沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂在乳腺癌中的表达及其与微血管密度的关系

背景与目的:目前,对于肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TNF-likeweak inducer of apoptosis,TWEAK)在乳腺癌中的表达存在争议,本研究探讨TWEAK在乳腺癌组织及不同侵袭能力乳腺癌细胞系中表达情况及其与微血管密度(microvessel density,MVD)的关系.方法:应用免疫组化SP法检测TWEAK在70例乳腺癌组织和30例癌旁非癌乳腺组织中的表达.应用Western blot法检测TWEAK在乳腺癌细胞系MCF-7(低转移)和MDA-MB-231(高转移)中的表达.应用ELISA方法检测TWEAK在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中的分泌情况.结果:TWEAK在乳腺癌组织中表达(60%)明显高于癌旁非癌组织(6.67%),且在浸润性导管癌组织(76.67%)中表达明显高于导管内癌组织(42.85%,P=0.003).浸润性导管癌组织中MVD高于导管内癌(P<0.05).浸润性导管癌组织中TWEAK表达与MVD明显相关(r=0.611),导管内癌中不显著(r=0.015).MDA-MB-231细胞系表达TWEAK明显高于MCF-7细胞系(t=4.259,P=0.007).MDA-MB-231细胞系分泌可溶性TWEAK高于MCF-7细胞系(t=3.6504,P=0.006).结论:TWEAK的表达与乳腺癌侵袭能力相关.     

乳腺癌MCF-7细胞通过TGF-β诱导的上皮-间质转化获得耐药北大核心CSCD

目的:通过研究高侵袭转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和低侵袭转移性细胞株MCF-7中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和耐药的相关性,以探讨乳腺癌耐药的机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和纤黏蛋白(bronectin)以及转录因子Snail、Slug和锌指E-box同源结合框1(Zincnger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的表达水平;划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测MDA-MB-231和MCF-7细胞的迁移和侵袭能力;CCK-8法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇的敏感性,并采用实时荧光定量PCR法检测耐药基因多重耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MDR1)和MDR相关蛋白1(MDR-associated protein,MRP1)mRNA的表达水平。用转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导MCF-7细胞发生EMT,或用靶向E-cadherin基因的E-cadherin-siRNA沉默EMT相关标志物E-cadherin的表达,再用CCK-8法检测MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的变化。结果:MDA-MB-231细胞中vimentin、fibronectin、Slug和ZEB1 mRNA的表达水平均高于MCF-7细胞(P值均<0.000 1),E-cadherin mRNA的表达水平明显低于MCF-7细胞(P=0.000 2),Snail mRNA的表达水平无明显差异。与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显更强(P值均<0.000 1);5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇对MDAMB-231细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值明显高于MCF-7细胞(P值均<0.05);MDA-MB-231细胞中耐药相关基因MDR1和MRP1 mRNA表达水平明显更高(P值均<0.000 1)。TGF-β诱导MCF-7细胞发生EMT后,5-氟尿嘧啶对MCF-7细胞的IC50值明显上升(P<0.05);沉默E-cadherin表达后,MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性明显增强(P<0.05)。结论:乳腺癌中EMT和耐药存在相关性,诱导EMT发生可导致细胞耐药。     

Tspan29在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7和MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响

目的：检测4次穿膜蛋白29（tetraspanins-29，Tspan29）在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平，探讨敲低Tspan29对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（epithelieal-mesenchymal transition，EMT）的影响。方法：收 集2017年6月至2018年2月复旦大学附属肿瘤医院闵行分院手术切除的20例乳腺癌患者的癌组织和相应的癌旁组织标本，以及乳腺癌细胞系 MCF-7、MDA-MB-231 和人乳腺上皮细胞 MDA-kb2，用 qPCR 和 Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞系中Tspan29 的表达水平。通过 siTspan29 对 MCF-7、MDA-MB-231 细胞中 Tspan29 进行干扰，用 qPCR 法检测转染细胞中 Tspan29mRNA 和蛋白的表达水平，PCR 芯片法检测 MCF-7 细胞中 EMT 相关基因的表达，用 CCK-8 法、Transwell 实验检测 MCF-7 和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果：乳腺癌组织中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于癌旁组织（均 P<0.01），MCF-7和MDA-MB-231细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于MDA-kb2细胞（均P<0.01）。siTspan29干扰后，MCF-7细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著下降（均P<0.05）；MCF-7细胞中EMT相关基因中有2个基因显著上调， 有7个基因显著下调；MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降（均P<0.05）。结论：Tspan29在乳腺癌组织及细胞系中表达水平显著上调，敲低Tspan29对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有显著的抑制作用。     

