益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞VEGF及MMP2表达的影响

目的观察益气养阴方抗血管生成作用及对肿瘤细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2表达的效应。方法制备接种肿瘤细胞的绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）模型,采用血清药理学方法制备益气养阴方含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与9．0g／L氯化钠注射液（normal saline,NS）血清组对照。另外,用U14子宫颈癌细胞悬液经肌肉接种小鼠,观察小鼠实体瘤质量、抑瘤率、肺部转移率、肺部转移瘤生长情况。应用免疫组织化学及其组织形态学定量分析方法对VEGF和MMP2在肿瘤细胞中的表达进行研究。结果益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成,与NS组比较差异具有显著性。益气养阴方组肺部转移结节较模型组明显减少,VEGF和MMP2的表达均明显低于对照组,差异有显著性。结论益气养阴方对肿瘤血管形成有明显抑制作用,降低VEGF和MMP2的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。     

肺一丸对肺癌血管生成及转移影响的实验研究

[目的]证实中药肺一丸抑制肺癌血管生成和抗转移的作用。[方法]1)采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,将含有肺一丸提取液的载体置于7d胚龄的CAM上,作用48h观察抑制血管生成情况,并予氢化可的松相比较。2)采用家兔角膜移植肿瘤模型观察肺一丸对肿瘤血管生成抑制作用。3)采用LA795肺腺癌皮下接种T739小鼠模型,灌胃给药法及局部给药法,观察中药肺一丸对肿瘤血管生成及肺转移的抑制作用。[结果]肺一丸能够使CAM及家兔角膜移植瘤的血管生成明显减少甚至消失。抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,抑瘤率为49.6%,降低血管密度,肺转移抑制率为60%。[结论]中药复方肺一丸能够抑制CAM、家兔角膜移植瘤及肺腺癌移植瘤的血管生成,并具有抗肿瘤转移作用。提示肺一丸能够通过抑制肿瘤血管生成起到抑制肿瘤生长、抗转移作用。     

益气养阴方抗血管生成作用的实验研究

目的：探讨益气养阴方抗鸡胚绒毛尿囊膜（Chick chorioa—llantoic membrane,CAM）血管及肿瘤细胞诱导CAM血管生成的效应。方法：制备CAM模型及接种肿瘤细胞的CAM模型,采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对CAM血管和肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照。结果：益气养阴方含药血清可抑制CAM血管及肿瘤细胞诱导的CAM血管生成,各剂量含药血清组血管数目（高剂量组：9．662±0．599,中剂量组：9．682±0．818,低剂量组：10．242±0．640）与血管面积（高剂量组：8878．500±1870．115,中刺量组：9369．750±3206．427,低剂量组：11226．875±2665．071,mm^2）均较对照血清纽（10．511±0．990,12759．375±4379．058,mm^2）明显减少,与生理盐水对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：益气养阴方对血管生成有明显抑制作用。     

解毒祛瘀法对肿瘤血管生成影响的实验研究

[目的]证实中医解毒祛瘀法能够抑制血管生成,调控血管生长基因,抑制肿瘤生长和转移作用。[方法]1)采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,将含有解毒祛瘀法提取液的载体置于7d胚龄的CAM上,作用48h观察抑制血管生成情况,并予氢化可的松相比较。2)采用家兔角膜移植肿瘤模型观察解毒祛瘀法对肿瘤血管生成抑制作用。3)解毒祛瘀法对荷瘤小鼠肿瘤生长及血管生成抑制作用研究。[结果]解毒祛瘀法能够使CAM及家兔角膜移植瘤的血管生成明显减少甚至消失。抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,抑瘤率为49.6%,降低血管密度,促进肿瘤血管内皮细胞凋亡。[结论]中药复方解毒祛瘀法能够抑制CAM、家兔角膜移植瘤及荷瘤小鼠肿瘤生长和血管生成作用,提示解毒祛瘀法能够通过抑制肿瘤血管生成起到抑制肿瘤生长作用。     

