甘草酸二胺对腹膜透析模型大鼠腹膜功能的保护作用研究

目的研究甘草酸二胺对腹膜透析模型大鼠腹膜功能保护作用机制。方法将清洁级雄性大鼠40只随机分成4组,分别为空白对照组、模型组、己酮可可碱组、甘草酸二胺组,每组10只,连续实验4周,4周后观察大鼠腹膜功能(超滤量、Durea/Purea)和相关指标变化(尿素氮、肌酐及清除率、TNF-α、MCP-1)。结果模型组超滤量、D4/DO较己酮可可碱组、甘草酸二胺组降低,Durea/Purea升高(F=8.935、7.824、9.361,P<0.05),己酮可可碱组较甘草酸二胺组超滤量、Durea/Purea、D4/D0降低,但2组比较差异不显著(P>0.05)。与模型组比较,己酮可可碱组、甘草酸二胺组尿素氮、肌肝清除率升高(F=7.363、8.923,P<0.05),己酮可可碱组较甘草酸二胺组尿素氮、肌酐清除率升高,但2组比较差异不显著(P>0.05);与模型组比较己酮可可碱组、甘草酸二胺组TNF-α、MCP-1降低(F=7.824、7.911,P<0.05),甘草酸二胺组较己酮可可碱组TNF-α、MCP-1降低,2组比较差异不显著(P>0.05)。结论 4.25%葡萄糖腹膜透析液能使大鼠腹膜功能受损,甘草酸二胺能减轻腹膜损伤,降低腹膜功能恶化。     

己酮可可碱对腹膜纤维化形成的干预作用

目的 探讨己酮可可碱(PTX)对SD大鼠腹膜纤维化病变的影响和可能的机制.方法 将大鼠随机分成3组:对照组,模型组和治疗组(PTX组).用4.25%含糖腹膜透析液 脂多糖腹腔注射制作腹膜纤维化模型,即模型组;PTX组同时每日给予PTX 6 mg/kg腹腔注射.5周后行2 h腹膜平衡试验测定腹膜功能,留取血液及腹膜透析液用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)浓度,并留取壁层腹膜组织做苏木精-伊红、Masson染色,RT-PCR检测肠系膜组织VEGF mRNA表达水平.结果 ①模型组及PTX组的壁层腹膜较对照组增厚,而PTX组较模型组明显减轻;②模型组及PTX组大鼠超滤量及2 h透析液葡萄糖浓度/0 h透析液葡萄糖浓度(D2/D0)比值均较对照组减少(均P<0.05),其中模型组较PTX组明显减少;与对照组比较,模型组及PTX组大鼠透析液尿素浓度/血浆尿素浓度(Durea/Purea)比值有明显增加(均P<0.05),其中模型组较PTX组增加明显;③PTX组腹透液及血清中VEGF浓度,肠系膜组织VEGF mRNA表达较模型组明显下降(均P<0.05).结论 己酮可可碱能有效地预防腹膜纤维化,其机制可能与调节VEGF的表达有关.     

氧化应激在腹膜纤维化大鼠模型腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的:研究氧化应激在腹膜纤维化大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用;观察抗氧化剂普罗布考的干预效应.方法:采用4.25%高糖腹透液以100 mL/kg 腹腔注射法复制腹膜纤维化大鼠模型,实验分为正常对照组、生理盐水对照组、腹膜纤维化模型组和普罗布考干预组.4周后行腹膜平衡试验,处死大鼠,准确测量超滤量,检测腹膜功能;取肠系膜...     

己酮可可碱对TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响

[目的]探讨己酮可可碱对转化生长因子-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响.[方法]用逆转录-聚合酶链反应检测腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达,用Western blot 检测磷酸化细胞外信号调节激酶.[结果]①0.3 mg/mL己酮可可碱与对照组相比,可下调胶原ⅠmRNA表达32%(P＜0.01),其抑制作用呈时间依赖性关系,作用16 h抑制作用达高峰(0.790vs 0.426,P＜0.001).②TGF-β1可诱导腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达上调(132.00vs 592.00,P＜0.001),以及磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(201.67vs 682.00,P＜0.001).③己酮可可碱可抑制TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达上调(0.945vs 0.594,P＜0.01),并可逆转TGF-β1诱导的磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(682.00vs 426.00,P＜0.001),其抑制作用呈剂量依赖关系.[结论]己酮可可碱可下调腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA的基础表达及TGF-β1诱导的过度表达,同时可逆转TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞细胞外信号调节激酶活性增加.     

