大鼠左心耳三种亚型α1肾上腺素受体对β肾上腺素受体正性变力效应的不同影响

采用电驱动离体大鼠左心耳收缩功能实验研究三种亚型α₁-肾上腺素受体(AR)激动时对β-AR介导正性变力效应的影响. 结果发现,RS 17053(选择性拮抗α_1A-AR)或WB 4101(选择性拮抗α_1A和α_1D-AR)可使去甲肾上腺素(NE)的累积浓度 收缩效应曲线(CRC)显著左移;在BMY 7378(选择性拮抗α_1D-AR)和RS 17053存在下,NE仅激动α_1B和β-AR,其CRC较单独激动β-AR时显著左移;在WB 4101和去氧肾上腺素(Phe)同时存在下(仅激动α_1B-AR),异丙肾上腺素(Iso)的CRC较对照显著左移;用BMY 7378阻断α_1D-AR后,NE的CRC不发生明显的偏移;用RS 17053和螺哌隆阻断α_1A和α_1B-AR,用Phe仅激动α_1D-AR时,对Iso的CRC也无影响. 结果说明在大鼠左心耳α_1A-AR抑制,α_1B-AR增强,而α_1D-AR则不参与对β-AR介导正性变力效应的调节.     

川芎嗪对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤L4/L5段背根神经节P2X3受体表达的影响

目的 探讨川芎嗪抑制P2X₃受体介导慢性神经病理痛的作用途径。方法 制备大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)神经病理痛模型，于d 2起ip川芎嗪100 mg·kg^-1，每天1次，共14 d。免疫组织化学法观察CCI大鼠L₄/L₅段背根神经节P2X₃受体的表达，全细胞膜片钳技术测定新鲜分离的L₄/L₅段背根神经节三磷酸腺苷（ATP）和α,β-亚甲基三磷酸腺苷（α,β-meATP）激活的电流。结果 与正常对照组比较，正常大鼠ip川芎嗪14 d，L₄/L₅段背根神经节P2X₃受体表达、ATP激活电流和α,β-meATP激活电流无明显变化，假手术组亦无明显变化。与假手术组比较，CCI模型组大鼠L₄/L₅段背根神经节P2X₃受体的表达、ATP和α,β-meATP激活电流明显增强。CCI大鼠ip川芎嗪14 d，L₄/L₅段背根神经节P2X₃受体表达、ATP和α,β-meATP激活电流较CCI模型组明显降低。结论 川芎嗪可抑制CCI大鼠L₄/L₅段背根神经节P2X₃受体的表达，从而对P2X₃受体介导的神经病理痛产生抑制作用。     

12月龄与3月龄大鼠心脏α1肾上腺素受体亚型的比较

采用［¹²⁵I］BE2254放射配体结合实验和离体灌流左心房收缩功能实验, 比较12月龄与3月龄大鼠心脏α₁肾上腺素受体(α₁-AR)三种亚型分布及其介导的正性变力效应的差别. 结果显示与3月龄大鼠相比, 12月龄大鼠: (1) 心脏α₁-AR最大结合容量显著减少; 去甲肾上腺素(NE)通过激动α₁-AR引起的左心房累积浓度-收缩效应曲线显著右移; (2) (+)尼古地平, BMY7378和WB4101的高亲和性位点所占百分比显著下降; (3)氯乙基可乐定预处理使NE引起的左心房最大收缩效应的下降幅度, 以及舍吲哚, BMY7378和WB4101拮抗NE介导正性变力效应的pA₂值均无显著差异. 提示12月龄大鼠较3月龄大鼠心脏α₁-AR总数减少, 且以α_1A和α_1D-AR亚型更为显著; α₁-AR介导的正性变力效应明显降低, α_1B-AR的功能效率降低最为明显.     

12月龄自发性高血压大鼠肾动脉α1肾上腺素受体亚型与同龄WKY大鼠的比较

采用RNA酶保护分析法及离体血管收缩实验比较12月龄自发性高血压大鼠(SHR)和同龄WKY大鼠肾动脉α₁肾上腺素受体(α₁-AR)亚型. 功能实验结果表明去甲肾上腺素(NE)引起SHR肾动脉收缩的pD₂值和最大收缩反应与WKY大鼠相比没有显著差异. 但舍吲哚和WB4101抑制NE收缩SHR肾动脉的pA₂值与WKY大鼠相比显著增加,同时BMY7378抑制NE收缩SHR肾动脉的pA₂值与WKY大鼠相比无显著改变. 提示SHR肾动脉对NE的敏感性与WKY大鼠相比没有差异,但α_1A-AR在介导NE收缩SHR肾动脉中的作用与WKY大鼠相比增加. RNA酶保护分析法结果显示在SHR肾动脉α₁-AR三种亚型的mRNA水平与WKY大鼠相比没有显著改变. 提示α₁-AR亚型在介导收缩反应中的改变可能因受体蛋白水平和(或)受体后信号转导的改变所致.     

