环境因子及接种量对单增李斯特菌生长/非生长界面的影响

单增李斯特菌在实验设定的环境条件下,通过10倍梯度稀释将菌悬液分别稀释到101、103、105、107CFU/m L四个接种水平,然后接种到TSB-YE肉汤中,培养基置于恒温培养箱中进行培养,然后通过肉眼观察培养基浊度并结合涂布TSA-YE平板对其生长/非生长情况进行判定,通过Logistics多项式回归模型对处理的数据建立了单增李斯特菌生长/非生长的界面模型。实验结果表明不同生长温度,p H和盐度的交互作用对单增李斯特菌的生长/非生长界面的影响较大,接种量的大小也会影响单增李斯特菌生长/非生长过渡区域的具体位置,但具体原因和作用机制还有待进一步研究。该研究为抑制单增李斯特菌生长的环境因子条件范围和实际产品中的污染严重程度提供一定的参考依据,对于有潜在单增李斯特菌污染的产品来说,这为加强产品的栅栏因子,优化工艺条件以提高其安全度也提供了重要的参考。     

食源性单增李斯特氏菌Lm319的毒力基因在四种肉汤培养基中表达分析

为了探明食源性单增李斯特菌的毒力基因在四种不同天然肉汤中的表达情况,了解食源性单增李斯特菌在不同肉类食品中的毒力水平。对单增李斯特菌Lm319中27个毒力基因进行PCR检测,并对Lm319在猪、鸡、牛和羊四种肉汤培养条件下27个毒力基因的表达情况进行RT-PCR检测。结果显示:单增李斯特菌Lm319中含有23个毒力基因;猪肉汤培养基中能表达的毒力基因种类以及基因表达量都是最高的,其次是羊肉肉汤培养基和牛肉肉汤培养基,而鸡肉肉汤培养基中表达的基因最少;同时发现iap、fbp、hpt和bsh这4个毒力基因的表达与prf A基因存在相关性。本研究表明,单增李斯特菌在不同生长环境下其毒力基因表达存在较大差异。     

即食食品中单增李斯特菌的半定量风险评估

开展某市即食食品中单增李斯特菌的半定量风险评估,参照微生物风险评估程序,对单增李斯特菌开展了危害识别、危害特征描述、暴露评估和风险特征描述。通过剂量反应关系推测易感人群和非易感人群由于摄入即食食品导致单增李斯特菌病的每年发病概率分别为3.71×10-7和3.39×10-9。基于2008~2011年监测各类生食蔬菜、生食水产品、菜肴(沙拉)等即食食品942组数据,构建了即食食品中单增李斯特菌的风险矩阵,由风险可能性和风险损失度计算得到易感人群通过摄入即食食品感染单增李斯特菌的风险等级属于五级风险等级中较小的一级,表明当地居民通过摄入即食食品感染单增李斯特菌病的风险较小。本文可为构建完整单增李斯特菌风险评估体系提供理论参考。     

不同增菌液对单增李斯特菌的增菌效果比较

目的比较不同选择性增菌液对单增李斯特菌增菌效果及对干扰菌的抗干扰性。方法参考国标GB/T 4789.30-2016和国际ISO 11290-1-2017,将2种来源的单增李斯特菌(标准菌株、分离菌株)和2种干扰菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌)分别接种到4种不同增菌液中,观察增菌后菌液的生长情况。结果研究发现低浓度菌液(102数量级), Fraser肉汤对单增李斯特菌的增菌效果及抗干扰性优于LB肉汤。选择性添加剂浓度过高会抑制李斯特菌的生长,通过选择合适的选择性添加剂及改变添加剂的浓度可以提高检出率。结论在实验室日常检验过程中,需考虑样品类别,选择合适的培养基。提高检测的准确率。     