己酮可可碱对肝纤维化大鼠抗纤维化作用的观察

目的探讨己酮可可碱在胆管阻塞性大鼠肝纤维化模型中的抗纤维化作用。方法雄性SD大鼠60只,分为假手术组、肝纤维化模型组、己酮可可碱组。比较各组肝组织羟脯氨酸含量和组织学评分。结果己酮可可碱组组织评分为2.38分,较模型组（3.5分）显著下降（P﹤0.05）。羟脯氨酸含量模型组[（108.33±14.54）μg/ml]较假手术组[（15.58±4.25）μg/ml]显著升高（P﹤0.05）,己酮可可碱组为[（67.50±12.48）μg/ml],与模型组比较下降38%。结论己酮可可碱在大鼠胆管阻塞性肝纤维化模型中具有一定的抗纤维化作用。     

苦参碱氯化钠注射液与甘草酸二铵治疗急性白血病化疗后肝损伤的疗效观察

目的:评价苦参碱氯化钠注射液(恒迈)与甘草酸二铵治疗急性白血病化疗后肝损伤的疗效。方法:46例化疗所致轻度肝损伤的急性白血病患者随机分成两组。26例为治疗组,20例为对照组,两组均给予甘草酸二铵治疗。治疗组加用苦参碱氯化钠注射液(恒迈)治疗。观察两组治疗前后ALT、GGT、胆红素的变化及疗效差别。结果:治疗后治疗组的ALT显著低于治疗前,其疗效和肝脏功能改善均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱氯化钠注射液与甘草酸二铵治疗化疗所致肝损伤均有效,而苦参碱氯化钠注射液联合甘草酸二铵起效更快、疗程更短,且降低胆红素效果更为明显,值得临床上推广应用。     

罗格列酮对大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化的影响

目的观察罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对腹膜透析所致腹膜纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为6组:空白对照组(n=5)、生理盐水(NS)组、模型组、二甲亚砜(DMSO)组、低浓度RGZ组、高浓度RGZ组(后5组n=9)。除空白对照组外其余大鼠均置入腹透管,除空白组和NS组外其余组均采用高糖腹膜透析液+红霉素制作慢性腹膜透析无菌性腹膜纤维化的大鼠模型。DMSO组、低浓度RGZ组、高浓度RGZ组分别采用DMSO、1.5mg/kg RGZ、15mg/kg RGZ治疗。透析5周后行1h腹膜平衡试验,检测血糖及血脂,计算超滤量(UF)、初始腹透液与透出液葡萄糖比值(D1/D0)、透出液与血浆尿素氮比值(D/Purea);处死大鼠,取壁层腹膜行H-E及Masson染色,观察腹膜形态改变,半定量计算腹膜单位面积血管数及炎症细胞数;免疫组化检测腹膜转化生长因子(TGF)-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果与空白对照组相比,模型组和DMSO组间皮下基质增厚,血管增生及炎症细胞浸润增加(P<0.05);TGF-β1、α-SMA表达水平增高(P<0.05);RGZ能改善上述病理改变,下调TGF-β1、α-SMA表达(P<0.05);与空白对照组比较,NS组、模型组、DMSO组、低浓度RGZ组及高浓度RGZ组的超滤量和D1/D0减少,D/Purea增加(P<0.05),其中以DMSO组及模型组改变最为显著。两种剂量RGZ间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在大鼠腹膜透析模型中加用罗格列酮能有效保护腹膜功能,抑制腹膜纤维化。     