miRNA-613在乳腺癌中的表达及作用机制

  目的  探讨乳腺癌中微小RNA (microRNA,miRNA)-613表达及作用机制。  方法  收集2017年5月至2018年5月91例于南充市中心医院手术切除的乳腺癌患者的组织标本,实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及癌旁组织标本、乳腺癌细胞系(MDAMB-231、MDA-MB-468、MCF-7)和正常乳腺上皮细胞系HBL-100中miRNA-613的表达水平,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系。TCGA数据库分析miRNA-613与乳腺癌患者预后的关系。双荧光素酶报告实验检测miRNA-613与SOX9的3'UTR区的结合情况。将miRNA-613模拟物转染至MDA-MB-231细胞,CCK-8法和Transwell侵袭及迁移实验分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移能力的变化,Western blot检测细胞中SOX9、β-catenin、E-Cadherin和Vimentin蛋白的表达变化。  结果  miRNA-613在乳腺癌组织中表达明显低于癌旁组织(P < 0.05),并且miRNA-613表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关(P < 0.05),TCGA生存数据显示miRNA-613表达与乳腺癌患者的总生存率无关(P>0.05)。乳腺癌细胞系中miRNA-613的表达明显低于正常乳腺上皮细胞系(P < 0.05),并且高侵袭转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468中miRNA-613的表达明显低于低侵袭转移性乳腺癌细胞系MCF-7(P < 0.05)。双荧光素酶报告实验显示miRNA-613可与SOX9的3'UTR特异性结合。上调miRNA-613的表达能抑制MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭迁移能力(P < 0.05),同时下调SOX9、β-catenin和Vimentin蛋白的表达(P < 0.05),并上调ECadherin蛋白的表达(P < 0.05)。  结论  在乳腺癌组织和细胞中miRNA-613异常低表达,miRNA-613可能通过调控SOX9、Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭转移及上皮间质转化。      

PPAPDC1A在体内外对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的:通过构建稳定过表达和干扰PPAPDC1A的乳腺癌细胞株,探讨PPAPDC1A对乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。方法:利用CCK-8和Transwell实验检测PPAPDC1A稳定过表达和干扰后对乳腺癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验检测PPAPDC1A对乳腺癌细胞体内增殖和裸鼠致瘤性的作用。利用免疫组织化学染色法检测各组肿瘤组织中Ki-67的表达。通过裸鼠尾静脉注射实验检测PPAPDC1A对乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体内转移能力的影响。结果:成功建立稳定过表达PPAPDC1A的乳腺癌MCF-7细胞株和稳定干扰PPAPDC1A的乳腺癌MDA-MB-231细胞株;CCK-8和Transwell实验结果显示,与MCF-7和MCF-7-Vector细胞株相比,MCF-7-PPAPDC1A细胞株的生长速度显著增快,穿膜细胞数量多（P＜0.05）;与此相反,MDA-MB-231-shPPAPDC1A组细胞的生长速度和穿膜细胞数明显少于MDA-MB-231-shNC和MDA-MB-231 细胞株（P＜0.05）。动物实验结果显示,与MCF-7-Vector组相比,MCF-7-PPAPDC1A组的肿瘤生长速度较快,肿瘤的体积较大,Ki-67的阳性率高,肺转移灶的数目增多（P＜0.05）;与此相反,与MDA-MB-231-shNC组相比MDA-MB-231-shPPAPDC1A组的肿瘤生长速度较慢,肿瘤的体积较小,Ki-67的阳性率低,肺转移灶的数目减少（P＜0.05）。结论:PPAPDC1A对乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移有促进作用。     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

