SW620细胞中TGF-β1及Smad4蛋白表达均缺失,苦参碱对二者蛋白表达未见明显影响。结论 实验表明苦参碱能抑制结直肠癌SW620细胞的增殖侵袭,但与TGF-β1/Smad4信号通路机制可能无关。     

左金丸联合西妥昔单抗诱导KRAS突变肠癌细胞铁死亡作用研究

目的:探讨左金丸(ZJW)对KRAS突变的人结肠癌细胞西妥昔单抗(CET)抵抗的效果及机制。方法:采用Sanger测序法检测SW620、Lovo、HCT116、HT29和Caco2细胞KRAS基因突变状态；采用CCK-8法检测ZJW、CET、ZJW联合CET以及联合不同细胞死亡抑制剂对上述细胞存活率的影响，并观察ZJW联合CET对KRAS突变型细胞(SW620、Lovo及HCT116)耐药性的影响；流式细胞术、比色法和FerroOrange荧光探针检测和观察ZJW、CET以及它们联合作用对KRAS突变型细胞内ROS、GSH及Fe²⁺水平的影响；Western blot和Real-time PCR法检测ZJW联合CET对铁死亡相关通路蛋白和mRNA的调控作用。结果:KRAS突变型细胞为HCT116(KRAS^G13D),Lovo(KRAS^G13D),SW620(KRAS^G12V),KRAS野生型细胞为HT29和Caco2;与125μg/mL CET处理组比较，相同浓度CET明显降低KRAS野生型细胞Ca...     

EGCG对TF/Ⅶa/PAR2促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织因子(TF)/凝血因子Ⅶa/蛋白酶激活受体(PAR)2促进结肠癌细胞株SW620细胞增殖与迁移的干预作用.方法 用不同浓度EGCG、蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa刺激SW620细胞,采用MTT法、transwell法分别检测细胞增殖及迁移能力,实时定量PCR检测细胞TF及半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)7 mRNA表达,发色底物法与Western blot分别检测TF活性、Caspase-7蛋白表达.结果 与PAR2-AP或Ⅶa单独处理相比,EGCG+PAR2-AP、EGCG+Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用明显降低,TFmRNA表达及活性下降,Caspase-7 mRNA及蛋白表达上调(P＜0.05).结论 EGCG可干预SW620细胞TF和Caspase-7的表达,抑制TF/Ⅶa/PAR2对细胞增殖与迁移的促进作用.     

青蒿琥酯对人结肠癌SW620细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白的影响

目的观察青蒿琥酯对人结肠癌细胞系SW620细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p16、p21、p27)表达的变化,探讨ART可能的作用机制。方法:不同浓度青蒿琥酯作用SW620细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot分别检测细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p16、p21、p27)蛋白变化。结果:在一定浓度范围之内,青蒿琥酯能抑制SW620细胞增殖,细胞周期发生G1—S期阻滞,并上调p21、p27的蛋白、mRNA水平,但对p16的蛋白、mRNA水平没有影响。结论:青蒿琥酯可抑制人结肠癌细胞增殖,其机制与上调p21、p27蛋白有关。     

MG与人类端粒DNA G-四链体相互作用的研究

目的:研究MG对人类端粒DNA G-四链体的稳定作用,为发展新型抗癌药物提供理论依据。方法:采用紫外光谱法和荧光光谱法研究MG与端粒DNA G-四链体的相互作用。结果:MG与杂化型端粒DNA G-四连体有很好的亲和性。结论:MG作为平面共轭的小分子配体与端粒DNA G-四链体良好的结合能力可以为修饰和设计更加优良的端粒DNA G-四链体配体提供依据。     

浙贝碱与DNA G-四链体复合物的分子动力学模拟研究

目的:探讨浙贝碱与平行型DNA G-四链体的结合特征,为发展新型DNA G-四链体稳定剂提供理论基础.方法:采用分子对接方法确定浙贝碱在平行型DNA G-四链体中的初始结合位置,通过动力学模拟寻找平衡结构.结果:浙贝碱能够选择性的作用于平行型DNA G-四链体的沟槽与loop共同形成的位点,并在动力学过程中稳定存在.结...     