己酮可可碱对大鼠溃疡性结肠炎治疗作用及其机制

目的:观察己酮可可碱(PTX)对大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型的治疗作用,探讨血栓及血栓前状态(PTS)在溃疡性结肠炎发病中的作用和己酮可可碱作用机制.方法:用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)造大鼠溃疡性结肠炎模型,将大鼠模型随机分为模型组,模型 生理盐水组,模型 己酮可可碱组,另设空白对照组,共4组.观察各组大鼠肠道大体形态和组织学改变;采用血小板黏附仪检测血小板黏附功能( PAdT),智能血液凝聚仪检测血小板的聚集功能(PAgT);ELISA法测定血清中的血栓烷B2( TXB2);单克隆酶联吸附法检测血管性假血友病因子相关抗原(vWF∶Ag);酶联免疫吸附法检测细胞内粘附因子1(ICAM-1).结果:与模型 生理盐水组比较,模型 己酮可可碱组损伤指数下降(6.02±0.74 vs 0.85±0.50,P＜0.01; 5.68±0.60 vs 1.08±0.45,P＜0.01);模型组血小板黏附率和聚集率与空白对照组无明显增加(P＞0.05); 模型组TXB2,vWF∶Ag,ICAM-1均较空白对照组的差异无统计学意义(P＜0.01),经己酮可可碱治疗后,均较模型 生理盐水组降低(P＜0.05).结论:TNBS所诱导大鼠溃疡性结肠炎模型与PTS有一定关系.PTX通过抗凝、抗炎症介质、抗细胞因子而发挥治疗UC作用.     

己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤和TGF-β1、FN分泌的影响

目的研究己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞（HPMC）损伤和TGF-β1、FN分泌的影响。方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并体外培养HPMC。采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平以示细胞损伤程度 ELISA法检测细胞培养液中TGF-β1、FN的水平。结果与单纯对照组相比,2.5%L-PDS致培养液中LDH水平明显增高（P〈0.01） 同时培养液中TGF-β1、FN蛋白质水平增加。在2.5%L-PDS刺激下,100μg/ml己酮可可碱与下调培养液LDH,提高MTT渗入量,并减少TGF-β1、FN蛋白质水平。结论己酮可可碱可拮抗乳酸盐腹膜透析液致HPMC损伤并下调TGF-β1和FN的表达。     

丹参对腹膜纤维化的作用及机制的研究

目的:探讨腹膜纤维化的机制及治疗。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分成腹膜纤维化模型组、给药组、正常组,30天后收集腹膜作病理,免疫组化查间皮细胞MCP-1、C-JUN/AP-1的表达,腹透液计数腹水中细胞总数和巨噬细胞数及测定TGF-β的浓度。结果:给药组比模型组的腹膜纤维化改变轻,TGF-β下降,MCP-1、C-JUN/AP-1的表达减少,腹水巨噬细胞计数减少具有统计学意义。结论:丹参能有效的防治腹膜纤维化的进程。机制可能为抑制腹膜间皮细胞C-JUN/AP-1表达,在转录的水平上降低TGF-β活性,并抑制MCP-1表达,抑制腹膜炎症,减轻纤维化。     

腹膜透析大鼠腹膜组织中HIF-1α和CTGF的表达

目的:探讨尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达及意义。方法:32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、尿毒症组及腹膜透析组,每组8只。尿毒症和腹膜透析组大鼠制备尿毒症模型,腹膜透析组于尿毒症造模成功后第6周开始每天规律行腹膜透析,28d后取4组大鼠新鲜腹膜组织,采用免疫组化及RT-PCR技术检测HIF-1α、CTGF蛋白及mRNA的表达水平,并采用免疫组化技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:4组大鼠腹膜组织中HIF-1α、CTGF蛋白和mRNA的表达水平及α-SMA蛋白表达水平差异均有统计学意义(P均<0.001),尿毒症组上述指标较正常对照组升高,腹膜透析组较尿毒症组升高更明显(P<0.05)。4组腹膜组织中3个蛋白的表达均呈正相关(P<0.05)。结论:腹膜透析大鼠腹膜纤维化的发生可能与HIF-1α、CTGF的表达上调有关。     

鳖甲煎丸对腹膜透析相关腹膜纤维化的影响及机制探讨

目的探讨鳖甲煎丸对腹膜透析(PD)小鼠腹膜纤维化的抑制作用及可能机制。方法采用ICR小鼠4.25%腹透液2.0 mL每日腹腔注射一次,并于第3、5、7天联合脂多糖0.8 mg/kg腹腔注射造模;鳖甲煎丸1.2 g/kg每日灌胃一次,干预6周后,测腹透超滤量,HE染色和Masson染色观察壁层腹膜形态改变及腹膜厚度;Western blot检测脏层腹膜组织N-cadherin、ZO-1的蛋白表达水平,及pAkt、总Akt的蛋白表达水平。结果腹膜透析(PD)组、鳖甲煎丸(BJJW)组与对照(Control)组比较,超滤量均显著下降(P0.05);壁层腹膜均显著增厚(P0.01)。脏层腹膜ZO-1蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高,pAkt也明显升高(均P0.01)。BJJW组与PD组比较,超滤量明显改善(P0.05),壁层腹膜厚度降低(P0.01);脏层腹膜ZO-1蛋白表达增加,N-cadherin蛋白表达下降,pAkt也明显下降(均P0.01)。结论鳖甲煎丸抑制腹膜纤维化,PI3K/Akt信号调节腹膜间皮细胞上皮-间质细胞转分化(EMT)是其机制之一。     