高与低表达RSK4基因人乳腺癌细胞株的筛选及鉴定

目的:探讨核糖体S6激酶4(RSK4)抑癌基因在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中的表达,并筛选出高和低表达RSK4基因的乳腺癌细胞。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测RSK4在MDA-MB-231、T47D、Bcap-37和MCF-7 4种乳腺癌细胞株中的表达。结果:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中均有RSK4基因表达,其中,MCF-7细胞RSK4表达水平最高,为表达量最低的MDA-MB-231细胞的2.9倍,MCF-7细胞RSK4蛋白表达水平也最高,与其他3种细胞株相比,差异有统计学意义,P<0.001。RT-PCR法和蛋白质印迹法检测结果一致,具有高度相关性,r=0.766,P<0.001。结论:人乳腺癌细胞株MCF-7为高表达RSK4基因的细胞,MDA-MB-231细胞为低表达RSK4基因的细胞,两者均可作为人乳腺癌细胞中研究RSK4基因的实验材料。     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的 通过乳腺癌细胞系及其干细胞的培养,化疗药干预和流式细胞仪筛选鉴定,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例,及富集乳腺癌干细胞相关亚群的方法。方法 通过细胞培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,观察生长曲线,比较化疗药物干预下生长情况;利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例;无血清悬浮培养,化疗药(多西紫杉醇、表阿霉素)干预这两种乳腺癌细胞系,观察其是否形成细胞球。结果 (1)MDA-MB-231细胞系倍增时间短,生长速率高于MCF-7细胞系;(2)MCF-7细胞系中可能存在较大比例肿瘤干细胞,其对化疗抵制,能自我更新;(3)化疗敏感性用两独立样本t检验,MCF-7细胞,差异没有统计学意义;MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义,提示MDA-MB-231细胞系对该方案化疗较敏感;(4)无血清悬浮培养,MDA-MB-231细胞系未发现明显细胞球;MCF-7细胞系初次无血清培养约6天出现细胞球。加入化疗药筛选后两种细胞,见大部分肿瘤细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球;(5)流式细胞仪检测,MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中主要是CD44⁺CD24⁺亚群和CD44^-CD24⁺亚群,CD44⁺CD24^-/low细胞比例分别2.07%和0.20%。结论 (1)MDA-MB-231细胞系增值较快,恶性度相对较高,其对TA联合化疗药物较敏感;MCF-7细胞系中可能存在少量肿瘤干细胞,对化疗抵制,能自我更新;(2)无血清培养液培养MCF-7细胞系能形成悬浮细胞球;流式细胞仪检测两种细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例小;(3)CD44⁺CD24^-/low表型可能不是乳腺癌干细胞唯一特异性的表面标志。     

FSIP1促进乳腺癌细胞迁移和侵袭并导致患者不良预后

目的 探讨乳腺癌组织中纤维鞘相互作用蛋白1(FSIP1)表达对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其与乳腺癌患者预后的关系,从而为乳腺癌的诊断和治疗提供一定的理论参考。方法 收集2004年1月—2018年12月于哈尔滨医科大学附属肿瘤医院确诊的404例乳腺癌患者的乳腺组织样本和病例资料,对收集的乳腺癌患者资料进行回顾性分析并采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线,采用免疫组织化学方法分析FSIP1在乳腺癌和癌旁组织中的表达情况,取乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、SK-BR-3、T-47D及正常乳腺上皮细胞(HMECs)MCF-10A进行细胞培养,采用CRISPR/CAS9技术敲除乳腺癌细胞系MDA-MB-231和SK-BR-3中的FSIP1基因,通过Western blot实验检测各乳腺癌细胞系中FSIP1蛋白的表达情况并对FSIP1基因敲除结果进行检测,通过细胞迁移和侵袭实验评估FSIP1蛋白敲除对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 与正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)相比,乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、SK-BR-3、T-47D中FSIP1的表达水平均显著升高(P＜0.01);与癌旁乳腺组织相比,乳腺癌组织中FSIP1的表达水平显著升高(P＜0.01);生存分析结果显示,FSIP1表达水平较高的乳腺癌患者总生存期显著缩短(P＜0.001),且FSIP1的表达水平与乳腺癌患者的临床分期(P=0.006)及细胞增殖标记物Ki-67(P=0.0067)表达相关;迁移实验和侵袭实验结果显示,敲除FSIP1基因后乳腺癌细胞系MDA-MB-231和SK-BR-3的迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.01)。结论 FSIP1在乳腺癌细胞中高表达能够增强其迁移和侵袭能力,并与患者预后不良相关。     

