自体骨髓干细胞经肝动脉移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的 评价自体骨髓干细胞经肝动脉移植对兔急性肝损伤模型的治疗效果,了解促肝细胞生长素(pHGF)在干细胞移植治疗中的协同作用.方法 新西兰雄性大白兔15只,皮下注射50%CCl4橄榄油溶液0.8 ml/kg连续4 d制作急性肝损伤模型.模型动物随机分为实验组A(干细胞移植组),实验组B(干细胞移植+pHGF组)和对照组(各5只).实验组经兔双侧胫骨抽取骨髓约5 ml,采用密度梯度离心法分离骨髓干细胞,制成5 ml细胞悬液,透视下经股动脉插管将骨髓干细胞经肝动脉注入肝脏,对照组注人生理盐水.实验组B在干细胞移植后隔日静脉注射pHGF 2.0 mg/kg共20 d.干细胞移植后2、4、8周抽血进行肝功能检测,8周后取兔肝脏组织标本进行病理学观察.结果 骨髓干细胞肝动脉移植后肝功能逐渐改善,至移植后8周,各组血清AST、ALT活性和TBIL、ALB含量均显著低于术前指标,而球蛋白含量高于术前(P均<0.05),而且各组之间仍有明显差异.病理组织学观察显示实验组肝纤维组织增生程度和肝细胞变性较对照组明显减轻.免疫组化染色可见肝组织内散在分布有CD34阳性肝样细胞,实验组A较对照组多,实验组B最多.结论 自体骨髓干细胞经肝动脉移植对肝损伤有明显治疗作用,可改善肝功能,促进肝组织结构重建,抑制纤维组织增生;pHGF能加速肝组织的修复和肝功能的改善.     

经兔肝动脉自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化的研究

目的 评价自体骨髓干细胞经肝动脉移植对兔肝硬化模型的治疗作用,了解促肝细胞生长素(pHGF)在干细胞移植治疗中的作用,为干细胞移植的临床应用提供实验研究基础.方法 用皮下注射四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液的方法复制兔肝硬化模型.25只肝硬化模型兔根据治疗方法不同分为对照组(5只)、干细胞移植组(10只)和移植+pHGF组(10只).无菌条件下从兔胫骨上端抽取骨髓4～5 ml,采用密度梯度离心法分离骨髓干细胞,在透视下将分离的骨髓干细胞经肝动脉移植于肝脏.术后移植+pHGF组隔日静脉内注射pHGF 2 mg/kg共20 d.然后在移植后4、8、12周分别抽血检测肝功能,12周时取肝脏行病理学检查.分别对3组12周时肝功能指标进行比较,各组间比较用方差分析.结果 在移植骨髓干细胞后,动物肝功能逐渐改善,至移植治疗后12周,各组肝功能与术前比较均有明显改善.干细胞移植组术后12周,兔血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)逐渐降低,由术前(73.0±10.6)、(152.4±22.8)U/L分别降至移植12周后的(48.0 ±1.0)、(86.7±2.1)U/L(F值分别为72.38、78.86,P值均<0.05);白蛋白(ALB)和凝血酶原活动度(PTA)逐渐上升,分别由(27.5±1.8)g/L和28.3%上升至干细胞移植后12周的(33.2±0.5)g/L和44.1%(F值分别为56.37、126.47,P值均<0.05);但12周时干细胞移植组除PTA外,其他上述血清酶改变与对照组相比差异无统计学意义(P值均>0.05).而干细胞移植+pHGF组肝功能指标改变较移植组迅速,术后12周时ALT、AST分别降至(43.3±0.6)、(78.7±4.0)U/L,而ALB、PTA上升至(35.7±0.4)g/L和50.5%,这些指标改变与对照组相比均差异均有统计学意义(F值分别为47.38、23.52、52.27、174.45,P值均<0.05).病理学检查显示干细胞移植组肝细胞形态较规整,无明显细胞坏死和变性,假小叶结构仍存在,但肝组织纤维化程度较对照组明显减轻;干细胞移植+pHGF组肝结构的改善更明显.免疫组织化学染色发现肝组织内散在分布有CD34<'+>肝样细胞,并且这些肝样细胞在不同组数量差异较大,干细胞移植组较对照组多,移植+pHGF组最多.结论 自体骨髓干细胞移植对肝硬化有一定的治疗作用;促肝细胞生长素可促进干细胞在肝脏的归巢与分化,与骨髓干细胞移植有协同治疗作用.     