重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及其联合5-氟尿嘧啶(5-FU)和洛铂的抗肿瘤效果。方法 采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;分别观察PP-22联合5-FU和洛铂对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;碘化丙锭单染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blot法检测PP-22作用后细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 重楼单体PP-22能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-22浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组和DMSO组相比有显著差异;PP-22联合不同浓度的5-FU和洛铂作用于SW620细胞48 h,可提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性;不同浓度PP-22作用于SW620细胞后,细胞周期阻滞于S期;PP-22作用后存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。结论 PP-22能显著抑制人结肠癌SW620细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性。     

脱氧核苷酸钠对结肠癌细胞化疗敏感性及IL-6、IL-8、Survivin表达的影响

摘要：目的:探究脱氧核苷酸钠对结肠癌细胞化疗敏感性及白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、Survivin表达的影响。方法:将结肠癌细胞分为6组:对照组、奥沙利铂组(100μg·L-1)、脱氧核苷酸钠组(100μmol·L-1)、脱氧核苷酸钠低、中、高剂量(20,60,100μmol·L-1)+奥沙利铂(100μg·L-1)组。采用MTT实验和流式细胞仪检测SW620细胞增殖和凋亡情况,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测SW620细胞中IL-6、IL-8、Survivin mRNA表达情况,蛋白免疫印迹（Western blot）检测SW620细胞中IL-6、IL-8、Survivin蛋白表达情况。结果:脱氧核苷酸钠组SW620细胞增殖率、凋亡率、IL-6、IL-8、Survivin mRNA及蛋白表达水平同对照组相比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。奥沙利铂组和脱氧核苷酸钠+奥沙利铂各组SW620细胞增殖率显著低于对照组（P<0.05）,脱氧核苷酸钠中、高剂量+奥沙利铂组SW620细胞增殖率显著低于奥沙利铂组和脱氧核苷酸钠低剂量+奥沙利铂组（P<0.05）;奥沙利铂组和脱氧核苷酸钠+奥沙利铂组SW620细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05）,脱氧核苷酸钠中、高剂量+奥沙利铂组SW620细胞凋亡率显著高于奥沙利铂组和脱氧核苷酸钠低剂量+奥沙利铂组（P<0.05）;奥沙利铂组和脱氧核苷酸钠+奥沙利铂组SW620细胞中IL-6、IL-8、Survivin mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组（P<0.05）,脱氧核苷酸钠中、高剂量组SW620细胞中IL-6、IL-8、Survivin mRNA及蛋白表达水平显著低于奥沙利铂组和脱氧核苷酸钠低剂量+奥沙利铂组（P<0.05）,且呈剂量依赖性。结论:脱氧核苷酸钠可能通过下调结肠癌细胞中IL-6、IL-8、Survivin表达,增加结肠癌细胞化疗敏感性。     

miR-27a对两种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨microRNA-27a(miR-27a)对2种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法应用miR-27a反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO)在体外转染结肠癌细胞系SW620和HCT116,设置转染无义序列组作为对照组。RT-PCR检测细胞miR-27a表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测转染细胞FOXO1蛋白表达。结果与对照组相比,转染miR-27a ASO后结肠癌细胞系SW620和HCT116的miR-27a表达水平均明显降低(P<0.001),增殖能力和侵袭能力均受到明显抑制(P<0.01),FOXO1蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论抑制miR-27a表达可显著降低结肠癌细胞系SW620和HCT116的增殖能力和侵袭能力,而调控下游FOXO1蛋白表达可能是miR-27a参与结肠癌细胞增殖和侵袭的主要机制。     

银杏叶提取物对结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的研究银杏叶提取物（EGB）对SW480结肠癌细胞生长增殖的影响。方法体外培养人结肠癌SW480细胞后,给予不同浓度（100,200,300,400,500 mg·L^-1）银杏叶提取物干预后,采用CCK-8检测人结肠癌SW480细胞的增殖抑制率,选择最佳作用浓度;随后,在此作用浓度下观察EGB作用不同时间对人结肠癌SW480细胞增殖抑制率的影响,并通过Western blot检测人结肠癌SW480细胞内Ki67和PCNA的表达情况。结果银杏叶提取物可抑制结肠癌SW480细胞的增殖,且随着作用浓度增加和作用时间的延长其抑制作用逐渐增强;300 mg·L^-1银杏叶提取物对结肠癌SW480细胞增殖的抑制效果最明显。银杏叶提取物干预的结肠癌SW480细胞内Ki67和PCNA的表达均明显下调。结论银杏叶提取物可呈浓度和时间依赖性地抑制结肠癌SW480细胞的增殖。     