2005—2013年河北省即食食品中单增李斯特菌污染及耐药特征研究

研究2005—2013年河北省即食食品中单增李斯特菌污染状况及耐药特征。方法 单增李斯特菌检验参照(GB/T 4789.30),药物敏感性试验应用微量肉汤稀释法,对15种抗生素进行耐药检测。结果 单增李斯特菌总污染率为1.34%,凉拌菜及沙拉(2.62%)、生食水产品(2.51%)的检出率均高于所测其他食品。136株单增李斯特菌对15种抗生素耐药率为13.97%,以氯霉素耐药率最高(7.35%),其次是四环素和复方新诺明(均为4.41%),强力霉素和环丙沙星的耐药率均为2.94%,所有菌株对青霉素、亚胺培南、头孢噻吩、利福平、氨苄西林-舒巴坦酸敏感。结论 河北省即食食品中存在单增李斯特菌污染,分离菌株存在较严重的耐药情况,且耐药性有增长趋势,应加强即食食品的监管以保证食品安全及公众健康。     

巴氏杀菌奶中单增李斯特菌生长动力学模型的研究

为研究巴氏杀菌奶中单增李斯特菌的生长规律,将4株单增李斯特菌混合接种到巴氏杀菌奶中,并分别置于4、8、12、16、20、25、30、37、40、43℃条件下恒温培养,间隔时间取样计数。使用美国农业部开发的IPMP 2013软件,将4～43℃条件下得的生长数据分别代入Huang模型和Baranyi模型进行拟合,分析单增李斯特菌在不同温度下的生长动力学特征。在所有温度下均可以观察到单增李斯特菌的生长,所有生长曲线都显示出滞后期,指数期和稳定期。综合比较2种初级模型的RMSE、RSE、AIC和生长速率,确定Baranyi模型和Huang模型均适合描述巴氏杀菌奶中单增李斯特菌的生长,且具有等同的拟合效果。采用Ratkowsky平方根模型、Huang平方根模型和Cardinal模型描述温度对巴氏杀菌奶中单增李斯特菌生长速率的影响。研究表明:3种模型都能用于评价温度对其生长速率的影响。Ratkowsky平方根模型预测的单增李斯特菌的最低、最高温度为0.218℃和46.389℃,与文献报道的更为接近。因此,Ratkowsky平方根模型比Huang平方根模型和Cardinal模型更适合描述温度对单增李斯特菌生长的影响。建立的模型可为相关监管部门开展巴氏杀菌奶中单增李斯特菌的安全风险评估提供科学依据。     

单增李斯特菌国标检验培养基质量的比较

通过考察市售单增李斯特菌国标检验培养基对单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM,以下简称单增李斯特菌)和非单增李斯特菌的增菌检测效果,比较不同品牌培养基的质量。该研究采用螺旋涂布计数法,定量测定30株单增李斯特菌和9株非单增李斯特菌在4个品牌的李氏增菌肉汤(LB₁、LB₂)和6个品牌的PALCAM琼脂培养基、李斯特氏菌显色培养基中的生长情况。实验结果表明:30株单增李斯特菌在4个品牌的LB;增菌肉汤中的浓度均值为2.04×10⁷CFU/m L~4.59×10⁷CFU/m L;在LB;增菌肉汤中的浓度为2.36×10⁷CFU/m L~2.69×10⁷CFU/m L;在D品牌的PALCAM琼脂培养基中的生长率均值为0.55,在其余5个品牌的PALCAM琼脂培养基和6个品牌的李斯特氏菌显色培养基中的生长率均值均超过0.85。30株单增李斯特菌在李氏增菌肉汤(LB₁、LB₂)、PALCAM琼脂培养基、李斯特氏菌显色培养基中的增菌检测效果存在显著性差异(p<0.05)。4个品牌的李氏增菌肉汤的增菌效果和6个品牌PALCAM琼脂培养基、李斯特氏显色培养基的检测效果存在显著性差异(p<0.01)。该研究结果表明市售单增李斯特菌国标检验培养基质量差异大。     