骨髓间质干细胞移植对肝纤维化模型大鼠治疗效果

目的探讨骨髓间质干细胞(MSCs)对肝纤维化模型大鼠肝功能及肝纤维化的改善情况。方法将39只健康雌性SD大鼠分为对照组(n=14)和肝纤维化模型组(n=25)。对照组给予普通食水喂养;肝纤维化模型组给予四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射及乙醇喂养,建立大鼠肝纤维化模型。建模成功后将存活的大鼠随机分为对照组、模型组和移植组(每组各9只)。取健康SD大鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原代培养骨髓MSCs,然后将MSCs通过大鼠尾静脉对肝纤维化模型大鼠进行移植。移植后4周,检测血清白蛋白、转氨酶、胆红素、Ⅳ型胶原;HE和Masson染色观察肝纤维化程度。结果 MSCs移植后4周,移植组和模型组大鼠肝的纤维组织增生较对照组大鼠重,差异有统计学意义(P<0.01);但移植组大鼠肝的纤维组织增生较模型组大鼠显著减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和移植组的肝功能较对照组差,差异有统计学意义(P<0.01);但与模型组比较,移植组大鼠血清白蛋白显著增高,胆红素、转氨酶、Ⅳ型胶原显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝纤维化模型大鼠骨髓MSCs移植4周后肝功能改善,肝纤维化程度显著减轻。     

自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化失代偿的临床研究

目的：研究肝动脉插管自体骨髓干细胞移植对肝硬化失代偿和慢性重症肝病的治疗作用。方法：从患者髂后上棘抽取骨髓100~200 m l,分离纯化骨髓源性干细胞,行肝动脉介入将干细胞移植到肝脏。观察移植后的临床症状、术后不良反应、肝功能检测及2年的生存率。结果：自体骨髓干细胞移植后患者症状好转,肝功能明显改善,生存率提高,未发现严重并发症。结论：骨髓干细胞移植对肝硬化失代偿的治疗安全有效,可作为肝硬化失代偿和慢性重症肝病的一种新的治疗方法。     

术中富集骨髓细胞构建组织工程骨成骨能力的研究

目的 观察术中富集骨髓干细胞构建的组织工程骨在山羊脊柱横突间融合的成骨效果,为组织工程骨探索一种新型的构建方法.方法 将多聚左旋赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)修饰于山羊脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)制备成基质材料(PLL-DBM);以山羊横突间隙为植骨模型,观察PIL-DBM富集骨髓细胞构建的组织工程骨(Ⅰ A组)的成骨能力;对照组为自体髂骨组(Ⅰ B组)、DBM富集骨髓组(Ⅱ C组)、空白DBM组(Ⅱ D组).于术后第16周取融合段标本行X线片、三维CT及CT值检测和生物力学检测,对比分析、评价其成骨能力.结果 X线表现:ⅠA组、Ⅰ B组融合范围基本相同,明显较ⅡC组宽,Ⅱ D组基本无融合.三维CT:Ⅰ A组的CT值为(696.76±102.75)HU,ⅠB组的CT值为(766.03±69.24)HU,二者差异无统计学意义(P>0.05),均明显较ⅡC组高(P<0.05),Ⅱ C组CT值较ⅡD组高(P<0.01).生物力学性能:Ⅱ A、Ⅰ B两组最大载荷、抗弯强度比较差异均无统计学意义(P>0.05),ⅠA组较Ⅱ C组高(P<0.01,0.05),Ⅰ B组较ⅡC组高(P<0.01),ⅡC组较ⅡD组高(P<0.01). 结论 PLL-DBM术中富集骨髓干细胞快速构建的组织工程骨是一种理想的组织工程骨,其成骨能力与自体髂骨相当.     

骨髓干细胞移植对急性肝功能损伤大鼠治疗的实验研究

目的：研究不同的骨髓干细胞移植途径对急性肝功能损伤大鼠的治疗作用。方法：采用四氯化碳注射方法,建立大鼠急性肝损伤模型,观察门静脉移植和肝实质内移植干细胞两种方式对急性肝功能损伤大鼠的治疗作用。结果：对于药物致急性肝损伤大鼠,干细胞移植后3周,两种方式的移植组血清白蛋白水平均明显高于阴性对照组（P〈0.05）,且肝实质内移植组明显高于门静脉移植组（P〈0.05）;肝实质内移植组血清谷丙转氨酶明显高于门静脉移植组（P〈0.01）。结论：骨髓干细胞移植可以促进急性肝损伤大鼠血清白蛋白恢复;肝实质内移植骨髓干细胞易引起肝脏损害。     

