茸菖胶囊对幼年大鼠癫痫后NRSF和BDNF蛋白表达的影响

[目的] 研究茸菖胶囊对幼年大鼠癫痫后神经元限制性沉默因子(NRSF)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响。[方法] 建立戊四唑点燃癫痫模型,分为中药高、中、低剂量组、西药组、模型组和空白组,用蛋白免疫印迹杂交法检测各组NRSF和BDNF 蛋白的变化。[结果] 幼年大鼠致痫后模型组海马NRSF和BDNF蛋白表达升高,中药高剂量组可显著降低大鼠海马齿状回NRSF和BDNF蛋白表达(P<0.01),作用优于西药组和其他中药组。[结论] 中药复方茸菖胶囊抗癫痫及改善癫痫后认知障碍机制可能与调控组蛋白乙酰化修饰及其所介导的神经元基因表达有关。     

穴位埋药线对癫痫持续状态后神经细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨穴位埋药线法抑制癫痫持续状态(SE)后大鼠海马神经元凋亡的基因水平机制。【方法】以腹腔注射青霉素诱导大鼠SE,采用免疫组织化学法检测SE后大鼠海马神经元凋亡相关基因c-jun、bcl-2的表达。【结果】青霉素致SE后24h,穴位埋药线组、苯妥英钠组和常规针刺组与模型组比较,c—jun表达降低,bcl-2表达升高,两者分别与细胞凋亡指数(AI)呈正、负相关,其中以穴位埋药线组与模型组差异最为显著。【结论】提示穴位埋药线疗法可能通过抑制c-jun、促进bcl-2蛋白表达,阻止SE后大鼠海马神经元凋亡的发生发展,从而起治疗癫痫的作用。     

针刺后海穴对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马CA1区突触素蛋白表达和超微结构的影响

[目的] 观察针刺后海穴对血管性痴呆大鼠学习记忆功能、海马CA1区突触素蛋白表达及超微结构的影响。[方法] 将48只SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组和针刺组, 每组16只, 采用双侧颈总动脉永久性结扎(2-VO)方法制造血管性痴呆模型, 针刺后海穴3个疗程后, 采用Morris水迷宫、免疫组化及电镜技术观察各组大鼠学习记忆功能、海马CA1区突触素蛋白表达及神经元超微结构的变化。[结果] 与空白组和模型组比较, 针刺组逃避潜伏期、原平台象限停留时间和大鼠海马CA1区突触素蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05);针刺组神经细胞包膜完整, 核内常染色质均匀分布, 线粒体丰富, 线粒体嵴未见明显断裂或缺失, 粗面内质网丰富;神经胶质细胞细胞器较少, 髓鞘未见明显肿胀、撕裂、溶解。[结论] 针刺后海穴可改善血管性痴呆大鼠海马的学习记忆能力, 其机制可能与改善CA1区突触素蛋白表达及超微结构有关。     

苦参素对慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡保护作用的研究

[目的]研究苦参素对大鼠慢性脑缺血后大脑海马CA1区神经元凋亡的保护作用并探讨其机制。[方法]将100只SD大鼠采用结扎双侧颈总动脉的方法复制慢性脑缺血大鼠模型,设假手术组、模型组和苦参素低[25 mg/（kg·d）]、中[50 mg/（kg·d）]、高[100 mg/（kg·d）]剂量组,各20只,术后第2天开始腹腔注射给药,疗程7 d。通过苏木精-伊红（HE）染色、末端标记（TUNEL）法分别观察海马CA1区神经元形态及凋亡状况;免疫组织化学（IHC）法检测海马B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、核因子-κB（NF-κB）蛋白表达;生化分析海马区氧化酶活性和丙二醛（MDA）含量;测定海马组织炎症细胞因子含量。[结果]与模型组比较,苦参素中、高剂量组慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元形态结构变化和凋亡状况均明显改善,凋亡指数（AI）显著降低（P<0.01）,海马区Bcl-2表达上调、Bax表达下调且Bcl-2/Bax比值显著提高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3、NF-κB蛋白表达均显著下调（P<0.05或P<0.01）,抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）]活性显著升高且MDA含量显著降低（P<0.05或P<0.01）;炎症细胞因子[白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）]含量均显著降低（P<0.05或P<0.01）。[结论]苦参素具有抑制慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡的药理学作用,其机制可能与苦参素调节凋亡相关蛋白表达以及提高氧自由基清除能力、抑制炎症反应有关。     