重庆市即食食品中单核细胞增生李斯特菌污染监测及初步风险评估

目的 了解重庆市市售即食食品中单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)的污染情况,进行初步风险评估,为预防食源性疾病提供科学依据。方法 2016—2019年对全市39个区县的市售即食食品中的单增李斯特菌进行监测,并用半定量微生物风险评估方法,初步评估重庆市即食食品中单增李斯特菌的风险。结果 重庆市2 680份即食食品中单增李斯特菌的检出率为1.77%;中式凉拌菜的单增李斯特菌检出率显著高于熟肉制品、生食水产品和即食豆制品(非发酵)(P＜0.05);超市、餐饮单位、农贸市场、便利店的即食食品中单增李斯特菌检出率大致相当(P＞0.05);第四季度单增李斯特菌检出率最高(P＞0.05);包装形式上,散装食品污染率最高(P＜0.05)。重庆市每年预计因食用熟肉制品、中式凉拌菜、生食水产品、即食豆制品(非发酵)引起每百万人口的李斯特菌病的发病例数分别为633.7例、126.1例、2.4例、31.5例。结论 重庆市即食食品中存在单增李斯特菌污染,其中熟肉制品致病风险最大。建议对即食食品加工后期采取有效的控制和监测措施,优先开展熟肉制品和中式凉拌菜中单增李斯特菌的定量风险评估研究,以降低潜在危害。     

鲜切结球莴苣中单增李斯特菌生长预测模型的建立

为建立不同温度下鲜切结球莴苣中单增李斯特菌生长模型,将单增李斯特菌接种到鲜切结球莴苣表面,并于不同温度下贮藏,获得其在4、8、16、24和32℃下的生长数据,选用Gompertz模型进行拟合,建立初级生长模型。在此基础上建立二级模型研究温度对初级模型中单增李斯特菌生长动力学参数的影响,并进行数学检验。结果表明,对最大比生长速率和延滞时间建立平方根模型,结果呈良好的线性关系,相关系数R2分别为0.977 2和0.984 7,所建立的预测模型能很好地描述不同温度下单增李斯特菌的生长动态。     

接种量对单增李斯特菌生长/非生长界面的影响

在4个水平(10~1,10~3,10~5,10~7 CFU/m L)接种浓度下,通过肉眼观察培养基浊度结合涂布TSA-YE平板,对TSB-YE肉汤中培养的单增李斯特菌在温度(0~30℃)、盐度(0.5%~8.5%)、pH(4.0~7.5)条件下的生长/非生长响应进行测定,结果表明:接种量影响单增李斯特菌生长/非生长界面的位置。通过对各种生长条件下单增李斯特菌生长/非生长数据的分析,用多项式逻辑回归模型,建立单增李斯特菌生长/非生长的界面模型,模型拟合的一致性为83.8%到89.6%,拟合结果较好。接种量对微生物生长的起点有重要影响,为微生物生长受初菌数的影响提供定量分析数据,也为建立实际产品中微生物的生长/非生长界面模型提供参考依据。     

温度生长预测模型在大肠杆菌O157:H7控制中的应用

大肠杆菌O157:H7是严重危害人类健康的肠道致病菌。本实验研究了该菌在温度、pH、NaCl浓度影响下的生长繁殖规律,确定了大肠杆菌O157:H7的最适生长条件。建立了在pH、NaCl浓度最佳情况下鸡肉和肉汤中该菌的温度生长预测模型。以模型为依据,提出了出口分割鸡肉中控制大肠杆菌O157:H7的措施。     

Listeria monocytogenes在经高氧化还原电位酸性水处理的鲜食莴苣上预测模型的建立

采用高氧化还原电位酸性水(EOW)对接种过单核细胞增生李斯特菌的鲜食莴苣进行处理,研究残留菌在不同温度下的保存期限。建立Gompertz,Logistic和Baranyi初级模型,描述单增李斯特菌在不同温度下的生长情况,对比结果表明,Gompertz模型的判定系数R2=0.9913,能够更好地拟合李斯特菌在各个温度下的生长状况,并得到李斯特菌生长的Gompertz模型生长参数(SGR,LT,MPD)。利用平方根模型对其的最大比生长速率的平方根-温度进行拟合,得到莴苣上单核细胞增生李斯特菌生长的二级模型:SGR=0.015T+0.069。使用判定系数(R2)、均方误差(MSE)、偏差因子(BF)和准确因子(AF)对模型进行验证,结果表明,本研究得出的二级模型能够很好地预测单核细胞增生李斯特菌在相应环境下的生长状况。     

Inhibition of Listeria monocytogenes by exposure to a combination of nisin and cold-pressed terpeneless Valencia oil