人乳腺癌细胞株WAF1/CIP1/p21基因的表达及其与细胞生物学特性的关系

目的研究人乳腺癌细胞株ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因的ＤＮＡ状况、ｍＲＮＡ和蛋白的表达水平及其意义。方法应用细胞培养、分子生物学Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交以及免疫组化染色等技术，检测人乳腺癌表达野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）的ＭＣＦ７细胞和表达突变型ｐ５３（ｍｔｐ５３）的ＭＤＡＭＢ２３１细胞中ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因ＤＮＡ状况、ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平，研究其与ｍｄｍ２、ｐ５３蛋白的表达和细胞生物学特性的关系。结果比较ＭＣＦ７细胞与ＭＤＡＭＢ２３１细胞：（１）两者ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因ＤＮＡ状况无明显差异，前者ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平明显高于后者（Ｐ＜０．０５）；（２）两者ｐ５３蛋白的性质和分布不同，前者ｍｄｍ２蛋白的表达水平明显高于后者（Ｐ＜０．０５）；（３）前者生物学特性好于后者。结论人乳腺癌细胞株ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平与ｐ５３基因表型和细胞生物学特性有关。     

HYAL1 overexpression is correlated with the malignant behavior of human breast cancer

Extracellular matrix (ECM) is closely correlated with tumor cell growth, proliferation, metastasis and angiogenesis, etc. Hyaluronic acid (HA) is a component of the ECM, and hyaluronidase (HAase) is a HA‐degrading endoglycosidase. Levels of HAase are elevated in many cancers. Hyaluronidase‐1 (HYAL1) is the major tumor‐derived HAase. In this study, we detected HYAL1 expression levels in breast cancer cells and tissues, and measured the amount HAase activity in breast cancer cells. Compared with nonmalignant breast cell line HBL‐100 and normal breast tissues, HYAL1 were overexpressed in breast cancer cell lines MDA‐MB‐231, MCF‐7, invasive duct cancer tissues and metastatic lymph nodes, respectively. Accordingly, the amount HAase activity in MDA‐MB‐231 and MCF‐7 was higher than that in HBL‐100. In addition, knockdown of HYAL1 expression in MDA‐MB‐231 and MCF‐7 cells resulted in decreased cell growth, adhesion, invasion and angiogenesis potential. Meantime, the HYAL1 knockdown markedly inhibited breast cancer cell xenograft tumor growth and microvessel density. Further studies showed that the HYAL1, HYAL2 and HA were elevated in breast cancer, and HYAL1 could downregulate HA expression. In conclusion, HYAL1 may be a potential prognostic marker and therapeutic target in breast cancer.     

环氧化酶-2抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2抑制剂nimesulide(NIM)对雌激素受体(ER)阴性(MDA-MB．231)和阳性(MCF-7)人乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响。方法 应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率，透射电镜观察细胞形态与超微结构，AnnexinV法检测细胞的凋亡。结果 NIM以时间、剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231(COX-2阳性)、MCF-7(COX-2阴性)细胞生长，阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导细胞的凋亡，MDA—MB-231细胞对NIM的作用更为敏感。NIM对COX-2表达阴性的MCF-7细胞同样具有抑制增生、诱导凋亡的作用。结论 NIM对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞均有抑制增生、诱导凋亡的作用。NIM的抗肿瘤作用存在环氧化酶．2依赖性与非依赖性两种途径。     

The role of desmoglein 2 and E-cadherin in the invasion and motility of human breast cancer cells

Loss of adhesion is a fundamental step in the metastatic cascade. Desmosomal cadherins, Desmoglein (Dsg) and Desmocollin (Dsc) are a novel group of adhesion molecules. Aims were to demonstrate expression of Dsg2 and E-cadherin in breast cancer cells and assess their role in invasion and motility. Immunofluorescence and Western blotting were used to demonstrate expression of Dsg2 and E-cadherin in 3 breast cancer cell lines (MDA MB 231, MCF7 and BT474). Functional studies included cell-cell aggregation, in vitro invasion and colloidal gold phagokinetic tracking assays. All 3 cell lines expressed Dsg2. MCF7 and BT474 cells were E-cadherin positive, MDA 231 was negative. Cell aggregation was reduced, in vitro invasion and motility were increased in Dsg2 or E-cadherin Mab pre-treated cells. Dsg2 present in breast cancer cells may act as a tumour suppressor molecule.     

