抗猪囊尾蚴单克隆抗体的初步研究

为了对囊尾蚴病的免疫诊断提供有价值的单在隆抗体（McAb)，我们应用杂交瘤技术，通过对骨髓瘤细胞NS－1与用猪囊尾蚴囊液抗原免疫的BALB／C小鼠脾细胞融合试验及反复筛选和多次克隆化，建立了3株分泌抗猪囊尾蚴抗原的McAb杂交瘤细胞株1D4、4E11和4E12。其分泌的抗体具有很强的种的特异性，与细粒棘球蚴和肥颈绦虫囊尾蚴抗原均不发生交叉反应。免疫球蛋白亚类鉴定表明3株均属IgG1。经蛋白质转移电泳试验（Western blot)确定，与所获McAb发生特异反应的抗原是猪囊尾蚴头节囊壁（SCW）抗原分子量为25kDa和17kDa的蛋白组分。     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

用间接酶标测定法评价不同猪囊尾蚴抗原在人囊尾蚴病免疫诊断中的价值

用硫酸铵分段沉淀法将猪囊尾蚴及其囊液的蛋白质分别分离为8种抗原,用间接酶标法检测猪囊尾蚴病病人、其他寄生虫病人及正常人血清中的相应抗体。结果表明,在8种抗原制品中,囊液部分提纯抗原P_1诊断囊尾蚴病的阳性率最高。囊尾蚴粗抗原的部分提纯成份P_(25-55)的阳性率次之。 P_1和囊液粗抗原对包虫病病人血清存在严重的交叉反应,而P_(25-55)交叉反应较低。P_1与肺吸虫病病人血清有交叉反应,但P_(25-55)与肺吸虫病人血清无交叉反应。P_25-55的来源比P_1丰富,是此病免疫诊断的实用抗原。     

免疫金银法标记抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb与猪囊尾蚴特异性结合的定位研究

McAb F_3在猪囊尾蚴上的结合部位经免疫金银法标记定位,冰冻及石腊切片均显示出清晰的结合位点。囊壁部位颗粒均匀呈双层分布,头节折叠部位皱襞的凹陷处黑色颗粒呈密集的小片状。免疫金银法所标记的抗猪囊尾蚴囊液与其相应抗原的结合部位与囊尾蚴细胞层的分布相一致。     

猪囊尾蚴蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦分析

猪囊尾蚴粗抗原在进行人体囊虫病的免疫诊断中有比较好的效果。但猪囊尾蚴抗原成分复杂,为了进一步提高阳性率,减少交叉反应,需要纯化抗原,分离出特异的抗原组分。我们用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和薄层水平等电聚焦(IEF)对猪囊尾蚴的囊液、头节囊壁和全囊抗原蛋白质组分进行了比较分析。     

猪囊尾蚴囊液抗原的免疫金电转移印斑技术分析

猪囊尾蚴囊液抗原的免疫金电转移印斑技术分析山东省寄生虫病防治研究所（济宁２７２１３３）刘玉冰，尹舜，张洪花，刘克义，李桂萍，葛凌云诊断用抗原的纯度严重影响着囊虫病免疫诊断的特异性及敏感性，为进一步寻找猪囊尾蚴囊液抗原的特异性部分，我们应用电转移印斑技...     

分泌抗包虫囊液抗原McAb杂交瘤细胞株的建立

应用Oriel法制备的包虫囊液抗原经腹腔注入供实验的小鼠,作为脾细胞供体。此脾细胞与不能分泌的骨髓瘤细胞株SP2/0和P3u_1相融合,以生成杂交瘤细胞株。用ELISA法从这些混合细胞培养基中筛选出上清液,用稀释法将上清液克隆,再克隆化之后,生成能分泌单克隆抗体、抗包虫囊液活性的杂交瘤,其染色体数目在80～100范围之内。单克隆抗体类及亚类13Fs和31G_(12)分别是IgG_1和IgA。DD和ELISA用于鉴定它们的敏感性和特异性。应用ELISA法比较杂交瘤和绦虫囊尾蚴液等其它寄生虫抗原制备物,包虫囊液和Pf抗原,表明单克隆抗体对包虫囊寄生虫有很高的特异性。     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验研究

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距囊结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋毛虫病猪、肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。提示用单克隆抗体不仅能检测到猪体组织液中特异性循环抗原，而且具有较高的敏感性和特异性，建立了一种通过检测组织液来判定肉类是否感染猪囊尾蚴的免疫学方法。     

猪囊尾蚴抗原的免疫化学研究

本文应用琼脂双向扩散(DID)、免疫电泳(IEP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对猪囊尾蚴的各部分抗原,即完整幼虫、囊液、头节和囊壁抗原进行分析。实验结果表明,四种抗原间存在相同的抗原成分。囊液中含有糖蛋白和脂蛋白。囊液、头节和囊壁蛋白质的主要分子量均在100KD以下。囊液与头节有     