骨髓基质细胞移植治疗骨缺损的实验研究

目的 探讨以Ⅰ型胶原海绵为载体的自体骨髓基质细胞移植治疗骨缺损的效果。方法 32只成年新西兰白兔随机分成Ⅰ、Ⅱ两组，分别自股骨大转子及胫骨结节抽取骨髓基质细胞进行培养，扩增后种植于Ⅰ型胶原海绵上，继续培养2周后植入1．5cm长桡骨缺损。Ⅰ组一侧桡骨缺损植入Ⅰ型胶原 自体骨髓基质细胞复合物(A处理)，对侧桡骨不做任何植入(B处理)。Ⅱ组一侧桡骨缺损做A处理，对侧桡骨缺损植入Ⅰ型胶原海绵(C处理)，分别于术后8周和12周取材，观察骨缺损的修复情况。结果 术后12周，A处理组全部骨性愈合，B处理组由纤维组织填充，C处理组有少量骨痂形成。结论 以Ⅰ型胶原海绵为载体的自体骨髓基质细胞移植能有效修复骨缺损。     

经动脉灌注5-FU缓释微球治疗兔VX2肝肿瘤

目的 研究5-FU缓释微球经胃十二指肠动脉灌注对兔VX2肝肿瘤的治疗作用.方法 将成功接种肝VX2肿瘤的模型兔随机分成4组,每组10只,用显微外科手术临时阻断肝总动脉血流,经胃十二指肠动脉插管至肝固有动脉起始部给药行介入治疗,术毕结扎胃十二指肠动脉.A组(生理盐水对照组),注射生理盐水0.5～1 ml;B组(碘佛醇对照组)注射碘佛醇0.5～1 ml;C组为碘油组(疗效对比组),注射超液化碘油0.5～1.0ml;D组为5-FU缓释微球组,注射5-FU缓释微球10mg和碘佛醇1 ml混合溶液.4组实验动物于治疗1周后观察肿瘤生长情况、坏死程度.并采用原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数(AI).结果 治疗1周后5-FU缓释微球组肿瘤生长受到抑制,肿瘤生长率低于生理盐水对照组和碘佛醇对照组(P<0.05),与碘油组差异无统计学意义(P>0.05).4组肿瘤均有不同程度坏死,5-FU缓释微球组和碘油组肿瘤坏死率明显高于另两组(P<0.05).生理盐水对照组、碘佛醇对照组和5-FU缓释微球组肿瘤细胞凋亡指数分别为1.69±0.18、1.75±0.27和8.03±0.63,5-FU缓释微球组与各对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 5-FU缓释微球经动脉灌注可抑制肝肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤坏死,是有效的化疗栓塞剂.     

大鼠骨髓间充质干细胞移植治疗喉返神经损伤实验研究

目的通过建立喉返神经损伤(recurrent laryngeal nerve injury)动物模型,探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对喉返神经损伤的治疗效果。方法随机数字表法将40只SD大鼠分成两组,每组20只。对全部大鼠手术复制喉返神经损伤动物模型。一组大鼠骨髓,培养、分化骨髓间充质干细胞后,自体进行干细胞移植为实验组。另一组为生理盐水注射对照组。建立模型3 d后,将BMSC诱导后的类神经细胞0.2 ml注射移植至大鼠左侧喉返神经损伤处,于移植后7、14、21、28、60 d,观察喉返神经电生理指标。结果实验组和对照组喉返神经损伤后均有不同程度的失神经和神经再生现象。移植14 d后实验组与对照组喉返神经电生理检测的潜伏期和波幅平均值分别为(1.78±0.41)ms与(2.36±0.16)ms(t=5.72、P<0.01)和(0.69±0.09)mV与(0.46±0.07)mV(t=8.18、P<0.01),差异有统计学意义。60 d后实验组与对照组喉返神经电生理检测的潜伏期和波幅分别为(0.93±0.03)ms与(1.16±0.18)ms(t=5.50,P<0.01)和(1.33±0.18)mV与(1.04±0.20)mV(t=4.64、P<0.01),差异有统计学意义。结论自体骨髓间充质干细胞移植对喉返神经损伤有促修复作用,治疗效果明显。     