前列腺素E1抑制血管平滑肌细胞增殖的作用

目的 从细胞周期蛋白和凋亡相关基因探讨前列腺素E₁(PGE₁)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控作用。方法 采用培养的新生牛主动脉VSMC，以胎牛血清及白介素1(IL-1)分别作为促增殖剂，测定不同浓度PGE₁对VSMC增殖、细胞内周期蛋白d₁ mRNA表达、p53及Bcl-2基因表达和培养液内NO含量的影响。结果 PGE₁浓度依赖性抑制胎牛血清促VSMC增殖作用；显著减少细胞周期蛋白d₁ mRNA含量；浓度依赖性诱导IL 1孵育下VSMC产生大量NO, 同时抑制VSMC增殖；并促进p53基因表达，下调bcl-2基因，诱导细胞凋亡。结论 PGE₁具有抑制VSMC增殖的作用，其机制可能与其阻滞VSMC生长有关；在炎性因子存在情况下，PGE₁可诱导VSMC内大量产生NO，抑制VSMC增殖，并加速VSMC凋亡。     

多巴胺舒张猪冠状动脉及激活冠状动脉平滑肌细胞钾通道

采用血管环实验和膜片钳细胞贴附式技术分别在器官和细胞分子水平观察多巴胺舒张猪冠状动脉作用及对平滑肌细胞大电导型钙激活钾通道(BK_Ca)的影响. 结果表明多巴胺引起前列腺素F_2α(PGF_2α)预收缩动脉环浓度依赖性舒张反应, 而不引起高K⁺预收缩动脉环舒张反应. 表明多巴胺引起的冠状动脉血管舒张反应依赖于K⁺生理浓度梯度的存在, 结果提示钾通道参与了多巴胺的血管舒张反应. 向细胞浴液内灌流多巴胺增强冠状动脉血管平滑肌细胞膜BK_Ca通道活性. 用DA₁受体阻断剂SCH23390预处理细胞, 完全阻断多巴胺的这一作用, 而用β受体阻断剂普萘洛尔无影响. 提示多巴胺通过DA₁受体激活BK_Ca通道引起PGF_2α预收缩动脉环舒张反应.     

一枝蒿有效部位对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 筛选四氯化碳(CCl₄)致小鼠急性肝损伤最佳模型,并研究一枝蒿有效部位(AR)对CCl₄所致小鼠急性肝损伤的保护作用. 方法采用不同浓度的CCl₄花生油溶液予小鼠腹腔注射,测定小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量. 一枝蒿有效部位予小鼠连续灌胃5 d,用最佳CCl₄模型造成小鼠急性肝损伤,测定小鼠血清中ALT和AST的含量,观察光镜下小鼠肝组织的病理变化. 结果 0.11% CCl₄ 模型组为最佳模型. AR低、中、高剂量组均能抑制CCl₄引起的急性肝损伤所致的ALT、AST升高. 结论 AR对CCl₄所致急性肝损伤的小鼠有保护作用.     

丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L^-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP₃)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC ［Ca²⁺］_i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L^-1)引起的［Ca²⁺］_i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L^-1)时,丙泊酚抑制NE升高［Ca²⁺］_i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP₃合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP₃介导的细胞内钙释放密切相关.     

大鼠前列腺α1-肾上腺素受体亚型分析

用离体组织收缩功能实验和放射配体结合实验, 分析大鼠前列腺α₁-肾上腺素受体(α₁-AR)三种亚型的分布及其介导的收缩效应. 结果显示: 标本经用氯乙基可乐定(CEC)预处理后,去氧肾上腺素(PE)介导的最大收缩效应无明显下降, α₁-AR亚型选择性拮抗剂5-MU, WB4101, 萘哌地尔, 尼古地平, BMY7378抑制PE介导前列腺收缩的pA₂值与克隆α_1A-AR亚型的K_i值呈高度相关(r=0.91). 在放射配体结合实验中, 标本经CEC预处理后, ［¹²⁵I］BE与α₁-AR的最大结合容量由1.09±0.32 nmol·g^-1蛋白质明显下降至0.33±0.08 nmol·g^-1蛋白质. α_1A-, α_1B- , α_1D-AR密度分别约占总受体密度的15%, 65%和20%. 结果提示大鼠前列腺中尽管α₁-AR三种亚型均有分布, 但引起平滑肌收缩的功能性α₁-AR以α_1A-AR为主.     