抑癌扶正平衡Ⅱ号方对乳腺癌小鼠移植瘤生长转移的实验研究

[目的]观察抑癌扶正平衡Ⅱ号方对乳腺癌小鼠移植瘤生长及肺转移的抑制作用,并探索其抗肿瘤效应与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的相关性。[方法]建立4T1乳腺癌小鼠模型,随机分为空白组、模型组、低分子肝素组、抑癌扶正平衡Ⅱ号方高、中、低剂量组,连续给药14 d后处死取材。测定移植瘤瘤质量和计数肺转移结节个数,并计算瘤质量抑制率及肺转移抑制率。ELISA法检测各组小鼠移植瘤、转移瘤、血清中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）的表达。[结果]中药各组瘤质量、肺转移结节数随中药剂量增高而下降（P<0.05）;高剂量中药组瘤质量抑制率及肺转移抑制率均优于低分子肝素组（P<0.05）。中药各组移植瘤、转移瘤、血清中HSPG的表达随中药剂量增高而上升（P<0.05）;高剂量中药组移植瘤、转移瘤、血清中HSPG的表达高于低分子肝素组（P<0.05）。[结论]抑癌扶正平衡Ⅱ号方可显著抑制乳腺癌小鼠移植瘤的增殖和肺转移,其作用机制可能与增高硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的表达有关。     

益心定悸方含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF表达影响的研究

[目的] 通过观察益心定悸方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响探讨其治疗冠心病快速心律失常的作用机制, 同时为临床应用提供客观依据。[方法] 用20只雄性Wistar大鼠制备含药血清, 将内皮细胞接种在两种血清培养基上, 采用免疫组化方法测定VEGF的表达。[结果] 含药血清组细胞边界和核结构清晰细胞核颜色深染, 正常血清组VEGF仅有微弱表达。[结论] 益心定悸方能够明显促进VEGF表达, 这可能是本方治疗冠心病快速心律失常的作用机制之一。     

人工牛黄对小鼠乳腺癌肺转移的影响

目的 研究人工牛黄单用或与环磷酰胺合用对小鼠乳腺癌肺转移的影响。方法 采用BALB/c小鼠乳腺癌细胞系4T1,制备稳定表达荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞系4T1-Luc,每只小鼠尾iv 2×10⁵ 4T1-Luc细胞,制备小鼠乳腺癌肺转移模型。注射后将小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、人工牛黄组、人工牛黄与环磷酰胺联合用药组,每组9只。人工牛黄组每天ig人工牛黄120 mg/kg 1次,连续给药4周;环磷酰胺组每天ip环磷酰胺30 mg/kg 1次,连续给药1周;每组选取3只小鼠监测肿瘤转移情况。4周后将小鼠断颈处死,肺脏经Bowin氏液固定,计数肺部转移瘤数目;HE染色观察肺内转移灶大小。结果 与模型组相比,肿瘤细胞接种21 d后,人工牛黄与环磷酰胺联合用药组小鼠肺部发光强度降低,但差异不显著;接种肿瘤细胞28 d后,人工牛黄组、人工牛黄与环磷酰胺联合用药组肺部转移瘤数目均显著减少（P＜0.05、0.01）,且联合用药组小鼠肺部转移灶数目明显少于模型组。结论 人工牛黄具有抑制小鼠乳腺癌细胞肺转移的潜在作用,并与环磷酰胺有一定协同作用。     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞的诱导凋亡作用

[目的]观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞凋亡的影响。[方法]采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用流式细胞仪(FCM)及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况。[结果]不同浓度灵芪胶囊含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成。[结论]灵芪胶囊含药血清具有诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间—浓度呈正相关。灵芪胶囊含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。     

灵芪胶囊对H22荷瘤小鼠COX-2蛋白表达的影响

[目的] 研究灵芪胶囊(LQC)的抗肿瘤作用的机制。[方法] 以免疫组化方法检测荷瘤小鼠血管生成因子环氧化酶-2(COX-2)、表达的变化, 研究LQC对肿瘤血管生成的抑制作用。[结果] LQC能够下调血管生长因子COX-2的表达而抑制肿瘤生长。[结论] LQC通过影响COX-2的表达, 抑制肿瘤新生血管生成, 发挥抗肿瘤作用。     