猪囊尾蚴囊液蛋白组学分析

目的利用鸟枪法技术鉴定猪囊尾蚴囊液蛋白组分构成,完善猪囊尾蚴蛋白表达谱,筛选特异性候选诊断标识并分析囊液蛋白组分的功能。方法无菌收集猪囊尾蚴虫体囊液,经处理后采用shotgun液相色谱-串联质谱系统对囊液进行分选与鉴定,通过Mascot 2.2软件进行数据库检索,完成蛋白鉴定。使用Blast2go软件对蛋白序列进行比对和注释,对注释的蛋白组分数据进行Gene Ontology (GO)分析。结果经鸟枪法分析共获得486个蛋白,通过Mascot 2.2软件检索已鉴定蛋白为158种,未知蛋白为328种。初步筛选囊液中含有丰度较高的8 kDa糖蛋白、膜联蛋白、烯醇化酶、胰蛋白酶样蛋白等4个猪囊尾蚴特异性抗原和多种酶类,主要存在于细胞及细胞组分中。其中膜联蛋白主要具有结合功能,主要参与一系列依赖于钙离子的膜型生物活动;烯醇化酶主要具有离子结合功能和水解酶活性,除大量富集在糖酵解途径中,还参与调节DNA结合转录因子过程。GO分析结果显示:蛋白谱分布细胞成分方面, 65个蛋白位于细胞中, 64个蛋白位于细胞组分中, 25个蛋白位于细胞器中,其余位于细胞器、蛋白复合物、细胞外区域和细胞膜中;蛋白谱分子功能方面, 72个蛋白具有催化活性, 74个蛋白具有结合功能,其余蛋白具有转运蛋白活性、分子功能调节剂、结构分子活性等功能;生物进程分类方面, 69个蛋白参与细胞进程,73个蛋白参与代谢进程, 11个蛋白参与生物调节、生物过程的调节、信号、对刺激的应答、定位等过程。结论经鸟枪法技术初步筛选出4个丰度较高可作为猪囊尾蚴病诊断标识的候选抗原,鉴定出的酶类可能在猪囊尾蚴与宿主互作过程中起相关作用。     

猪囊尾蚴蛋白水解酶的初步研究

猪带绦虫病是人畜共患病。迄今国内外对囊虫病的研究主要报道特异性的诊断方法[1 ,2 ] 和诊断抗原[3 ,4] 。Ｍａｎｏｕｔｃｈａｒｉａｎ等[5 ] 克隆了肥头绦虫囊尾蚴囊液蛋白编码 5 6、74和 78ｋＤａ的保护性抗原基因。孙树汉等[6 ] 以囊虫病患者血清和病猪血清为探针筛选猪囊尾蚴ｃＤＮＡ文库 ,克隆了用于诊断的人特异性抗原、猪特异性抗原及人、猪共同抗原。关于猪囊尾蚴蛋白水解酶 ,目前尚未见研究报道。本文从猪囊尾蚴体内提取蛋白酶 ,研究其对各种底物的分解活性及酶抑制剂和二价阳离子对酶活性的影响。 河北省自然科学基金资助项目 (…     

抗旋毛虫肌幼虫ES抗原单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备分泌抗旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)抗原单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并对其及分泌的McAb进行鉴定。方法用旋毛虫肌幼虫ES抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌特异性、高滴度McAb的杂交瘤细胞株,制备腹水,进行纯化。ELISA间接法、夹心法和竞争法分别测定McAb滴度、相对亲和力和相加效应,琼脂双扩散试验鉴定免疫球蛋白类型,检测McAb与其他寄生虫抗原的交叉反应。电镜观察杂交瘤细胞超微结构,计数染色体数目及观察杂交瘤细胞分泌McAb的稳定性。结果筛选出2株(B2C12和E11F11)分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原McAb杂交瘤细胞株。电镜显示,杂交瘤细胞具有肿瘤细胞和浆细胞的特征,胞浆内可见大量分泌颗粒;杂交瘤细胞染色体数目平均为98.6条,均能稳定分泌McAb(属IgM)。B2C12株培养上清液和腹水McAb滴度分别为1∶1280和1∶2.048×104,E11F11株为1∶640和1∶1.024×104,其中前者的相对亲和力较后者稍高。2株McAb识别ES抗原不同的抗原决定簇;且不与其他寄生虫抗原发生交叉反应。结论获得2株抗旋毛虫肌幼虫ES抗原杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高滴度、特异性的IgM类McAb,并识别不同的抗原决定簇,为研制旋毛虫病诊断试剂盒和制备基因工程抗体奠定了基础。     

以层析聚焦纯化的猪囊尾蚴抗原作酶联免疫吸附试验诊断人的囊尾蚴病

猪囊尾蚴粗抗原在各种血清试验中均有较好的敏感性,但有特异性差和交叉反应等缺点,本文报告用层析聚焦方法纯化抗原和ELISA诊断人猪囊尾蚴病的结果。按Diwan等(1982)方法将人的猪肉绦虫制成全虫粗抗原,用玻璃匀浆器研磨,加PBS制成20%的悬液,超声后用1,600g离心,取其上清备用,同时以猪体囊尾蚴及同一猪体未感染的肌肉组织按同法制备作为粗     