MRI评价VEGF转染自体骨髓基质细胞移植治疗慢性心肌缺血的实验研究

目的应用MR多技术扫描评价转染血管内皮生长因子的自体骨髓基质细胞移植于慢性缺血动物模型猪后对心功能的保护和促血管新生作用。方法将慢性缺血心脏病模型猪随机分2组:注射转染血管内皮生长因子基因的自体骨髓基质细胞组(组Ⅰ,n=9)和注射空腺病毒载体的对照组(组Ⅱ,n=7)。治疗后4周应用MR多技术扫描检测各实验组射血分数、缺血坏死节段,取心脏标本测定梗塞区的百分比、荧光显微镜下标记细胞、血管数量。结果与组Ⅱ相比组I的射血分数明显提高,缺血坏死面积明显减少(P<0.05),且荧光显微镜下可见大量CM-D iI标记的移植存活细胞。组I缺血区血管计数高于组II并有显著性差异。结论携带血管内皮生长因子的自体骨髓基质细胞移植治疗缺血性心脏病具有明显的优越性,移植细胞成活率高,心功能和局部血运改善明显。     

肝静脉造影测压在肝小静脉闭塞病中的应用价值

 目的 探讨肝静脉造影下检测肝静脉楔压(WHVP)、肝静脉自由压(FHVP)和肝静脉压力梯度(HVPG)在诊断肝小静脉闭塞病(hepatic veno-occlusive disease,VOD)中的应用价值. 方法我科从2003年8月～2006年8月共收治6例VOD患者,3例服用过"土三七",2例服用过"不明中药",1例病因不明.病程18 d～5个月.6例均有肝大和大量顽固性腹水,血清学检查肝炎标记物阴性,肝功能异常,心脏多普勒超声及肝静脉、下腔静脉造影检查无明确支持依据.因患者均有大量腹水而行肝穿活检.为明确诊断,对该6例行肝静脉造影及WHVP和FHVP检测,并以此计算出HVPG.结果 6例经肝静脉造影后测压,WHVP值为29.4～39.0 mmHg平均36.0 mmHg;FHVP值为:16.1～22.0 mmHg,平均为19.4 mmHg; HVPG值为:13.2～19.2 mmHg,平均16.4 mmHg.结论 对可疑VOD患者经静脉插管测定WHVP、FHAP和HVPG检测有助于VOD的明确诊断,且经济、方便、可靠性强,值得推广.     

多排螺旋CT诊断肝血管瘤及肝脏肿瘤的临床价值

目的探讨CT鉴别诊断肝脏血管瘤和肝脏肿瘤在临床应用价值。方法选择68例患者按自身情况划分成Pc(原发性肝癌)组、Ml(肝脏转移瘤)组和Lh(肝血管瘤)组。对病患整个肝脏进行灌注CT检查,对比分析占位病灶实质部分、周边实质区和正常肝脏实质灌注参数(HBF、HBV、MTT、PS、HAF)。结果病变实质区参数,Pc组中HBF和HAF相比其他两组显著较高;Pc组和Lh组进行比较发现Ml组HBV显然要高;Pc组MTT相比其他两组都要短。病变周边实质区参数,Pc组和Ml组HBF相比Lh组都要显著高一些,Pc组和Ml组HAF相比Lh组要低。Ml组PS相比其他两组要更高一些。正常的肝脏实质参数,Pc组病患的MTT相比其他两组更短;Pc组HAF相比另外两个组要显著增高一些。结论使用CT灌注成像获得的参数值针对肝血管瘤和肝脏肿瘤进行鉴别诊断。     

Intermittent hepatic artery antibiotic infusion therapy for pyogenic hepatic abscess

Purpose: To study the efficacy and problems associated with intermittent hepatic artery antibiotic infusion therapy for pyogenic hepatic abscess.

Material and Methods: The material comprised eight patients with pyogenic hepatic abscess in whom percutaneous drainage could not be performed and intravenous administration of antibiotics was ineffective. An injection catheter was introduced into the common hepatic artery. Almost the same dose of antibiotics as with intravenous administration was infused intra-arterially 2-4 times per day.

Results: A therapeutic effect was achieved in six of the eight cases. In these 6 cases, the mean period of intra-arterial infusion was 10.8 days, while the mean period of catheter placement was 14.7 days. Using broad spectrum antibiotics, the therapeutic effect was obtained regardless of the numbers, morphologic characteristics, and differences in location of the abscesses. No significant complications were noted except in one case of splenic infarction.

Conclusion: Intermittent hepatic artery antibiotic infusion therapy is useful as an alternative therapeutic procedure for pyogenic hepatic abscess in which percutaneous drainage cannot be performed and intravenous administration of antibiotics is ineffective.