灵芪胶囊对S180荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

[目的]通过实验研究,探讨灵芪胶囊对小鼠肝细胞瘤(S₁₈₀)荷瘤小鼠的抑瘤作用。[方法]采用体内实验法,于无菌条件下抽取传代7d、生长良好的S₁₈₀荷瘤小鼠腹水,用无菌生理盐水1:3稀释(约含瘤细胞2×103/L),按0.2mL/只接种于消毒后的小鼠右前肢腋部皮下,制成肿瘤模型,经口灌胃灵芪胶囊11d后,取瘤体称质量,计算抑瘤率;采用苏木-伊红(HE)染色,于光镜下观察各组肿瘤组织细胞形态学变化。[结果]灵芪胶囊各组与模型组相比肿瘤体积缩小,灵芪胶囊高、中、低剂量对S₁₈₀荷瘤小鼠的抑瘤率分别为22.18%、40.18%、36.40%;实验形态学结果表明,模型组、阳性对照组、灵芪胶囊组之间有一定差异,灵芪胶囊能在一定程度上改善肿瘤组织形态,从而为中药抗癌作用从微观方面提供了有力证据。[结论]灵芪胶囊对S₁₈₀荷瘤小鼠有明显抑瘤作用。     

三种鸡胚绒膜尿囊膜移植瘤模型对比分析

目的通过比较三种不同癌细胞株在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的生长情况,从中筛选最佳移植癌细胞株,建立移植瘤模型并观察生物学特性。方法分别将人肺癌A549株、舌鳞癌TCA8113株与人肝癌QGY7703株接种于7日龄鸡胚CAM上,对各自鸡胚成活率、瘤株成活、成瘤率和诱导血管生成情况等指标进行检测,并观察筛选移植瘤模型生长特性。结果与人肺癌A549株和肝癌QGY7703株接种组相比,舌鳞癌TCA8113株接种组成瘤率最高(P0.05),为最佳移植癌细胞株,最佳接种癌细胞数量为8.0×106/个,接种后瘤体最佳生长周期为4~8 d,最佳实验时间为接种后第7天。结论筛选建立了舌鳞癌TCA-CAM移植瘤模型,为深入研究肿瘤生长生物学特性、血管生成机制、侵袭转移机制和筛选抗肿瘤药物提供了良好的实验动物模型。     

复方苦参注射液对小鼠移植性S180肉瘤血管形成抑制作用

[目的]探讨复方苦参注射液对肿瘤血管形成的抑制作用.[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,运用免疫组化方法,观察复方苦参注射液对小鼠移植性S180肉瘤血管形成抑制作用.[结果]小鼠腹腔注射复方苦参注射液0.3,0.6g/kg,连续8 d后瘤体较对照组分别减小25％,36％;瘤体微血管密度较对照组分别减小32％,40％.[结论]复方苦参注射液能够抑制肿瘤的生长,具有抑制肿瘤血管形成的作用.     

参麦注射液协同奥沙利铂抗结肠肿瘤作用

[目的]通过观察参麦注射液联合奥沙利铂对结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤的影响探究参麦注射液与奥沙利铂合用增效减毒的作用机制。[方法]制备裸鼠LOVO细胞移植瘤体内模型,设立生理盐水组(n=8)、奥沙利铂组(8 mg/kg,n=8)、联合治疗组(奥沙利铂8 mg/kg;参麦注射液10 mg/g,n=8)及参麦组(参麦注射液10 mg/g,n=8),通过腹腔注射途径给药,自给药之日起每隔1日记录肿瘤体积并绘制生长曲线。给药14 d后观察奥沙利铂对移植瘤体抑瘤率的影响:处死小鼠后留取血样;摘取脾组织称质量以计算脾指数;摘取肿瘤组织并应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)及血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达。[结果]参麦注射液与奥沙利铂联合用药抑瘤率为49%,联合用药组抑制肿瘤生长的作用显著且对荷瘤鼠血液及肝肾无明显毒性;联合用药组可显著降低b-FGF的表达,并降低肿瘤组织的微血管密度(MVD)。[结论]参麦注射液能减轻奥沙利铂对小鼠免疫器官与肝功能的影响,并增强奥沙利铂抗结肠恶性肿瘤的作用,其机制可能与抑制b-FGF介导的血管生成信号通路相关。     

