原发性肾病综合征患者激素敏感性与糖皮质激素受体亚型的关系研究

目的 探讨原发性肾病综合征(PNS)患者对糖皮质激素(以下简称激素)敏感性与其外周血单个核细胞(PBMC)内激素受体(GR)亚型表达的关系.方法 应用流式细胞术(FCM)检测正常对照组(10例)和PNS组(28例,其中激素敏感组10例、激素依赖组10例、激素抵抗组8例)外周血PBMC内α与β亚型表达水平的变化.结果 与正常对照组相比,PNS患者3组中GRα的表达水平均降低,差异有显著性(P< 0 .05 );GRβ在激素抵抗组中表达明显增高,差异有显著性(P<0.01),而在激素敏感组、激素依赖组中表达无明显差异(P>0.05).结论 PNS患者糖皮质激素受体GRα、GRβ表达水平的变化,导致GRα与GRβ比例失调,使组织细胞对激素的敏感性降低,因此,导致PNS患者对糖皮质激素治疗反应不同,PNS出现激素抵抗可能与GRβ表达水平增高有关.     

TNF-α与特发性血小板减少性紫癜患者激素抵抗的相关性研究

目的研究特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenia purpura,ITP）患者肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的表达及其对糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）表达的影响,探讨TNF-α与糖皮质激素抵抗的相关性。方法ELISA方法检测ITP激素敏感型、激素抵抗型患者及正常对照组的血浆中TNF-α的含量;分离健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）,一组用TNF-α刺激培养,一组单独培养作为对照,分别采用RT-PCR方法及Western blot法分析其GRα和GRβmRNA及蛋白表达的变化。结果血浆TNF-α浓度在ITP患者激素敏感组、激素抵抗组、正常对照组分别为（13.69&#177;4.92）pg/mL、（19.73&#177;4.66）pg/mL、（7.51&#177;2.79）pg/mL,二组ITP患者血浆中TNF-α的含量均高于正常对照组（P〈0.01）,其中激素抵抗组ITP患者血浆中TNF-α的含量高于激素敏感组（P〈0.05）;经TNF-α刺激培养24 h后,培养组与对照组GRα/GAPDHmRNA分别为1.16&#177;0.73,1.20&#177;0.51,培养组与对照组相比,其GRαmRNA表达无显著变化（P〉0.05）;培养组与对照组GRβ/GAPDHmRNA分别为1.62&#177;0.59,0.81&#177;0.66,培养组与对照组相比,GRβmRNA表达明显增加（P〈0.05）;GRα蛋白的表达在各组之间无显著差别,但GRβ蛋白的表达在TNF-α刺激组较对照组明显增高。结论ITP激素抵抗型患者血浆TNF-α含量增高;TNF-α可以增加PBMC中GRβ的表达,这可能是炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的内在机制。     

激素性高眼压患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体α、β的表达及意义

目的 检测糖皮质激素性高眼压患者外周血单个核细胞(PBMCs)内糖皮质激素受体(GR)亚型GRα和GRβ mRNA的表达,并探讨其与激素性青光眼的关系.方法 收集9例激素性高眼压患者(高眼压组),10例用激素后眼压正常患者(正常眼压组),10例健康志愿者(对照组)的外周血,提取单个核细胞RNA,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PBMCs内GRα、GRβ mRNA表达水平.结果 外周血单个核细胞有GRα、GRβ mRNA表达,以GRα为主.高眼压组的GRα mRNA半定量比值为(1.11±0.17),与对照组(1.07±0.09)和正常眼压组(1.06±0.11)相比,其表达增高,差异有显著性意义(均P<0.05).高眼压组、正常眼压组、对照组的GRβ mRNA半定量比值分别为(1.030±0.004)、(1.040±0.004)、(1.030±0.006),3组之间的表达差异无显著性意义(均P0.05).结论 外周血GRαmRNA的表达水平与糖皮质激素性青光眼的发病密切相关,外周血GRβ mRNA与激素性青光眼的关系可能不大,但GRβ的作用仍需从其他方面继续研究.     

