用单克隆抗体对湖北五株流行性出血热病毒抗原性初步检定

由于流行性出血热病毒(EHFV)单克隆抗体(McAb)的研制成功,目前已将McAb应用于EHF病毒抗原检测及分析研究。最近我们在中国预防医学中心病毒学研究所虫媒病毒室的协助下,对从湖北疫区不同宿主动物分离到的5株EHF病毒的抗原性进行了初步检定,证明属野鼠型,但病毒抗原对21个单克隆抗体IF反应具有一定的特点,结果如下: 1.各个McAb对湖北5株EHFV的IF     

流行性出血热病毒多肽的免疫印渍分析

对4株不同来源的流行性出血热病毒(EHFV)的抗原进行免疫印渍分析。转印后,与其兔抗血清分别作交叉酶免疫染色,均出现一条共同的深染的区带,其分子量为52.5Kd。用A35单克隆抗体(McAb)或病人血清染色,亦见此区带。述一区带的多肽可能是EHFV引起机体免疫应答的主要抗原成份。     

EHF病毒(A_9株)核蛋白血凝活性的研究

用已知抗 EHF 病毒核蛋白的 McAb A_(35)偶联于 Sepharose 4B 免疫吸咐柱进行亲和层析,纯化 EHF 病毒 A_9株抗原,再用高压液相色谱进一步分离纯化.所获纯化样品用不同特性的单克隆抗体、EHF 患者血清及正常人血清。通过 ELISA 间接法鉴定为 EHF 病毒特异性的;经 SDS-PAGE 测定其相对分子质量为49.6ku;并经 EHF 病毒 S、M 片段的 cDNA(PS86,PM 56)斑点杂交试验证实其中不含有核酸.且其比活性高于亲和层析纯化样品十几倍.HPLC 纯化 NP 仍具有血凝活性,并可被特异性抗体所抑制,将其免疫小鼠后,血清中可检出血凝抑制抗体,但无中和抗体.提示 EHF 病毒 A_9株的核蛋白上可能具有血凝活性结合位点的存在.     

流行性出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

用流行性出血热病毒(EHFV)陈株血凝素(HAN)免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤生长孔率为60％,阳性率为22％,三次克隆化培养阳性率达100％,通过筛选建立一株杂交瘤细胞1H8。其腹水单克隆抗体(McAb)的间接免疫荧光滴度为1:16×10~4,其血凝抑制滴度为1:5120。经染色体核型分析,1H8杂交细胞染色体为85—105条,每个细胞均含1—2条中着丝点标记染色体。经琼脂双扩散试验,1H8McAb属IgG2b亚类。该McAb与17株不同来源的EHFV都有免疫荧光反应,且对5株不同来源的EHFV—HAN具有血凝抑制活性。故1H8为血凝抑制抗体。这说明17株EHFV都具有血凝素抗原决定簇,但是1H8McAb对它们具有不同的活性。     

流行性出血热病毒山东地方株特性的研究

应用Vero-E_6细胞直接从流行性出血热(EHF)抗原阳性的褐家鼠鼠肺中分离出流行性出血热病毒R_(36)株(EHFV—R_(36))。形态学鉴定符合EHFV,并见到典型的颗粒性EHFV包涵体和大小形态类似的EHFV样颗粒。分离病毒株经EHFV单克隆抗体分析,R_(36)株EHFV的抗原谱不同于我国的R_(22)株,它既带有家鼠型R_(22)株相似的抗原决定簇,同时又具有野鼠型5H_5抗原决定簇。     

流行性出血热患者对野、家鼠型病毒多肽抗原的抗体应答

应用兔抗流行性出血热(EHF)病毒血清及EHF病人血清对野、家鼠型EHF病毒多肽抗原进行免疫识别,发现两型病毒多肽抗原间稍有差异。不同流行地区EHF病人血清大多数可与两型病毒49.6ku(50kd)多肽反应,提示该多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成分。并对EHF病人血清中针对两型病毒多肽抗原的抗体检出率与临床病程及病型的关系进行了观察。     

五株流行性出血热病毒单克隆抗体的建立及其特性的研究

<正> 流行性出血热(EHF)是世界分布较广的传染病之一。多年来,国内外学者已经从不同地区、不同宿主分离出流行性出血热病毒,并且发现它们都具有共同的和差异较大的抗原成份。EHFV的抗原比较复杂,对其不同抗原决定簇的性质还认识不够,尚不能用抗原性作EHFV的分型。单克隆抗体是研究病毒抗原的一种良好工具,我们用从人血清中分离的陈株病毒免疫Balb/c小鼠制备了5株McAb,现将建株及其特性研究的初步结果报告如下。材料与方法一、细胞和病毒:骨髓瘤细胞sp~2/0—Ag14,曾经8—氮杂鸟嘌呤(8—Azaguanine)处理过,用含20％胎牛血清(FCS)的RPMI     