甘草酸二铵对博莱霉素致肺纤维化大鼠血清iNOS及NO水平的影响及其抗肺纤维化的作用机制

目的：探讨甘草酸二铵对博莱霉素（BLM）致肺纤维化的作用,阐明其抗肺纤维化的作用机制。方法：36只Wistar大鼠随机分为正常对照组、博莱霉素所致大鼠肺纤维化组(模型组)及甘草酸二铵组,每组12只。气管内一次性注入博来霉素5 mg/kg复制肺纤维化模型。实验第2天开始,甘草酸二铵组大鼠给以甘草酸二铵75 mg?kg-1?d-1干预,采用腹腔给药,对照组及模型组分别给予生理盐水(10 mL/kg),连续给药27 d。实验第28天处死所有大鼠,腹主动脉取血,测定血清中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及一氧化氮（NO）的水平。同时取大鼠左肺下叶,行HE染色和Masson三联染色观察肺组织病理学变化。结果：光镜下正常对照组大鼠肺组织大致正常,甘草酸二铵组大鼠肺纤维化轻微,而模型组大鼠肺纤维化改变明显。与正常对照组比较,模型组大鼠血清iNOS、 NO水平明显增高（P<0.01）,而甘草酸二铵组无明显变化（P>0.05）;甘草酸二铵组大鼠血清iNOS、NO均低于模型组（P<0.05或P<0.01）。结论：甘草酸二铵可以下调大鼠血清中iNOS及NO的表达,从而减轻肺纤维化。     

钙蛋白酶激活可促进大鼠透析相关性腹膜纤维化

目的 观察钙蛋白酶（CAPN）激活在腹膜纤维化中的表达和作用。方法 将24只SD雄性大鼠随机分为4组：对照组、生理盐水MDL28170（CAPN抑制剂）组、腹膜透析组、腹膜透析+MDL28170组。8周后处死大鼠,观察各组大鼠腹膜厚度、组织中CAPN的活化状态以及纤维连接蛋白(FN)和胶原蛋白I（COL I）蛋白的表达。体外培养原代大鼠腹膜间皮细胞,分为对照组、单纯MDL28170组、转化生长因子（TGF-β）诱导组、MDL28170联合TGF-β干预组,其中MDL28170联合TGF-β干预组按照施加的MDL28170浓度再分为30、20、10 μmol/L组。采用Western blot和免疫荧光检测CAPN活化状态、FN和COL-I在腹膜间皮细胞中的表达。结果 与对照组相比,腹膜透析组大鼠腹膜厚度增加（P<0.05）,腹膜组织CAPN活化程度、FN和COL-I的表达均增加（P<0.05）。应用MDL28170干预后,大鼠腹膜纤维化程度改善,腹膜厚度变薄（P<0.01）,FN和COL-I的表达减少（P<0.01）。体外实验与体内实验结果相符,MDL28170与TGF-β共同孵育的腹膜间皮细胞α-SMA、FN和COL-I的表达量较TGF-β组均减少（P<0.05）。结论 腹膜透析模型大鼠腹膜CAPN的活性、FN和COL-I的表达明显增加,CAPN的活化可以促进腹膜纤维化,抑制其活化可以减轻腹膜纤维化程度。     

转化生长因子-β对大鼠腹膜纤维化的防治研究

目的探讨腹膜纤维化的防治措施。方法Wistar大鼠30只随机分成三组。A组为模型组,每日腹腔注射4.25%的百特透析液20ml,B组为给药组每日腹腔注射透析液同时灌胃给药（血管紧张素转换酶抑制剂）一平苏,C组为空白对照组,每日腹腔注入生理盐水20ml。试验开始30天后取大鼠腹膜作病理组织学检查,同时收集血清和腹透液测定转化生长因子-β。结果A组和B组的腹膜明显纤维化并且转化生长因子-β血清和腹透液中都有增加,与C组差异都有显著性。结论高糖可以诱导腹膜纤维化。腹膜纤维化时转化生长因子-β血清和腹透液中都升高并且可被一平苏抑制。3平苏有抗腹膜纤维化的作用。     