紫癜性肾炎患儿外周血单个核细胞内GRα和GRβ表达

目的 :探讨过敏性紫癜肾炎 (HSPN )患儿外周血单个核细胞 (PBMC)内糖皮质激素受体 (GR )两种亚型GRα和GRβmRNA表达与糖皮质激素 (GC)治疗效应之间的关系。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR ) ,检测不同激素效应的HSPN患儿 (激素敏感组 10例 ,激素不敏感组 8例 )和正常对照组儿童 ( 8例 )GRα和GRβmRNA表达水平。结果激素不敏感组HSPN患儿PBMC内GRβmRNA表达显著高于激素敏感组 ( P <0 .0 5 。结论 :HSPN患儿PBMC内GRβmRNA的表达增多 ,可能与GC治疗不敏感有关。     

溃疡性结肠炎肠粘膜细胞中糖皮质激素受体α和β的表达

目的　研究溃疡性结肠炎患者肠粘膜细胞中糖皮质激素受体 α、β(GRα、GRβ)表达与糖皮质激素治疗反应以及炎症程度之间的关系。方法　采用免疫组织化学法检测肠粘膜细胞中 GRα、GRβ表达强度。比较激素抵抗、激素敏感及正常对照 3组间以及炎症程度各组间 GRα、GRβ表达差异。结果　肠粘膜组织切片中 GRα、GRβ的表达强度在抵抗与敏感组之间有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,在激素敏感组与正常对照组间无显著差异 ,且与炎症程度无关。结论　糖皮质激素受体 GRα、GRβ在决定患者对激素治疗的反应中起着重要的作用 ,其中 GRβ可能对 GRα起优势负性抑制作用 ,检测患者肠粘膜细胞中 GRα、GRβ的表达可预测患者对激素治疗的反应 ,但不能判断其炎症程度     

TNF-α对人糖皮质激素受体表达的影响

目的: 研究TNF-α对人糖皮质激素受体(GR)表达的影响,探讨炎性细胞因子与糖皮质激素抵抗的相关性. 方法: 分离人外周血单个核细胞(PBMCs),用TNF-α刺激培养后,采用RT-PCR方法分析其与未用TNF-α刺激培养的PBMCs在GRα和GRβ mRNA表达方面的变化. 结果: 经TNF-α刺激培养24 h的PBMCs,与未加TNF-α刺激培养的PBMCs相比,GRα mRNA表达无显著变化(P>0.05),GRα/GAPDH mRNA分别为1.16 ±0.73,1.20±0.51,但GRβ mRNA表达明显增加(P<0.05),GRβ/GAPDH mRNA分别为1.62±0.59,0.81±0.66. 结论: TNF-α可以增加GRβ的表达,这可能是炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的内在机制之一.     

儿童激素性高眼压与外周血淋巴细胞糖皮质激素受体表达相关性研究

目的 检测激素性高眼压患儿外周血淋巴细胞糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）,GRα和 GRβ的表达,研究其与儿童激素性高眼压的相关性。 方法 收集20例激素性高眼压患儿(高眼压组),10例使用激素后眼压正常患儿（对照组）,10例健康儿童(健康组)的外周血,提取淋巴细胞RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)法检测淋巴细胞内GRα、GRβmRNA表达水平。结果 儿童外周血淋巴细胞有GRα、GRβmRNA表达, 以GRα为主。高眼压组的 GRαmRNA 半定量比值为(1.35±0.08) , 与对照组（1.25±0.04）及健康组(1.33±0.09)相比,差异无显著性意义(均 P＞0. 05)。高眼压组的GRβmRNA半定量比值为(1.24±0.04),与对照组(1.28±0.03)及健康组(1.20±0.07)相比,3组之间的表达差异无显著性意义(均 P >0. 05)。结论 未发现儿童外周血淋巴细胞糖皮质激素受体GRα和 GRβ的表达水平与激素性高眼压之间相关性。     

儿童原发性肾病综合征激素耐药性与外周血淋巴细胞激素受体mRNA表达水平的相关性

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿糖皮质激素(GC)耐药性与糖皮质激素受体mRNA(包括GRα与GRβ)表达的相关性。方法选择2012年6月—2014年12月儿科住院的初诊并予大剂量激素治疗PNS患儿80例作为研究组,按照患儿GC疗效反应分为激素敏感亚组与耐药亚组;另选择正常同龄儿童30例作为健康对照组。于治疗前采取静脉血5 ml,使用荧光定量PCR方法检测并比较外周血单个核细胞(PBMCs)中GRα和GRβ的mRNA表达水平。结果 80例PNS患儿中出现GC耐药15例(18.8%),GC敏感65例(81.2%),与健康对照组相比,研究组PBMCs的GRαmRNA、GRβmRNA表达水平均较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与GC耐药亚组相比,GC敏感亚组PBMCs的GRβmRNA表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05),而GRαmRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。采用Logistic回归分析校正相关混杂因素后显示,患儿PBMCs的GRβmRNA表达水平是GC耐药性的独立危险因素(OR=2.17,95%CI 1.17~9.21,P<0.05)。结论儿童PNS PBMCs的GRβmRNA表达水平是GC耐药性的独立危险因素,可作为预测GC反应性的临床参考指标。     