5株抗恶性疟McAb的免疫荧光特性及其靶抗原鉴定

本文观察了5株抗恶性疟McAb的免疫荧光特性,并对其抗原进行了鉴定。结果表明5株McAb主要与恶性疟原虫红内期发育晚期虫体的表面膜抗原发生免疫反应,免疫荧光图象为明亮的点状、均匀片状和蜂窝状。它们在对靶抗原的识别上与免疫荧光的特点呈现一致性,主要能识别恶性疟原虫红内期发育晚期虫体的~(125)Ⅰ-表面标记抗原,其中McAbs 93A_3、94B_5、92D_4和93D_4主要识别分子量为125、115、83、74和67KDa的表面抗原,而McAb94D_1则主要识别分子量为200和19KDa的抗原。     

咸宁黑线姬鼠中流行性出血热病毒的分离与鉴定

从湖北咸宁黑线姬鼠中分离到一株 EHF 抗原因子,经系统的血清学鉴定,与多个单克隆抗体和抗血清起反应,排除了呼肠病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的污染,证实为 EHFV,并命名为 A_(24)株。     

50kd多肽是出血热病毒主要抗原

在著名传染病学专家郝连杰教授指导下,经过对国内外20余种流行性出血热病毒(EHFV)抗原多肽细致地分析,以及对来自不同地区的野鼠型与家鼠型EHFV多肽抗原比较,同济医院临床免疫研究室新得出结论:     

四株钩端螺旋体外膜单克隆抗体的建立,鉴定及对外膜蛋白抗原...

Four McAbs (1A7E7, 2F9D4, 2G3H5, 1A7H12) against outer membrane antigens of L. interrogans serovar Lai strain 017 were produced by hybridoma technique. McAb 1A7E7 was identified to be IgG2a, the rest IgG1 by immunodiffusion. Outer membrane antigens of three pathogenic leptospiral strains (017, 601, 156) and two non-pathogenic leptospiral strains (Patoc I, 3055) were analysed by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblotting with McAbs. It was found that McAb 1A7E7 recognized specifically the 42kd antigenic band of strain 017; McAb 2F9D4 the 42kd antigenic bands of strain 017, 601, 156, and McAbs 2G3H5 and 1A7H12 the 31 kd antigenic bands of 017, 601, 156. Further study of antigenic properties possessed by pathogenic leptospira may provide some new clues to look for specific diagnostic and protective antigens.     

桥粒蛋白生化免疫特性研究

Desmosmoes were dissolved by incubation at 100 degrees C for 30 minutes in lysis buffer containing 9.5 M urea. SDS-PAGE revealed seven high molecular weight (> 67 kd) bands and some keratins. Seven of these were considered to be major bands. Bands 1 and 2 with M(r) values of 250 kd and 215 kd, called desmoplakins I and II. Polypeptide bands 3, 4a 4b, 5 and 6 had M(r) values of 165kd, 130kd, 115kd, 83kd and 75kd, respectively. 2-2.5mg of Desmoplakin I was obtained by a preparative electrophoresis; the purity reached 93.1%. The isoelectric pH range was between 6.8 and 7.2, and the amino acid compositions displayed a relatively high content of glycine. It was found that McAb Desmoplakin I recognized specifically the 250kd antigenic band by immunoblotting.     

钩端螺旋体澳洲群体特异性McAb的建立,鉴定及群特异性...

Spleen cells of BALB/c mice immunized with whole Leptospira interrogans serogroup Australis serovar australis strain 620 were fused with myeloma cells line SP2/0. Specificities of four McAbs determined by MAT. 2E1 McAb (IgG3) reacted with 11 serovars, of the Australis serogroup, but did not react with 22 representative serovars of L. interrogans in 20 serogroups, L. biflexa strain patoc I and Leptonema illini strain 3055. 2E1 McAb showed serogroup specificity for Australis by agglutination and the other 3 McAbs showed partial serogroup specificity. We compared the outer envelope (OE) protein profiles of serovar australis strain 620 with those of two pathogenic L. interrogans serovar lai strain 601 and serovar hebdomadis strain 156 by SDS-PAGE. 63kd protein profile was only found in the OE of strain 620, and the quantity of 42kd protein of strain 620 was greater than that of strain 601 and 156. The immunoblotting revealed that 2E1 McAb reacted with a 34kd band in the OE preparation of serovar australis strain 620, but did not react with that of other two L. interrogans. 2E1 McAb also did not react with OE of non-pathogenic leptospires. It was suggested that 34kd protein might contain the antigenic determinants which were shared by leptospires of Australis serogroup.     