Inhibition effect of small interfering RNA of connective tissue growth factor on the expression of vascular endothelial growth factor and connective tissue growth factor in cultured human peritoneal mesothelial cells

Background The peritoneum response to peritoneal dialysis can lead to fibrosis. The transforming growth factor β1 （TGF-β1 ） plays a key role in regulating tissue repair and remodelling after injury. Connective tissue growth factor （CTGF）, a downstream mediator of TGF-β1 inducing fibrosis, has been implicated in peritoneal fibrosis. Vascular endothelial growth factor （VEGF） plays a key role in angiogenesis that can hasten peritoneal fibrosis. In this study, we investigated the effect of small interfering RNA （siRNA） of CTGF by pRETRO-SUPER （PRS） retrovirus vector on the expression of CTGF and VEGF in human peritoneal mesothelial cells. Methods Retrovirus producing CTGF siRNA were constructed from the inverted oligonucleotides and transferred into packaging cell line PT67 with lipofectamine, and the virus supernatant was used to infect human peritoneal mesothelial cell （HPMC）. The cells were divided into seven groups： low glucose DMEM, low glucose DMEM ＋ TGF-β1 5 ng/ml, low glucose DMEM ＋ TGF-β1 5 ng/ml ＋ PRS-CTGF-siRNA1-4 and low glucose DMEM ＋ TGF-β1 5 ng/ml ＋ PRS. The expression of CTGF and VEGF were measured by semiquantitative RT-PCR and Western blot. Results Low levels of CTGF and VEGF were detected in confluent HPMCs. Following stimulation with TGF-β1 , the levels of CTGF and VEGF were significantly upregulated （P〈0.01）. Introduction of PRS-CTGF-siRNA1-4 resulted in the significant reduction of CTGF mRNA and protein, and VEGF mRNA （P〈0.01）, especially in groups PRS-CTGF-siRNA, and PRS-CTGF-siRNA4. The introduction of PRS void vector did not have these effects （P〉0.05）. Conclusions The expression of CTGF siRNA mediated by PRS retrovirus vector can effectively reduce the level of CTGF and VEGF induced by TGF-β1 in cultured HPMCs. This study may provide potential therapeutic strategies to prevent the peritoneal fibrosis.     

丹参注射液减轻腹透液致大鼠腹膜结构和功能损伤

目的：研究丹参注射液对腹透液（peritoneal dialysis solution,PDS）致大鼠腹膜组织结构和功能损伤的影响及与水通道蛋白1（aquaporin-1,AQP-1）和紧密连接相关蛋白1（zonula occluden-1,ZO-1）的关系。方法：56只SD大鼠分为正常对照组、1.5%PDS组、4.25%PDS组、1.5%PDS＋1%丹参组、4.25%PDS＋1%丹参组、1.5%PDS＋2%丹参组和4.25%PDS＋2%丹参组。腹膜透析液大鼠腹腔注射8周后,检测腹膜透析超滤量、腹膜对物质的清除率和腹透液漏出蛋白含量;光镜和电镜下观察腹膜结构变化;免疫印迹法检测腹膜AQP-1蛋白表达,免疫组织化学法检测腹膜间皮细胞ZO-1和AQP-1蛋白表达。结果：与正常对照组比较,1.5%PDS组和4.25%PDS组大鼠腹膜结构和功能发生改变,包括腹膜病理的改变明显,超滤量减少（P〈0.05）,对肌酐和葡萄糖清除能力下降（P〈0.01）,AQP-1蛋白表达增加（P〈0.05）;1.5%PDS＋2%丹参组和4.25%PDS＋2%丹参组大鼠腹膜结构和功能较单纯腹透液组改善,表现为病理改变缓解,腹膜超滤量以及肌酐和葡萄糖清除率提高。与1.5%PDS组比较,1.5%PDS＋2%丹参组腹膜AQP-1蛋白表达量减少（P〈0.05）。结论：丹参注射液可能通过下调AQP-1蛋白表达拮抗腹透液对腹膜组织结构和功能的损伤。