茵兰益肝颗粒剂体外抑制乙型肝炎病毒复制的实验研究

[目的]验证含有茵兰益肝颗粒剂药效成分的药物血清对转染乙型肝炎病毒基因的人肝癌细胞系2.2.15(HepG2.2.15)细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原的(HBeAg)抑制作用。[方法]组织培养及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。[结果]药物血清第8天对HepG2.2.15细胞半数毒性浓度(TC₅₀)为11.48%,最大药物血清无毒浓度(TC₀)为6.0%。6.0%~3.0%、1.50%、0.75%4种药物血清浓度在HepG2.2.15细胞中第8天对HBsAg的抑制率分别为7.89%~5.8%、1.6%、1.6%,对HBeAg抑制率均为负值。[结论]茵兰益肝颗粒剂对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg有较低的抑制率,对HBeAg无抑制作用。     

妇痛宁对子宫内膜异位症COX2-PGE2作用途径的影响

[目的] 通过研究化瘀散结中药妇痛宁对子宫内膜异位症（EMs）病灶中环氧化酶2（COX2）-前列腺素E2（PGE2）作用途径中相关分子基因和蛋白的表达,探讨妇痛宁对EMs中血管生成、侵袭和转移方面的影响。[方法] 收集EMs患者的异位病灶组织,原代消化培养子宫内膜细胞,将25×10⁶/mL浓度混合培养的异位子宫内膜细胞注射到裸鼠腹部皮下,成功建立模型后,将成模裸鼠分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组,分别予无菌生理盐水、低剂量中药、中剂量中药、高剂量中药和孕三烯酮灌胃,3周后处死裸鼠,取病灶,测量病灶体积,免疫组化法检测各组病灶中血管内皮生长因子（VEGF）的表达和微血管密度（MVD）,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail和E-cadherin mRNA的表达,Western-blot法检测病灶中Snail和E-cadherin蛋白的表达。[结果] 中剂量及高剂量妇痛宁治疗组裸鼠异位病灶体积减小、VEGF表达及MVD均降低,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。各剂量治疗组裸鼠异位病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail mRNA表达降低,E-cadherin mRNA表达升高,且Snail蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 妇痛宁可影响COX2-PGE2作用途径中与血管生成、侵袭和转移相关分子的表达,通过抑制异位病灶的血管生成、侵袭和转移能力而抑制病灶的生长。     

Heparanase antisense oligodeoxynucleotide inhibits angiogenesis and metastasis of human mammary carcinoma cell xenografts in nude mice

Objective： To evaluate the inhibitory effect of heparanase antisense oligodeoxynucleotide （AS-ODN） on the angiogenesis and metastasis of human mammary carcinoma cell xenografts in nude mice. Methods： The AS-ODN complementary to the start codon region of heparanase mRNA and its control, scrambled nonsense oligodeoxynucleotide （NS-ODN） were designed and synthesized. A subcutaneous growth model and an acute hematogenous metastasis model of human mammary carcinoma were established in nude mice and were treated with ODNs. The heparanase expression in tumor was evaluated by RT-PCR and Western blot. The microvessel density （MVD） was measured by immunohistochemistry for factor VS. The tumor volume was calculated and lung metastatic nodules were counted. Results ： The heparanase expression, MVD, tumor volume and lung metastatic nodules in AS-ODN treated group were significantly decreased compared with that in NS-ODN treated group and that in PBS group （P〈0.01）. Conclusion ： Heparanase AS-ODN has significant inhibitory effect on the angiogenesis and metastasis of human mammary carcinoma cell xenografts in nude mice.