儿童原发性肾病综合征外周血糖皮质激素受体β及热休克蛋白90的变化及其意义

目的探讨原发性肾病综合征（PNS）患儿外周血单个核细胞（PBMC）上糖皮质激素受体β（GRβ）及热休克蛋白90（HSP90）与糖皮质激素治疗效应之间的关系。方法以30例PNS患儿作为观察组,根据随访结果分成激素耐药型肾病综合征（SRNS）和激素敏感型肾病综合征（SSNS）2组,各15例。10例健康儿童作为正常对照组。应用RT-PCR检测了各组PBMC上GRβmRNA及HSP90mRNA的表达;并分析以上指标与肾脏病理及相关临床实验室指标的关系。结果 （1）SSNS组患儿PBMC上GRβmRNA、HSP90mRNA的表达均高于对照组（均P〈0.05）。（2）SRNS组患儿PBMC上GRβmRNA、HSP90mRNA的表达均高于SSNS组（均P〈0.01）。（3）SRNS组患儿PBMC上GRβmRNA的表达与肾脏病理分级成等级正相关（r=0.496,P〈0.05）;与24 h尿蛋白定量（24 h UTP）成等级正相关（r=0.458,P〈0.05）。（4）SSNS组患儿PBMC上GRβmRNA的表达与24 h UTP无相关性（P〉0.05）。结论 GRβ及HSP90可能参与了SRNS的发生与发展。GRβ可以作为监测PNS患儿病情以及预后的指标之一。     

糖皮质激素受体在类风湿关节炎外周血单个核细胞中表达水平的研究

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中糖皮质激素受体(GR)α、βmRNA的表达水平及其与RA发病机制、活动性的关系.方法 从44例RA患者(活动期24例、缓解期20例)、20例健康对照人群外周血单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,并逆转录为cDNA.应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)检测GRα和GRβ mRNA的表达水平,并研究其与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)的相关性.结果 RA患者GRα和GRβmRNA的表达水平均明显高于健康对照人群(P＜0.01);活动期RA患者GRβ mRNA表达水平(-3.5442±0.8017)明显高于缓解期RA患者(1.2175±1.5969)(P＜0.01);活动期RA患者GRα mRNA表达水平(4.2333±2.1775)与缓解期RA患者(4.2985±1.6109)比较无显著性差异(P＞0.05);RA患者GRβ表达水平与CRP呈正相关(P=0.01),与ESR、RF均无关;RA患者GRoα表达水平与CRP、ESR、RF均无关.结论 GRα和GRβ的表达异常可能参与了RA的发病;GRβ表达水平与CRP呈明显正相关,提示其可能与RA疾病活动性相关.     

淫羊藿苷对多发性硬化患者PBMC ER、GR mRNA表达的影响

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对多发性硬化(MS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中ERα、ERβ、GR mRNA表达水平的影响及其剂效关系.方法 分离、提取MS患者及健康人PBMC并将其均分为空白对照组、雌激素组、高、中、低剂量ICA组以及对应浓度的空白血清对照组各8个亚组,培养后离心,以RQ-PCR法检测各组PBMC中ERα、ERβ、GR mRNA的表达量.结果 MS患者高、中剂量ICA及雌激素组ERα表达量较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);MS患者高剂量ICA及雌激素组ERβ mRNA表达量较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).MS患者和健康人中实验组与各对照组比较GR mRNA表达量无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05).MS患者与健康人高剂量ICA组比较,ERα、ERβ mRNA表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ICA可以提高MS患者PBMC中ERα、ERβ mRNA的表达,具有拟雌激素样作用,但对MS患者PBMC中GR mRNA的表达无明显干预作用.     