抗猪囊尾蚴IgG4抗体的特异性抗原筛选

将囊液抗原蛋白采用双向凝胶电泳分离,经考马斯亮蓝染色后用双向电泳图像分析软件分析蛋白点,以脑囊尾蚴病患者血清为一抗进行蛋白质印迹分析(Western blotting),选取阳性蛋白点进行质谱分析,获取肽质量指纹图谱,采用Mascot软件在NCBI中搜寻、比对,筛选出抗猪囊尾蚴IgG4特异性抗原。囊液抗原经双向电泳检测到(201±5)个蛋白斑点,相对分子质量(M_r)为10 000~170 000,等电点(pI)为3.0~10.0。Western blotting分析显示,与患者血清中特异IgG4抗体结合的抗原以小分子量蛋白为主,从中筛选出51个(抗原)点进行质谱分析,其中有21个点峰值大于39。对比分析显示,高峰值点与10种囊尾蚴蛋白有关,其中最为密切相关的为4种蛋白,按分值高低排序分别为Ts8B2、Ts8B3、10ku抗原和Sequence 3。     

神经部位囊尾蚴病的血清学诊断:以猪肉绦虫囊尾蚴的囊液及其它成份为抗原的ELISA法

作者从重感染的猪中取得囊尾蚴,制备囊液抗原(CFAg)、原头节抗原(CSAg)和囊壁抗原(CWAg)。囊尾蚴刺破后收集囊液,并从囊壁取下头节,均加 pH7. 2PBS,经超声获 CSAg 和 CWAg。新鲜囊液抗原     

带绦虫囊尾蚴的囊液和膜糖蛋白抗原

为了确定带绦虫囊尾蚴的囊液和膜的成分中是否含有交叉反应少、有诊断价值的抗原组分,作者通过直接同位素标记、小扁豆外源性凝集素(LcH)-琼脂糖珠4B亲和层析以及SDS-PAGE等方法分析猪带绦虫、牛带绦虫和肥头绦虫囊尾蚴的表膜蛋白以及前两种囊尾蚴的囊液,并用不同的感染宿主血清与上述抗原进行免疫沉淀试验,以评价各种抗原的特异性。     

猪囊尾蚴发育过程中的细胞凋亡

目的　研究猪囊尾蚴发育过程中猪囊尾蚴细胞是否存在凋亡。方法　仔猪感染猪带绦虫卵后 ,定期剖杀 ,剥离囊尾蚴 ,作组织切片 ,采用TUNEL法检测囊尾蚴头节和囊壁细胞的凋亡率 (S -AI和W -AI)。结果　头节细胞和囊壁细胞均存在凋亡现象 ,尤以囊壁细胞凋亡明显。感染后 19d时头节细胞和囊壁细胞凋亡率较高 ,分别为 7%和 15 %左右。以后随感染时间的延长而降低 ,至 80d时稍有回升 ,并分别稳定保持在 4 %和 8%左右。结论　猪囊尾蚴发育过程中猪囊尾蚴细胞存在凋亡 ,且囊壁细胞凋亡明显。     

猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶活性研究

目的 :探讨猪囊尾蚴头节及囊壁 GST活性。方法 :用 GST底物催化测定法检测成熟、未成熟猪囊尾蚴头节及囊壁匀浆的 GST活性。结果 :成熟猪囊尾蚴头节、囊壁 GST活性分别为 0 .2 2 65± 0 .0 2 81、0 .1 765± 0 .0 1 99,未成熟猪囊尾蚴头节、囊壁 GST活性分别为 0 .1 766± 0 .0 2 2 3、0 .1 758± 0 .0 2 1 4 ,成熟猪囊尾蚴头节与囊壁之间、未成熟猪囊尾蚴头节与囊壁之间、成熟与未成熟猪囊尾蚴之间 GST活性均无显著性差异( P>0 .0 5)。结论 :猪囊尾蚴头节及囊壁内存在相同的 GST活性 ,且 GST活性与猪囊尾蚴的成熟程度无关     

猪囊尾蚴三种组分的抗原特性分析

本实验用免疫印渍和ELISA分析了猪囊尾蚴(囊虫)的囊液、体表及虫体组分的抗原组成,血清学活性及交叉反应性.SDS-PAGE显示,囊液组分有32条带,体表组分有64条带,虫体组分有62条带,分子量196KD～9KD,带谱各异。免疫印渍表明,三种组分各有约70％的多肽具抗原性。囊液组分的96KD多肽体表组分在175KD～31KD间有10条多肽,虫体组分在147     

猪囊尾蚴表面蛋白及其抗原性的初步测定分析

本文初步分析了猪囊尾蚴囊壁表面蛋白的特性。根据囊尾蚴漂洗液PAGE和SDS-PAGE考马斯亮蓝染色带分别显示了9条及14条蛋白区带,其中大部分与宿主骨骼肌组织的可溶性蛋白有一致的迁移率,但其中第5、7、10条蛋白带为其独有。漂洗液与囊液兔高免血清IE可出现1条沉淀弧;用漂洗液蛋白抗原对35例囊虫病人血清做ELISA,阳性率为60％。此外,对囊虫表面宿主蛋白的可能作用,做了初步探讨。