针刺对痴呆小鼠大脑神经元超微结构的影响

[目的] 研究三焦针法对痴呆小鼠皮质和海马CA1区神经元线粒体结构的影响。[方法] 选取雄性SAMP8小鼠30只(随机分成模型组、非穴组、穴位组)和10只SAMR1小鼠(正常对照组)。持续治疗30日后,采用电子显微镜对小鼠大脑皮质顶叶和海马CA1区进行观察。[结果] R1组皮质顶叶和海马CA1区超微结构正常;SAMP8模型组小鼠神经元部分线粒体肿大、部分变性、部分脂肪化和坏死;SAMP8三焦针刺组线粒体肿大减少,少数线粒体变性,脂肪化和坏死;非经穴针刺组线粒体少数介于两者之间。[结论] 三焦针法能有效改善SAMP8小鼠大脑皮质和海马CA1区神经原线粒体病理性损伤。     

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤影响的研究

[目的] 探讨熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤的影响.[方法] 应用氯化锂-匹罗卡品复制难治性癫痫大鼠模型.观察实验大鼠的反复自发性发作(SRS)情况、海马形态学改变和苔藓纤维出芽(MFS).[结果] 1)治疗组癫痫大鼠SRS的发作次数均明显低于模型组(P < 0.01).2)光、电镜结果显示：各治疗组中联合治疗组海马结构损伤最轻.3)Timm染色结果显示：联合治疗组对海马CA3区及齿状回MFS有较强的干预作用,优于单药治疗组.这种干预作用的强弱与熄风胶囊的剂量呈现一定正相关关系.[结论] 熄风胶囊单药及与卡马西平(CBZ)联合用药能够有效的控制氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,降低海马神经元损伤的程度,抑制苔藓纤维异常出芽.     

参芪复方对GK大鼠心肌细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax及NO的影响

[目的]研究参芪复方对GK大鼠心肌细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax及一氧化氮(NO)的影响及其可能作用机制。[方法]GK大鼠腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),同时给予高脂饮食复制2型糖尿病(T2DM)心肌病变模型。选择随机血糖≥11.1mmol/L的GK大鼠随机分为4组:模型组、中药高、低剂量组、西药组,另设正常Wistar大鼠作正常对照组,共5组动物。治疗4周后,统一取心肌标本,通过免疫组化等测量方法,对照观察各组药物对GK大鼠一般状态、心肌NO、心肌Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。[结论]GK大鼠的上述指标存在明显异常。参芪复方特别是其高剂量组能改善其一般状态、升高心肌NO(P<0.01),升高心肌细胞凋亡抑制因子Bcl-2的表达(P<0.01),降低促细胞凋亡因子Bax表达(P<0.05)和Bax/Bcl-2比值(P<0.01)。[结论]凋亡相关因子Bcl-2和Bax与NO参与糖尿病心肌损伤过程,参芪复方能升高心肌NO,降低心肌Bax表达,升高Bcl-2表达。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca²⁺浓度[Ca²⁺]_i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(MCAO)模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca²⁺]_i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca²⁺]_i(以细胞内Ca²⁺相对荧光强度表示)在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时(P<0.05)。假手术组与正常组相比[,Ca²⁺]_i变化差异无统计学意义(P>0.05)。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca²⁺]_i比较,无统计学意义(P>0.05)。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca²⁺]_i低于模型组(P<0.01)。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca²⁺]_i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca²⁺]_i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

和颜坤泰胶囊对卵巢去势大鼠子宫形态及细胞凋亡的影响

[目的]研究和颜坤泰胶囊对卵巢去势模型大鼠子宫形态及细胞凋亡的影响。[方法]以雌性去势大鼠为动物模型,分为空白对照组,假手术组,模型组,补佳乐组,莉芙敏组,和颜坤泰胶囊8、4、2 g生药/kg剂量组。给药8周后,观察药物对子宫病理学的影响,检测子宫细胞凋亡率及Bcl-2 mRNA、Bax mRNA和蛋白的表达。[结果]和颜坤泰胶囊可增加去势大鼠子宫横截面及壁厚,肌层面积及厚度,内膜面积及厚度,上皮厚度和腺体数（P<0.01,P<0.05）;能降低去势大鼠子宫细胞的凋亡率（P<0.01,P<0.05）,升高子宫Bcl-2 mRNA和蛋白的表达（P<0.01,P<0.05）,降低BaxmRNA和蛋白的表达（P<0.01,P<0.05）。[结论]和颜坤泰胶囊有一定的子宫营养作用,可通过调控Bcl-2和Bax基因与蛋白的表达来抑制子宫细胞的凋亡。     