慢性阻塞性肺疾病患者转录因子、糖皮质激素受体的表达

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者转录因子活化蛋白-1（AP-1）、核因子-κB（NF-κB）、糖皮质激素受体（GR）的表达水平及不同治疗后的变化。方法：36例COPD急性发作期患者随机分为激素治疗组（18例）与非激素治疗组（18例）,18例健康者为对照组;激素治疗组给予续贯的糖皮质激素治疗及常规治疗,非激素治疗组给予除激素之外的常规治疗,用荧光定量RT-PCR方法测定外周血单核细胞c-jun（代表AP-1）、核转录因子κB（NF-κB）、糖皮质激素受体（GR-α和GR-β）mRNA的表达水平。结果：COPD患者c-jun、NF-κB表达水平始终高于健康对照组;治疗后与治疗前相比,激素治疗组c-jun和NF-κB显著下降,非激素治疗组NF-κB有显著下降,c-jun有下降趋势,但差异无统计学意义。治疗前COPD患者GR-α表达水平显著低于健康对照组,GR-β表达水平显著高于健康对照组;治疗后COPD患者GR-α表达水平较治疗前升高,GR-β表达水平较治疗前下降。激素治疗组治疗前C-jun、NF-κB、GR-α、GR-β分别为0.093±0.047、0.122±0.062、0.062±0.035、0.102±0.026;非激素治疗组分别为0.094±0.053、0.123±0.045、0.065±0.034、0.095±0.031;两组比较,差异无统计学意义,P〉0.05;激素治疗组治疗3个月时C-jun为0.054±0.024,非激素治疗组治疗3个月时C-jun为0.076±0.015,两组比较差异有统计学意义,P〈0.05。结论：COPD患者c-jun、NF-κB、GR-α和GR-β的表达量与健康者存在差异,这可能是COPD炎症反应的基础,这些可能成为治疗COPD炎症反应的新靶向。     

翼状胬肉中糖皮质激素受体的表达及意义

目的检测糖皮质激素受体-α、α（GR—α、GR—β）在翼状胬肉组织中的表达,探讨其在翼状胬肉发病机制中的作用。方法取39例翼状胬肉组织（其中初发30例,复发9例）,应用荧光定量逆转录PCR和免疫组化技术检测GR—α、βmRNA和蛋白表达,并选择8例正常人的球结膜做为对照。结果翼状胬肉及正常人的球结膜组织中均存在GR-αmRNA表达,但GR-βmRNA表达均为阴性。其中39例翼状胬肉中的GR—αmRNA为（10．40±1．42）×10^3拷贝／μg,8例正常眼球结膜中GR—αmRNA为（2．23±0．32）×10^3拷贝／μg,差异有统计学意义（t=4．82,P〈0．01）。其中初发性胬肉（30例）表达为（10．40±0．40）×10^3拷贝／μg,而复发性胬肉（9例）为（10．50±0．30）×10^3拷贝／μg,较初发性胬肉略高,但差异无统计学意义（t=0．55,P〉0．05）。结论翼状胬肉组织中GR—αmRNA及其蛋白表达明显增高,这可能是翼状胬肉发生、发展的重要原因之一,但其作用机制尚待于进一步研究。     

IL-1β对HepG2细胞核受体RXRα蛋白表达的影响

目的研究白细胞介素1β（interleukin 1 beta,IL-1β）诱导人肝癌细胞HepG2维甲酸X受体α（retinoid Xreceptor alpha,RXRα）蛋白核-胞浆转移现象及其基因水平变化。方法 IL-1β处理HepG2细胞,收集不同时间点RXRα总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白及mRNA;同时用蛋白酶体抑制剂,MG132预处理HepG2细胞后IL-1β诱导细胞,收集细胞蛋白及mRNA,应用Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR）检测RXRα总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白及mRNA水平的变化。结果总胞核RXRα蛋白表达量降低（P〈0.05）,胞浆RXRα蛋白表达量增高（P〈0.05）,RXRαmRNA水平在6、12 h升高（P〈0.05）。MG132可以抑制IL-1β对细胞核、胞浆RXRα蛋白表达水平的变化。结论 IL-1β可以诱导HepG2细胞RXRα核-胞浆转移,RXRα核-胞浆转移可能与泛素-蛋白酶体降解途径相关。     

HD-IVIg糖皮质激素联合治疗成人重症ITP疗效观察

目的观察大剂量静脉注射丙种球蛋白（HD-IVIg）加糖皮质激素治疗成人重症特发性血小板减少性紫癜（ITP）的临床疗效。方法将36例重症ITP患者随机分为两组：对照组18例单用糖皮质激素治疗,地塞米松10 mg/d静脉滴注,用7-21 d后,改强的松口服,逐渐减量维持3个月;治疗组18例在上述糖皮质激素治疗的基础上加HD-IVIg400 mg/kg.d-1,静脉滴注5 d。结果治疗组总有效率为94.44%,对照组总有效率为77.78%,两组比较差异有显著性（P〈0.05）。结论对于成人重症ITP患者,可首选HD-IVIg联合糖皮质激素治疗。     