钩端螺旋体澳洲群群特异性McAb的建立、鉴定及群特异性抗原检测

作者成功地获得4株分泌抗澳洲群钩瑞螺旋体的单克隆抗体(McAb)杂交瘤。其中2E_1株能与所选澳洲群的11个型的钩体都发生凝集反应,而不与澳洲群外的20群22个型的钩体、非致病性Patot Ⅰ株钩体和伊利尼细螺旋体3055株发生凝集反应。由此表明,2E_1 McAb具有澳洲群钩体的群特异性。用SDS-PAGE、免疫印迹法对澳洲型620株、赖型601株、七日热型156株、Patoc Ⅰ株及3055株外膜蛋白中McAb识别的抗原成分进行检测,结果2E_1 McAb能特异地识别澳洲型620株34kd外膜蛋白区带。其余3株McAb具有澳洲群钩体部分群特异性。     

藜草花粉变应原免疫活性分析

目的:分析藜草花粉变应原成分及其变应原性、免疫原性.方法:用Sephacryl S-200HR葡聚糖凝胶层析法分离、纯化藜草花粉变应原,通过十二烷硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电脉法(SDS-PAGE)测定变应原各组分的分子质量;应用免疫印迹法检测各组分蛋白质与藜草花粉过敏性哮喘患者血清中sIgG和sIgE的反应率.结果:藜草花粉经电泳后得到12条蛋白质区带,分子质量依次为92,63.1,61,52,45,43,39.7,38.9,34,31.6,28.4和18.5～12 ku;免疫印迹可见4条sIgE反应带,蛋白分子质量依次为92,34,31.6和18.5～12 ku;与患者血清反应率分别是70%,50%,80%和90%;与血清sIgG结合的反应带有8条,蛋白分子质量为92,61,52,45,43,39.7,31.6和18.5～12 ku;与患者血清反应率分别是80%,40%,10%,20%,80%,10%,10%和100%.结论:藜草花粉变应原主要含12种蛋白质成分,其中分子质量为18.5～12 ku和92 ku的蛋白质变应原活性及免疫原活性均很强,是主要变应原成分;分子质量在34和31.6 ku的蛋白质有较强的变应原性而无或仅有较弱的免疫原性;而分子质量为43,61,45,52和39.7 ku的蛋白质具有一定的免疫原性而无变应原性.     

Virion proteins of viruses causing hemorrhagic fever with renal syndrome; monoclonal antibody analysis

SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting analysis by using 9 clones of monoclonal antibodies specifrc for hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) viruses were carried out on the virion proteins of 17 strains of HFRS viruses isolated from different areas in Asia and different hosts such as Apodemus agrarius, Rattus norvegicus, domestic cat and HFRS patients. Polypeptide with apparent molecular weight about 50 kilodalton(Kd) could be detected in all 17 strains of HFRS viruses. On this polypeptide there are two different antigenic determinants and one of them might be genus specific.     

抗斯氏狸殖吸虫单克隆抗体识别和检测抗原分子量

作者用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离斯氏狸殖吸虫抗原,并通过转移电泳转至国产混合纤维素酯滤膜上,用特异单克隆抗体进行识别,检测识别的抗原区带的分子量。制备的三株单克隆抗体(A_6、D_(10)、E_9)共识别6条抗原区带,抗原的分子量分别为182、152、109、21、17.8和14.5kd。     

不同地区流行性出血热患者血清与特异性病毒多肽成份的反应

本文研究了安徽、湖北、山西、河南91份临床诊断为流行性出血热患者血清与特异性病毒多肽成份的反应。结果表明,不同地区的患者血清均可与分子量在68kd和66kd左右的两种多肽发生反应,河南及湖北部分病例血清尚可识别75kd和61kd左右的病毒多肽。提示流行性出血热病毒存在多种特异性抗原多肽,其中68kd和66kd左右两种多肽是引起机体抗体应答反应的主要病毒抗原成份。