针刺人中穴对MCAO大鼠中枢神经系统神经干细胞增殖影响的研究

[目的] 探讨针刺人中穴治疗缺血性脑卒中的神经发生机制。[方法] 用BrdU⁺/nestin⁺免疫荧光双标和蛋白免疫印迹法观察针刺对线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验模型（MCAO）大鼠大脑新生神经细胞及皮质、海马、纹状体nestin 蛋白表达量的变化的影响。[结果] 针刺组MCAO 大鼠BdrU⁺、nestin⁺和BrdU⁺/nestin⁺细胞数均高于正常组、假手术组和模型组（P<0.05）,模型组高于正常组和假手术组（P<0.05）;针刺组nestin在海马和皮质的表达量高于其他组别（P<0.05）。[结论] 缺血缺氧能引起MCAO大鼠脑神经干细胞的增殖,而针刺人中穴能增强神经干细胞增殖作用,促进大脑功能的修复。     

补肾调冲含药血清对离体卵巢颗粒细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响

【目的】探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞原癌基因蛋白表达的影响。【方法】采用血清药理学的方法，以不同含药量的大鼠血清与体外培养的卵巢颗粒细胞共同孵育24h，用免疫组化法检测Bcl-2、P53蛋白的表达。【结果】补肾调冲含药血清可增强Bcl-2蛋白的阳性表达。【结论】原癌基因作为卵巢内局部调节因子，参与卵巢颗粒细胞凋亡过程。补肾调冲含药血清可通过促进卵巢颗粒细胞内抑癌基因的蛋白表达，抑制颗粒细胞的凋亡。     

推拿疗法对骨骼肌纤维化大鼠MMP-1和TIMP-1表达的影响

[目的]观察推拿疗法对大鼠急性腓肠肌钝挫伤后纤维修复的影响,探讨其可能的作用机制。[方法]将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、推拿治疗组(n=10),运用自制砸伤装置复制经典骨骼肌钝挫伤模型。治疗组进行推拿治疗,每次干预10 min,每日1次,连续实施25 d。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠腓肠肌纤维化程度;qPCR和蛋白印迹检测大鼠腓肠肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达情况。[结果]HE染色镜下发现对照组大鼠骨骼肌纤维排列整齐,形态结构完整;模型组大鼠骨骼肌纤维排列紊乱,甚至断裂,肌成纤维细胞增多,细胞外基质ECM)增多且胶原纤维明显沉积;治疗组大鼠骨骼肌纤维排列较整齐、间距小,且大小均一,胶原纤维生成减少,仅有少量ECM生成,损伤基本恢复。qPCR和蛋白印迹结果显示模型组大鼠损伤腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白表达量及MMP-1/TIMP-1比值明显降低(P<0.01),而TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平明显升高;给予推拿治疗后可明显提高损伤大鼠腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白水平及MMP-1/TIMP-1的比值(P<0.01,P<0.05),且降低TIMP-1的转录水平(P<0.01,P<0.05)。[结论]推拿治疗可有效减轻骨骼肌钝挫伤后纤维化程度,其作用可能与上调MMP-1/TIMP-1比值有关。     

埋线预处理对ZDF大鼠缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的　探讨埋线预处理对ZDF大鼠缺血再灌注损伤后心肌相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。方法　2015年1月—2016年5月,选取SPF级雄性ZDF大鼠24只,随机分为4组,每组6只。空白组常规饲养,不做任何处理。缺血再灌注组饲养7 d后缺血30 min,再灌注60 min。缺血预处理组饲养7 d后缺血5 min,再灌注5 min,反复3次后,缺血30 min,再灌注60 min。埋线预处理组第1天对内关、膻中、心俞穴进行埋线,7 d后缺血30 min,再灌注60 min。酶联免疫吸附法检测血清过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮（NO）水平,Western blotting法检测心肌组织Bcl-2、Bax及Caspase-3表达,电镜观察心肌组织超微结构。结果　缺血再灌注组血清CAT、NO水平低于空白组,缺血预处理组、埋线预处理组血清CAT、NO水平高于空白组、缺血再灌注组（P<0.05）。缺血再灌注组、缺血预处理组、埋线预处理组Bcl-2、Bax及Caspase-3相对表达量均高于空白组,缺血预处理组、埋线预处理组Bcl-2、Caspase-3相对表达量高于缺血再灌注组,Bax相对表达量低于缺血再灌注组（P<0.05）。电镜下,缺血再灌注组心肌组织可见大量线粒体肿胀且密度降低,呈囊泡状;缺血预处理组及埋线预处理组仅见少量线粒体肿胀。结论　埋线预处理可能通过上调心肌组织Bcl-2及Caspase-3表达,下调Bax表达,抑制细胞凋亡和促进自噬,对ZDF大鼠缺血再灌注损伤后心肌发挥保护作用。     