美托洛尔在正常大鼠和自发性高血压大鼠体内的药代动力学-药效学结合模型

用麻醉正常大鼠(NR)和麻醉自发性高血压大鼠(SHR)研究美托洛尔混旋体(Met)药动学-药效学之间的关系. Sig Met后, Met在NR及大多数SHR上的血药浓度-时间曲线呈二室模型. 药动学参数k_a, k_e，t_1/2ka，t_1/2α，t_1/2β在两种大鼠间有显著性差异. Met抑制SHR和NR的V_max，dp/dt_max，LVSP, SBP及HR效应和血药浓度之间存在着逆时针滞后环. 引入效应室理论后, 药效和效应室浓度间的关系符合Sigmoid-E_max模型. Met抑制V_max, dp/dt_max, LVSP及SBP作用在SHR上的C_ss50分别是NR的1.6, 3.2, 4.3和3.0倍, 而减慢SHR心率的作用仅为NR的28%.     

比较不同类型抗抑郁剂对新生大鼠神经细胞内游离Ca2+浓度的影响

The ability of antidepressant drugs to increase the concentration of intracellular Ca²⁺(［Ca²⁺］_i) was examined in dispersed brain cells from neonatal rat cortex and hippocampus using the Ca²⁺ sensitive fluorescent indicator Fura-2. Desipramine (DIM 0.1-1.0 mmol·L^-1) increased ［Ca²⁺］_i in a concentration-dependent manner. DIM (1.0 mmol·L^-1) and fluoxetine (1.0 mmol·L^-1) induced ［Ca²⁺］
_i increases were not altered by the absence of external Ca²⁺ or by the presence of nimodipine (10 μmol·L^-1). Pretreatment with neomycin (10 mmol·L^-1), an inhibitor of inositol 1,4,5-trisphosphate production, significantly inhibited DIM-induced ［Ca²⁺］_i increase but could not effectively inhibit fluoxetine-induced ［Ca²⁺］_i increase. Pretreatment with dantrolene (0.05 mmol·L^-1), an exhaustor of Ca²⁺ store, inhibited fluoxetineinduced ［Ca²⁺］_i increase, suggesting that DIM and fluoxetine provoke intracellular Ca²⁺ mobilization. In addition, fluoxetine-induced ［Ca²⁺］_i increase was about 1.5 times higher than that induced by DIM at the same concentration (0.4 mmol·L^-1). Moclobemide, an inhibitor of monoamine oxidase A, did not affect ［Ca²⁺］_i. It is concluded that DIM and fluoxetine may be Ca²⁺ mobilizing agents.     

川芎嗪对慢性支气管炎肺泡巨噬细胞上CD11c和CD14量的影响

对19例慢性支气管炎（慢支）缓解期患者和15例正常对照者经局部支气管肺泡灌洗获取的肺泡巨噬细胞(AM)，加川芎嗪(ligustrazine)，脂多糖(LPS)体外培养24 h后，以流式细胞仪分析其CD11c和CD14表达的百分率；测定其胞浆游离钙水平. 慢支组AM膜上CD11c和CD14的表达均显著高于正常对照组；100 mg·L^-1 LPS可使慢支组AM膜上CD11c的表达进一步增加；400 mg·L^-1川芎嗪可明显减少LPS诱导慢支组AM膜上CD11c的过度表达. 慢支组AM胞浆中基础钙水平较正常对照组明显增高，但其静息钙水平与正常对照组无显著差异性；400　mg·L^-1川芎嗪明显抑制10 mg·L^-1 LPS诱导慢支AM胞浆游离钙水平的升高. 结果提示川芎嗪通过抑制慢支患者AM胞浆游离钙水平升高下调其CD11c的表达, 可能对慢支缓解期气道内非特异性炎症有抑制作用.     

羊角拗苷对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的观察羊角拗苷(Div)对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响,以探讨Div正性肌力作用的机制。方法Fura-2/AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞,应用荧光离子成像系统观察Div800nmol.L-1对心室肌细胞[Ca2+]i的影响。结果在正常台氏液中,Div使心室肌细胞[Ca2+]i显著升高(243±36)%,在无钙液中对[Ca2+]i无明显影响。在无Na+、无K+台氏液中,Div使[Ca2+]i升高(96±20)%。给予L型钙通道阻滞剂CdCl2100μmol.L-1预处理后,Div仍使[Ca2+]i升高(63±10)%。给予T型钙通道阻滞剂NiCl240μmol.L-1预处理后,Div引起的[Ca2+]i升高基本被阻断。结论体外应用Div800nmol.L-1时使豚鼠心室肌细胞[Ca2+]i升高,该升高作用依赖于细胞外Ca2+的存在,可能主要由T型钙通道介导,L型钙通道和Na+-Ca2+交换蛋白亦参与其中。其正性肌力作用与心室肌细胞[Ca2+]i升高有关。     