ZIC1联合苦参碱对人乳腺癌 MDA - MB -231细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的：探讨 ZIC1联合苦参碱对人乳腺癌 MDA - MB -231细胞的增殖、迁移能力及凋亡的影响。方法：将慢病毒载体 rLV - Zic1- PGK - puro 稳定转染人乳腺癌 MDA - MB -231细胞株并得到稳定传代的细胞株,Western blot 法检测转染效果。以人乳腺癌 MDA - MB -231细胞及 ZIC1基因稳定转染的细胞为研究对象进行药物实验,MTT 法筛选出苦参碱的半数抑制浓度（IC50）后分组,划分 A 空载不加药组（阴性对照组）,B空载加药组,C 转染不加药组和 D 转染加药组。对四组细胞采用黏附试验检测细胞黏附（增殖）能力、划痕实验检测细胞迁移能力、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：ZIC1或苦参碱单独作用均可抑制乳腺癌 MDA - MB-231细胞黏附（增殖）、迁移及增强其凋亡,差异较对照组有统计学意义（P <0.05）,且在抑制细胞迁移上存在时间依赖性。两者联合作用抗癌效果更明显,差异较其它三组有统计学意义（P <0.05）。结论：苦参碱联合 ZIC1可明显增强对人乳腺癌 MDA - MB -231细胞的抑癌效果。     

细胞周期相关因子与乳腺细胞的癌变及生物学特性的相关性研究

目的：研究正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞之间以及不同恶性程度的乳腺癌细胞之间的细胞周期相关因子的表达异同。方法：采用Western印迹法检测正常乳腺细胞株AG11132A、ER阳性和乳腺癌细胞株MCF－7及ER阴性的乳腺癌细胞株MDA－MB－231之间细胞周期蛋白D1、E及P21蛋白表达的异同及与其生物学特性的关系。结果：（1）正常乳腺上皮细胞株高表达P21蛋白,低表达周期蛋白E。与正常细胞相比,乳腺癌细胞株MCF－7、MDA－MB－231细胞高表达周期蛋白E,其中表达的周期蛋白E中存在异常的你分子量周期蛋白E成分,而正常乳腺上皮细胞不表达这种异常 的周期蛋白E。（2）在乳腺癌细胞株之间,相对ER阳性的MCF－7细胞,ER阴性的MDA－MB－231细胞则高表达周期蛋白E,基本无表达P21蛋白。结论L（1）正常细胞与这间、相对低恶性程度的民相对高恶性和蔼的癌细胞之间的差别是多环节的、质和量异常导致的结果;（2）周期蛋白E及P21均可反映乳腺癌细胞的增殖活性和恶性程度,可能是乳腺癌的临床预后指标。     

ADAM9在高侵袭转移 MDA －MB －231乳腺癌细胞系中的表达

目的：探讨去整合素金属蛋白酶9（a disintegrin and metalloproteinase 9，ADAM9）蛋白在人乳腺癌细胞系中的表达。方法：提取人正常乳腺上皮细胞 HBL100，人乳腺癌细胞系 MCF －7，ZR －75－1，MDA －MB －231，HCC1937和 Hs578T，小鼠乳腺癌细胞系4T1的总蛋白和总 mRNA，提取细胞的总蛋白和总 RNA 进行蛋白免疫印迹和实时定量 PCR 检测 ADAM9的表达。结果：在人乳腺癌细胞系 MDA －MB －231中 ADAM9蛋白表达最高，在小鼠乳腺癌4T1细胞中 ADAM9表达较低。结论：ADAM9在高侵袭的 MDA －MB －231乳腺癌细胞中高表达。     

微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制

目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.     

MiR‐200c inhibits autophagy and enhances radiosensitivity in breast cancer cells by targeting UBQLN1

Radioresistance is a major challenge during the treatment of breast cancer. A further understanding of the mechanisms of radioresistance could provide strategies to address this challenge. In our study, we compared the expression of miR‐200c in four distinct breast cancer cell lines: two representative basal cancer cells (MDA‐MB‐231 and BT549) vs. two representative luminal cancer cells (MCF‐7 and BT474). The results revealed practically lower expression of miR‐200c in the two basal cancer cell lines and higher expression of miR‐200c in luminal cancer cells compared to the normal breast epithelial cell line MCF‐10A. Ectopic expression of miR‐200c in MDA‐MB‐231 cells inhibited irradiation‐induced autophagy and sensitized the breast cancer cells to irradiation. We also identified UBQLN1 as a direct functional target of miR‐200c involved in irradiation‐induced autophagy and radioresistance. In 35 human breast cancer tissue samples, we detected an inverse correlation between the expression of miR‐200c vs. UBQLN1 and LC3. These results indicate that the identified miR‐200c/UBQLN1‐mediated autophagy pathway may help to elucidate radioresistance in human breast cancer and might represent a therapeutic strategy.