Listeria monocytogenes is an important foodborne pathogen and its control in foods is a significant challenge. This study evaluated the effectiveness of nisin and cold-pressed terpeneless Valencia oil (CPTVO) on limiting L. monocytogenes growth. Disk diffusion assays were performed to determine the effects of CPTVO and nisin individually and in combination. Together, these antimicrobials produced a zone of inhibition that was significantly larger (P < 0.05) than zones correlating to CPTVO or nisin individually. Furthermore, L. monocytogenesΔsigB had an increased sensitivity to the combination treatment. Growth experiments performed in brain heart infusion (BHI) broth revealed the effects of nisin and CPTVO, individually and in combination on L. monocytogenes growth rate. When L. monocytogenes was grown in BHI containing 0.025% CPTVO and 26 IU/mL nisin, no growth inhibition was observed relative to the control. However, exposure to CPTVO at 0 h followed by the introduction of nisin at 15 h resulted in a statistically significant (P < 0.05) reduction in growth. This approach to inhibiting L. monocytogenes has potential as an all-natural, generally-recognized-as-safe multiple hurdle intervention that may be applicable for ready-to-eat products in which L. monocytogenes is likely to cause foodborne illness.     

地衣芽孢杆菌在营养肉汤中生长模型的建立

考察了温度、Na Cl质量分数及p H值对地衣芽孢杆菌在营养肉汤中生长特性的影响,建立了15~45℃下地衣芽孢杆菌的生长模型。结果表明:地衣芽孢杆菌的最适的生长温度范围为30~37℃,Na Cl质量分数范围为0~3%,p H值范围为5.0~8.0。在15、20、25℃时其生长曲线用MMF模型拟合较好,在30、37℃用Richards模型拟合较好,其相关系数较高,均大于0.998。相反,在45℃其生长曲线只能用Logistic方程拟合,且相关系数较低,仅为0.907。     

食品中单核细胞增生李斯特菌株的分离及聚合酶链式反应鉴定

目的 建立单核细胞增生李斯特菌的聚合酶链式反应(PCR)检测方法,了解市售食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况.方法 采集成都市市售生畜肉、生禽肉、熟肉制品、水产品、生食蔬菜以及其他熟食等食品样品共135份,采用李氏增菌肉汤(LB1,LB2)进行初增菌,应用选择性分离培养基PALCAM和在TSA-YE平板上进行分离,利用单增李斯特显色平板进行鉴定;根据李斯特菌的特异性基因iap基因设计引物,采用PCR方法检测所有分离的李斯特菌株;根据单增李斯特菌的特异性基因hly基因和prfA基因设计引物检测单核细胞增生李斯特菌株.结果 135份样品中共检出李斯特菌17株,检出率为12.6％;其中单核细胞增生李斯特菌4株,检出率为3.0％.结论 本研究建立的PCR方法具有特异性,本市市售食品不同程度受到李斯特菌的污染.     

发酵液中透明质酸含量的快速估测方法

为快速估测出发酵液中透明质酸含量,对发酵液中透明质酸含量与菌体量、浊度、粘度、电导率、还原糖含量进行相关性分析及偏相关性分析,选择与透明质酸含量相关性最为显著指标构建一元线性回归、二次项曲线回归以及BP神经网络数学模型,并对模型估测发酵液中透明质酸含量进行验证。结果表明:在显著性水平P<0.01下,发酵液浊度、电导率与透明质酸含量不存在相关性;菌体量与透明质酸含量存在虚假性相关;粘度及还原糖含量与透明质酸含量显著相关,系数分别为0.984、-0.869,粘度与透明质酸含量相关性最为显著,可作为估测发酵液中透明质酸含量的唯一指标;利用三种数学模型对发酵液中透明质酸含量进行估测验证表明BP神经网络模型的估测最为准确,方差仅为1.89×10-2,通过测定发酵液粘度可快速准确估测出发酵液中透明质酸含量。     