三七总皂苷对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响*

【目的】研究三七总皂苷（PNS）对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响,探讨PNS抗神经元缺氧,复氧诱导的细胞凋亡的作用。【方法】体外原代培养大鼠胎鼠大脑皮质神经元细胞（CNC）,采用缺氧／复氧（H／R）诱导皮质神经元细胞氧化应激损伤模型,采用PNS50、10、2mg／L进行干预。采用实时荧光定量逆转录酶-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）mRNA表达的变化,采用福林-酚法（Lowrry）法检测caspase-3蛋白含量的变化。探讨PNS抑制神经元细胞凋亡的分子机制。【结果】PNS50、10mg／L剂量组可以显著降低Bax表达;PNS50mg／L组可以显著增加Bcl—2表达;PNS有降低caspase-3表达的趋势。PNS各剂量组均能够抑制cas—pase-3的活性,有剂量依赖性趋势。【结论】PNS可能是通过增加抑制凋亡基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax的表达,抑制caspase-3的活性等作用抑制神经元缺氧／复氧诱导的细胞凋亡。     

针灸对脑梗死大鼠患侧海马CA1区Bcl-2的影响及其与学习记忆的关系

目的观察针灸对脑梗死大鼠患侧海马CA1区Bcl-2的影响及其与学习记忆的关系,从细胞凋亡角度探讨针灸对脑梗死大鼠学习记忆能力、中枢神经系统的可塑性影响及其可能机制。方法采用大脑中动脉梗死模型,对照组及针灸组各24只,用Y-迷宫测试学习记忆能力;用免疫组化方法测试Bcl-2蛋白及凋亡指数。结果针灸组大鼠学会Y-迷宫所花的次数明显少于对照组（P〈0.05）;针灸组患侧海马CA1区Bcl-2蛋白阳性神经元数比对照组多（P〈0.05）;针灸组大鼠患侧海马CA1区的凋亡指数明显低于对照组（P〈0.05）。结论①针灸增加海马Bcl-2蛋白的表达,使Bcl-2在海马CA1区中占优势而使细胞受到保护,细胞凋亡减少,海马最终得以保存更多神经元而发挥其改善学习记忆功能的作用。②针灸能明显改善脑缺血大鼠的学习记忆能力。     

胰岛素对高糖培养海马神经元凋亡及IRS/PI3K/AKT信号通路、Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的 探讨胰岛素对高糖培养海马神经元的保护作用及其作用机制。方法 选择新生24h SD大鼠,取海马神经元进行原代培养,分为正常对照组（NC组）,高糖模型组（HG组）,实验组（RI组）,采用Tunel检测海马神经元的凋亡,Western blot法检测各组P-IRS、IRS1、P-AKT、AKT、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 与NC组相比,HG组海马神经元凋亡率显著增加（P<0.01）;与HG组相比,RI组凋亡率显著降低（P<0.01）。与NC组相比,HG组P-IRS、IRS1蛋白表达显著降低（P<0.05）;RI组P-IRS表达及P-IRS/IRS1显著升高（P<0.01）。与HG组相比,RI组P-IRS表达及P-IRS/IRS1显著升高（P<0.01）。与NC组相比,HG组AKT表达显著降低（P<0.01）;RI组P-AKT、AKT表达及P-AKT/AKT显著升高（P<0.01）。与HG组相比,RI组P-AKT、AKT表达及P-AKT/AKT显著升高（P<0.01）。与NC组相比,HG组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）;RI组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bax蛋白表达显著降低（P<0.01）。与HG组相比,RI组Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达显著升高（P<0.01）,bax蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 胰岛素能够抑制高糖培养海马神经元的凋亡,其作用可能是通过活化IRS1/PI₃K/AKT信号通路,同时上调Bcl-2/Bax实现的。     

洛罗兰糖苷激活Bcl-2通路诱导髓样抑制性细胞凋亡研究

[目的]促进髓样抑制性细胞（MDSCs）凋亡是抑制肿瘤生长的一个有效途径。因此,该实验旨在探究盘龙参活性成分络罗兰糖苷对MDSCs的抑制效应以及可能机制。[方法]采用MTT法分别检测洛罗兰糖苷对MDSCs细胞系（MSC-2）的毒性;采用流式分析法检测洛罗兰糖苷对MSC-2的促凋亡作用;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测洛罗兰糖苷作用后MSC-2细胞内凋亡相关基因的蛋白表达水平。[结果]细胞活性检测证实洛罗兰糖苷可以抑制MSC-2的活性;凋亡抗体染色结果显示洛罗兰糖苷可以促进MSC-2凋亡;Western Blot结果表明,洛罗兰糖苷作用下,JNK2、细胞色素C、caspase-9、caspase-3表达明显上调,而Bcl-2表达下降。[结论]洛罗兰糖苷可以通过激活Bcl-2信号通路,促进MDSCs凋亡增强免疫正调控,从而达到抗肿瘤的效果。