阴阳虚证与糖皮质激素受体关系的临床与实验研究

目的：探讨阴阳虚证与糖皮质激素受体（GR）之间的关系。方法：分别以临床典型阴虚阳虚患者、动物模型（大鼠）以及细胞模型（HL－60）为研究对象,观察阴阳虚证时糖皮质激素受体（GR）的改变,并探讨中药上调GR的部分作用机制。结果：GR水平降低是阴阳虚证发展到一定阶段的共同病理基础之一;阴阳虚证发展到一定阶段时,体内GR下降无器官特异性;上调GR是参附汤、生脉饮被用于临床急救的重要作用机理之一;参附汤、生脉饮上调GR的重要作用途径之一是增加细胞内GRmRNA的表达。结论：GR数量和／或活性的下降及其下降的幅度有可能作为中医虚证极其严重程度的重要微观指标之一;有可能从生脉饮和参附汤中筛选出一种有效上调GR的成分（单体或混合物）,并用于临床以虚证为主要表现的一类疾病（如肿瘤、风湿病、乃至艾滋病等）的治疗。     

重症肌无力患者外周血白细胞糖皮质激素受体α、β mRNA表达与激素疗效的关系

 目的 探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血白细胞(peripheral blood white cell,PBWC)中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)α、β mRNA表达与糖皮质激素(glucocorticoid,GC)疗效的相关性。方法 采用实时定量RT-PCR方法对43例MG患者和14例正常对照者PBWC中的GR-α、β mRNA表达水平进行检测,发现全身型MG 28例,其中18例对治疗敏感,10例抵抗;眼肌型15例,其中10例对治疗敏感,5例抵抗。结果 在GC治疗敏感的全身型和眼肌型MG患者中,其GR-α mRNA表达水平均明显高于GC抵抗者;而GR-β mRNA在各组间的差异无统计学意义。结论 全身型和眼肌型MG患者的GC抵抗均可能与GR-α mRNA的表达水平下降有关,而与GR-β mRNA的表达水平无明显相关性。     

孕激素受体与TNF-α、IL-1β、NF-κB在自然流产蜕膜组织中的表达及临床意义

目的:探讨孕激素受体(Progesterone receptor,PR)与TNF-α、IL-1β、NF-κB在不明原因自然流产蜕膜组织中的表达及临床意义。方法:收集不明原因自然流产病例(研究组)和正常早孕人工流产病例(对照组)各33例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组蜕膜组织中PR、TNF-α、IL-1β、NF-κB的表达差异,并分析TNF-α、IL-1β、NF-κB及PR间的相互关系。结果:与正常人工流产蜕膜组织比较,不明原因自然流产蜕膜组织PR mRNA表达明显降低(P=0.011),而NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达明显增强(P<0.001,P=0.008,P=0.009)。相关性分析显示,不明原因自然流产蜕膜组织中PR表达与NF-κB表达明显负相关(r=-0.508,P<0.013),而TNF-α和IL-1β的表达均与NF-κB的表达显著正相关(r=0.680,P<0.001,r=0.670,P<0.001)。结论:TNF-α、IL-1β及NF-κB表达增加和PR表达减少与不明原因自然流产有关,即PR的减少可能是导致不明原因自然流产的因素之一,可能与NF-κB的激活启动炎性反应有关。     

抗神经生长因子与糖皮质激素干预对哮喘大鼠肺神经生长因子表达的影响

目的 探讨糖皮质激素与抗神经生长因子（NGF）干预对哮喘大鼠肺内NGF表达的影响.方法 建立哮喘模型,将48只SD大鼠按随机数字法分为对照组、哮喘组、糖皮质激素干预组和抗NGF干预组,每组12只.用免疫组织化学方法检测哮喘大鼠肺内NGF表达水平.结果 NGF的表达与呼吸道平滑肌厚度呈正相关.哮喘组呼吸道平滑肌厚度及NGF的表达均显著高于对照组、抗NGF干预组及糖皮质激素组（P〈0.05）;抗NGF干预组及糖皮质激素组NGF表达显著高于对照组（P〈0.05）.结论 在实验哮喘大鼠中,肺内NGF表达水平显著增高,糖皮质激素与抗NGF干预后肺内NGF表达水平有所减少.