小檗碱对神经递质引起的新生大鼠脑细胞内游离钙升高的影响

以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为荧光指示剂，利用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子系统测定小檗碱（Ｂｅｒ）对新生大鼠脑细胞静息Ｃａ２＋和神经递质引起的脑细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化的影响．Ｂｅｒ１，１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１对脑静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响．Ｂｅｒ１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１剂量依赖的抑制谷氨酸引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高．Ｂｅｒ１０μｍｏｌ·Ｌ－１能降低Ｈａｎｋｓ液有Ｃａ２＋和无Ｃａ２＋时去甲肾上腺素引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高，且能降低５－羟色胺引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高（在细胞外液有Ｃａ２＋时）．结果提示Ｂｅｒ可降低谷氨酸，去甲肾上腺素和５－羟色胺引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高，这可能是其抗脑缺血机理之一．     

T型钙通道在心肌肥厚大鼠心肌细胞钙内流中的作用

目的研究T型钙通道在心肌细胞钙离子内流中的作用及其对心脏兴奋收缩耦联的可能影响。方法测定选择性T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔对培养的SD乳大鼠心室肌细胞和二肾一夹心肌肥厚大鼠心室肌细胞[Ca2+]i的影响。结果血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激使乳大鼠心室肌舒张期细胞[Ca2+]i增高,收缩期细胞[Ca2+]i降低,[Ca2+]i上升和下降的时间延长。米贝拉地尔1.25～5μmol·L-1浓度依赖性降低AngⅡ引起的细胞[Ca2+]i变化。在心肌肥厚模型大鼠,咖啡因刺激后,[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显降低。而米贝拉地尔25mg·kg-1·d-1(灌胃给药7～9周)组加入咖啡因刺激后细胞内[Ca2+]i增幅和最高[Ca2+]i明显增高。结论T型钙通道异常开放可以引起心肌细胞内钙超载。阻断T型钙通道,可能通过改善肌浆网摄取及释放钙的功能而抑制心肌细胞钙超载。     

异钩藤碱体外对家兔血小板聚集和胞浆游离钙离子浓度的影响

目的研究异钩藤碱对血小板内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,以探讨其抗血小板聚集作用的可能机制。方法比浊法测定家兔血小板聚集功能;双波长Fura-2荧光法测定血小板胞浆[Ca2+]i。结果异钩藤碱0.33~1.30mmol.L-1体外给药对ADP和凝血酶引起的血小板聚集有浓度依赖性的抑制作用。存在细胞外钙时,异钩藤碱对基础状态血小板的[Ca2+]i和ADP及凝血酶诱导的[Ca2+]i水平有浓度依赖性的降低作用,而无细胞外钙存在时,则均无明显影响,表明其可抑制血小板的外钙内流,对内钙释放无明显抑制作用。结论异钩藤碱可抑制血小板聚集,其作用机制可能与其抑制血小板胞浆[Ca2+]升高有关。     

三七皂甙Rg1对大鼠实验性血栓形成,血小板聚集率及血小板内游离钙水平的影响

三七皂甙Rg₁可明显降低实验性血栓形成, 并且以剂量依赖方式抑制凝血酶诱导的血小板聚集. 此外, Rg₁还可抑制凝血酶诱导的正常血压及肾性高血压大鼠血小板内游离钙(［Ca²⁺］_i)升高. 表明Rg₁的抗血栓形成和抗血小板聚集作用可能与抑制血小板［Ca²⁺］_i升高有关.     

强啡肽对培养脊髓神经元高钾刺激性胞内钙增高的双向作用

为探讨强啡肽(Dyn)镇痛与致瘫的细胞机理，采用Fura-2显微荧光光度技术观测了不同浓度的Dyn A(1-17)对原代培养脊髓神经元单个细胞内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)的影响. Dyn A 0.1-100 μmol·L^-1对基础［Ca²⁺］_i均无影响. Dyn A 0.1和1 μmol·L^-1使高钾(50 mmol·L^-１)刺激的Ca²⁺内流峰值反应分别下降94%(n=6)和83%(n=4, P<0.05); Dyn A 10和100 μmol·L^-1对高钾刺激反应峰值无明显影响，但所有测试细胞均呈现持续性［Ca²⁺］_i升高；预先给予低浓度的Dyn A (0.1和1 μmol·L^-1), 则高浓度Dyn A (10 和100 μmol·L^-1)的促进作用明显 减弱甚至消失. 结果表明低浓度和高浓度Dyn A(1-17)对培养脊髓神经元的基础［Ca²⁺］_i无影响，但可分别抑制和促进去极化性钙离子内流，低浓度Dyn A 可对抗高浓度Dyn A 的促进作用.