Inhibitory activity of colicin E1 against Listeria monocytogenes

Colicins are gram-negative bacteriocins produced by and effective against Escherichia coli and related species. Colicin E1 (ColE1) is composed of three functional domains, which collectively have a pore-forming effect on targeted bacteria. ColE1 binding and translocation domains are highly specific in contrast to the pore-forming domain, implying that ColE1 could be broadly effective. In this study, the activity of ColE1 against Listeria monocytogenes was evaluated in broth and on surfaces of ready-to-eat products. Individual strains of L. monocytogenes were examined in broth containing ColE1 at 0, 0.1, 1, or 10 microg/ml. Although strain differences in sensitivity to ColE1 existed, growth was significantly reduced in all strains at doses as low as 0.1 microg/ml. Sterilized ham slices were submerged in a five-strain L. monocytogenes cocktail (either 7 or 4 log CFU/ ml) and placed in vacuum packages containing 0, 1, 5, 10, 25, or 50 microg of ColE1. Ham slices were then stored at 4 or 10 degrees C, and samples were removed and examined for L. monocytogenes after 1, 3, 7, and 14 days. Reduction of L. monocytogenes by ColE1 was dependent on initial inoculum concentration and storage temperature. For slices stored at 4 degrees C, treatment with 25 microg reduced Listeria growth below detection limits for the slices inoculated with 4 log CFU/ml for the entire 14 days, whereas for the 7-log CFU/ml slices, growth was detected at 7 days postinoculation. For slices stored at 10 degrees C, 10 microg/ml ColE1 significantly inhibited growth of L. monocytogenes for up to 3 days for both inoculation groups. These data indicate that ColE1 is highly effective against Listeria.     

Inhibition of Listeria monocytogenes in turkey and pork-beef bologna by combinations of sorbate, benzoate, and propionate

The control of Listeria monocytogenes was evaluated with ready-to-eat uncured turkey and cured pork-beef bologna with combinations of benzoate, propionate, and sorbate. Three treatments of each product type were formulated to include control with no antimycotic agents; a combination of 0.05% sodium benzoate and 0.05% sodium propionate; and a combination of 0.05% sodium benzoate and 0.05% potassium sorbate. Ingredients were mixed, stuffed into fibrous, moisture-impermeable casings, cooked to an internal temperature of 73.9 degrees C, chilled, and sliced. The final product was surface inoculated with L. monocytogenes (4 log CFU per package), vacuum packaged, and stored at 4 degrees C for 13 weeks. The antimycotic addition to the second and third uncured turkey treatments initially slowed the pathogen growth rate compared with the control, but populations of L. monocytogenes increased 5 log or more by 6 weeks. In contrast, the addition of antimycotic combinations in the cured bologna prevented growth of L. monocytogenes during the 13-week storage period at 4 degrees C, compared with a more than 3.5-log increase in listerial populations in the control bologna, to which no antimicrobial agents had been added. These data suggest that low concentrations of antimycotic agents can prevent L. monocytogenes growth in certain ready-to-eat meats. Additional research is needed to define the levels needed to prevent growth of L. monocytogenes in high-moisture cured and uncured ready-to-eat meat and poultry and for gaining governmental approval for their use in such formulations.     

Effects of suspension in emulsified wiener or incubation in wiener packages on the virulence of Listeria monocytogenes Scott A in intragastrically inoculated A/J mice

Several outbreaks of listeriosis have been associated with contamination of wieners and other ready-to-eat meat products. In this study, we addressed the question of whether emulsification in, or growth on, wieners triggers a response in the listerial cells that makes them more virulent or protects them against the harsh environment of the gastrointestinal tract in mice. Our results indicate that Listeria monocytogenes Scott A grows poorly, if at all, in one brand of commercially prepared wieners inoculated with 5 x 10(3) to 5 x 10(6) CFU per package and incubated at 15 degrees C. Neither L. monocytogenes Scott A emulsified in a slurry of homogenized wieners nor recovered from wiener package fluid after a 7-day incubation at 15 degrees C were more virulent when inoculated into the stomachs of A/J mice than L. monocytogenes Scott A grown in brain heart infusion broth. These findings suggest that the ability of L. monocytogenes Scott A to cause systemic infection following introduction into the gastrointestinal tract was not improved by incubation with wieners or suspension in a meat matrix.