冬凌草甲素抑制SW620结肠癌细胞增殖与BMP7-p53通路的相关性研究

目的 研究冬凌草甲素（ORI）对人结肠癌细胞SW620的增殖抑制、诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法 采用结晶紫染色研究ORI（5、10、15、20、25 μmol/L）对SW620细胞的增殖抑制作用;流式细胞术研究ORI（10、15、20 μmol/L）诱导SW620细胞凋亡作用;采用Western blotting技术研究ORI对SW620细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、凋亡相关指标（Caspase-3）、骨形态发生蛋白7（BMP7）、p53蛋白表达的影响;转染重组p53腺病毒实现p53的外源性过表达,p53抑制剂PFTα降低BMP7水平,检测ORI是否通过调节p53表达影响细胞增殖凋亡、BMP7-p53信号通路。结果 与对照组比较,ORI可以时间和剂量依赖性地抑制SW620细胞生长,上调PCNA蛋白水平;流式细胞术以及Western blotting检测结果显示,ORI明显增加细胞凋亡率,促进Caspase-3蛋白表达,并且上调BMP7和p53蛋白表达;外源性过表达p53加强了ORI对上述蛋白表达的调控,PFTα则部分抑制了ORI的作用。结论 ORI可以通过激活BMP7-p53信号通路抑制SW620细胞增殖、诱导凋亡。     

探讨NDUFA13抑制结肠癌细胞增殖的机制

目的 探讨抑癌基因Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物13(NDUFA13)抑制结肠癌生长的机制.方法 以人结肠正常组织为对照,用实时荧光定量PCR及免疫组织化学方法检测NDUFA13及miR-7在60例人结肠癌中的表达；体外细胞模型研究NDUFA13基因对结肠癌细胞株增殖水平的影响.结果 与人结肠正常组织比较,NDUFA13及miR-7在人结肠癌表达显著下调(P＜0.01),两者的表达呈正相关；在人结肠癌细胞株SW480及HCT-116中高表达NDUFA13能够显著抑制结肠癌细胞的增殖.结论 抑癌基因NDUFA13在人结肠癌中通过促进miR-7的成熟而抑制肿瘤的发生发展.     

固公果根提取物促进结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨固公果根提取物促进结肠癌细胞凋亡及机制研究。方法 分别采用MTT法、DAPI染色及流式细胞术检测固公果根提取物对结肠癌细胞增殖活性及细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹（Western-Blot）法检测凋亡相关蛋白的活性表达水平。结果 固公果根提取物能显著抑制结肠癌SW620和LOVO细胞增殖,促进两种结肠癌细胞凋亡,上调凋亡相关基因Keap-1、Bax的蛋白表达,下调Nrf2、HO-1以及Bcl2蛋白的表达。结论 固公果根提取物能显著抑制人结肠癌细胞SW620和LOVO增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能涉及调控凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达,且与激活Nrf2氧化应激通路有关。     

缺氧对血管生成素-2在人结肠癌细胞SW480中表达的影响

目的探讨缺氧对血管生成素-2（Ang-2）在人结肠癌细胞SW480中表达的影响。方法采用RT—PCR检测常氧和缺氧状态（体积百分数95％N2，5％CO2；2，4，8h）下体外培养的人结肠癌细胞SW480中Ang-2的mRNA表达水平。结果与常氧组相比，Ang-2 mRNA的表达在人结肠癌细胞SW480中随缺氧时间延长而逐渐上升（P〈0．05），呈时间依赖性。结论缺氧可以在基因转录水平上调人结肠癌细胞SW480中Ang-2的表达，有利于肿瘤的生长和转移。     

具抑制端粒酶活性的G-四链体小分子配体研究进展

端粒酶能阻止端粒的缩短使细胞无限增殖形成肿瘤。端粒3′端富G序列在一定生理条件下可形成具有抑制端粒酶活性的G-四链体结构,从而达到促进肿瘤细胞凋亡的作用。能够诱导DNA特别是致癌基因富G区域形成并稳定G-四链体结构的配体具有重要的抗肿瘤意义。以G-四链体为抗癌药物作用靶点对化合物进行筛选和结构设计是目前化学家和生物学家的关注点。该文对近年来以G-四链体为靶点的小分子端粒酶抑制剂的研究进行了综述。     

二甲双胍在结肠癌中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应

目的 探讨二甲双胍（MET）对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。方法 采用CCK-8、流式细胞术及Transwell检测MET对结肠癌细胞SW480和SW620增殖、凋亡及侵袭的影响,qRT-PCR检测5种lncRNA在结肠癌细胞中的表达,Western blotting检测MET和/或MALAT1基因敲减在体外对PI3K/AKT和ERK通路活性的影响。结果 MET在体外对SW480和SW620细胞具有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P<0.05）。MET可促进SW480和SW620细胞凋亡（P<0.05）。在5种lncRNA中,lncRNA-MALAT1在SW480和SW620细胞中的表达水平最高（P<0.01）。siRNA可抑制lncRNA-MALAT1表达,并进一步增强MET介导的抗结肠癌作用（P<0.05）。MET可下调结肠癌细胞中lncRNA-MALAT1的表达（P<0.05）,并通过PI3K/AKT和ERK信号通路与lncRNA-MALAT1敲减协同抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡（P<0.01）。结论 MET在结肠癌细胞中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应。